ISO 20645:2004

Textile fabrics — Determination of antibacterial activity — Agar diffusion plate test

ISO 20645:2004 specifies a method for the determination of the effect of antibacterial treatments applied to woven, knitted and other flat textiles. ISO 20645:2004 is applicable to testing hygienic finishes of hydrophilic, air-permeable materials or antibacterial products incorporated in the fibre. A minimum diffusion of the antibacterial treatment into the test agar is necessary with this procedure. ISO 20645:2004 is applicable to other materials, provided that it is adapted accordingly. ISO 20645:2004 is not suitable for testing textiles treated with antibacterial treatments that react with the agar.

Étoffes — Contrôle de l'activité antibactérienne — Essai de diffusion sur plaques de gélose

L'ISO 20645:2004 fixe une méthode de détermination de l'effet des traitements antibactériens appliqués aux textiles tissés, tricotés et autres textiles plats. Elle s'applique aux essais effectués sur les apprêts hygiéniques des matériaux hydrophiles perméables à l'air ou des produits antibactériens incorporés dans la fibre. Le mode opératoire nécessite une diffusion minimale de l'apprêt antibactérien dans la gélose. La présente méthode peut convenir à l'essai d'autres matériaux à condition d'être adaptée en conséquence. L'ISO 20645:2004 n'est pas appropriée aux essais sur textiles soumis à des traitements antibactériens s'ils réagissent avec la gélose.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 30-Nov-2004
• ICS: 59.080.01 - Textiles in general
• Technical Committee: ISO/TC 38 - Textiles
• Drafting Committee: ISO/TC 38 - Textiles
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Start Date: 04-Apr-2024
• Completion Date: 14-Feb-2026

Relations

• Consolidates: EN ISO 20645:2004 - Textile fabrics - Determination of antibacterial activity - Agar diffusion plate test (ISO 20645:2004)
• Effective Date: 12-Feb-2026
• Consolidates: ISO 5663:1984 - Water quality — Determination of Kjeldahl nitrogen — Method after mineralization with selenium
• Effective Date: 06-Jun-2022

ISO 20645:2004 - Overview

ISO 20645:2004 specifies a laboratory method - the agar diffusion plate test - for qualitatively assessing the antibacterial activity of treatments applied to woven, knitted and other flat textile materials. The method is intended mainly for hydrophilic, air‑permeable materials and for products in which the antibacterial agent can diffuse into agar. It provides a reproducible way to compare hygienic finishes and antimicrobial textile treatments, but is not suitable for treatments that chemically react with the agar.

Key topics and technical requirements

• Test principle: Two‑layer agar plates (sterile lower layer, bacteria‑inoculated upper layer). Textile specimens are placed on the agar; antibacterial activity is assessed by bacterial growth under the specimen and any inhibition zone surrounding it.
• Specimens: Circular samples, typically 25 ± 5 mm diameter; tests performed on both sides; minimum of four specimens.
• Apparatus & conditions: Incubator at 37 ± 1 °C; sterile petri dishes (9 cm); microscope (20×) for contact‑zone inspection.
• Culture media & preparation: Defined nutrient broth and agar formulations are given; pour volumes for layers are specified (lower layer ~10 ml, upper inoculated layer ~5 ml per plate). Use standardized reagents and follow sterile technique.
• Test bacteria: Typical strains specified include Staphylococcus aureus (ATCC 6538) and one gram‑negative strain such as Escherichia coli (ATCC 11229) or Klebsiella pneumoniae (ATCC 4352) from recognized culture collections.
• Incubation & assessment: Plates incubated 18–24 h after specimen placement. Measure inhibition zone width H using: H = (D − d) / 2 (where D = total diameter of specimen + inhibition zone, d = specimen diameter). Also inspect contact zone microscopically for growth.
• Safety: Work with bacteria requires trained personnel and appropriate biosafety precautions.

Applications and who uses it

• Textile R&D teams validating antimicrobial finishes and treated fibres.
• Quality control and certification laboratories performing textile testing for healthcare, sportswear, technical and home textiles.
• Manufacturers comparing the relative performance of antibacterial treatments and concentrations.
• Regulatory bodies and procurement specialists requiring standard test data for product claims.

