ISO 4832:1978

Microbiology — General guidance for enumeration of coliforms — Colony count technique at 30 degrees C

Microbiologie — Directives générales pour le dénombrement des coliformes — Méthode par comptage des colonies obtenues à 30 degrés C

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 31-Jan-1978
• Withdrawal Date: 31-Jan-1978
• ICS: 07.100.30 - Food microbiology
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 9 - Microbiology
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 9 - Microbiology
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 01-Mar-1991

Relations

• Revised: ISO 4832:1991 - Microbiology — General guidance for the enumeration of coliforms — Colony count technique
• Effective Date: 15-Apr-2008

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL STANDARD 4832
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATlONOME)I(LIYHAPO~HAR OPrAHMBAUHR Il0 CTAHflAPTM3A~MMWRGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Microbiology - General guidance for enumeration of
coliforms - Colony count technique at 30 "C
Microbiologie - Directives générales pour le dénombrement des coliformes - Méthode par comptage des
colonies obtenues à 30 OC
First edition - 1978-02-01
1
w
-
Ref. No. IS0 4832-1978 (E)
UDC 663.1
m
b
m
c
Dereriptois : food products, animal products, microbiological analysis, counting, coliform bacteria.
c1
m
m
d
Price based on 4 pages

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FOREWORD
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation
of national standards institutes (IS0 member bodies). The work of developing
International Standards is carried out through IS0 technical committees. Every
member body interested in a subject for which a technical committee has been set
up has the right to be represented on that committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated
to the member bodies for approval before their acceptance as International
Standards by the IS0 Council.
International Standard IS0 4832 was deveiopped by Technical Committee
I ISOBC 34, Agricultural foodproducts, and was circulated to the member bodies in
1 July 1976.
It has been approved by the member bodies of the following countries :
Australia Hungary Romania
India South Africa, Rep. of
Austria
I ran Spain
Bulgaria
Ireland Turkey
Canada
Chile Israel United Kingdom
Mexico U.S.A.
Czechoslovakia
Netherlands Yugoslavia
France
Poland
Germany
Ghana Portugal
member bodies of the following countries expressed disapproval of the
The
document on technical grounds :
New Zealand
Thailand
0 International Organization for Standardization, 1978
I

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INTERNATIONAL STANDARD IS0 4832-1978 (E)
Microbiology - General guidance for enumeration of
coliforms - Colony count technique at 30 "C
0.3 For the purposes of a practicable test method, the
O INTRODUCTION
definition of "coliforms" given in clause 3 and used as the
0.1 This International Standard is intended to provide
basis for the procedure is not necessarily identical with
general guidance for the examination of products not dealt
corresponding definitions given in other published texts.
with by existing International Standards and for the con-
The method described by this International Standard will,
sideration of bodies preparing reference microbiological
on average, detect only about 90 % of strains of the micro-
methods of test for application to foods or to animal
organisms referred to in other publications as "(presump-
feeding stuffs. Because of the large variety of products
tive) coliforms" (Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella) ).
within this field of application, these guidelines may not
0
be appropriate for some products in every detail, and for
some other products it may be necessary to use different 1 SCOPE AND FIELD OF APPLICATION
methods. Nevertheless, it is hoped that in all cases every
This International Standard gives general guidelines for
attempt will be made to apply the guidelines provided as
the enumeration of coliforms present in products intended
far as possible and that deviations from them will only be
for human consumption or feeding of animals, by means of
made if absolutely necessary for technical reasons.
the technique of counting colonies on a solid medium, after
is next reviewed, account
When this International Standard incubation at 30 OC.
will be taken of all information then available regarding the
A limitation on the applicability of this International
extent to which the guidelines have been followed and the
Standard is imposed by the method's susceptibility to a
reasons for deviation from them in the case of particular
large degree of variability. The method should be applied
products.
and the results interpreted in the light of the information
The harmonization of test methods cannot be immediate, given in 10.2.
and for certain groups of products International Standards
and/or national standards may already exist that do not
2 REFERENCES
comply with the guidelines. In cases where International
Standards already exist for the product to be tested, they
IS0 2293, Meat and meat products - Aerobic count at
should be followed, but it is hoped that when such standards
30 OC (Reference method).
are reviewed they will be changed to comply with this
ISO3565, Meat and meat products - Detection of
International Standard so that eventually the only remain-
@
sa I m o ne I I ae (Reference method).
ing departures from these guidelines will be those necessary
for well established technical reasons.
IS0 483 1, Microbiology - General guidance for enumer-
ation of coliforms - Most probable number technique at
30 OC.
0.2 The technique described in this International Standard
IS0 . . ., Microbiology - General guidance for preparation
is more precise than that described in IS0 4831, but does
of dilutions. 2,
not allow a microbiological examination to be carried out
on such a large test portion. It will therefore be the preferred
method when large numbers of coliforms are present.
3 DEFINITION
Moreover, since the definition of "coliforms" adopted in
For the purpose of this International Standard, the follow-
the two documents is different, the micro-organisms
ing definition applies :
enumerated are not necessarily the same.
For any particular product, the method to be chosen will coliforms : Bacteria which, at 30 OC, form characteristic
be specified in the International Standard dealing with that colonies in crystal violet neutral red bile lactose agar under
product. the operational conditions described.
1) See Edwards. P. R., and Ewing, W.H. (1972) : "ldentificationof Enterobacteriaceae", 3rd edition, Burgess Publishing eompany, Minneapolis,
Minnesota, U.S.A.
2) In preparation.
1

