ISO 23695:2023

• Abstract:

  This document specifies a method for the determination of ammonium nitrogen (NH4-N) in drinking water, groundwater, surface water, wastewater, bathing water and mineral water using the small-scale sealed tube method. The result can be expressed as NH4 or NH4-N or NH3 or NH3-N. NOTE 1 In the habitual language use of sewage treatment and on the displays of automated sealed-tube test photometers or spectrophotometers, NH4 without indication of the positive charge has become the common notation for the parameter ammonium. This notation is adopted in this document even though not being quite correct chemical nomenclature. This method is applicable to (NH4-N) concentration ranges from 0,01 mg/l to 1 800 mg/l of NH4-N. The measuring ranges of concentration can vary depending on the type of small-scale sealed tube method of different manufacturers. Concentrations even slightly higher than the upper limit indicated in the manufacturers manual relating to the small-scale sealed tube method used, cannot be reported as accurate results. It is up to the user to choose the small-scale sealed tube test with the appropriate application range or to adapt samples with concentrations exceeding the measuring range of a test by preliminary dilution. NOTE 2 The results of a small-scale sealed tube are most precise in the middle of the application range of the test. All manufacturers' methods are based on the Berthelot reaction and its modifications to develop indophenol blue colour. Reagents mixtures can differ slightly based on manufacturers small-scale sealed tube method, see Clause 9. This method is applicable to non-preserved samples by using small-scale sealed tubes for the determination of drinking water, groundwater, surface water, wastewater and to preserved samples. The method is applicable to samples with suspended materials if these materials are removable by filtration.

• Status: Published
• Publication Date: 01-Feb-2023
• ICS: 13.060.50 - Examination of water for chemical substances
• Technical Committee: ISO/TC 147/SC 2 - Physical, chemical and biochemical methods
• Drafting Committee: ISO/TC 147/SC 2/WG 81 - TN, nitrate, ammonium using cell tests
• Current Stage: 6060 - International Standard published
• Start Date: 02-Feb-2023
• Due Date: 18-Jul-2022
• Completion Date: 02-Feb-2023

Overview

ISO 23695:2023 - Water quality - Determination of ammonium nitrogen in water - Small‑scale sealed tube method defines a routine analytical procedure for measuring ammonium nitrogen (NH4‑N) in drinking water, groundwater, surface water, wastewater, bathing water and mineral water using commercially available small‑scale sealed tubes. The method is based on the Berthelot reaction (indophenol blue formation) and is read with a photometer or spectrophotometer. Results may be reported as NH4, NH4‑N, NH3 or NH3‑N. The method covers a wide working range (typically 0.01 mg/L to 1 800 mg/L NH4‑N) but instrument/manufacturer ranges vary and samples may require dilution.

Key topics and technical requirements

• Principle: Ammonia reacts under strongly alkaline conditions with dichloroisocyanurate and salicylate or chlorophenol, catalysed by sodium nitroprusside, to form indophenol blue; absorbance is measured at manufacturer‑specified wavelengths (e.g. ~694, 650, 585 or 550 nm depending on range).
• Reagents and tubes: Uses manufacturer‑supplied sealed tubes containing reagents such as sodium dichloroisocyanurate, sodium salicylate, chlorophenol, sodium nitroprusside and NaOH or LiOH; reagent mixtures can differ between suppliers.
• Measurement range & calibration: Choose the sealed‑tube variant appropriate to the expected concentration; calibrate and verify photometer/spectrophotometer performance and use quality control checks and blanks.
• Interferences: The standard describes common ionic and matrix interferences (salinity, turbidity, colour, primary amines, reducing substances, heavy metals) and notes that manufacturers must provide interference limits. If interferences cannot be eliminated by filtration or dilution, alternative distillation methods (e.g. ISO 5664) are recommended.
• Sampling & preservation: Follow ISO 5667 series guidance; non‑preserved samples should be analysed promptly, otherwise stabilize (acidify) per guidance and re‑adjust pH before testing. Filtration (0.45 µm, on‑site, pressure) is required where suspended material is removable.
• Safety & competence: Tests must be performed by qualified personnel following laboratory safety practice.

Applications and users

ISO 23695:2023 is intended for:

• Environmental and public health laboratories performing routine ammonium monitoring in water and wastewater.
• Water utilities and wastewater treatment operators for process control and compliance testing.
• Field and portable testing workflows where small‑scale sealed‑tube photometers provide rapid, high‑throughput results.
• Manufacturers of sealed‑tube kits and photometers for method validation and documentation.

Benefits include fast, standardized measurements, suitability for a broad concentration range, and compatibility with automated photometers for routine monitoring programs.

Related standards

• ISO 5664 - Determination of ammonium - distillation and titration method (alternative for difficult matrices)
• ISO 5667‑1, ‑3, ‑10 - Water sampling and preservation guidance
• ISO 8466‑1 - Calibration and evaluation of analytical methods
• ISO/IEC 17025 - Laboratory competence and quality management

Keywords: ISO 23695:2023, ammonium nitrogen, NH4‑N, small‑scale sealed tube method, Berthelot reaction, water quality, photometer, spectrophotometer, water monitoring.

FINAL
INTERNATIONAL ISO/FDIS
DRAFT
STANDARD 23695
ISO/TC 147/SC 2
Water quality — Determination of
Secretariat: DIN
ammonium nitrogen in water —
Voting begins on:
2022-10-11 Small-scale sealed tube method
Voting terminates on:
2022-12-06
RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED TO
SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS, NOTIFICATION
OF ANY RELEVANT PATENT RIGHTS OF WHICH
THEY ARE AWARE AND TO PROVIDE SUPPOR TING
DOCUMENTATION.
IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS
Reference number
BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL, TECHNO-
ISO/FDIS 23695:2022(E)
LOGICAL, COMMERCIAL AND USER PURPOSES,
DRAFT INTERNATIONAL STANDARDS MAY ON
OCCASION HAVE TO BE CONSIDERED IN THE
LIGHT OF THEIR POTENTIAL TO BECOME STAN-
DARDS TO WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN
NATIONAL REGULATIONS. © ISO 2022

ISO/FDIS 23695:2022(E)
FINAL
INTERNATIONAL ISO/FDIS
DRAFT
STANDARD 23695
ISO/TC 147/SC 2
Water quality — Determination of
Secretariat: DIN
ammonium nitrogen in water —
Voting begins on:
Small-scale sealed tube method
Voting terminates on:
© ISO 2022
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on
the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below
or ISO’s member body in the country of the requester.
RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED TO
ISO copyright office
SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS, NOTIFICATION
OF ANY RELEVANT PATENT RIGHTS OF WHICH
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
THEY ARE AWARE AND TO PROVIDE SUPPOR TING
CH-1214 Vernier, Geneva
DOCUMENTATION.
Phone: [phone]
IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS
Reference number
Email: [e-mail]
BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL, TECHNO­
ISO/FDIS 23695:2022(E)
Website: www.iso.org
LOGICAL, COMMERCIAL AND USER PURPOSES,
DRAFT INTERNATIONAL STANDARDS MAY ON
Published in Switzerland
OCCASION HAVE TO BE CONSIDERED IN THE
LIGHT OF THEIR POTENTIAL TO BECOME STAN­
DARDS TO WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN
ii
NATIONAL REGULATIONS. © ISO 2022

