ISO 20635:2018

Infant formula and adult nutritionals - Determination of vitamin C by (ultra) high performance liquid chromatography with ultraviolet detection ((U)HPLC-UV)

This document specifies a method for the determination of vitamin C (L-ascorbic acid) present in all forms of infant and adult formulas (powders, ready-to-feed liquids and liquid concentrates), using (ultra) high performance liquid chromatography with ultraviolet detection (U)HPLC-UV. The application range runs from 2,5 mg/100 g (limit of quantification) to 50 mg/100 g expressed in the product as consumed. The method is able to distinguish between D-ascorbic acid (isoascorbic- or erythorbic acid) and L-ascorbic acid.

Formules infantiles et produits nutritionnels pour adultes — Détermination de la teneur en vitamine C par chromatographie liquide à (ultra) haute performance avec détection dans l'ultraviolet ((CL(U)HP-UV)

Le présent document spécifie une méthode de détermination de la teneur en vitamine C (acide L‑ascorbique) dans toutes les formes de formules infantiles et pour adultes (poudres, liquides prêts à consommer et concentrés liquides), par chromatographie en phase liquide à (ultra) haute performance avec détection dans l'ultraviolet CL(U)HP-UV. Le domaine d'application de la méthode est compris entre 2,5 mg/100 g (limite de quantification) et 50 mg/100 g dans le produit tel qu'il est consommé. La méthode fait la distinction entre l'acide D-ascorbique (acide isoascorbique ou acide érythorbique) et l'acide L-ascorbique.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 01-Jul-2018
• ICS: 67.050 - General methods of tests and analysis for food products
• Technical Committee: ISO/TC 34 - Food products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/WG 14 - Vitamins, carotenoids and other nutrients
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Start Date: 20-Dec-2023
• Completion Date: 13-Dec-2025

Overview

ISO 20635:2018 specifies a validated analytical method for the determination of vitamin C (L‑ascorbic acid) in infant formula and adult nutritionals using (ultra) high performance liquid chromatography with ultraviolet detection - (U)HPLC‑UV. The method covers powders, ready‑to‑feed liquids and liquid concentrates, with an application range from 2.5 mg/100 g (limit of quantification) up to 50 mg/100 g expressed in the product as consumed. The procedure can distinguish L‑ascorbic acid from D‑ascorbic acid (isoascorbic/erythorbic acid).

Key topics and technical requirements

• Scope & principle: Extraction of vitamin C using trichloroacetic acid (TCA) in the presence of tris[2‑carboxyethyl]phosphine (TCEP) to reduce and protect ascorbic acid from oxidation, followed by separation on a C‑column with ion‑pairing (decylamine) in a sodium acetate buffer and UV detection at 265 nm.
• Sample types: Powder reconstitutions, ready‑to‑feed liquids and concentrates; starch‑containing samples may require α‑amylase pretreatment.
• Reagents & mobile phase: Key reagents include ascorbic acid standards, TCA, TCEP, sodium acetate buffer (pH 5.4), decylamine and acetonitrile. Mobile phase formulations differ for UHPLC and HPLC (noted in the standard).
• Chromatographic conditions: Separate sets of conditions for UHPLC (shorter run time, smaller column/particles) and HPLC (longer run, larger column). Typical detection: UV at 265 nm.
• Quality control: System suitability tests, calibration with multi‑point standards, filtration and membrane handling, and validated precision (repeatability and reproducibility) data are specified.
• Performance: Defined limit of quantification and validated linear range; instructions for sample preparation, extraction, filtration and calculation.

Applications and users

Who benefits from ISO 20635:2018:

• Food and beverage analytical laboratories performing vitamin C assays in infant formula and adult nutritionals.
• Infant formula and clinical nutrition manufacturers for in‑house quality control and formulation verification.
• Regulatory authorities and third‑party testing bodies assessing compliance with nutrient labeling and infant nutrition standards.
• R&D teams developing fortified formulas and stability studies (to monitor vitamin C degradation).

Practical uses:

• Routine QC testing of production batches.
• Stability and shelf‑life studies for vitamin C retention.
• Regulatory compliance testing and product release.

