ISO 22174:2005
(Main)Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens — General requirements and definitions
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens — General requirements and definitions
ISO 22174:2004 gives the general requirements for the in vitro amplification of nucleic acid sequences (DNA or RNA). It is applicable to the testing of foodstuffs and isolates obtained from foodstuffs for food-borne pathogens using the polymerase chain reaction (PCR) The minimum requirements laid down in ISO 22174:2004 are intended to ensure that comparable and reproducible results are obtained in different laboratories. ISO 22174:2004 has been established for food-borne pathogens in or isolated from food and feed matrices, but is also applicable to other matrices (e.g. environmental samples) and for the detection of non-pathogenic microorganisms.
Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la recherche de micro-organismes pathogènes dans les aliments — Exigences générales et définitions
L'ISO 22174:2005 s'applique aux essais d'aliments et aux extraits obtenus à partir de ces aliments pour la détection de micro-organismes pathogènes en faisant appel à la réaction de polymérisation en chaîne (PCR) et stipule les exigences générales relatives à l'amplification in vitro des séquences d'acide nucléique (ADN ou ARN). Les exigences minimales déclarées dans l'ISO 22174:2005 sont destinées à garantir l'obtention de résultats comparables et reproductibles dans des laboratoires différents. L'ISO 22174:2005 a été conçue pour les micro-organismes pathogènes présents dans les aliments ou extraits d'aliments et de matrices d'aliments mais elle peut également s'appliquer à d'autres matrices, comme les échantillons environnementaux, ainsi que pour la détection de micro-organismes non pathogènes.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 22174
First edition
2005-02-15
Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Polymerase chain reaction
(PCR) for the detection of food-borne
pathogens — General requirements and
definitions
Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne
(PCR) pour la recherche de micro-organismes pathogènes dans les
aliments — Exigences générales et définitions
Reference number
©
ISO 2005
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Published in Switzerland
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Contents Page
Foreword. iv
Introduction . v
1 Scope. 1
2 Normative references. 1
3 Terms and definitions. 1
4 Principle. 6
4.1 General. 6
4.2 Preliminary microbial enrichment . 6
4.3 Nucleic acid preparation . 6
4.4 PCR amplification. 6
4.5 Detection and confirmation of PCR products. 7
5 Test material. 7
6 General laboratory requirements. 7
6.1 General. 7
6.2 Personnel. 7
6.3 Laboratory setup. 7
6.4 Waste management. 8
7 Reagents. 8
8 Apparatus and equipment. 8
8.1 General. 8
8.2 Special considerations. 8
9 Procedure. 8
9.1 Sample preparation. 8
9.2 Amplification. 9
9.3 Control reaction. 9
9.4 Confirmation of PCR results. 9
10 Evaluation. 10
11 Test report. 10
Bibliography . 11
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
ISO 22174 was prepared by the European Committee for Standardization (CEN) Technical Committee
CEN/TC 275, Food analysis — Horizontal methods, in collaboration with Technical Committee ISO/TC 34,
Food products, Subcommittee SC 9, Microbiology, in accordance with the Agreement on technical
cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
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Introduction
The polymerase chain reaction (PCR) is a fast, sensitive and specific method for the detection of food-borne
pathogens. Although a relatively young technology, the application of PCR-based methods in food analysis is
increasing.
In brief, existing protocols can be divided in two main groups, depending on the type of nucleic acid used as
target for amplification:
RNA-based amplification (RT-PCR);
DNA-based amplification (PCR).
Numerous variations of both methods have been established and can be characterized by their degree of
complexity and automation. The level of specificity of the methods varies from screening assays which detect
nucleic acid sequences common to a microbiological genus, to specific assays which identify nucleic acid
sequences unique to an individual strain- or type-specific nucleic acid sequence.
This International Standard presents a comprehensive list of requirements for PCR-based methods used for
the detection of microorganisms in food samples. It contains terms and definitions used in reference to PCR
and RT-PCR.
ISO 22174 is part of a series of International Standards and a Technical Specification under the general title
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-
borne pathogens:
General requirements and definitions (ISO 22174);
1)
Requirements for sample preparation for qualitative detection (ISO 20837) ;
1)
Requirements for amplification and detection for qualitative methods (ISO 20838) ;
1)
Performance testing for thermal cyclers (ISO/TS 20836) .
The International Organization for Standardization (ISO) draws attention to the fact that it is claimed that
compliance with this document may involve the use of one or more patents concerning the PCR technology.
ISO takes no position concerning the evidence, validity and scope of these patent rights.
ISO has been informed that Applied Biosystems, Roche Molecular Systems, Inc. and F. Hoffman-La Roche
Ltd. hold patent rights concerning the PCR technology. The companies have assured the ISO that they are
willing to negotiate licences under reasonable and non-discriminatory terms and conditions with applicants
throughout the world. In this respect, the statements of the holders of these patent rights are registered with
ISO. Information may be obtained from:
Licensing Department
Applied Biosystems
850 Lincoln Centre Drive
Foster City, CA 94404
USA
1) To be published.
and
Roche Molecular Systems, Inc.