ISO/FDIS 23695:2022(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 2
4 Principle . 2
5 Interferences . 2
6 Sampling and sample preparation . 3
7 Reagents . 3
8 Apparatus . 4
9 Reaction conditions for the colour reaction . 4
9.1 General . 4
9.2 Salicylate based reaction . . 4
9.3 Chlorophenol based reaction . 5
10 Quality control . 5
10.1 V erification of the spectrophotometer calibration and acceptability criteria . 5
10.2 System and interferences checks . 6
11 Calculation . 6
12 Expression of results .7
13 Test report . 7
Annex A (informative) Principle of alternative distillation . 8
Annex B (informative) Performance data .11
Bibliography .12
iii
ISO/FDIS 23695:2022(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to
the World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see
www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 2,
Physical, chemical and biochemical methods.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
iv
ISO/FDIS 23695:2022(E)
Introduction
Ammonium nitrogen is one of the possible forms of nitrogen present in water. It can come directly from
industrial or public waste, from fertilizers or can be generated by the microbial breakdown of urea
and proteins under anaerobic conditions. Ammonium nitrogen can also be found naturally in water in
aquifers with low flow velocities, which are confined and contain organic matter.
v
FINAL DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/FDIS 23695:2022(E)
Water quality — Determination of ammonium nitrogen in
water — Small-scale sealed tube method
WARNING — Persons using this document should be familiar with normal laboratory practice.
This document does not purport to address all of the safety problems, if any, associated with its
use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health practices.
IMPORTANT — It is absolutely essential that tests conducted in accordance with this document
be carried out by suitably qualified staff.
1 Scope
This document specifies a method for the determination of ammonium nitrogen (NH -N) in drinking
water, groundwater, surface water, wastewater, bathing water and mineral water using the small­scale
sealed tube method. The result can be expressed as NH or NH ­N or NH or NH ­N.
4 4 3 3
NOTE 1 In the habitual language use of sewage treatment and on the displays of automated sealed-tube test
photometers or spectrophotometers, NH without indication of the positive charge has become the common
notation for the parameter ammonium. This notation is adopted in this document even though not being quite
correct chemical nomenclature.
This method is applicable to (NH ­N) concentration ranges from 0,01 mg/l to 1 800 mg/l of NH ­N. The
4 4
measuring ranges of concentration can vary depending on the type of small-scale sealed tube method
of different manufacturers. Concentrations even slightly higher than the upper limit indicated in the
manufacturers manual relating to the small­scale sealed tube method used, cannot be reported as
accurate results. It is up to the user to choose the small­scale sealed tube test with the appropriate
application range or to adapt samples with concentrations exceeding the measuring range of a test by
preliminary dilution.
NOTE 2 The results of a small­scale sealed tube are most precise in the middle of the application range of the
test.
All manufacturers' methods are based on the Berthelot reaction and its modifications to develop
indophenol blue colour. Reagents mixtures can differ slightly based on manufacturers small-scale
sealed tube method, see Clause 9. This method is applicable to non-preserved samples by using small-
scale sealed tubes for the determination of drinking water, groundwater, surface water, wastewater and
to preserved samples. The method is applicable to samples with suspended materials if these materials
are removable by filtration.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 5664, Water quality — Determination of ammonium — Distillation and titration method
ISO 5667­1, Water quality — Sampling — Part 1: Guidance on the design of sampling programmes and
sampling techniques
ISO 5667­3, Water quality — Sampling — Part 3: Preservation and handling of water samples
ISO 5667­10, Water quality — Sampling — Part 10: Guidance on sampling of waste water
ISO 8466­1, Water quality — Calibration and evaluation of analytical methods — Part 1: Linear calibration
function
ISO/FDIS 23695:2022(E)
ISO/IEC 17025, General requirements for the competence of testing and calibration laboratories
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
3.1
small-scale sealed tube
glass tube commercially available on the market prefilled by different manufacturers with reagent(s) to
develop a colour to be read by a photometer or spectrophotometer
4 Principle
This method is based on the principle of Berthelot reaction and its modification to develop indophenol
blue colour. In strongly alkaline solution, ammonia ions react with dichloroisocyanurate and salicylate
ions or chlorophenol ions, forming blue indophenol. The presence of sodium nitroprusside as catalyst
promotes the development of the blue colour. Small­scale sealed tube is to be read on a photometer or
spectrophotometer.
The method serves to obtain the concentration of ammonium nitrogen present in the sample.
5 Interferences
Typical interferences are due to both cations and anions. Examples for maximum tolerable concentration
values are listed in Table 1. These values refer to both small­scale sealed tube methods applicable at
high concentrations and to those applicable at low concentrations of NH ­N.
Every manufacturer of small-scale sealed tubes shall provide information about interference levels
above which the ion interferes. The concentration of interfering substances can depend on the ratio of
sampled volume and predosed reagents, in the small­scale sealed tube.
Table 1 — Example of interfering ions
Ion Maximum tolerable concentration
mg/l
Cl⎺ 1 000
2−
1 000
SO
+
K 500
−
NO
+
Na 500
2− 50
CO
2+
Ca 500
2+
Cu 50
3+
Cr 50
2+
Co 50
2+
Zn 50
Cr(VI) 50
ISO/FDIS 23695:2022(E)
Primary amines can react under analysis conditions and lead to overestimated NH ­N values. All
reducing substances interfere and lead to underestimated results. The presence of urea is tolerated up
to concentrations which are 10 000 times greater than those of the ammonia present in the sample to
be analysed.
Turbidity, colour and high salinity levels can interfere both in the instrumental measurement and in the
speed of colour development.
As specified in ISO 5667-3, preliminary filtration is necessary using filters with 0,45 μm pore width.
The filtration has to be performed on-site. Filtration shall be carried out under pressure and not under
vacuum, to avoid ammonia leakage. Before filtering, the filter shall be washed with water with the same
pH as the sample. Generally, it can be done with the sample itself by discarding the first millilitres of
sample, already filtered.
When measuring a reagent blank value, follow the normal procedure but use pure water (7.1) instead
of sample.
When measuring a blank value caused by a coloured sample, add the sample to a small-scale sealed
tube but do not add further reagents. Then follow the normal procedure.
In some cases, interferences can be eliminated using appropriate dilutions such that interfering ions
fall below the maximum tolerable concentration and NH ­N remains within the measurement range.
It is the laboratory's responsibility to identify interferences by, for example, spiking with reference
material containing known amounts of ammonium nitrogen to the sample containing the suspected ion
or to a solution of known concentration of the suspected ion.
In case of higher concentration of interfering substances, highly coloured wastewater or turbid
suspension which cannot be easily filtered or diluted as described above, proceed with a distillation as
described in ISO 5664. An alternative method for distillation is described in Annex A.
6 Sampling and sample preparation
For methods of sampling and storing samples before analysis, proceed according to ISO 5667-1,
ISO 5667­3 and ISO 5667­10.
Persons performing the analysis shall be aware of the risks associated with the method.
It shall be noted that, in the case of acidification of unknown samples, toxic gases such as HCN and H S
can form. Work in a fume cupboard.
Non-preserved samples shall be analysed as soon as possible, in accordance with ISO 5667-3. Longer
storage periods require stabilization by acidification with sulfuric acid to pH < 2; if the sample is
acidified, before proceeding with the determination, the pH shall be brought within the range indicated
in the procedure for the test being used. When stabilizing samples, make sure to use ammonium-free
reagents. Store samples in the refrigerator as described in ISO 5667­3.
...

