ISO 22118:2011
(Main)Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the detection and quantification of food-borne pathogens — Performance characteristics
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the detection and quantification of food-borne pathogens — Performance characteristics
ISO 22118:2010 specifies minimum requirements of performance characteristics for the detection of nucleic acid sequences (DNA or RNA) by molecular methods. ISO 22118:2010 applies to the detection of food-borne pathogens in foodstuffs and isolates obtained from them using molecular detection methods based on the polymerase chain reaction (PCR). ISO 22118:2010 is also applicable, for example, to the detection of food-borne pathogens in environmental samples and in animal feeding stuffs.
Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la détection et la quantification des micro-organismes pathogènes dans les aliments — Caractéristiques de performance
L'ISO 22118:2010 spécifie les exigences minimales relatives aux caractéristiques de performance pour la détection de séquences d'acide nucléique (ADN ou ARN) par méthodes moléculaires. L'ISO 22118:2010 s'applique à la détection de micro-organismes pathogènes présents dans les aliments et les extraits obtenus à partir de ces aliments en employant des méthodes de détection moléculaires fondées sur la réaction de polymérisation en chaîne (PCR). L'ISO 22118:2010 peut également être utilisée, par exemple, pour la détection de micro-organismes pathogènes d'origine alimentaire dans des prélèvements environnementaux ainsi que dans les aliments pour animaux.
General Information
Buy Standard
Standards Content (Sample)
МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 22118
Первое издание
2011-07-15
Микробиология пищевых продуктов и
кормов для животных. Метод
полимеразной цепной реакции (ПЦР)
для обнаружения и количественного
определения пищевых патогенных
микроорганизмов. Показатели
результативности
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain
reaction (PCR) for the detection and quantification of food borne
pathogens — Performance characteristics
Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO
Ссылочный номер
ISO 22118:2011(R)
©
ISO 2011
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 22118:2011(R)
ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ
© ISO 2011
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO, которое должно быть получено после запроса о разрешении, направленного по
адресу, приведенному ниже, или в комитет-член ISO в стране запрашивающей стороны.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO 2011 – Все права сохраняются
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 22118:2011(R)
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией национальных
организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов
обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член, заинтересованный в
деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в этом
комитете. Международные правительственные и неправительственные организации, имеющие связи с
ISO, также принимают участие в работах. ISO работает в тесном сотрудничестве с Международной
электротехнической комиссией (IEC) по всем вопросам стандартизации в области электротехники.
Международные стандарты разрабатываются в соответствии с правилами, установленными в
Директивах ISO/IEC, Часть 2.
Основная задача технических комитетов состоит в подготовке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, одобренные техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам
на голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения, по
меньшей мере, 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.
Следует иметь в виду, что некоторые элементы данной части ISO 16065 могут быть объектом
патентных прав. Организация ISO не должна нести ответственность за идентификацию какого-либо
одного или всех патентных прав.
ISO 22118 был подготовлен Европейским комитетом по стандартизации (CEN) Техническим комитетом
CEN/TC 275, Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы, совместно с Техническим
комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты, Подкомитетом SC 9, Микробиология, в соответствии с
Соглашением по техническому сотрудничеству между ISO и CEN (Венское Соглашение).
© ISO 2011 – Все права сохраняются iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 22118:2011(R)
Введение
Методы молекулярного обнаружения разработаны в последние несколько десятилетий и в настоящее
время имеются для большинства пищевых патогенных микроорганизмов. Некоторые из этих методов
имеют возможность выполнения количественного анализа.
Хотя до настоящего времени большинство методов основывалось на полимеразной цепной реакции
(ПЦР) и ПЦР в реальном времени, другие принципы молекулярного обнаружения и количественного
анализа подлежат дальнейшему обсуждению.
Для сопоставления молекулярных методов с общепринятыми методами или с другими принципами
необходимо разработать минимальные требования к показателям результативности разрабатываемых
методов.
