ISO 20637:2015

Infant formula and adult nutritionals — Determination of myo-inositol by liquid chromatography and pulsed amperometry

ISO 20637:2015 specifies a method for the determination of myo-inositol (free or free plus bound as phosphatidylinositol) in infant formula and adult nutritionals using liquid chromatography and pulsed amperometry with column switching.

Formules infantiles et produits nutritionnels pour adultes — Détermination de la teneur en myo-inositol par chromatographie liquide et ampérométrie pulsée

ISO 20637:2015 spécifie une méthode de détermination de la teneur en myo-inositol (libre ou libre plus lié sous forme de phosphatidylinositol) dans les formules infantiles et les produits nutritionnels pour adultes par chromatographie liquide et ampérométrie pulsée avec commutation de colonne.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 08-Nov-2015
• ICS: 67.050 - General methods of tests and analysis for food products
• Technical Committee: ISO/TC 34 - Food products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/WG 14 - Vitamins, carotenoids and other nutrients
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 23-Apr-2021

Relations

• Consolidated By: ISO 18530:2021 - Health informatics — Automatic identification and data capture marking and labelling — Subject of care and individual provider identification
• Effective Date: 06-Jun-2022

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20637
First edition
2015-11-01
Infant formula and adult
nutritionals — Determination of myo-
inositol by liquid chromatography and
pulsed amperometry
Formules infantiles et produits nutritionnels pour adultes —
Détermination de la teneur en myo-inositol par chromatographie
liquide et ampérométrie pulsée
Reference number
ISO 20637:2015(E)
©
ISO 2015

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ISO 20637:2015(E)

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ISO 20637:2015(E)

Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Terms and definitions . 1
3 Principle . 1
4 Reagents and materials . 1
5 Apparatus . 3
6 Procedure. 4
6.1 Free myo-inositol . 4
6.1.1 Sample preparation . 4
6.1.2 Extraction . 5
6.2 Myo-inositol bound as phosphatidylinositol . 5
6.2.1 Sample preparation . 5
6.2.2 Extraction . 5
6.2.3 Cleanup . 6
6.2.4 Hydrolysis . 6
6.3 HPLC analysis . 6
6.3.1 Instrument operating conditions . 6
6.3.2 PAD settings with gold electrode . 8
6.3.3 Instrument startup. 8
6.3.4 Standard and sample analysis . 8
6.3.5 System shutdown . 8
7 Calculations. 8
7.1 General . 8
7.2 Concentration of calibration standards . 9
7.3 Preparation of standard curve . 9
7.4 Calculation of free or free plus bound myo-inositol in samples . 9
7.4.1 Calculation of free myo-inositol . 9
7.4.2 Calculation of bound myo-inositol .10
7.4.3 Calculation of free plus bound myo-inositol .10
Annex A (informative) Examples of chromatograms .11
Annex B (informative) Precision data .12
Bibliography .15
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ISO 20637:2015(E)

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2. www.iso.org/directives
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received. www.iso.org/patents
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity
assessment, as well as information about ISO’s adherence to the WTO principles in the Technical
Barriers to Trade (TBT) see the following URL: Foreword - Supplementary information
The committee responsible for this document is ISO/TC 34, Food products in collaboration with AOAC
INTERNATIONAL. It is being published by ISO and separately by AOAC INTERNATIONAL. The method
described in this International Standard is equivalent to the AOAC Official Method 2011.18: Myo-inositol
(free and bound as phosphatidyl inositol) in infant and pediatric formula and adult nutritional.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 20637:2015(E)
Infant formula and adult nutritionals — Determination
of myo-inositol by liquid chromatography and pulsed
amperometry
WARNING — The use of this International Standard can involve hazardous materials, operations
and equipment. This International Standard does not purport to address all the safety problems
associated with its use. It is the responsibility of the user of this International Standard to
establish appropriate safety and health practices and determine the applicability of regulatory
limitations prior to use.
1 Scope
This International Standard specifies a method for the determination of myo-inositol (free or free plus
bound as phosphatidylinositol) in infant formula and adult nutritionals using liquid chromatography
and pulsed amperometry with column switching.
2 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
2.1
adult nutritional
nutritionally complete, specially formulated food, consumed in liquid form, which may constitute the
sole source of nourishment, made from any combination of milk, soy, rice, whey, hydrolysed protein,
starch and amino acids, with and without intact protein
2.2
infant formula
breast-milk substitute specially manufactured to satisfy, by itself, the nutritional requirements of
infants during the first months of life up to the introduction of appropriate complementary feeding
[SOURCE: Codex Standard 72-1981]
3 Principle
Free myo-inositol and phosphatidyl bound myo-inositol are extracted using two different sample
preparation procedures. Free myo-inositol is extracted from samples with dilute hydrochloric acid and
water. Phosphatidylinositol is extracted from samples with chloroform and separated from other fats
with silica solid phase extraction cartridges. Myo-inositol is then released from the glycerol backbone
with concentrated acetic and hydrochloric acid at 120°C. The ion chromatographic method uses a
combination of two different ion exchange columns with column switching and pulsed amperometric
detection (PAD). The concentration of myo-inositol is calculated by comparison with external standards
of known concentration.
4 Reagents and materials
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade and
distilled or demineralized water or water of equivalent purity.
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ISO 20637:2015(E)