TC /SC
Date:  2022-07-29
TC /SC /WG ISO/FDIS 23695:2022(E)
ISO/TC 147/SC 2/WG 81
Secretariat: DIN
Document type:
Document subtype:
Document stage:
Document language:
Water quality — Determination of ammonium nitrogen in water — Small-scale
sealed tube method
First edition
Date: 2022-09-21
Document type:
Document subtype:
Document stage:
Document language:
ISO/FDIS 23695:2022(E)
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of
this publication may be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or
mechanical, including photocopying, or posting on the internet or an intranet, without prior written
permission. Permission can be requested from either ISO at the address below or ISO’sISO's member body
in the country of the requester.
ISO Copyright Office
Ch. de Blandonnet 8 • CP 401 • CH-1214 Vernier, Geneva , Switzerland
Tel. Phone: + 41 22 749 01 11
Email: [e-mail] + 41 22 749 09 47
[e-mail]
Website: www.iso.org
Published in Switzerland.
iv
ISO/FDIS 23695:2022(E)
Contents Page
Foreword . 6
Introduction . 7
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 2
4 Principle . 2
5 Interferences . 2
6 Sampling and sample preparation . 3
7 Reagents . 4
8 Apparatus . 4
9 Reaction conditions for the colour reaction . 5
9.1 General . 5
9.2 Salicylate based reaction . 5
9.3 Chlorophenol based reaction . 5
10 Quality control . 6
10.1 Verification of the spectrophotometer calibration and acceptability criteria . 6
10.2 System and interferences checks . 6
11 Calculation. 6
12 Expression of results . 7
13 Test report . 8
Annex A (informative) Principle of alternative distillation . 9
Annex B (informative) Performance data . 13
Bibliography . 14
v
ISO/FDIS 23695:2022(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of any
patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or on
the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the World
Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see
www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 2,
Physical, chemical and biochemical methods.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
vi
ISO/FDIS 23695:2022(E)
Introduction
Ammonium nitrogen is one of the possible forms of nitrogen present in water. It can come directly from
industrial or public waste, from fertilizers or can be generated by the microbial breakdown of urea and
proteins under anaerobic conditions. Ammonium nitrogen can also be found naturally in water in
aquifers with low flow velocities, which are confined and contain organic matter.
vii
FINAL DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/FDIS 23695:2022(E)

Water quality — Determination of ammonium nitrogen in
water — Small-scale sealed tube method
WARNING — Persons using this document should be familiar with normal laboratory practice. This
document does not purport to address all of the safety problems, if any, associated with its use. It is the
responsibility of the user to establish appropriate safety and health practices.
IMPORTANT — It is absolutely essential that tests conducted in accordance with this document be
carried out by suitably qualified staff.
1 Scope
This document specifies a method for the determination of ammonium nitrogen (NH -N) in drinking
water, groundwater, surface water, wastewater, bathing water and mineral water using the small-scale
sealed tube method. The result can be expressed as NH or NH -N or NH or NH -N.
4 4 3 3
NOTE 1 In the habitual language use of sewage treatment and on the displays of automated sealed-tube test
photometers or spectrophotometers, NH without indication of the positive charge has become the common
notation for the parameter ammonium. This notation is adopted in this document even though not being quite
correct chemical nomenclature.
This method is applicable to (NH -N) concentration ranges from 0,01 mg/l to 1 800 mg/l of NH -N. The
4 4
measuring ranges of concentration can vary depending on the type of small-scale sealed tube method of
different manufacturers. Concentrations even slightly higher than the upper limit indicated in the
manufacturers manual relating to the small-scale sealed tube method used, cannot be reported as
accurate results. It is up to the user to choose the small-scale sealed tube test with the appropriate
application range or to adapt samples with concentrations exceeding the measuring range of a test by
preliminary dilution.
NOTE 2 The results of a small-scale sealed tube are most precise in the middle of the application range of the test.
All manufacturers' methods are based on the Berthelot reaction and its modifications to develop
indophenol blue colour. Reagents mixtures can differ slightly based on manufacturers small-scale sealed
tube method, see Clause 9. This method is applicable to non-preserved samples by using small-scale
sealed tubes for the determination of drinking water, groundwater, surface water, wastewater and to
preserved samples. The method is applicable to samples with suspended materials if these materials are
removable by filtration.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 5664, Water quality — Determination of ammonium — Distillation and titration method
Water quality — Sampling — Part 1: Guidance on the design of sampling programmes and
ISO 5667--1,
sampling techniques
ISO/FDIS 23695:2022(E)
ISO 5667--3, Water quality — Sampling — Part 3: Preservation and handling of water samples
ISO 5667--10, Water quality — Sampling — Part 10: Guidance on sampling of waste water
ISO 8466--1, Water quality — Calibration and evaluation of analytical methods and estimation of
performance characteristics — Part 1: Statistical evaluation of the Linear calibration function
ISO/IEC 17025, General requirements for the competence of testing and calibration laboratories
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminologicalterminology databases for use in standardization at the following
addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https://www.iso.org/obp
— IEC Electropedia: available at https://www.electropedia.org/
3.1
small-scale sealed tube
glass tube commercially available on the market prefilled by different manufacturers with reagent(s),) to
develop a colour to be read by a photometer or spectrophotometer.
4 Principle
This method is based on the principle of Berthelot reaction and its modification to develop indophenol
blue colour. In strongly alkaline solution, ammonia ions react with dichloroisocyanurate and salicylate
ions or chlorophenol ions, forming blue indophenol. The presence of sodium nitroprusside as catalyst
promotes the development of the blue colour. Small-scale sealed tube is to be read on a photometer or
spectrophotometer.
The method serves to obtain the concentration of ammonium nitrogen present in the sample.
5 Interferences
Typical interferences are due to both cations and anions. Examples for maximum tolerable concentration
values are listed in Table 1. These values refer to both small-scale sealed tube methods applicable at high
concentrations and to those applicable at low concentrations of NH -N.
Every manufacturer of small-scale sealed tubes shall provide information about interference levels above
which the ion interferes. The concentration of interfering substances can depend on the ratio of sampled
volume and predosed reagents, in the small-scale sealed tube.
Table 1 — Example of interfering ions
Ion Maximum tolerable concentration
mg/l
Cl⎺ 1 000
2−
1 000
SO
+
K 500
ISO/FDIS 23695:2022(E)
−
NO
+
Na 500
2− 50
CO
2+
Ca 500
2+
Cu 50
3+
Cr 50
2+
Co 50
2+
Zn 50
Cr(VI) 50
Primary amines can react under analysis conditions and lead to overestimated NH -N values. All reducing
substances interfere and lead to underestimated results. The presence of urea is tolerated up to
concentrations which are 10 000 times greater than those of the ammonia present in the sample to be
analysed.
Turbidity, colour and high salinity levels can interfere both in the instrumental measurement and in the
speed of colour development.
As specified in ISO 5667-3, preliminary filtration is necessary using filters with 0,45 μm pore width. The
filtration has to be performed on-site. Filtration shall be carried out under pressure and not under
vacuum, to avoid ammonia leakage. Before filtering, the filter shall be washed with water with the same
pH as the sample. Generally, it can be done with the sample itself by discarding the first millilitres of
sample, already filtered.
When measuring a reagent blank value, follow the normal procedure but use pure water (7.1) instead of
sample.
When measuring a blank value caused by a coloured sample, add the sample to a small-scale sealed tube
but do not add further reagents. Then follow the normal procedure.
In some cases, interferences can be eliminated using appropriate dilutions such that interfering ions fall
below the maximum tolerable concentration and NH -N remains within the measurement range.
It is the laboratory's responsibility to identify interferences by, for example, spiking with reference
material containing known amounts of ammonium nitrogen to the sample containing the suspected ion
or to a solution of known concentration of the suspected ion.
In case of higher concentration of interfering substances, highly coloured wastewater or turbid
suspension which cannot be easily filtered or diluted, as described above, proceed with a distillation as
described in ISO 5664. An alternative method for distillation is described in Annex A.
6 Sampling and sample preparation
For methods of sampling and storing samples before analysis see, proceed according to ISO 5667--1,
ISO 5667--3 and ISO 5667--10.
Persons performing the analysis shall be aware of the risks associated with the method.
It shall be noted that, in the case of acidification of unknown samples, toxic gases such as HCN and H S
maycan form. Work in a fume cupboard.
Non-preserved samples shall be analysed as soon as possible, following in accordance with ISO 5667-3.
Longer storage periods require stabilization by acidification with sulfuric acid to pH < < 2; if the sample
ISO/FDIS 23695:2022(E)
is acidified, before proceeding with the determination, the pH shall be brought within the range indicated
in the procedure for the test being used. When stabilizing samples, make sure to use ammonium-free
reagents. Store samples in the refrigerator as described in ISO 5667--3.
Due to the differences in used small-scale sealed tube between all the manufacturers it is recommended
to follow manufacturers' manuals.
7 Reagents
7.1 Water, the concentration of nitrogen in the used water shall be below 25 % of the lower
measurement range of the used sealed tube.
7.2 Ammonium chloride, NH Cl, of analytical grade, previously dried at 105 °C for 2 h, to be used for
preparing suitable solutions to verify the calibration in the NH -N concentration range. Commercially
available ammonium chloride solutions, with known concentration, can also be used as reference
material.
7.3 Reagents provided by the manufacturers for the small-scale sealed tube method and used to
determine NH -N with colour reactions (see Clause 9)
7.3.1 Sodium dichloroisocyanurate, C Cl N NaO .
3 2 3 3
7.3.2 Sodium salicylate, C H NaO .
7 5 3
7.3.3 Sodium nitroprusside, Na [Fe(CN) NO].
2 5
7.3.4 Chlorophenol, (Cl)C H OH.
6 4
7.3.5 Sodium hydroxide, NaOH
7.3.6 Lithium hydroxide, LiOH
8 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
8.1 Small-scale sealed tubes, for different measuring ranges of NH -N concentrations: low, medium,
high and very high.
8.2 Photometer or spect
...