Настоящий международный стандарт является частью серии документов под общим называнием
Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Метод полимеразной цепной реакции
(ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов:
ISO/TS 20836, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Метод полимеразной
цепной реакции (ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов. Определение характеристик
термоциклеров
ISO 20837, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Метод полимеразной цепной
реакции (ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов. Требования к подготовке образцов
для качественного обнаружения
ISO 20838, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Метод полимеразной цепной
реакции (ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов. Требования к амплификации и
обнаружению для методов качественного анализа
ISO 22118, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Метод полимеразной цепной
реакции (ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов. Показатели результативности
ISO 22119, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Метод полимеразной цепной
реакции (ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов. Общие требования и определения
ISO 22174, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Метод полимеразной цепной
реакции (ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов. Общие требования и определения
Следующие Технические условия находятся в стадии разработки:
ISO/TS 13136, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод
обнаружения бактерий Escherichia coli, выделяющих токсин Шига (STEC), принадлежащих к
серотипам O157, O111, O26, O103 и O145. Качественный метод на основе полимеразной цепной
реакции (ПЦР)
iv © ISO 2011 – Все права сохраняются
---------------------- Page: 4 ----------------------
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ ISO 22118:2011(R)
Микробиология пищевых продуктов и кормов для
животных. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для
обнаружения и количественного определения пищевых
патогенных микроорганизмов. Показатели
результативности
1 Область применения
Настоящий международный стандарт устанавливает минимальные требования к показателям
результативности при обнаружении последовательностей нуклеиновых кислот (ДНК или РНК)
молекулярными методами. Настоящий международный стандарт применяется к обнаружению
пищевых патогенных микроорганизмов в пищевых продуктах и полученных из них изолятов с помощью
молекулярных методов обнаружения, основанных на полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Настоящий международный стандарт также применяется, например, к обнаружению пищевых
патогенных микроорганизмов в пробах из различных объектов окружающей среды и в кормах для
животных.
ПРИМЕЧАНИЕ Ввиду стремительного развития в данной области приведенные примеры являются наиболее
часто используемыми на момент разработки данного стандарта.
2 Нормативные ссылки
Нижеследующие документы являются обязательными для применения данного документа. Для
датированных ссылок действительно только указанное издание. В случае недатированных ссылок
используется последняя редакция документа, на который дается ссылка (включая все изменения).
ISO 16140:2003, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Протокол валидации
альтернативных методов
ISO 22174:2005, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Метод полимеразной
цепной реакции (ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов. Общие требования и
определения
3 Термины и определения
Применительно к данному документу используются следующие термины и определения.
3.1
аналит
анализируемое вещество
analyte
компонент, обнаруженный или измеренный методом анализа
ПРИМЕЧАНИЕ 1 Аналит может представлять собой микроорганизм или вирус, его компоненты или продукты.
ПРИМЕЧАНИЕ 2 Взято из ISO 16140:2003, 3.4.
© ISO 2011 – Все права сохраняются 1
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 22118:2011(R)
3.2
качественный метод
qualitative method
метод анализа, результатом которого является присутствие или отсутствие аналита, обнаруженное
непосредственно или косвенно в определенном количестве образца
[ISO 16140:2003, 3.5.]
3.3
количественный метод
quantitative method
метод анализа, результатом которого является количество аналита, измеренное непосредственно или
косвенно в определенном количестве образца
ПРИМЕЧАНИЕ Взято из ISO 16140:2003, 3.6.
3.4
анализ устойчивости (метода)
robustness testing
〈микробиология пищевых продуктов〉 проверка влияния на предлагаемый метод небольших изменений
методики или воздействия факторов окружающей среды с целью определения степени их влияния (в
случае возникновения) на результативность метода
3.5
селективность
избирательность
selectivity
〈микробиология пищевых продуктов 〉 мера инклюзивности (обнаружения целевого микроорганизма или
вируса) и эксклюзивности (необнаружение нецелевых микроорганизмов или вирусов)
3.6
чувствительность
sensitivity
〈микробиология пищевых продуктов 〉 мера минимального количества клеток, частиц или молекул
аналита, которое можно обнаружить в одной реакции
3.7
специфичность
specificity
способность применяемого метода распознавать исключительно целевую последовательность и
отличать ее от сходных последовательностей и загрязняющих примесей
[ISO 22174:2005, 3.6.4]
3.8
правильность
trueness
близость согласования между ожиданием и результатом или результатом измерения и истинным
значением
[1]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.3]
2 © ISO 2011 – Все права сохраняются
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 22118:2011(R)
3.9
предел обнаружения
предел выявления
detection limit
limit of detection
LOD
наименьшая концентрация или наименьшее содержание целевого микроорганизма относительно
определенного количества матрицы, которое можно последовательно обнаружить в условиях
эксперимента, установленных в рассматриваемом методе
ПРИМЕЧАНИЕ Взято из ISO 22174:2005, 3.1.8.
3.10
предел количественного определения
quantification limit
limit of quantification
LOQ
〈микробиология пищевых продуктов 〉 наименьшее количество аналита (т.е. наименьшее фактическое
число микроорганизмов), которое можно измерить количественно при определенной правильности и
прецизионности в условиях метода, достоверность которого надо подтверждать
ПРИМЕЧАНИЕ Взято из ISO 16140:2003, 6.2.2.2.3.