Licensing Department
1145 Atlantic Avenue
Alameda, CA 94501
USA
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights other than those identified above. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent
rights.
vi © ISO 2005 – All rights reserved
INTERNATIONAL STANDARD ISO 22174:2005(E)
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase
chain reaction (PCR) for the detection of food-borne
pathogens — General requirements and definitions
WARNING — The use of this standard may involve hazardous materials, operations and equipment.
This standard does not purport to address all of the safety problems associated with its use. It is the
responsibility of the user of this standard to establish appropriate safety and health practices and
determines the applicability of regulatory limitations prior to use.
1 Scope
This International Standard gives the general requirements for the in vitro amplification of nucleic acid
sequences (DNA or RNA). It is applicable to the testing of foodstuffs and isolates obtained from foodstuffs for
food-borne pathogens using the polymerase chain reaction (PCR).
The minimum requirements laid down in this International Standard are intended to ensure that comparable
and reproducible results are obtained in different laboratories.
This International Standard has been established for food-borne pathogens in or isolated from food and feed
matrices, but is also applicable to other matrices (e.g. environmental samples) and for the detection of non-
pathogenic microorganisms.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 3534-1, Statistics — Vocabulary and symbols — Part 1: Probability and general statistical terms
ISO 5725-1, Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results — Part 1: General
principles and definitions
ISO 20837, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the
detection of food-borne pathogens — Requirements for sample preparation for qualitative detection
ISO 20838, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the
detection of food-borne pathogens — Requirements for amplification and detection for qualitative methods
ISO/IEC 17025, General requirements for the competence of testing and calibration laboratories
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply. For definitions concerning
validation, see ISO 3534-1 and ISO 5725-1.
3.1 General terms
3.1.1
nucleic acid
macromolecule that is the medium for genetic information or acts as an agent in expressing the information
NOTE There are two types of nucleic acid, DNA and RNA.
3.1.2
DNA
deoxyribonucleic acid
polymer of deoxyribonucleotides occurring in a double-stranded (dsDNA) or single-stranded (ssDNA) form
3.1.3
RNA
ribonucleic acid
polymer of ribonucleotides occurring in a double-stranded or single-stranded form
3.1.4
matrix
products submitted for analysis, which might have differences in chemical composition and physical state
3.1.5
repeatability conditions
conditions where independent test results are obtained with the same method on identical test items in the
same laboratory by the same operator using the same equipment within short intervals of time
[ISO 3534-1]
3.1.6
reproducibility conditions
conditions where test results are obtained with the same method on identical test items in different
laboratories with different operators using different equipment
[ISO 3534-1]
3.1.7
detection
recogni
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 22174
Première édition
2005-02-15
Microbiologie des aliments — Réaction
de polymérisation en chaîne (PCR) pour
la recherche de micro-organismes
pathogènes dans les aliments —
Exigences générales et définitions
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain
reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens — General
requirements and definitions
Numéro de référence
©
ISO 2005
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Publié en Suisse
ii © ISO 2005 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos. iv
Introduction . v
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives. 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe. 6
4.1 Généralités. 6
4.2 Enrichissement microbien préliminaire. 7
4.3 Préparation de l'acide nucléique . 7
4.4 Amplification par PCR . 7
4.5 Détection et confirmation des produits PCR . 7
5 Matériau d'essai. 7
6 Exigences générales de laboratoire. 8
6.1 Généralités. 8
6.2 Personnel. 8
6.3 Équipement du laboratoire. 8
6.4 Gestion des déchets . 9
7 Réactifs. 9
8 Appareillage et équipement. 9
8.1 Généralités. 9
8.2 Considérations particulières. 9
9 Mode opératoire. 9
9.1 Préparation de l'échantillon . 9
9.2 Amplification. 9
9.3 Réaction des témoins . 9
9.4 Confirmation des résultats de la PCR. 10
10 Évaluation. 10
11 Rapport d'essai. 11
Bibliographie . 12
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'ISO 22174 a été élaborée par le Comité européen de normalisation (CEN) Comité Technique CEN/TC 275,
Analyse des denrées alimentaires — Méthodes horizontales en collaboration avec le comité technique
ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9, Microbiologie, conformément à l'Accord de coopération
technique entre l'ISO et le CEN (Accord de Vienne).
iv © ISO 2005 – Tous droits réservés
Introduction
La réaction de polymérisation en chaîne (PCR) est une méthode spécifique rapide et sensible pour la
détection de micro-organismes pathogènes dans les aliments. Bien que la PCR soit une technologie
relativement récente, les méthodes d'analyse des produits alimentaires fondées sur la PCR sont de plus en
plus utilisées.
En résumé, les protocoles existants peuvent être répartis en deux groupes principaux, selon le type d'acide
nucléique utilisé comme cible de l'amplification:
l'amplification de l'ARN (RT-PCR);
l'amplification de l'ADN (PCR).