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 23695
First edition
2023-02
Water quality — Determination of
ammonium nitrogen in water —
Small-scale sealed tube method
Qualité de l'eau — Détermination de l'azote ammoniacal dans l'eau
— Méthode à petite échelle en tubes fermés
Reference number
© ISO 2023
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on
the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below
or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: [phone]
Email: [e-mail]
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 2
4 Principle . 2
5 Interferences . 2
6 Sampling and sample preparation . 3
7 Reagents . 4
8 Apparatus . 4
9 Reaction conditions for the colour reaction . 4
9.1 General . 4
9.2 Salicylate based reaction . . 5
9.3 Chlorophenol based reaction . 5
10 Quality control . 5
10.1 V erification of the calibration and acceptability criteria . 5
10.2 System and interferences checks . 6
11 Calculation . 6
12 Expression of results .7
13 Test report . 7
Annex A (informative) Principle of alternative distillation . 8
Annex B (informative) Performance data .11
Bibliography .12
iii
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to
the World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see
www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 2,
Physical, chemical and biochemical methods.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
iv
Introduction
Ammonium nitrogen is one of the possible forms of nitrogen present in water. It can come directly from
industrial or public waste, from fertilizers or can be generated by the microbial breakdown of urea
and proteins under anaerobic conditions. Ammonium nitrogen can also be found naturally in water in
aquifers with low flow velocities, which are confined and contain organic matter.
v
INTERNATIONAL STANDARD ISO 23695:2023(E)
Water quality — Determination of ammonium nitrogen in
water — Small-scale sealed tube method
WARNING — Persons using this document should be familiar with normal laboratory practice.
This document does not purport to address all of the safety problems, if any, associated with its
use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health practices.
IMPORTANT — It is absolutely essential that tests conducted in accordance with this document
be carried out by suitably qualified staff.
1 Scope
This document specifies a method for the determination of ammonium nitrogen (NH -N) in drinking
water, groundwater, surface water, wastewater, bathing water and mineral water using the small-scale
sealed tube method. The result can be expressed as NH or NH -N or NH or NH -N.
4 4 3 3
NOTE 1 In the habitual language use of sewage treatment and on the displays of automated sealed-tube test
photometers or spectrophotometers, NH without indication of the positive charge has become the common
notation for the parameter ammonium. This notation is adopted in this document even though not being quite
correct chemical nomenclature.
This method is applicable to (NH -N) concentration ranges from 0,01 mg/l to 1 800 mg/l of NH -N. The
4 4
measuring ranges of concentration can vary depending on the type of small-scale sealed tube method
of different manufacturers. Concentrations even slightly higher than the upper limit indicated in the
manufacturers manual relating to the small-scale sealed tube method used, cannot be reported as
accurate results. It is up to the user to choose the small-scale sealed tube test with the appropriate
application range or to adapt samples with concentrations exceeding the measuring range of a test by
preliminary dilution.
NOTE 2 The results of a small-scale sealed tube are most precise in the middle of the application range of the
test.
All manufacturers' methods are based on the Berthelot reaction and its modifications to develop
indophenol blue colour. Reagents mixtures can differ slightly based on manufacturers small-scale
sealed tube method, see Clause 9. This method is applicable to non-preserved samples by using small-
scale sealed tubes for the determination of drinking water, groundwater, surface water, wastewater and
to preserved samples. The method is applicable to samples with suspended materials if these materials
are removable by filtration.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 5664, Water quality — Determination of ammonium — Distillation and titration method
ISO 5667-1, Water quality — Sampling — Part 1: Guidance on the design of sampling programmes and
sampling techniques
ISO 5667-3, Water quality — Sampling — Part 3: Preservation and handling of water samples
ISO 5667-10, Water quality — Sampling — Part 10: Guidance on sampling of waste water
ISO 8466-1, Water quality — Calibration and evaluation of analytical methods — Part 1: Linear calibration
function
ISO/IEC 17025, General requirements for the competence of testing and calibration laboratories
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
3.1
small-scale sealed tube
glass tube commercially available on the market prefilled by different manufacturers with reagent(s) to
develop a colour to be read by a photometer or spectrophotometer
4 Principle
This method is based on the principle of Berthelot reaction and its modification to develop indophenol
blue colour. In strongly alkaline solution, ammonia reacts with dichloroisocyanurate and salicylate
ions or chlorophenol ions, forming blue indophenol. The presence of sodium nitroprusside as catalyst
promotes the development of the blue colour. Small-scale sealed tube is read on a photometer or
spectrophotometer.
The method serves to obtain the concentration of ammonium nitrogen present in the sample.
5 Interferences
Typical interferences are due to both cations and anions. Examples for maximum tolerable concentration
values are listed in Table 1. These values refer to both small-scale sealed tube methods applicable at
high concentrations and to those applicable at low concentrations of NH -N.
Every manufacturer of small-scale sealed tubes shall provide information about interference levels
above which the ion interferes. The concentration of interfering substances can depend on the ratio of
sampled volume and predosed reagents, in the small-scale sealed tube.
Table 1 — Example of interfering ions
Ion Maximum tolerable concentration
mg/l
Cl⎺ 1 000
1 000
2−
SO
+
K 500
−
NO
+
Na 500
2−
CO
2+
Ca 500
2+
Cu 50
3+
Cr 50
2+
Co 50
2+
Zn 50
TTabablele 1 1 ((ccoonnttiinnueuedd))
Ion Maximum tolerable concentration
mg/l
Cr(VI) 50
Primary amines can react under analysis conditions and lead to overestimated NH -N values. All
reducing substances interfere and lead to underestimated results. The presence of urea is tolerated up
to concentrations which are 10 000 times greater than those of the ammonia present in the sample to
be analysed.
Turbidity, colour and high salinity levels can interfere both in the instrumental measurement and in the
speed of colour development.
As specified in ISO 5667-3, preliminary filtration is necessary using filters with 0,45 μm pore width.
Filtration has to be performed on-site. Filtration shall be carried out under pressure and not under
vacuum, to avoid ammonia leakage. Before filtering, the filter shall be washed with water with the
same pH as the sample. Generally, it can be done with the sample itself by discarding the first millilitres
of sample, already filtered.
When measuring a reagent blank value, follow the normal procedure but use pure water (7.1) instead
of sample.
When measuring a blank value caused by a coloured sample, add the sample to a small-scale sealed
tube but do not add further reagents. Then follow the normal procedure.
In some cases, interferences can be eliminated using appropriate dilutions such that interfering ions
fall below the maximum tolerable concentration and NH -N remains within the measurement range.
It is the laboratory's responsibility to identify interferences by, for example, spiking with reference
material containing known amounts of ammonium nitrogen to the sample containing the suspected ion
or to a solution of known concentration of the suspected ion.
In case of higher concentration of interfering substances, highly coloured wastewater or turbid
suspension which cannot be easily filtered or diluted as described above, proceed with a distillation as
described in ISO 5664. An alternative method for distillation is described in Annex A.
6 Sampling and sample preparation
For methods of sampling and storing samples before analysis, proceed according to ISO 5667-1,
ISO 5667-3 and ISO 5667-10.
Persons performing the analysis shall be aware of the risks associated with the method.
It shall be noted that, in the case of acidification of unknown samples, toxic gases such as HCN and H S
can form. Work in a fume cupboard.
Non-preserved samples shall be analysed as soon as possible, in accordance with ISO 5667-3. Longer
storage periods require stabilization by acidification with sulfuric acid to pH < 2; if the sample is
acidified, before proceeding with the determination, the pH shall be brought within the range indicated
in the procedure for the test being used. When stabilizing samples, make sure to use ammonium-free
reagents. Store samples in the refrigerator as described in ISO 5667-3.
Due to the differences in used small-scale sealed tube between all the manufacturers it is recommended
to follow manufacturers' manuals.
7 Reagents
7.1 Water, the concentration of nitrogen in the used water shall be below 25 % of the lower
measurement range of the used sealed tube.
7.2 Ammonium chloride, NH Cl, of analytical grade, previously dried at 105 °C for 2 h, to be used for
preparing suitable solutions to verify the calibration in the NH -N concentration range. Commercially
available ammonium chloride solutions, with known concentration, can also be used as reference
m
...