3.11
прецизионность
precision
близость согласования между результатами независимого испытания/измерения, полученными в
предписанных условиях
ПРИМЕЧАНИЕ 1 Прецизионность зависит только от распределения случайных ошибок и не связана с истинным
значением или установленным значением.
ПРИМЕЧАНИЕ 2 Мера прецизионности обычно выражается в пересчете на непрецизионность и вычисляется
как стандартное (среднеквадратическое) отклонение результатов испытаний или результатов измерений.
Меньшая прецизионность отображается бóльшим стандартным отклонением.
ПРИМЕЧАНИЕ 3 Количественные меры прецизионности критически зависят от предписанных условий.
Условия повторяемости и условия воспроизводимости являются конкретными наборами граничных
предписанных условий.
[1]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.4]
4 Показатели результативности количественных и качественных методов
обнаружения
4.1 Общие положения
Молекулярный метод обнаружения должен удовлетворять показателям результативности согласно
данному международному стандарту. Информация о показателях результативности молекулярного
метода обнаружения должна быть доступна. Сюда входит конкретная информация по
межлабораторным исследованиям и исследованиям, проведенным одной лабораторией, включая
соответствующие данные, полученные в процессе предварительного подтверждения метода
(например, варьирование параметров, реактивов).
© ISO 2011 – Все права сохраняются 3
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 22118:2011(R)
4.2 Область применения метода
Следует указать цель метода. Следует также представить информацию, касающуюся
предполагаемого применения и ограничений методов. В частности, провайдер метода должен указать,
что выполняют критерии, установленные данным международным стандартом.
4.3 Научная база
Следует обеспечить обзор принципов и ссылок на соответствующие научные публикации.
4.4 Селективность
4.4.1 Анализ инклюзивности
4.4.1.1 Общие положения
Следует предоставить эмпирические результаты проверки метода на целевом микроорганизме или
вирусах. Такая проверка должна включать все соответствующие варианты или типы микроорганизма
или вирусов в соответствии с областью применения метода (4.2).
4.4.1.2 Минимальные требования к специфичности
Варианты последовательностей целевого микроорганизма или вирусов следует обнаруживать с
помощью сопоставимой эффективности амплификации, даже если присутствуют различия в участках
связывания праймеров и/или зондов, как указано в области применения метода (4.2).
Если возможно, рекомендуется проанализировать 50 штаммов конкретного целевого микроорганизма
или вируса.
4.4.2 Анализ эксклюзивности
4.4.2.1 Общие положения
Следует обеспечить эмпирические результаты проверки метода нецелевыми микроорганизмами или
вирусами. Такая проверка должна включать как таксономически близкие, так и неблизкие
микроорганизмы или вирусы.
Метод должен четко различать целевые и нецелевые микроорганизмы или вирусы.
4.4.2.2 Тест-системы для обнаружения бактерий
Выбирают минимум 30 штаммов, которые могут привести к интерференции с целевым
микроорганизмом и пищевыми штаммами, естественно присутствующими в каждом анализируемом
пищевом материале. Примеры подходящих микроорганизмов приведены в Приложении A.
Следует также включить вирусы, если подходят, например, если существует родство
последовательностей олигонуклеотидов и последовательностей вирусных нуклеиновых кислот.
Не менее 90 % штаммов должны быть представлены бактериями. Остальные штаммы должны
принадлежать дрожжам, плесеням и вирусам.
6
Четко обнаруживаемое количество ДНК, например, представляющее ДНК 10 клеток, следует
использовать для проверки селективности. Пригодность ДНК, используемой для амплификации,
следует подтвердить, например, с помощью рибосомной основанной на ДНК согласованной ПЦР-
системы.
4 © ISO 2011 – Все права сохраняются
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 22118:2011(R)
4.4.2.3 Тест-системы для обнаружения грибков
Вы
...
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 22118
First edition
2011-07-15
Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Polymerase chain reaction
(PCR) for the detection and quantification
of food-borne pathogens — Performance
characteristics
Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne
(PCR) pour la détection et la quantification des micro-organismes
pathogènes dans les aliments — Caractéristiques de performance
Reference number
ISO 22118:2011(E)
©
ISO 2011
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 22118:2011(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2011
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or
ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2011 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 22118:2011(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 22118 was prepared by the European Committee for Standardization (CEN) Technical Committee
CEN/TC 275, Food analysis — Horizontal methods, in collaboration with Technical Committee ISO/TC 34,
Food products, Subcommittee SC 9, Microbiology, in accordance with the Agreement on technical
cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
© ISO 2011 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 22118:2011(E)
Introduction
Molecular detection methods have been developed during the last few decades, and are now available for the
majority of food-borne pathogens. Some of these methods have the potential for quantitative analysis.