Related standards

• AOAC Official Method 2012.22 - method equivalent to ISO 20635:2018 (Ultra‑Performance Liquid Chromatography with UV detection for vitamin C in infant formula).
• ISO/TC 34 (Food products) guidance for laboratory and sampling practices may be relevant when implementing ISO 20635.

Keywords: ISO 20635:2018, vitamin C determination, (U)HPLC‑UV, infant formula, adult nutritionals, L‑ascorbic acid, UHPLC, HPLC, chromatography, TCEP, TCA.

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20635
First edition
2018-07
Infant formula and adult
nutritionals — Determination of
vitamin C by (ultra) high performance
liquid chromatography with
ultraviolet detection ((U)HPLC-UV)
Formules infantiles et produits nutritionnels pour adultes —
Détermination de la teneur en vitamine C par chromatographie
liquide à (ultra) haute performance avec détection dans l'ultraviolet
((CL(U)HP-UV)
Reference number
©
ISO 2018
© ISO 2018
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CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: [phone]
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Published in Switzerland
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Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents and materials . 2
5.1 Reagents and standards . 2
5.2 Preparation of solutions . 2
6 Apparatus . 3
7 Procedure. 4
7.1 Sample preparation . 4
7.1.1 General. 4
7.1.2 Powder samples . 4
7.1.3 Liquid samples . 4
7.2 Extraction . 4
7.3 Analysis. 5
7.3.1 Chromatographic conditions for UHPLC . 5
7.3.2 Chromatographic conditions for HPLC . 5
7.3.3 System suitability test . 5
7.3.4 Calibration . 5
7.3.5 Analysis . 6
7.3.6 Identification . 6
8 Calculations. 6
9 Precision . 6
9.1 General . 6
9.2 Repeatability . 6
9.3 Reproducibility . 7
Annex A (informative) Typical chromatograms . 9
Annex B (informative) Precision data .12
Bibliography .13
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso
.org/iso/foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, in collaboration
with AOAC INTERNATIONAL. It is being published by ISO and separately by AOAC INTERNATIONAL.
The method described in this document is equivalent to the AOAC Official Method 2012.22: Vitamin
C in Infant Formula and Adult/Pediatric Nutritional Formula, Ultra-Performance Liquid Chromatography
(UPLC) with Ultraviolet Detection.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/members .html.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 20635:2018(E)
Infant formula and adult nutritionals — Determination
of vitamin C by (ultra) high performance liquid
chromatography with ultraviolet detection ((U)HPLC-UV)
1 Scope
This document specifies a method for the determination of vitamin C (L-ascorbic acid) present in all
forms of infant and adult formulas (powders, ready-to-feed liquids and liquid concentrates), using
(ultra) high performance liquid chromatography with ultraviolet detection (U)HPLC-UV. The application
range runs from 2,5 mg/100 g (limit of quantification) to 50 mg/100 g expressed in the product as
consumed. The method is able to distinguish between D-ascorbic acid (isoascorbic- or erythorbic acid)
and L-ascorbic acid.
2 Normative references
There are no normative references in this document.
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https: //www .iso .org/obp
— IEC Electropedia: available at http: //www .electropedia .org/
3.1
adult nutritional
nutritionally complete, specially formulated food, consumed in liquid form, which may constitute the
sole source of nourishment, made from any combination of milk, soy, rice, whey, hydrolysed protein,
starch and amino acids, with and without intact protein
3.2
infant formula
breast-milk substitute specially manufactured to satisfy, by itself, the nutritional requirements of
infants during the first months of life up to the introduction of appropriate complementary feeding
[SOURCE: CODEX STAN 72-1981]
4 Principle
Ascorbic acid is extracted from the sample using trichloroacetic acid (TCA) in the presence of tris
[2-carboxyethyl]phosphine (TCEP) as a reducing agent and to protect ascorbic acid from oxidation.
Ascorbic acid is then determined by Ultra High Performance Liquid Chromatography (UHPLC) or High
Performance Liquid Chromatography (HPLC) with UV detection at 265 nm. Separation takes place
on a C column using decylamine as ion-pairing agent in a sodium acetate buffer solution (pH = 5,4)
containing TCEP.
5 Reagents and materials
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade and
distilled or demineralized water or water of equivalent purity.
SAFETY PRECAUTIONS — Refer to material safety data sheets prior to use of chemicals. Use
appropriate personal protective equipment when performing testing.
5.1 Reagents and standards
5.1.1 Acetonitrile, HPLC grade.
5.1.2 Ascorbic acid, purity > 99 %.
5.1.3 Decylamine.
5.1.4 Phosphoric acid, 85 %.
5.1.5 Ultra pure water, resistivity > 18 MΩ/cm.
5.1.6 Sodium acetate trihydrate.
5.1.7 Trichloroacetic acid (TCA).
5.1.8 Tris [2-carboxyethyl]phosphine (TCEP).
5.1.9 Isoascorbic acid.
5.1.10 Orotic acid.
5.2 Preparation of solutions
IMPORTANT — Vitamin C is sensitive to light and oxygen. Conduct operations under subdued
light, or use amber glassware. Keep all solutions away from direct light.
5.2.1 Sodium acetate solution, substance concentration c = 0,500 mol/l (pH = 5,4).
Into a 500 ml volumetric flask, weigh 34,0 g of sodium acetate trihydrate (5.1.6), add about 400 ml of
water and dissolve well. Adjust pH to 5,4 with phosphoric acid 85 % (5.1.4) and make up to volume
with water.
5.2.2 TCA solution, 15 %.
Into a 500 ml volumetric flask, weigh 75,0 g of TCA (5.1.7), dissolve and make up to volume with water.
5.2.3 TCEP solution, mass concentration ρ = 250 µg/ml.
Into a 500 ml volumetric flask, weigh 125 mg of TCEP (5.1.8), dissolve and make up to volume with water.
2 © ISO 2018 – All rights reserved