Norme
internationale
ISO 23695
Première édition
Qualité de l’eau — Détermination
2023-02
de l’azote-ammonium dans l’eau —
Méthode à petite échelle en tubes
fermés
Water quality — Determination of ammonium nitrogen in water
— Small-scale sealed tube method
Numéro de référence
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2023
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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E-mail: [e-mail]
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Publié en Suisse
ii
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe. 2
5 Interférences . 2
6 Échantillonnage et préparation des échantillons . 3
7 Réactifs . 4
8 Appareillage . 4
9 Conditions de réaction pour la réaction colorimétrique . 5
9.1 Généralités .5
9.2 Réaction à base de salicylate .5
9.3 Réaction à base de chlorophénol .5
10 Contrôle qualité . 6
10.1 Vérification de l’étalonnage et des critères d’acceptabilité.6
10.2 Contrôles du système et des interférences .6
11 Calculs . 6
12 Expression des résultats . 7
13 Rapport d’essai . 7
Annexe A (informative) Principe de distillation alternative . 9
Annexe B (informative) Données de performance .12
Bibliographie .13

iii
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document
a été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2
(voir www.iso.org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété. Les détails concernant les références aux droits de propriété
intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration du document sont indiqués dans
l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de
l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au
commerce (OTC), voir www.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 147, Qualité de l’eau, sous-comité SC 2,
Méthodes physiques, chimiques et biochimiques, en collaboration avec le comité technique CEN/TC 230, Analyse
de l'eau, du Comité européen de normalisation (CEN) conformément à l’Accord de coopération technique
entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes se
trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.