4.1 Chemicals and solvents
4.1.1 Acetic acid, glacial, ACS.
4.1.2 Chloroform, high-purity, HPLC grade.
4.1.3 Diethyl ether, anhydrous, HPLC grade.
4.1.4 Drierite, (desiccant), anhydrous calcium sulfate, 8 mesh.
4.1.5 Helium, zero grade or equivalent.
4.1.6 Hexane, HPLC grade.
4.1.7 Hydrochloric acid, concentrated (36 % to 38 %), ACS.
4.1.8 Metaphosphoric acid, ACS.
4.1.9 Methanol, HPLC grade.
4.1.10 Myo-inositol, primary reference standard, official lot, store desiccated. See standard label for
purity.
4.1.11 Sodium chloride, ACS.
4.1.12 Sodium hydroxide, 50 % (m/m), low carbonate form.
4.2 Preparation of reagents and standard solutions
4.2.1 General. All solutions can be scaled up or down for convenience provided good laboratory
practices are observed. Solutions can be stored at refrigerated or at ambient temperature in tight, inert
containers unless otherwise specified.
4.2.2 Myo-inositol stock standard solution (approximately 2 000 mg/l). Accurately weigh
approximately 0,100 g myo-inositol and quantitatively transfer to a 50 ml volumetric flask. Dilute to
volume with water. Mix well. Store refrigerated. Expiration: 3 months.
4.2.3 Myo-inositol intermediate standard solution (approximately 200 mg/l). Dilute 10,0 ml stock
standard (4.2.2) to 100 ml with water and mix well. Discard after use.
4.2.4 Preparation of calibration standard solutions
4.2.4.1 Myo-inositol calibration standard solutions high, (approximately 4 mg/l, 2 mg/l, 1 mg/l,
0,5 mg/l).
Into separate volumetric flasks, dilute 2,0 ml, 1,0 ml and 0,5 ml myo-inositol intermediate standard
(4.2.3) to 100 ml with water. Dilute 0,5 ml myo-inositol intermediate standard (4.2.3) to 200 ml with
water. Expiration: 2 weeks
4.2.4.2 Myo-inositol calibration standard solutions low, (approximately 0,2 mg/l and 0,05 mg/l).
Into separate volumetric flasks, dilute 4 ml and 1 ml of the 0,5 mg/l myo-inositol calibration standard
to 10 ml with water. Expiration: 2 weeks.
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4.2.5 Hydrochloric acid, 0,5 %. Add 1,25 ml concentrated hydrochloric acid to approximately 200 ml
water in a 250 ml volumetric flask. Dilute to volume with water and mix well. Expiration: 6 months.
4.2.6 Sodium chloride, 1 mol/l. Dissolve 5,8 g sodium chloride and dilute to 100 ml with water.
Expiration: 1 month.
4.2.7 Sodium hydroxide, 0,12 % or 30 mmol (Pump 1). Quickly weigh (4,8 ± 0,1) g of 50 % sodium
hydroxide into a 2 000 ml volumetric flask containing approximately 1 900 ml water. It is important that
the sodium hydroxide does not absorb carbon dioxide from the air. Swirl to mix well. Dilute to volume
with water and mix well. Expiration: 1 month.
4.2.8 Sodium hydroxide, 4,0 % or 1 mol/l (Pump 2). Quickly weigh (160 ± 3) g of 50 % sodium
hydroxide into a 2 000 ml volumetric flask containing approximately 1 900 ml water. It is important that
the sodium hydroxide does not absorb carbon dioxide from the air. Swirl to mix well. Dilute to volume
with water and mix well. Expiration: 1 month.
4.2.9 Metaphosphoric acid, 6 %. Weigh 6,0 g metaphosphoric acid into a 100 ml volumetric flask.
Dissolve and dilute to volume with water. Mix well. Store refrigerated. Expiration: 1 week.
4.2.10 Phosphatidylinositol extraction solutions. Prepare fresh on day of use.
4.2.10.1 Chloroform:methanol (2:1). Mix 60 ml chloroform and 30 ml methanol.
4.2.10.2 Hexane:diethyl ether (80:20). Mix 80 ml hexane and 20 ml diethyl ether.
4.2.10.3 Hexane:diethyl ether (50:50). Mix 50 ml hexane and 50 ml diethyl ether.
4.2.10.4 Methanol:chloroform:water (75:15:10). Mix 75 ml methanol, 15 ml chloroform and 10 ml
water.
5 Apparatus
Usual laboratory glassware and equipment and, in particular, the following.
5.1 Analytical balance, minimum weighing capacity of at least 0,000 1 g.
5.2 Centrifuge.
5.3 Desiccator.
5.4 Nitrogen evaporator, with water bath or equivalent.
5.5 Oven, capable of maintaining 120 °C.
5.6 pH-meter, with pH 4 and 7 buffers.
5.7 Stir plate, multiposition with stir bars.
5.8 Vacuum manifold.
5.9 Vortex mixer.
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ISO 20637:2015(E)