5.2.4 Mobile phase for UHPLC.
Into a 250 ml flask, mix 0,4 g of decylamine (5.1.3), 2,5 ml of acetonitrile (5.1.1), 25 ml of sodium acetate
solution (5.2.1) and 205 ml of water. Do not make up to volume. Adjust pH to pH = 5,4 with phosphoric
acid 85 % (5.1.4). Add 10 mg of TCEP (5.1.8).
NOTE Mobile phases are hazy during preparation, but they become clear after pH adjustment.
5.2.5 Mobile phase for HPLC.
Into a 1 000 ml flask, mix 1,6 g of decylamine (5.1.3), 80 ml of acetonitrile (5.1.1), 100 ml of sodium
acetate solution (5.2.1) and 820 ml of water. Do not make up to volume. Adjust pH to pH = 5,4 with
phosphoric acid 85 % (5.1.4). Add 50 mg of TCEP (5.1.8).
5.2.6 Ascorbic acid stock solution, ρ = 500 µg/ml.
Into a 25 ml amber glass volumetric flask (6.2), weigh 12,5 mg of ascorbic acid (5.1.2). Dissolve and
make up to volume with TCEP solution (5.2.3). This solution can be kept for 3 months if stored at 4 °C
away from light.
5.2.7 Ascorbic acid intermediate standard solution, ρ = 50 µg/ml.
Into a
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 20635
Première édition
2018-07
Formules infantiles et produits
nutritionnels pour adultes —
Détermination de la teneur en
vitamine C par chromatographie
liquide à (ultra) haute performance
avec détection dans l'ultraviolet
((CL(U)HP-UV)
Infant formula and adult nutritionals — Determination of vitamin C
by (ultra) high performance liquid chromatography with ultraviolet
detection ((U)HPLC-UV)
Numéro de référence
©
ISO 2018
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2018
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: [phone]
Fax: [phone]
E-mail: [e-mail]
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d'application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 1
5 Réactifs et matériel . 2
5.1 Réactifs et étalons . 2
5.2 Préparation des solutions . 2
6 Appareillage . 3
7 Mode opératoire. 4
7.1 Préparation des échantillons . 4
7.1.1 Généralités . 4
7.1.2 Échantillons de poudre . 4
7.1.3 Échantillons liquides . 4
7.2 Extraction . 4
7.3 Analyse . 5
7.3.1 Conditions chromatographiques pour CLUHP . 5
7.3.2 Conditions chromatographiques de CLHP. 5
7.3.3 Test d'adéquation du système analytique . 5
7.3.4 Étalonnage . 5
7.3.5 Analyse . 6
7.3.6 Identification . 6
8 Calculs . 6
9 Fidélité . 6
9.1 Généralités . 6
9.2 Répétabilité . 7
9.3 Reproductibilité . 8
Annex A (informative) Chromatogrammes types . 9
Annex B (informative) Données de fidélité .12
Bibliographie .13
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.
L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/directives).
L'attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l'élaboration du document sont indiqués dans l'Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l'ISO (voir www .iso .org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion
de l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34 Produits alimentaires,
en collaboration avec AOAC INTERNATIONAL. Il est publié par l'ISO et séparément par AOAC
INTERNATIONAL. La méthode décrite dans le présent document est équivalente à la Méthode officielle
AOAC 2012.22: Vitamin C in Infant Formula and Adult/Pediatric Nutritional Formula, Ultra-Performance
Liquid Chromatography (UPLC) with Ultraviolet Detection.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.
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NORME INTERNATIONALE ISO 20635:2018(F)
Formules infantiles et produits nutritionnels pour
adultes — Détermination de la teneur en vitamine C par
chromatographie liquide à (ultra) haute performance avec
détection dans l'ultraviolet ((CL(U)HP-UV)
1 Domaine d'application