iv
Introduction
L’azote-ammonium est l’une des formes possibles d’azote présent dans l’eau. Il peut provenir directement
de déchets industriels ou ménagers, ou d’engrais, ou peut être généré par la dégradation microbienne de
l’urée et des protéines dans des conditions anaérobies. L’azote-ammonium peut également être trouvé
naturellement dans l’eau des aquifères à faible vitesse d’écoulement, qui sont confinés et qui contiennent de
la matière organique.
v
Norme internationale ISO 23695:2023(fr)
Qualité de l’eau — Détermination de l’azote-ammonium dans
l’eau — Méthode à petite échelle en tubes fermés
AVERTISSEMENT — Il convient que les utilisateurs du présent document maîtrisent les pratiques
courantes de laboratoire. Le présent document n’a pas pour but de traiter tous les problèmes de
sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son utilisation. Il incombe à l’utilisateur d’établir des pratiques
appropriées en matière d’hygiène et de sécurité.
IMPORTANT — Il est indispensable que les essais menés selon le présent document soient effectués
par un personnel adéquatement qualifié.
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de détermination de l’azote-ammonium (NH -N) dans l’eau
potable, les eaux souterraines, les eaux de surface, les eaux usées, les eaux de baignade et les eaux minérales
en utilisant la méthode à petite échelle en tubes fermés. Le résultat peut être exprimé en NH ou NH -N ou
4 4
NH ou NH -N.
3 3
NOTE 1 Dans le langage habituel du traitement des eaux usées et sur les écrans des photomètres ou des
spectrophotomètres à essai en tubes fermés automatisés, NH sans indication de la charge positive est devenu la
notation courante pour le paramètre ammonium. Cette notation est adoptée dans le présent document, même si la
nomenclature chimique n’est pas tout à fait correcte.
Cette méthode s’applique aux plages de concentration de (NH -N) de 0,01 mg/l à 1 800 mg/l de NH -N. Les
4 4
plages de concentration de mesure peuvent varier en fonction du type de méthode en tubes fermés à petite
échelle des différents fabricants. Les concentrations, même légèrement supérieures à la limite supérieure
indiquée dans le manuel du fabricant concernant la méthode en tubes fermés à petite échelle utilisée, ne
peuvent pas être consignées comme des résultats exacts. Il appartient à l’utilisateur de choisir l’essai en
tubes fermés à petite échelle avec la plage d’application appropriée ou d’adapter les échantillons dont les
concentrations dépassent la plage de mesure d’un essai par dilution préliminaire.
NOTE 2 Les résultats en tubes fermés à petite échelle sont plus précis au milieu de la plage d’application de l’essai.
Toutes les méthodes des fabricants sont basées sur la réaction de Berthelot et ses modifications pour
développer la couleur bleu indophénol. Les mélanges de réactifs peuvent différer légèrement en fonction
de la méthode en tubes fermés à petite échelle du fabricant, voir l’Article 9. Cette méthode s’applique aux
échantillons non stabilisés en utilisant des tubes fermés à petite échelle pour la détermination de l’eau
potable, des eaux souterraines, des eaux de surface et des eaux usées, ainsi qu’aux échantillons stabilisés. La
méthode s’applique aux échantillons contenant des matériaux en suspension si ces matériaux peuvent être
retirés par filtration.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour
les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 5664, Qualité de l'eau — Dosage de l'ammonium — Méthode par distillation et titrimétrie
ISO 5667-1, Qualité de l’eau — Échantillonnage — Partie 1: Recommandations relatives à la conception des
programmes et des techniques d’échantillonnage
ISO 5667-3, Qualité de l’eau — Échantillonnage — Partie 3: Conservation et manipulation des échantillons d’eau

ISO 5667-10, Qualité de l’eau — Échantillonnage — Partie 10: Lignes directrices pour l’échantillonnage des eaux
résiduaires
ISO 8466-1, Qualité de l'eau — Étalonnage et évaluation des méthodes d'analyse — Partie 1: Fonction linéaire
d'étalonnage
ISO/IEC 17025, Exigences générales concernant la compétence des laboratoires d'étalonnages et d'essais
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en normalisation,
consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https:// www .electropedia .org/
3.1
tube fermé à petite échelle
tube en verre disponible sur le marché, prérempli par différents fabricants avec un ou plusieurs réactifs,
destiné à développer une couleur à lire par un photomètre ou un spectrophotomètre
4 Principe
Cette méthode est basée sur le principe de la réaction de Berthelot et sa modification pour développer
la couleur bleu indophénol. Dans une solution fortement alcaline, l’ammoniac réagit avec les ions de
dichloroisocyanurate et de salicylate ou de chlorophénol, formant de l’indophénol bleu. La présence de
nitroprussiate de sodium comme catalyseur favorise le développement de la couleur bleu. Le tube fermé à
petite échelle est lu sur un photomètre ou un spectrophotomètre.
La méthode permet d’obtenir la concentration en azote-ammonium présente dans l’échantillon.
5 Interférences
Les interférences types sont dues à la fois aux cations et aux anions. Des exemples de valeurs de concentration
maximale tolérable sont donnés dans le Tableau 1. Ces valeurs font référence à la fois aux méthodes en
tubes fermés à petite échelle applicables à des concentrations élevées et à celles applicables à de faibles
concentrations de NH -N.
Chaque fabricant de tubes fermés à petite échelle doit fournir des informations sur les niveaux d’interférence
au-delà desquels l’ion interfère. La concentration des substances interférentes peut dépendre du rapport
entre le volume prélevé et les réactifs pré-dosés, dans le tube fermé à petite échelle.

Tableau 1 — Exemple d’ions interférents
Ion Concentration maximale tolérable
mg/l
Cl⎺ 1 000
2−
1 000
SO
+
K 500
−
NO
+
Na 500
2−
CO
2+
Ca 500
2+
Cu 50
3+
Cr 50
2+
Co 50
2+
Zn 50
Cr(VI) 50
Les amines primaires peuvent réagir dans les conditions d’analyse et conduire à des valeurs de NH -N
surestimées. Toutes les substances réductrices interfèrent et conduisent à des résultats sous-estimés. La
présence d’urée est tolérée jusqu’à des concentrations 10 000 fois supérieures à celles de l’ammoniac présent
dans l’échantillon à analyser.
La turbidité, la couleur et des niveaux élevés de salinité peuvent interférer à la fois dans la mesure
instrumentale et dans la vitesse de développement des couleurs.
Comme spécifié dans l’ISO 5667-3, une filtration préliminaire est nécessaire en utilisant des filtres d’une
taille de pore de 0,45 μm. La filtration doit être réalisée sur site. La filtration doit être effectuée sous pression
et non sous vide, afin d’éviter les fuites d’ammoniac. Avant la filtration, le filtre doit être lavé avec de l’eau
ayant le même pH que l’échantillon. En général, cela peut être fait avec l’échantillon lui-même en éliminant
les premiers millilitres d’échantillon, déjà filtrés.
Lors de la mesure d’une valeur de blanc réactif, suivre le mode opératoire normal, mais utiliser de l’eau pure
(7.1) à la place de l’échantillon.
Lors du mesurage d’une valeur de blanc due à un échantillon coloré, ajouter l’échantillon dans un tube fermé
à petite échelle, mais ne pas ajouter d’autres réactifs. Suivez ensuite le mode opératoire normal.
Dans certains cas, les interférences peuvent être éliminées en utilisant des dilutions appropriées de sorte
que les ions interférents tombent en dessous de la concentration maximale tolérable et que le NH -N reste
dans la plage de mesure.
Il est de la responsabilité du laboratoire d’identifier les interférences, par exemple en enrichissant
l’échantillon contenant l’ion suspecté ou une solution de concentration connue de l’ion suspecté avec un
matériau de référence contenant des quantités connues d’azote-ammonium.
En cas de concentration plus élevée de substances interférentes, d’eaux usées fortement colorées ou de
suspension trouble qui ne peut pas être facilement filtrée ou diluée comme décrit ci-dessus, procéder à une
distillation comme décrit dans l’ISO 5664. L’Annexe A décrit une autre méthode de distillation.
6 Échantillonnage et préparation des échantillons
Pour les méthodes d’échantillonnage et de stockage des échantillons avant analyse, procéder conformément
à l’ISO 5667-1, l’ISO 5667-3 et l’ISO 5667-10.