Although until now most methods have been based on the polymerase chain reaction (PCR) and real-time
PCR, other molecular detection and quantification principles should be kept under consideration.
To compare molecular methods with conventional methods or with other principles, it is necessary to generate
minimum requirements for performance characteristics of the methods to be developed.
This International Standard is part of a series of documents under the general title Microbiology of food and
animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens:
ISO/TS 20836, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the
detection of food-borne pathogens — Performance testing for thermal cyclers
ISO 20837, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the
detection of food-borne pathogens — Requirements for sample preparation for qualitative detection
ISO 20838, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the
detection of food-borne pathogens — Requirements for amplification and detection for qualitative methods
ISO 22118, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the
detection and quantification of food-borne pathogens — Performance characteristics
ISO 22119, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Real-time polymerase chain reaction (PCR) for
the detection of food-borne pathogens — General requirements and definitions
ISO 22174, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the
detection of food-borne pathogens — General requirements and definitions
The following Technical Specification is in preparation:
ISO/TS 13136, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the detection of Shiga
toxin-producing Escherichia coli (STEC) belonging to O157, O111, O26, O103 and O145 serogroups —
Qualitative real-time polymerase chain reaction (PCR)-based method
iv © ISO 2011 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD ISO 22118:2011(E)
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase
chain reaction (PCR) for the detection and quantification of
food-borne pathogens — Performance characteristics
1 Scope
This International Standard specifies minimum requirements of performance characteristics for the detection
of nucleic acid sequences (DNA or RNA) by molecular methods. This International Standard applies to the
detection of food-borne pathogens in foodstuffs and isolates obtained from them using molecular detection
methods based on the polymerase chain reaction (PCR).
This International Standard is also applicable, for example, to the detection of food-borne pathogens in
environmental samples and in animal feeding stuffs.
NOTE Because of the rapid progress in this field, the examples given are those most frequently in use at the time of
development of this International Standard.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 16140:2003, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Protocol for the validation of alternative
methods
ISO 22174:2005, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the
detection of food-borne pathogens — General requirements and definitions
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
analyte
component detected or measured by the method of analysis
NOTE 1 The analyte can be a microorganism or virus, its components or products.
NOTE 2 Adapted from ISO 16140:2003, 3.4.
3.2
qualitative method
method of analysis whose response is either the presence or absence of the analyte detected either directly or
indirectly in a certain amount of sample
[ISO 16140:2003, 3.5.]
© ISO 2011 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 22118:2011(E)
3.3
quantitative method
method of analysis whose response is the amount of the analyte measured either directly or indirectly in a
certain amount of sample
NOTE Adapted from ISO 16140:2003, 3.6.
3.4
robustness testing
〈food microbiology〉 subjecting the proposed method to small procedural changes or environmental factors to
determine what influence, if any, they have on method performance
3.5
selectivity
〈food microbiology〉 measure of the inclusivity (detection of the target microorganism or virus) and exclusivity
(non-detection of non-target microorganisms or viruses)
3.6
sensitivity
〈food microbiology〉 measure of the lowest number of analyte cells, particles or molecules which can be
detected in a single reaction
3.7
specificity
capacity to exclusively recognize the target to be detected, distinguishing it from similar substances and
impurities
[ISO 22174:2005, 3.6.4]
3.8
trueness
closeness of agreement between the expectation of a test result or a measurement result and a true value
[1]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.3]
3.9
detection limit
limit of detection
LOD
lowest concentration or content of the target organism relative to the defined amount of matrix that can be
consistently detected under the experimental conditions specified in the method
NOTE Adapted from ISO 22174:2005, 3.1.8.
3.10
quantification limit
limit of quantification
LOQ
〈food microbiology〉 smallest amount of analyte (that is the lowest actual number of organisms), which can be
measured and quantified with defined trueness and precision under the experimental conditions by the
method under validation
NOTE Adapted from ISO 16140:2003, 6.2.2.2.3.
3.11
precision
closeness of agreement between independent test/measurement results obtained under stipulated conditions
2 © ISO 2011 – All rights reserved
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 22118:2011(E)
NOTE 1 Precision depends only on the distribution of random errors and does not relate to the true value or the
specified value.