Limitations and related guidance

• Requires that the antibacterial agent diffuses into agar; not suitable for non‑diffusible or agar‑reactive chemistries.
• For microbial strain handling, the standard references preservation procedures (e.g., EN 12353) and recommends using recognized culture collections for reproducibility.
• For quantitative or alternative antimicrobial test methods, consult the current ISO catalogue and related standards for antimicrobial textiles.

Keywords: ISO 20645, agar diffusion plate test, antibacterial activity, textile testing, antimicrobial textiles, hygienic finishes, test method.

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20645
First edition
2004-12-01
Textile fabrics — Determination of
antibacterial activity — Agar diffusion
plate test
Étoffes -— Contrôle de l'activité antibactérienne — Essai de diffusion
sur plaques de gélose
Reference number
©
ISO 2004
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Published in Switzerland
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Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 20645 was prepared by the European Committee for Standardization (CEN) in collaboration with
Technical Committee ISO/TC 38, Textiles, in accordance with the Agreement on technical cooperation
between ISO and CEN (Vienna Agreement).
Throughout the text of this document, read “.this European Standard.” to mean “.this International
Standard.”.
Contents Page
Foreword.v
Introduction .vi
1 Scope .1
2 Terms and definitions .1
3 Safety precautions.1
4 Principle.1
5 Apparatus, reagents and culture media .1
5.1 Apparatus .1
5.2 Reagents and culture media.4
6 Test bacteria.3
7 Preparation of the bacteria cultures .3
7.1 General.3
7.2 Culturing with lyophilized bacteria .3
7.3 Culturing from the agar.3
8 Preparation of test specimens .4
8.1 General.4
8.2 Preparation of the test material.4
8.3 Material for blind tests .4
8.4 Conditioning of specimens.4
9 Test procedure.4
10 Assessment of the tests .5
11 Evaluation.6
12 Test report .6
Annex A (informative) Special specimens and tests .7
Annex B (informative) European Suppliers of ATCC.8
Bibliography . 9

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Foreword
This document (EN ISO 20645:2004) has been prepared by Technical Committee CEN/TC 248 “Textiles and
textile products”, the secretariat of which is held by BSI, in collaboration with Technical Committee ISO/TC 38
“Textiles”.
This European Standard shall be given the status of a national standard, either by publication of an identical
text or by endorsement, at the latest by June 2005, and conflicting national standards shall be withdrawn at
the latest by June 2005.
This document includes a Bibliography.
CAUTION — This method involves the use of processes that could lead to a hazardous situation.
Attention is drawn to the safety precautions in Clause 3.
According to the CEN/CENELEC Internal Regulations, the national standards organizations of the following
countries are bound to implement this European Standard: Austria, Belgium, Cyprus, Czech Republic,
Denmark, Estonia, Finland, France, Germany, Greece, Hungary, Iceland, Ireland, Italy, Latvia, Lithuania,
Luxembourg, Malta, Netherlands, Norway, Poland, Portugal, Slovakia, Slovenia, Spain, Sweden, Switzerland
and United Kingdom.
Introduction
The application of an antimicrobial finish to a textile can prevent bacterial growth and might reduce the effects
of microbial pathway products, biodeterioration and microbiogenous odours.
This method determines the activity of such treatments qualitatively when different products are compared.
Semi-quantitative information on the effect of treatments can be obtained when different concentrations of the
same product are compared.
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1 Scope
This document specifies a method for the determination of the effect of antibacterial treatments applied to
woven, knitted and other flat textiles.
This method is applicable to testing hygienic finishes of hydrophilic, air-permeable materials or antibacterial
products incorporated in the fibre. A minimum diffusion of the antibacterial treatment into the test agar is
necessary with this procedure.
NOTE Other materials may be tested using this method, provided that it is adapted accordingly.
This method is not suitable for testing textiles treated with antibacterial treatments that react with the agar.
2 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following term and definition applies.
antibacterial effect
inhibition of bacterial growth in favourable growing conditions
3 Safety precautions
This method requires the use of bacteria and conditions that promote bacterial growth. Since the bacteria
might be pathogenic the tests should be carried out by trained personnel.
Appropriate safety precautions should be observed.
4 Principle
Specimens of the material to be tested are placed on two-layer agar plates. The lower layer consists of a
culture medium free from bacteria and the upper layer is inoculated with the selected bacteria. The textiles are
tested on both sides. The level of antibacterial activity is assessed by examining the extent of bacterial growth
in the contact zone between the agar and the specimen and, if present, the extent of the inhibition zone
around the specimen.
5 Apparatus, reagents and culture media
5.1 Apparatus
5.1.1 Incubator , capable of maintaining a temperature of (37 ± 1)°C.
5.1.2 Autoclave, capable of operating at 121°C and 205 kPa (2,05 bar).
5.1.3 Water bath, capable of maintaining a temperature of (45 ± 2)°C.
5.1.4 Shaker, for test tubes
5.1.5 Microscope, 20 × magnification, lighting from beneath (lens 20x, stereomicroscope 20x).
5.1.6 Petri dishes, of glass or polystyrene construction and 9 cm inner diameter
5.2 Reagents and culture media
5.2.1 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade and distilled water or water of equivalent purity.
5.2.2 Culture media
5.2.2.1 Dry agar, available commercially with the following composition .
Should commercially available agars be unsuitable for the bacteria to be tested, the culture media shall be
adapted or replaced accordingly. Such changes shall be mentioned in the test report
5.2.2.2 Composition of the nutrient broth for test strains:
trypton peptone 17 g
phyton peptone 3 g
sodium chloride 5 g
di-potassium
hydrogen phosphate 2,5 g
dextrose 2,5 g
distilled water 1 000 ml
Preparation
Prepare the nutrient broth by heating the above solids in water until they are compl
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 20645
Première édition
2004-12-01
Étoffes — Contrôle de l'activité
antibactérienne — Essai de diffusion sur
plaques de gélose
Textile fabrics — Determination of antibacterial activity — Agar diffusion
plate test
Numéro de référence
©
ISO 2004
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veuillez en informer le Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.