Les personnes réalisant l’analyse doivent être conscientes des risques associés à la méthode.
Il faut noter que, dans le cas de l’acidification d’échantillons inconnus, des gaz toxiques tels que le HCN et le
H S peuvent se former. Travailler sous hotte aspirante.
Les échantillons non stabilisés doivent être analysés dès que possible, conformément à l’ISO 5667-3. Des
périodes de stockage plus longues nécessitent une stabilisation par acidification à l’acide sulfurique jusqu’à
un pH < 2; si l’échantillon est acidifié, avant de procéder à la détermination, le pH doit être ramené dans
la plage indiquée dans le mode opératoire d’essai utilisé. Lors de la stabilisation des échantillons, veiller
à utiliser des réactifs exempts d’ammonium. Stocker les échantillons au réfrigérateur comme décrit dans
l’ISO 5667-3.
En raison des différences dans les tubes fermés à petite échelle utilisés par les différents fabricants, il est
recommandé de suivre les manuels des fabricants.
7 Réactifs
7.1 Eau, la concentration d’azote dans l’eau utilisée doit être inférieure à 25 % de la plage de mesure
inférieure du tube fermé utilisé.
7.2 Chlorure d’ammonium, NH Cl, de qualité analytique, préalablement séché à 105 °C pendant 2 h, à
utiliser pour préparer des solutions appropriées afin de vérifier l’étalonnage dans la gamme de concentrations
de NH -N. Des solutions de chlorure d’ammonium disponibles sur le marché, dont la concentration est
connue, peuvent également être utilisées comme matériau de référence.
7.3 Réactifs fournis par les fabricants pour la méthode de
...

ISO/TC 147/SC 2
Secrétariat: DIN
Date: 2025-12-08
Première édition
2023-02
Qualité de l’eau — Détermination de l’azote-ammonium dans l’eau —
Méthode à petite échelle en tubes fermés
Water quality — Determination of ammonium nitrogen in water — Small-scale sealed tube method

Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre oeuvre, aucune partie
de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique
ou mécanique, y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable.
Une autorisation peut être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du
demandeur.
ISO copyright office
Case postaleCP 401 • • Ch. de Blandonnet 8
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Tél.: +Phone: + 41 22 749 01 11
E-mail: [e-mail]
WebWebsite: www.iso.org
Publié en Suisse
ii
Sommaire Page
Avant-propos . iv
Introduction . v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe . 2
5 Interférences . 2
6 Échantillonnage et préparation des échantillons . 4
7 Réactifs . 4
8 Appareillage . 4
9 Conditions de réaction pour la réaction colorimétrique . 5
9.1 Généralités . 5
9.2 Réaction à base de salicylate . 5
9.3 Réaction à base de chlorophénol . 5
10 Contrôle qualité . 6
10.1 Vérification de l’étalonnage et des critères d’acceptabilité . 6
10.2 Contrôles du système et des interférences . 6
11 Calculs . 7
12 Expression des résultats . 8
13 Rapport d’essai . 8
Annexe A (informative) Principe de distillation alternative . 9
Annexe B (informative) Données de performance . 12
Bibliographie . 14

iii
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont décrites
dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents critères
d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été rédigé
conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2
(voir www.iso.org/directives).
Field Code Changed
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de droits
de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir
identifié de tels droits de propriété. Les détails concernant les références aux droits de propriété intellectuelle
ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou
dans la liste des déclarations de brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions spécifiques
de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux
principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au commerce
(OTC), voir www.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 147, Qualité de l’eau, sous-comité SC 2,
Méthodes physiques, chimiques et biochimiques.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes se
trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
iv
Introduction
L’azote-ammonium est l’une des formes possibles d’azote présent dans l’eau. Il peut provenir directement de
déchets industriels ou ménagers, ou d’engrais, ou peut être généré par la dégradation microbienne de l’urée
et des protéines dans des conditions anaérobies. L’azote-ammonium peut également être trouvé
naturellement dans l’eau des aquifères à faible vitesse d’écoulement, qui sont confinés et qui contiennent de
la matière organique.
v
Qualité de l’eau — Détermination de l’azote-ammonium dans l’eau —
Méthode à petite échelle en tubes fermés
AVERTISSEMENT — Il convient que les utilisateurs du présent document maîtrisent les pratiques
courantes de laboratoire. Le présent document n’a pas pour but de traiter tous les problèmes de
sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son utilisation. Il incombe à l’utilisateur d’établir des pratiques
appropriées en matière d’hygiène et de sécurité.
IMPORTANT — Il est indispensable que les essais menés selon le présent document soient effectués
par un personnel adéquatement qualifié.
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de détermination de l’azote-ammonium (NH4-N) dans l’eau
potable, les eaux souterraines, les eaux de surface, les eaux usées, les eaux de baignade et les eaux minérales
en utilisant la méthode à petite échelle en tubes fermés. Le résultat peut être exprimé en NH ou NH -N ou
4 4
NH ou NH -N.
3 3
NOTE 1 Dans le langage habituel du traitement des eaux usées et sur les écrans des photomètres ou des
spectrophotomètres à essai en tubes fermés automatisés, NH4 sans indication de la charge positive est devenu la notation
courante pour le paramètre ammonium. Cette notation est adoptée dans le présent document, même si la nomenclature
chimique n’est pas tout à fait correcte.
Cette méthode s’applique aux plages de concentration de (NH4-N) de 0,01 mg/l à 1 800 mg/l de NH4-N. Les
plages de concentration de mesure peuvent varier en fonction du type de méthode en tubes fermés à petite
échelle des différents fabricants. Les concentrations, même légèrement supérieures à la limite supérieure
indiquée dans le manuel du fabricant concernant la méthode en tubes fermés à petite échelle utilisée, ne
peuvent pas être consignées comme des résultats exacts. Il appartient à l’utilisateur de choisir l’essai en tubes
fermés à petite échelle avec la plage d’application appropriée ou d’adapter les échantillons dont les
concentrations dépassent la plage de mesure d’un essai par dilution préliminaire.
NOTE 2 Les résultats en tubes fermés à petite échelle sont plus précis au milieu de la plage d’application de l’essai.
Toutes les méthodes des fabricants sont basées sur la réaction de Berthelot et ses modifications pour
développer la couleur bleu indophénol. Les mélanges de réactifs peuvent différer légèrement en fonction de
la méthode en tubes fermés à petite échelle du fabricant, voir l’Article 9l’Article 9. Cette méthode s’applique
aux échantillons non stabilisés en utilisant des tubes fermés à petite échelle pour la détermination de l’eau
potable, des eaux souterraines, des eaux de surface et des eaux usées, ainsi qu’aux échantillons stabilisés. La
méthode s’applique aux échantillons contenant des matériaux en suspension si ces matériaux peuvent être
retirés par filtration.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur contenu,
des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 5664, Qualité de l'eau — Dosage de l'ammonium — Méthode par distillation et titrimétrie
ISO 5667--1, Qualité de l’eau — Échantillonnage — Partie 1: Recommandations relatives à la conception des
programmes et des techniques d’échantillonnage
ISO 5667--3, Qualité de l’eau — Échantillonnage — Partie 3: Conservation et manipulation des échantillons
d’eau
ISO 5667--10, Qualité de l’eau — Échantillonnage — Partie 10: Lignes directrices pour l’échantillonnage des
eaux résiduaires
ISO 8466--1, Qualité de l'eau — Étalonnage et évaluation des méthodes d'analyse — Partie 1: Fonction linéaire
d'étalonnage
ISO/IEC 17025, Exigences générales concernant la compétence des laboratoires d'étalonnages et d'essais
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en normalisation,
consultables aux adresses suivantes:
— — ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https://www.iso.org/obp
— — IEC Electropedia: disponible à l’adresse https://www.electropedia.org/
3.1 3.1
tube fermé à petite échelle
tube en verre disponible sur le marché, prérempli par différents fabricants avec un ou plusieurs réactifs,
destiné à développer une couleur à lire par un photomètre ou un spectrophotomètre
4 Principe
Cette méthode est basée sur le principe de la réaction de Berthelot et sa modification pour développer la
couleur bleu indophénol. Dans une solution fortement alcaline, l’ammoniac réagit avec les ions de
dichloroisocyanurate et de salicylate ou de chlorophénol, formant de l’indophénol bleu. La présence de
nitroprussiate de sodium comme catalyseur favorise le développement de la couleur bleu. Le tube fermé à
petite échelle est lu sur un photomètre ou un spectrophotomètre.
La méthode permet d’obtenir la concentration en azote-ammonium présente dans l’échantillon.
5 Interférences
Les interférences types sont dues à la fois aux cations et aux anions. Des exemples de valeurs de concentration
maximale tolérable sont donnés dans le Tableau 1Tableau 1. Ces valeurs font référence à la fois aux méthodes
en tubes fermés à petite échelle applicables à des concentrations élevées et à celles applicables à de faibles
concentrations de NH -N.
Chaque fabricant de tubes fermés à petite échelle doit fournir des informations sur les niveaux d’interférence
au-delà desquels l’ion interfère. La concentration des substances interférentes peut dépendre du rapport entre
le volume prélevé et les réactifs pré-dosés, dans le tube fermé à petite échelle.