5.10 System HPLC, with corrosion-resistant components including an autosampler, two isocratic
pumps, 6-port switching valve, pulsed amperometry detector with a gold electrode and PEEK or
polytetrafluoroethylene (PTFE) 0,18 mm to 0,25 mm (0,007 inch to 0,01 inch) internal diameter tubing.
Autosampler capable of injecting 20 μl.
1)
5.11 Columns, Dionex CarboPac MA1 (4 mm × 250 mm) P/N, 44066, MA1 (4 mm × 50 mm) P/N
44067, and PA1 (4 × 50 mm) P/N 43096, or equivalent.
5.12 Beakers, assorted sizes.
5.13 Centrifuge tubes, 50 ml with polytetrafluoroethylene (PTFE)-coated caps.
5.14 Syringe filters, polyamide, 0,45 μm and 0,2 μm.
1)
5.15 Filter paper, Whatman 2V or equivalent.
5.16 Conical flasks, 50 ml or 125 ml or equivalent.
5.17 Volumetric flasks, assorted sizes.
5.18 Funnels, suitable for use with filter paper.
5.19 Pipets, volumetric, assorted sizes.
2)
5.20 Solid-phase extraction (SPE) cartridge, silica, 1 g
.
5.21 Syringes, 1 ml disposable and 25 ml gas-tight glass with 100 mm (4 in) stainless steel needles.
6 Procedure
6.1 Free myo-inositol
6.1.1 Sample preparation
6.1.1.1 General
Prepared samples that are constantly stored at 1 °C to 8 °C in closed containers are stable for up to
5 days. After 5 days, samples shall be prepared again. Mix liquid samples well to ensure homogeneity. If
the powder sample homogeneity is unknown, assume that it is non-homogenous and proceed with the
preparation of dry blended/non-homogenous powder samples as given in 6.1.1.3.
6.1.1.2 Liquid samples
For ready-to-feed liquid samples, accurately weigh (0,5 ± 0,05) g to (5 ± 0,5) g of
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 20637
Première édition
2015-11-01
Formules infantiles et produits
nutritionnels pour adultes —
Détermination de la teneur en myo-
inositol par chromatographie liquide
et ampérométrie pulsée
Infant formula and adult nutritionals — Determination of myo-
inositol by liquid chromatography and pulsed amperometry
Numéro de référence
ISO 20637:2015(F)
©
ISO 2015

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ISO 20637:2015(F)

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
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ISO 20637:2015(F)

Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Termes et définitions . 1
3 Principe . 1
4 Réactifs et matériaux . 1
5 Appareillage . 3
6 Mode opératoire. 4
6.1 Myo-inositol libre . 4
6.1.1 Préparation de l’échantillon . 4
6.1.2 Extraction . 5
6.2 Myo-inositol lié sous forme de phosphatidylinositol . 5
6.2.1 Préparation de l’échantillon . 5
6.2.2 Extraction . 6
6.2.3 Purification . 6
6.2.4 Hydrolyse . 6
6.3 Analyse par CLHP . 6
6.3.1 Conditions de fonctionnement de l’instrument . 6
6.3.2 Réglages du détecteur d’ampérométrie pulsée avec électrode en or . 8
6.3.3 Démarrage de l’instrument . 8
6.3.4 Analyse de l’étalon et de l’échantillon . 9
6.3.5 Arrêt du système . 9
7 Calculs . 9
7.1 Généralités . 9
7.2 Concentration des étalons . 9
7.3 Préparation de la courbe d’étalonnage .10
7.4 Calcul du myo-inositol libre ou libre plus lié dans les échantillons .10
7.4.1 Calcul du myo-inositol libre .10
7.4.2 Calcul du myo-inositol lié .10
7.4.3 Calcul du myo-inositol libre plus lié .10
Annexe A (informative) Exemples de chromatogrammes .11
Annexe B (informative) Données de fidélité .12
Bibliographie .15
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ISO 20637:2015(F)

Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer
un engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à
l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes
de l’OMC concernant les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos —
Informations supplémentaires.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 34, Produits alimentaires, en
collaboration avec l’AOAC INTERNATIONAL. Le document est publié par l’ISO et séparément par l’AOAC
INTERNATIONAL. La méthode décrite dans la présente Norme internationale est équivalente à la
Méthode officielle de l’AOAC 2011.18: Myo-inositol (libre et lié sous forme de phosphatidylinositol) dans les
formules infantiles et pédiatriques et les produits nutritionnels pour adultes.
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NORME INTERNATIONALE ISO 20637:2015(F)
Formules infantiles et produits nutritionnels pour
adultes — Détermination de la teneur en myo-inositol par
chromatographie liquide et ampérométrie pulsée
AVERTISSEMENT — L’utilisation de la présente Norme internationale peut impliquer des
matériaux, des opérations et des équipements dangereux. La présente Norme internationale
n’a pas pour but d’aborder tous les problèmes de sécurité liés à son utilisation. Avant d’utiliser
la présente Norme internationale, il incombe à l’utilisateur d’établir des pratiques appropriées
de sécurité et de protection de la santé et de déterminer l’applicabilité des restrictions
réglementaires.
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale spécifie une méthode de détermination de la teneur en myo-
inositol (libre ou libre plus lié sous forme de phosphatidylinositol) dans les formules infantiles et
les produits nutritionnels pour adultes par chromatographie liquide et ampérométrie pulsée avec
commutation de colonne.
2 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
2.1
produit nutritionnel pour adultes
aliment complet sur le plan nutritionnel, spécialement formulé, consommé sous forme liquide, pouvant
constituer la seule source d’alimentation, constitué de n’importe quelle combinaison de lait, soja, riz,
lactosérum, protéine hydrolysée, amidon et acides aminés, avec et sans protéine intacte
2.2
formule infantile
substitut du lait maternel spécialement fabriqué pour satisfaire, par lui-même, les besoins nutritionnels
des nourrissons pendant les premiers mois de la vie jusqu’à l’introduction d’une alimentation
complémentaire appropriée
[SOURCE: Norme Codex 72-1981]
3 Principe
Le myo-inositol libre et le myo-inositol lié sous forme de phosphatidylinositol sont extraits au moyen
de deux modes opératoires de préparation d’échantillon différents. Le myo-inositol libre est extrait
des échantillons avec de l’acide chlorhydrique dilué et de l’eau. Le phosphatidylinositol est extrait des
échantillons avec du chloroforme et séparé des autres matières grasses sur cartouches d’extraction
en phase solide en silice. Le myo-inositol est alors libéré de la chaîne glycérol avec de l’acide acétique
et de l’acide chlorhydrique concentrés à 120 °C. La méthode de chromatographie ionique utilise une
combinaison de deux colonnes d’échange d’ions différentes avec commutation de colonne et détection
par ampérométrie pulsée (PAD). La concentration du myo-inositol est calculée par comparaison avec
des étalons de concentration connue.
4 Réactifs et matériaux
Au cours de l’analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue et de l’eau distillée ou déminéralisée ou de l’eau de pureté équivalente.
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ISO 20637:2015(F)