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IS0 4832-1978 (E)
7 CULTURE MEDIUM AND DILUTION FLUID
4 PRINCIPLE
4.1 Preparation of two poured plates, using a solid
7 .I Basic materials
selective culture medium, and using a specified quantity of
,preciolen . .
In order to improve the of the results, it is
the test sample if the initial product is liquid, or using a
specified quantity of an initial suspension in the case of recommended that, for the preparation of the culture
other products. medium, dehydrated basic components or a complete
dehydrated medium should be used. The manufacturer's
Preparation of other pairs of poured plates, under the same
instructions shall be rigorously followed.
conditions, using decimal dilutions of the test sample or of
the initial suspension.
The chemicals used shall be of analytical quality.
The water used shall be distilled or deionized, and shall be
4.2 Incubation of the plates at 30 OC for 24 h.
free from substances that might inhibit growth of coliforms
under the test conditions.
4.3 Calculation of the number of micro-organisms per
millilitre or per gram of sample from the number of
characteristic colonies obtained in plates at dilution levels
7.2 Dilution fluid
chosen so as to give a significant result.
Use a peptone-based dilution fluid containing sodium
chloride, buffered or not; for example, peptone-saline
5 SAMPLING
dilution fluid (see 5.3 of IS0 2293) or buffered peptone
water (see 6.2.1 of IS0 3565).
Carry out sampl
...

NOR M E INTERN AT10 N ALE 4832
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDlZATlON*ME%&IYHAPOJlHAR OPrAHHBAUMR no CTAHaAPTM3AUMMWRGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Microbiologie - Directives générales pour le dénombrement
des coliformes - Méthode par comptage des colonies
obtenues à 30 "C
Microbiology - General guidance for enumeration of co/iforms - Colon y count technique at 30 "C
Première édition - 1978-02-01
CDU 663.1 Réf. no : IS0 4832-1978 (F)
Descripteurs : produit alimentaire, produit animal, analyse microbiologique, comptage, bactérie coliforme.
Prix base sur 4 pages
I

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AVANT-PROPOS
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d'organismes nationaux de normalisation (comités membres de I'ISO). L'élaboration
est confiée aux comités techniques de I'ISO. Chaque
des Normes internationales
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
correspondant. Les organisations internationales, ~ gouvernementales et non
gouvernementaies, en liaison avec I'iSO, participent égdiement aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont
soumis aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme
Normes internationales par le Conseil de I'ISO.
La Norme internationale IS04832 a été élaborée par le comité technique
ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, et a été soumise aux comités membres
en juillet 1976.
Les comités membres des pays suivants l'ont approuvée :
Portugal
Afrique du Sud, Rép. d' Ghana
Hongrie Roumanie
Allemagne
Australie Inde Royaume-Uni
Autriche I ran Tchécoslovaquie
Turquie
Bulgarie Irlande
U.S.A.
Canada Israël
Yougoslavie
Chili Mexique
Pays-Bas
Espagne
France Pologne
comités membres des pays suivants l'ont désapprouvée pour des raisons
Les
:
techniques
Nouvelle-Zélande
Thaïlande
O Oganiration internationale de normalisation, 1978 0
lmprid en Suisse