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Version française parue en 2005
Publié en Suisse
ii © ISO 2004 – Tous droits réservés

Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 20645 a été élaborée par le Comité européen de normalisation (CEN) en collaboration avec le comité
technique ISO/TC 38, Textiles, conformément à l'Accord de coopération technique entre l'ISO et le CEN
(Accord de Vienne).
Tout au long du texte du présent document, lire «… la présente Norme européenne …» avec le sens de
«… la présente Norme internationale …».
Sommaire Page
Avant-propos . v
Introduction.vi
1 Domaine d'application.1
2 Termes et définitions .1
3 Précautions de sécurité.1
4 Principe.1
5 Appareillage, réactifs et milieux de culture .2
5.1 Appareillage.2
5.2 Réactifs et milieux de culture.2
5.2.1 Réactifs.2
5.2.2 Milieux de culture .2
6 Bactéries d'essai.3
7 Préparation des cultures de bactéries .3
7.1 Généralités.3
7.2 Mise en culture avec bactéries lyophilisées.3
7.3 Mise en culture à partir de la gélose .4
8 Préparation des éprouvettes.4
8.1 Généralités.4
8.2 Préparation du matériau pour essai .4
8.3 Matériau pour essais témoins.4
8.4 Conditionnement des éprouvettes .4
9 Mode opératoire d'essai .5
10 Évaluation des essais.5
11 Évaluation.6
12 Rapport d'essai.6
Annexe A (informative) Éprouvettes et essais particuliers .7
Annexe B (informative) Fournisseurs européens d'ATCC.8
Bibliographie.9

iv © ISO 2004 – Tous droits réservés

Avant-propos
Le présent document (EN ISO 20645:2004) a été élaboré par le Comité Technique CEN/TC 248 "Textiles et
produits textiles" dont le secrétariat est tenu par le BSI, en collaboration avec le Comité Technique ISO/TC 38
"Textiles".
Cette norme européenne devra recevoir le statut de norme nationale, soit par publication d'un texte identique,
soit par entérinement, au plus tard en juin 2005, et toutes les normes nationales en contradiction devront être
retirées au plus tard en juin 2005.
Le présent document contient une bibliographie.
ATTENTION — La présente méthode implique l’application de processus susceptibles d’engendrer
une situation dangereuse. L’attention du lecteur est attirée sur les précautions de sécurité indiquées
dans l’Article 3.
Selon le Règlement Intérieur du CEN/CENELEC, les instituts de normalisation nationaux des pays suivants
sont tenus de mettre cette norme européenne en application: Allemagne, Autriche, Belgique, Chypre,
Danemark, Espagne, Estonie, Finlande, France, Grèce, Hongrie, Irlande, Islande, Italie, Lettonie, Lituanie,
Luxembourg, Malte, Norvège, Pays-Bas, Portugal, Pologne, République Tchèque, Royaume-Uni, Slovaquie,
Slovénie, Suède et Suisse.
Introduction
L’application d’un apprêt antimicrobien à un textile peut prévenir la croissance bactérienne et réduire les effets
des produits engendrés par les processus microbiens, la biodétérioration et les odeurs d’origine microbienne.
La présente méthode détermine l’activité de ces traitements du point de vue qualitatif dans le cadre de la
comparaison de divers produits. Une comparaison de différentes concentrations d’un même produit permet
l’obtention de données semi-quantitatives sur l’effet des traitements.
vi © ISO 2004 – Tous droits réservés