Il existe de nombreuses variantes de ces méthodes, qui peuvent être caractérisées par leur niveau de
complexité et d'automatisation. Le niveau de spécificité des méthodes varie entre des essais de criblage
détectant les séquences d'acide nucléique communes à un genre microbien et des essais spécifiques
identifiant des séquences d'acide nucléique propres à une souche particulière ou à un type de souches.
La présente Norme internationale dresse une liste complète d'exigences relatives à l'utilisation des méthodes
fondées sur la PCR pour la détection de micro-organismes dans des échantillons de produits alimentaires.
Cette norme contient des termes et des définitions qui s'appliquent à la PCR et à la RT-PCR.
L'ISO 22174 fait partie d'une série de Normes internationales et d'une spécification technique réunies sous le
titre générique Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la détection
de micro-organismes pathogènes dans les aliments:
Exigences générales et définitions (ISO 22174);
1)
Exigences relatives à la préparation des échantillons pour la détection qualitative (ISO 20837) ;
1)
Exigences relatives à l'amplification et à la détection pour les méthodes qualitatives (ISO 20838) ;
1)
Critères de performances des thermocycleurs (ISO/TS 20836) .
L'Organisation internationale de normalisation (ISO) attire l'attention sur le fait qu'il est déclaré que la
conformité avec les dispositions du présent document peut impliquer l'utilisation d'un brevet intéressant la
technologie de la réaction de polymérisation en chaîne (PCR).
L'ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à la portée de ces droits de propriété.
L’ISO a été informée que Applied Biosystems, Roche Molecular Systems, Inc. et F. Hoffman-La Roche Ltd.
détiennent les droits de propriété de la technologie de la PCR. Les compagnies ont donné l'assurance à l'ISO
qu'elles consentent à négocier des licences avec des demandeurs du monde entier, à des termes et
conditions raisonnables et non discriminatoires. À ce propos, les déclarations des détenteurs des droits de
propriété sont enregistrées à l'ISO. Des informations peuvent être demandées à:
Licensing Department
Applied Biosystems
850 Lincoln Centre Drive
Foster City, CA 94404
États-Unis
1) À publier.
et
Roche Molecular Systems, Inc.
Licensing Department
1145 Atlantic Avenue
Alameda, CA 94501
États-Unis
L'attention est d'autre part attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire
l'objet de droits de propriété autres que ceux qui ont été mentionnés ci-dessus. L'ISO ne saurait être tenue
pour responsable de l'identification de ces droits de propriété en tout ou partie.
vi © ISO 2005 – Tous droits réservés
NORME INTERNATIONALE ISO 22174:2005(F)
Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en
chaîne (PCR) pour la recherche de micro-organismes
pathogènes dans les aliments — Exigences générales et
définitions
AVERTISSEMENT — L'utilisation de la présente Norme internationale peut impliquer la manipulation
de matériaux et d'équipements dangereux et la réalisation d'opérations comportant des risques. La
présente Norme internationale n'a pas pour objectif de traiter toutes les questions de sécurité
associées à son utilisation. Il est de la responsabilité de l'utilisateur de la présente Norme
internationale de mettre en place des pratiques appropriées en matière de sécurité et de santé et de
déterminer l'applicabilité des limites réglementaires avant utilisation.
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale s'applique aux essais d'aliments et aux extraits obtenus à partir de ces
aliments pour la détection de micro-organismes pathogènes en faisant appel à la réaction de polymérisation
en chaîne (PCR) et stipule les exigences générales relatives à l'amplification in vitro des séquences d'acide
nucléique (ADN ou ARN).
Les exigences minimales déclarées dans la présente Norme internationale sont destinées à garantir
l'obtention de résultats comparables et reproductibles dans des laboratoires différents.
La présente Norme internationale a été conçue pour les micro-organismes pathogènes présents dans les
aliments ou extraits d'aliments et de matrices d'aliments mais elle peut également s'appliquer à d'autres
matrices, comme les échantillons environnementaux, ainsi que pour la détection de micro-organismes non
pathogènes.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 3534-1, Statistique — Vocabulaire et symboles — Partie 1: Probabilité et termes statistiques généraux
ISO 5725-1, Exactitude (justesse et fidélité) des résultats et méthodes de mesure — Partie 1: Principes
généraux et définitions
ISO 20837, Microbiologie des aliments — Réaction des polymérases en chaîne (PCR) pour la détection des
micro-organismes pathogènes dans les aliments — Exigences relatives à la préparation des échantillons pour
la détection qualitative
ISO 20838, Microbiologie des aliments — Réaction des polymérases en chaîne (PCR) pour la détection des
micro-organismes pathogènes dans les aliments — Exigences relatives à l'amplification et détection pour des
méthodes qualitatives
ISO/CEI 17025, Prescriptions générales concernant la compétence des laboratoires d'étalonnages et d'essais
ISO 22174:200
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.