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IS0 4832-1978 (F)
NORME INTERNATIONALE
Microbiologie - Directives générales pour le dénombrement
des coliformes - Méthode par comptage des colonies
obtenues à 30 "C
O INTRODUCTION
Pour les produits particuliers, le choix de la technique sera
précisé dans les Normes internationales traitant des produits
0.1 La présente Norme internationale se propose de fournir
à examiner.
des directives générales pour l'examen de produits non
traités dans les Normes internationales existant actuellement
0.3 Pour les besoins d'une méthode d'essai efficace, la
et pour être étudiées par les organismes élaborant des
définition des ((coliformes)) donnée dans le chapitre 3 et
méthodes d'essai microbiologiques destinées à être
servant de base au procédé n'est pas nécessairement
appliquées à des produits alimentaires ou à des aliments
identique aux définitions correspondantes données dans
pour animaux. En raison de la grande diversité des produits
0
d'autres textes publiés. Ainsi, la méthode décrite dans la
entrant dans ce domaine d'application, il est possible que
présente Norme internationale ne détectera qu'environ
ces directives, dans tous leurs détails, ne conviennent pas
90 % des souches de micro-organismes désignés, dans
exactement à certains produits et que, pour certains autres
d'autres publications, sous le nom de ((col iformes
produits, il puisse être nécessaire d'employer des méthodes
(présumés) )) (Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella) ).
différentes. Néanmoins, il est à espérer que, dans tous les cas,
tous les efforts seront faits pour appliquer chaque fois qu'il
sera possible les directives données et qu'on n'aura recours à
des dérogations que si cela est absolument nécessaire pour
1 OBJET ET DOMAINE D'APPLICATION
des raisons techniques.
La présente Norme internationale donne des directives
Lorsque la présente Norme internationale sera réexaminée,
générales pour le dénombrement des coliformes dans les
il sera tenu compte de tous les renseignements disponibles
produits destinés à la consommation humaine ou à I'alimen-
à ce moment-là, à savoir dans quelle mesure les directives
tation animale, par comptage des colonies obtenues en
auront été suivies et les raisons pour lesquelles il aura été
milieu solide, après incubation à 30 OC.
nécessaire d'y déroger dans le cas de prgduits particuliers.
Des limites sont imposées aux possibilités d'application de
L'harmonisation des méthodes d'essai ne peut pas être
la présente Norme internationale, du fait que cette méthode
immédiate et, pour certains groupes de produits, des
est sujette à de grandes variations. II est recommandé
normes nationales et/ou des Normes internationales existent
d'appliquer cette norme et d'interpréter les résultats à la
peut-être déjà, qui ne concordent pas avec ces directives. Au
lumière des renseignements donnés en 10.2.
cas où des Normes internationales existent déjà pour le
0
produit à contrôler, elles devront être appliquées, mais il
serait souhaitable que, lorsqu'elles viendront en révision,
2 RÉFÉRENCES
elles soient modifiées de façon à se conformer à la présente
si bien que, finalement, les seules
Norme internationale
IS0 2293, Viandes et produits à base de viande - Dénom-
divergences restantes seront celles qui auront été nécessaires
brement des germes aérobies à 30 OC (Méthode de
pour des raisons techniques bien établies.
référence).
IS0 3565, Viandes et produits a base de viande -
0.2 La technique décrite ci-après est plus précise que celle
Recherche des salmonellae (Méthode de référence).
décrite dans I'ISO 4831, mais elle ne permet pas d'effectuer
un examen microbiologique sur une prise d'essai aussi
IS0 4831, Microbiologie - Directives générales pour le
importante. Elle sera donc choisie de préférence lorsque les
dénombrement des coliformes - Technique du nombre le
coliformes sont en grand nombre. D'autre part, la définition
plus probable après incubation à 30 OC.
des coliformes étant différente, on ne dénombre pas
nécessairement les mêmes micro-organismes par ces deux IS0 . . ., Microbiologie - Directives générales pour la pré-
méthodes. paration des dilutions.2)
1) Voir Edwards, P.R., et Erwing, W.H. (1972) : u/dentificarion of Enterobacteriacecae)), 3eédition. Burgess Publishing Gompany, iylinneapolis,
Minnesota, U.S.A.
2) En préparation.
1

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IS0 4832-1978 (F)
6.6 Appareil de comptage de colonies, comportant un
3 DÉFINITION
système d'éclairage avec fond noir, muni d'une loupe
Pour les besoins de la présente Norme internationale, la
devant être utilisée à un grossissement de 1,5 et d'un
définition suivante est applicable :
compteur numérique mécanique ou électronique.
coliformes : Bactéries qui, à 30 OC, forment des colonies
6.7 pH-mètre.
caractéristiques en gélose lactosée biliée au cristal violet et
au rouge neutre, dans les conditions opératoires décrites.
7 MILIEU DE CULTURE ET DILUANT
4 PRINCIPE
4.1 Ensemencement en profondeur d'un milieu sélectif 7.1 Composants de base
solide, coulé dans deux boîtes de Petri, avec une quantité
Pour améliorer la reproductibilité des résultats, il est recom-
déterminée de l'échantillon pour essai si le produit à exa-
mandé d'utiliser, pour la préparation du milieu de culture,
miner est liquide, ou avec une quantité déterminée de
des composants de base déshydratés ou un milieu complet
suspension mère dans le cas d'autres produits.
déshydraté. Les prescriptions du fabricant doivent être
Dans les mêmes conditions, ensemencement des dilutions suivies scrupuleusement.
décimales obtenues à partir de l'échantillon pour essai ou
Les produits chimiques utilisés doivent être de qualité
de la suspension mère.
analytique.
4.2 Incubation de ces boîtes à 30 OC durant 24 h.
L'eau utilisée doit être de l'eau distillée ou déminéralisée,
exempte de substances susceptibles d'inhiber la croissance
des coliformes dans les conditions de l'essai.
4.3 Calcul du nombre de coliformes par millilitre ou par
gramme d'échantillon, à partir du nombre de colonies carac-
téristiques obtenues dans des boîtes de Petri choisies aux
7.2 Diluant
niveaux de d
...