Tableau 1 — Exemple d’ions interférents
Ion Concentration maximale tolérable
mg/l
Cl⎺ 1 000
2−
1 000
SO
+
K 500
−
NO 250
+
Na 500
2−
CO 50
2+
Ca 500
2+
Cu 50
3+
Cr 50
2+
Co 50
2+
Zn 50
Cr(VI) 50
Les amines primaires peuvent réagir dans les conditions d’analyse et conduire à des valeurs de NH -N
surestimées. Toutes les substances réductrices interfèrent et conduisent à des résultats sous-estimés. La
présence d’urée est tolérée jusqu’à des concentrations 10 000 fois supérieures à celles de l’ammoniac présent
dans l’échantillon à analyser.
La turbidité, la couleur et des niveaux élevés de salinité peuvent interférer à la fois dans la mesure
instrumentale et dans la vitesse de développement des couleurs.
Comme spécifié dans l’ISO 5667--3, une filtration préliminaire est nécessaire en utilisant des filtres d’une taille
de pore de 0,45 μm. La filtration doit être réalisée sur site. La filtration doit être effectuée sous pression et non
sous vide, afin d’éviter les fuites d’ammoniac. Avant la filtration, le filtre doit être lavé avec de l’eau ayant le
même pH que l’échantillon. En général, cela peut être fait avec l’échantillon lui-même en éliminant les premiers
millilitres d’échantillon, déjà filtrés.
Lors de la mesure d’une valeur de blanc réactif, suivre le mode opératoire normal, mais utiliser de l’eau pure
(7.1(7.1)) à la place de l’échantillon.
Lors du mesurage d’une valeur de blanc due à un échantillon coloré, ajouter l’échantillon dans un tube fermé
à petite échelle, mais ne pas ajouter d’autres réactifs. Suivez ensuite le mode opératoire normal.
Dans certains cas, les interférences peuvent être éliminées en utilisant des dilutions appropriées de sorte que
les ions interférents tombent en dessous de la concentration maximale tolérable et que le NH -N reste dans la
plage de mesure.
Il est de la responsabilité du laboratoire d’identifier les interférences, par exemple en enrichissant
l’échantillon contenant l’ion suspecté ou une solution de concentration connue de l’ion suspecté avec un
matériau de référence contenant des quantités connues d’azote-ammonium.
En cas de concentration plus élevée de substances interférentes, d’eaux usées fortement colorées ou de
suspension trouble qui ne peut pas être facilement filtrée ou diluée comme décrit ci-dessus, procéder à une
distillation comme décrit dans l’ISO 5664. L’Annexe AL’Annexe A décrit une autre méthode de distillation.
6 Échantillonnage et préparation des échantillons
Pour les méthodes d’échantillonnage et de stockage des échantillons avant analyse, procéder conformément
à l’ISO 5667--1, l’ISO 5667--3 et l’ISO 5667--10.
Les personnes réalisant l’analyse doivent être conscientes des risques associés à la méthode.
Il faut noter que, dans le cas de l’acidification d’échantillons inconnus, des gaz toxiques tels que le HCN et le
H S peuvent se former. Travailler sous hotte aspirante.
Les échantillons non stabilisés doivent être analysés dès que possible, conformément à l’ISO 5667--3. Des
périodes de stockage plus longues nécessitent une stabilisation par acidification à l’acide sulfurique jusqu’à
un pH < 2; si l’échantillon est acidifié, avant de procéder à la détermination, le pH doit être ramené dans la
plage indiquée dans le mode opératoire d’essai utilisé. Lors de la stabilisation des échantillons, veiller à utiliser
des réactifs exempts d’ammonium. Stocker les échantillons au réfrigérateur comme décrit dans l’ISO 5667--3.
En raison des différences dans les tubes fermés à petite échelle utilisés par les différents fabricants, il est
recommandé de suivre les manuels des fabricants.
7 Réactifs
7.1 7.1 Eau, la concentration d’azote dans l’eau utilisée doit être inférieure à 25 % de la plage de
mesure inférieure du tube fermé utilisé.
7.2 7.2 Chlorure d’ammonium, NH Cl, de qualité analytique, préalablement séché à 105 °C
pendant 2 h, à utiliser pour préparer des solutions appropriées afin de vérifier l’étalonnage dans la gamme de
concentrations de NH4-N. Des solutions de chlorure d’ammonium disponibles sur le marché, dont la
concentration est connue, peuvent également être utilisées comme matériau de référence.
7.3 7.3 Réactifs fournis par les fabricants pour la méthode des tubes fermés à petite
échelle et utilisés pour déterminer le NH -N avec des réactions colorimétriques (voir
l’Article 9l’Article 9)).
7.3.1 7.3.1 Dichloroisocyanurate de sodium, C Cl N NaO .
3 2 3 3
7.3.2 7.3.2 Salicylate de sodium, C H NaO .
7 5 3
7.3.3 7.3.3 Nitroprussiate de sodium, Na [Fe(CN) NO].
2 5
7.3.4 7.3.4 Chlorophénol, (Cl)C H OH.
6 4
7.3.5 7.3.5 Hydroxyde de sodium, NaOH.
7.3.6 7.3.6 Hydroxyde de lithium, LiOH.
8 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
8.1 8.1 Tubes fermés à petite échelle, pour différentes plages de mesure de concentrations en
NH4-N: faible, moyenne, élevée et très élevée.
8.2 8.2 Photomètre ou spectrophotomètre, pour la lecture des tubes fermés à petite échelle à
une longueur d’onde conforme aux réactions colorimétriques données en 9.29.2 ou 9.39.3.
NOTE En général, un instrument automatisé possède, en mémoire, les courbes d’étalonnage requises pour une
utilisation de routine et peut également en enregistrer de nouvelles.
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