4.1 Produits chimiques et solvants
4.1.1 Acide acétique, glacial, ACS.
4.1.2 Chloroforme, haute pureté, qualité CLHP.
4.1.3 Éther diéthylique, anhydre, qualité CLHP.
4.1.4 Driérite (dessiccatif), sulfate de calcium anhydre, 8 mesh.
4.1.5 Hélium, qualité zéro ou l’équivalent.
4.1.6 Hexane, qualité CLHP.
4.1.7 Acide chlorhydrique, concentré (36 % à 38 %), ACS.
4.1.8 Acide métaphosphorique, ACS.
4.1.9 Méthanol, qualité CLHP.
4.1.10 Myo-inositol, étalon de référence primaire, lot officiel, conserver avec un dessiccatif. Consulter
l’étiquette de l’étalon pour connaître la pureté.
4.1.11 Chlorure de sodium, ACS.
4.1.12 Hydroxyde de sodium, 50 % (m/m), forme à faible teneur en carbonates.
4.2 Préparation des réactifs et des solutions étalons
4.2.1 Généralités. Le volume de toutes les solutions peut être augmenté ou diminué selon les besoins,
à condition de respecter les bonnes pratiques de laboratoire. Les solutions peuvent être conservées au
réfrigérateur ou à température ambiante dans des récipients inertes étanches, sauf indication contraire.
4.2.2 Solution étalon mère de myo-inositol (environ 2 000 mg/l). Peser avec précision environ
0,100 g de myo-inositol et transférer quantitativement dans une fiole jaugée de 50 ml. Compléter au
volume avec de l’eau. Bien mélanger. Conserver au réfrigérateur. Délai d’expiration: 3 mois.
4.2.3 Solution étalon intermédiaire de myo-inositol (environ 200 mg/l). Diluer 10,0 ml de solution
étalon mère (4.2.2) à 100 ml avec de l’eau et bien mélanger. Jeter après usage.
4.2.4 Préparation des solutions d’étalonnage
4.2.4.1 Solutions étalons de myo-inositol limite haute (environ 4 mg/l, 2 mg/l, 1 mg/l, 0,5 mg/l)
Dans des fioles jaugées séparées, diluer 2,0 ml, 1,0 ml et 0,5 ml d’étalon intermédiaire de myo-inositol
(4.2.3) à 100 ml avec de l’eau. Diluer 0,5 ml d’étalon intermédiaire de myo-inositol (4.2.3) à 200 ml avec
de l’eau. Délai d’expiration: 2 semaines.
4.2.4.2 Solutions étalons de myo-inositol limite basse (environ 0,2 mg/l et 0,05 mg/l)
Dans des fioles jaugées séparées, diluer 4 ml et 1 ml de l’étalon de myo-inositol à 0,5 mg/l avec 10 ml
d’eau. Délai d’expiration: 2 semaines.
2 © ISO 2015 – Tous droits réservés

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4.2.5 Acide chlorhydrique, 0,5 %. Ajouter 1,25 ml d’acide chlorhydrique concentré à environ 200 ml
d’eau dans une fiole jaugée de 250 ml. Compléter au volume avec de l’eau et bien mélanger. Délai
d’expiration: 6 mois.
4.2.6 Chlorure de sodium, 1 mol/l. Dissoudre 5,8 g de chlorure de sodium et diluer à 100 ml avec de
l’eau. Délai d’expiration: 1 mois.
4.2.7 Hydroxyde de sodium, 0,12 % ou 30 mmol (Pompe 1). Peser rapidement (4,8 ± 0,1) g
d’hydroxyde de sodium à 50 % dans une fiole jaugée de 2 000 ml contenant environ 1 900 ml d’eau. Il est
important que l’hydroxyde de sodium n’absorbe pas le dioxyde de carbone de l’air. Bien mélanger d’un
mouvement rotatif. Compléter au volume avec de l’eau et bien mélanger. Délai d’expiration: 1 mois.
4.2.8 Hydroxyde de sodium, 4,0 % ou 1 mol/l (Pompe 2). Peser rapidement (160 ± 3) g d’hydroxyde
de sodium à 50 % dans une fiole jaugée de 2 000 ml contenant environ 1 900 ml d’eau. Il est important
que l’hydroxyde de sodium n’absorbe pas le dioxyde de carbone de l’air. Bien mélanger d’un mouvement
rotatif. Compléter au volume avec de l’eau et bien mélanger. Délai d’expiration: 1 mois.
4.2.9 Acide métaphosphorique, 6 %. Peser 6,0 g d’acide métaphosphorique dans une fiole jaugée
de 100 ml. Dissoudre et diluer au volume avec de l’eau. Bien mélanger. Conserver au réfrigérateur. Délai
d’expiration: 1 semaine.
4.2.10 Solutions d’extraction du phosphatidylinositol. Préparer une solution fraîche le jour de
l’utilisation.
4.2.10.1 Chloroforme:méthanol (2:1). Mélanger 60 ml de chloroforme et 30 ml de méthanol.
4.2.10.2 Hexane:éther diéthylique (80:20). Mélanger 80 ml d’hexane et 20 ml d’éther diéthylique.
4.2.10.3 Hexane:éther diéthylique (50:50). Mélanger 50 ml d’hexane et 50 ml d’éther diéthylique.
4.2.10.4 Méthanol:chloroforme:eau (75:15:10). Mélanger 75 ml de méthanol, 15 ml de chloroforme
et 10 ml d’eau.
5 Appareillage
Verrerie et équipement de laboratoire habituels et, en particulier, les éléments suivants.
5.1 Balance analytique, capacité de pesée minimum d’au moins 0,000 1 g.
5.2 Centrifugeuse.
5.3 Dessiccateur.
5.4 Évaporateur sous flux d’azote, avec bain-marie ou l’équivalent.
5.5 Four, capable de maintenir 120 °C.
5.6 pH-mètre, avec tampons à pH 4 et 7.
5.7 Agitateur magnétique, multiposition avec barreaux aimantés.
5.8 Extracteur sous vide.
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ISO 20637:2015(F)