Le présent document spécifie une méthode de détermination de la teneur en vitamine C (acide
L-ascorbique) dans toutes les formes de formules infantiles et pour adultes (poudres, liquides prêts à
consommer et concentrés liquides), par chromatographie en phase liquide à (ultra) haute performance
avec détection dans l'ultraviolet CL(U)HP-UV. Le domaine d'application de la méthode est compris
entre 2,5 mg/100 g (limite de quantification) et 50 mg/100 g dans le produit tel qu'il est consommé.
La méthode fait la distinction entre l'acide D-ascorbique (acide isoascorbique ou acide érythorbique) et
l'acide L-ascorbique.
2 Références normatives
Le présent document ne contient aucune référence normative.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https: //www .iso .org/obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http: //www .electropedia .org/
3.1
produit nutritionnel pour adultes
aliment complet sur le plan nutritionnel, spécialement formulé, consommé sous forme liquide, pouvant
constituer la seule source d’alimentation, constitué de n’importe quelle combinaison de lait, soja, riz,
lactosérum, protéine hydrolysée, amidon et acides aminés, avec et sans protéine intacte
3.2
formule infantile
substitut du lait maternel spécialement fabriqué pour satisfaire à lui seul les besoins nutritionnels
des nourrissons pendant les premiers mois de leur vie jusqu’à l’introduction d’une alimentation
complémentaire appropriée
[SOURCE: CODEX STAN 72-1981, modifié – Le terme de la source est devenu “formule infantile”.]
4 Principe
Extraction de l'acide ascorbique contenu dans l'échantillon au moyen d'acide trichloroacétique (TCA)
en présence de tris [2-carboxyéthyl]phosphine (TCEP) comme agent réducteur et pour protéger l'acide
D-ascorbique de l'oxydation. L'acide ascorbique est ensuite dosé par chromatographie en phase liquide
à ultra haute performance (CLUHP) ou par chromatographie en phase liquide à haute performance
(CLHP) avec détection dans l’ultraviolet à 265 nm. La séparation se produit sur une colonne C en
utilisant de la décylamine comme agent d'appariement d'ions, dans une solution tampon d'acétate de
sodium (pH = 5,4) contenant du TCEP.
5 Réactifs et matériel
Au cours de l'analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue et de l’eau distillée ou déminéralisée ou de l'eau de pureté équivalente.
PRÉCAUTIONS DE SÉCURITÉ — Se référer aux fiches techniques de sécurité relatives aux
matériaux avant de faire usage des produits chimiques. Utiliser les équipements de protection
individuelle appropriés lors des essais.
5.1 Réactifs et étalons
5.1.1 Acétonitrile, de qualité CLHP.
5.1.2 Acide ascorbique, de pureté > 99 %.
5.1.3 Décylamine.
5.1.4 Acide phosphorique, à 85 %.
5.1.5 Eau ultra-pure, ayant une résistivité > 18 MΩ/cm.
5.1.6 Acétate de sodium trihydraté.
5.1.7 Acide trichloroacétique (TCA).
5.1.8 Tris [2-carboxyéthyl]phosphine (TCEP).
5.1.9 Acide isoascorbique.
5.1.10 Acide orotique.
5.2 Préparation des solutions
IMPORTANT — La vitamine C est sensible à la lumière et à l'oxygène. Effectuer les différentes
opérations sous éclairage atténué ou utiliser de la verrerie ambrée. Tenir toutes les solutions à
l'abri de la lumière directe.
5.2.1 Solution d'acétate de sodium, concentration c = 0,500 mol/l (pH = 5,4)
Dans une fiole jaugée de 500 ml, peser 34,0 g d'acétate de sodium trihydraté (5.1.6), ajouter environ
400 ml d'eau et homogénéiser. Ajuster le pH à 5,4 avec de l'acide phosphorique à 85 % (5.1.4) et
compléter au volume avec de l'eau.
5.2.2 Solution de TCA , à 15 %.
Dans une fiole jaugée de 500 ml, peser 75,0 g de TCA (5.1.7), dissoudre et compléter au volume avec
de l'eau.
2 © ISO 2018 – Tous droits réservés