1 Domaine d'application
Le présent document fixe une méthode de détermination de l’effet des traitements antibactériens appliqués
aux textiles tissés, tricotés et autres textiles plats.
La présente méthode s’applique aux essais effectués sur les apprêts hygiéniques des matériaux hydrophiles
perméables à l’air ou des produits antibactériens incorporés dans la fibre. Le mode opératoire nécessite une
diffusion minimale de l’apprêt antibactérien dans la gélose.
NOTE La présente méthode peut convenir à l’essai d’autres matériaux à condition d’être adaptée en conséquence.
La présente méthode n’est pas appropriée aux essais sur textiles soumis à des traitements antibactériens s’ils
réagissent avec la gélose.
2 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, le terme et la définition suivants s'appliquent.
2.1
effet antibactérien
inhibition de la croissance bactérienne dans des conditions favorables de développement
3 Précautions de sécurité
La présente méthode nécessite l’emploi de bactéries et de conditions qui favorisent la croissance bactérienne.
Il convient que les essais soient réalisés par du personnel qualifié car il se peut que les bactéries utilisées
soient pathogènes.
Il est recommandé d’observer des précautions de sécurité appropriées.
4 Principe
Les éprouvettes du matériau soumis à l’essai sont placées sur des plaques de gélose à deux couches. La
couche inférieure est constituée d’un milieu de culture exempt de bactéries tandis que la couche supérieure
est ensemencée avec la bactérie choisie. Les textiles sont soumis à l’essai sur les deux faces. Le degré
d’activité antibactérienne est évalué en examinant l’étendue de la croissance bactérienne dans la zone de
contact entre la gélose et l’éprouvette et, le cas échéant, l’étendue de la zone d’inhibition autour de
l’éprouvette.
5 Appareillage, réactifs et milieux de culture
5.1 Appareillage
5.1.1 Incubateur, permettant de maintenir une température de (37 ± 1) °C.
5.1.2 Autoclave, pouvant fonctionner à 121 °C et à 205 kPa (2,05 bar).
5.1.3 Bain marie, permettant de maintenir une température de (45 ± 2) °C.
5.1.4 Agitateur pour tubes à essai.
5.1.5 Microscope permettant d’obtenir un grossissement de 20 ×, éclairage par le dessous (lentille 20 x,
microscope stéréoscopique 20 x).
5.1.6 Boîtes de Pétri, en verre ou en polystyrène, ayant un diamètre intérieur de 9 cm.
5.2 Réactifs et milieux de culture
5.2.1 Réactifs
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l’eau distillée ou de l’eau de pureté
équivalente.
5.2.2 Milieux de culture
1)
5.2.2.1 Gélose déshydratée, disponible dans le commerce, ayant la composition suivante .
Si les géloses disponibles dans le commerce ne conviennent pas aux bactéries à soumettre à l’essai, adapter
ou remplacer en conséquence les milieux de culture. Ces modifications doivent être mentionnées dans le
rapport d’essai.
5.2.2.2 Bouillon nutritif pour souches d’essai ayant la composition suivante :
tryptone peptone 17 g ;
phytone peptone 3 g ;
chlorure de sodium 5 g ;
dihydrogénophosphate de potassium 2,5 g ;
dextrose 2,5 g ;
eau distillée 1 000 ml.
Préparation
Préparer le bouillon nutritif en chauffant les solides ci-dessus dans l’eau jusqu’à dissolution complète.
Stériliser le bouillon à 121 °C (205 kPa) dans l’autoclave pendant 15 min. Après stérilisation, le pH du bouillon
doit être 7,3 ± 0,1 à 20 °C.
1) Trypticase Soy Ag
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