5.9 Agitateur vortex.
5.10 Système de CLHP, avec composants résistant à la corrosion incluant un échantillonneur
automatique, deux pompes isocratiques, une vanne de commutation à six voies, un détecteur
d’ampérométrie pulsée avec électrode en or et tubulure en PEEK ou polytétrafluoroéthylène (PTFE)
de 0,18 mm à 0,25 mm (0,007 pouce à 0,01 pouce) de diamètre interne. Échantillonneur automatique
pouvant injecter 20 μl.
1)
5.11 Colonnes, Dionex CarboPac MA1 (4 mm × 250 mm) P/N 44066, MA1 (4 mm × 50 mm) P/N 44067
et PA1 (4 × 50 mm) P/N 43096, ou l’équivalent.
5.12 Béchers, tailles assorties.
5.13 Tubes de centrifugation, 50 ml avec bouchons revêtus de polytétrafluoroéthylène (PTFE).
5.14 Filtres seringue, polyamide, 0,45 μm et 0,2 μm.
1)
5.15 Papier filtre, Whatman 2V ou l’équivalent.
5.16 Fioles coniques, 50 ml ou 125 ml ou l’équivalent.
5.17 Fioles jaugées, tailles assorties.
5.18 Entonnoirs, adaptés à une utilisation avec papier filtre.
5.19 Pipettes, volumétriques, tailles assorties.
2)
5.20 Cartouche d’extraction en phase solide (SPE), silice, 1 g .
5.21 Seringues, 1 ml jetables et 25 ml étanches au gaz en verre avec aiguilles de 100 mm (4 pouces) en
acier inoxydable.
6 Mode opératoire
6.1 Myo-inositol libre
6.1.1 Préparation de l’échantillon
6.1.1.1 Généralités
Les échantillons préparés qui sont conservés de manière constante à une température comprise entre
1 °C et 8 °C dans des récipients fermés sont stables pendant 5 jours. Après 5 jours, les échantillons
doivent de nouveau être préparés. Bien mélanger les échantillons liquides pour assurer l’homogénéité.
1) Ceci est un exemple de produit approprié disponible dans le commerce. Cette information est donnée par souci
de commodité à l’intention des utilisateurs du présent document et ne saurait constituer un engagement de l’ISO à
l’égard de ce produit. Des produits équivalents peuvent être utilisés s’il est démontré qu’ils conduisent aux mêmes
résultats.
2) J.T. Baker référence 7086-07 (www.avantormaterials.com) est un exemple de produit approprié disponible
dans le commerce. Cette information est donnée par souci de commodité à l’intention des utilisateurs du présent
document et ne saurait constituer un engagement de l’ISO à l’égard de ce produit. Des produits équivalents peuvent
être utilisés s’il est démontré qu’ils conduisent aux mêmes résultats.
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Si l’homogénéité de l’é
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