5.2.3 Solution de TCEP, concentration massique ρ = 250 µg/ml.
Dans une fiole jaugée de 500 ml, peser 125 mg de TCEP (5.1.8), dissoudre et compléter au volume avec
de l'eau.
5.2.4 Phase mobile pour CLUHP.
Dans un récipient de 250 ml, mélanger 0,4 g de décylamine (5.1.3), 2,5 ml d'acétonitrile (5.1.1), 25 ml de
la solution d'acétate de sodium (5.2.1) et 205 ml d'eau. Ne pas compléter au volume. Ajuster le pH à 5,4
avec de l'acide phosphorique à 85 % (5.1.4). Ajouter 10 mg de TCEP (5.1.8).
NOTE Les phases mobiles sont troubles pendant la préparation mais elles deviennent limpides après
l'ajustement du pH.
5.2.5 Phase mobile pour CLHP.
Dans un récipient de 1000 ml, mélanger 1,6 g de décylamine (5.1.3), 80 ml d'acétonitrile (5.1.1), 100 ml
de la solution d'acétate de sodium (5.2.1) et 820 ml d'eau. Ne pas compléter au volume. Ajuster le pH à
5,4 avec de l'acide phosphorique à 85 % (5.1.4). Ajouter 50 mg de TCEP (5.1.8).
5.2.6 Solution mère d'acide ascorbique, ρ = 500 µg/ml.
Dans une fiole jaugée (6.2) en verre ambré de 25 ml, peser 12,5 mg d'acide ascorbique (5.1.2). Dissoudre
et compléter au volume avec la solution de TCEP (5.2.3). Cette solution peut être conservée pendant 3
mois si elle est stockée à 4 °C à l'abri de la lumière.
5.2.7 Solution étalon intermédiaire d'acide ascorbique, ρ = 50 µg/ml.
Dans une fiole jaugée (6.2) en verre ambré de 10 ml, introduire à la pipette 1 ml de solution mère (5.2.6).
Compléter au volume avec la solution de TCEP (5.2.3). Cette solution peut être utilisée pendant 1 mois si
elle est stockée à 4 °C à l'abri de la lumière.
5.2.8 Solutions étalons d'acide ascorbique pour étalonnage, ρ = 0,5 µg/ml, ρ = 1,0 µg/ml,
ρ = 2,0 µg/ml, ρ = 3,0 µg/ml, ρ = 5,0 µg/ml, ρ = 7,5 µg/ml et ρ = 10 µg/ml.
Dans des fioles jaugées (6.2) en verre ambré de 10 ml, introduire à la pipette 0,1 ml, 0,2 ml, 0,4 ml,
0,6 ml, 1,0 ml
...