NOTE 2 The measure of precision is usually expressed in terms of imprecision and computed as a standard deviation
of the test results or measurement results. Less precision is reflected by a larger standard deviation.
NOTE 3 Quantitative measures of precision depend critically on the stipulated conditions. Repeatability conditions and
reproducibility conditions are particular sets of extreme stipulated conditions.
[1]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.4]
4 Performance characteristics of qualitative and quantitative detection methods
4.1 General
A molecular detection method shall meet performance characteristics according to this International Standard.
Information about the performance characteristics of the molecular detection method shall be made available.
This includes specific information on the multi- or single-laboratory trial, including relevant information
obtained during pre-validation of the method (e.g. variation of parameters, reagents).
4.2 Scope of the method
The purpose of the method should be indicated. Information regarding the intended use and the limitations of
the methods shall be provided. In particular, the method provider shall indicate that the criteria set out in this
International Standard are fulfilled.
4.3 Scientific basis
An overview of the principles and references to relevant scientific publications should be provided.
4.4 Selectivity
4.4.1 Inclusivity test
4.4.1.1 General
Empirical results from testing the method with the target microorganism or viruses should be provided. This
testing should include all relevant variants or types of the microorganism or viruses according to the scope of
the method (4.2).
4.4.1.2 Minimum requirements for specificity
Sequence variants of the target microorganism or viruses should be detected with comparable amplification
efficiency, even if sequence differences in the primer and/or probe binding sites are present as indicated by
the scope of the method (4.2).
If available, 50 strains of the specific target microorganism or virus should be tested.
4.4.2 Exclusivity test
4.4.2.1 General
Empirical results from testing the method with non-target microorganisms or viruses should be provided. This
testing should include both taxonomically closely related and not closely related microorganisms or viruses.
The method should clearly distinguish between target and non-target microorganisms or viruses.
© ISO 2011 – All rights reserved 3
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 22118:2011(E)
4.4.2.2 Test systems for detecting bacteria
Select a minimum of 30 strains that may cause interference with the target microorganism and food strains
naturally present in each food test material. Examples of suitable organisms are listed in Annex A.
Viruses should be included if relevant, e.g. if there are sequence homologies of oligonucleotides to viral
nucleic acid sequences.
At least 90 % of the strains should be bacteria. The remainder of the strains should belong to yeasts, moulds
or viruses.
6
A clearly detectable amount of DNA, e.g. representing DNA of 10 cells, should be used for the selectivity
testing. The suitability of the DNA used for amplification should be confirmed, e.g. by a ribosomal DNA-based
consensus PCR system
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 22118
Première édition
2011-07-15
Microbiologie des aliments — Réaction
de polymérisation en chaîne (PCR) pour
la détection et la quantification des
micro-organismes pathogènes dans les
aliments — Caractéristiques de
performance
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain
reaction (PCR) for the detection and quantification of food-borne
pathogens — Performance characteristics
Numéro de référence
ISO 22118:2011(F)
©
ISO 2011
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 22118:2011(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2011
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
de l'ISO à l'adresse ci-après ou du comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2011 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 22118:2011(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 22118 a été élaborée par le comité technique CEN/TC 275, Analyse des produits alimentaires —
Méthodes horizontales, du Comité européen de normalisation (CEN) en collaboration avec le comité
technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9, Microbiologie, conformément à l'Accord de
coopération technique entre l'ISO et le CEN (Accord de Vienne).
© ISO 2011 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 22118:2011(F)
Introduction
Des méthodes de détection moléculaires ont été développées ces dernières décennies et sont désormais
disponibles pour la majeure partie des micro-organismes pathogènes présents dans les aliments. Certaines
de ces méthodes offrent des possibilités d'analyses quantitatives.
Bien que de nos jours la plupart des méthodes soient basées sur la réaction de polymérisation en chaîne
(PCR) et la PCR en temps réel, il convient de tenir compte d'autres principes de détection moléculaire et de
quantification.
Pour comparer les méthodes moléculaires avec des méthodes traditionnelles ou basées sur d'autres
principes, il est nécessaire d'établir des exigences minimales en termes de caractéristiques de performance
des méthodes à développer.
La présente Norme internationale fait partie d'une série de documents présentés sous le titre général
Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la détection de
micro-organismes pathogènes dans les aliments:
ISO/TS 20836, Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la recherche
de micro-organismes pathogènes dans les aliments — Essais de performance des thermocycleurs
ISO 20837, Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la détection des
micro-organismes pathogènes dans les aliments — Exigences relatives à la préparation des échantillons pour
la détection qualitative
ISO 20838, Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la détection des
micro-organismes pathogènes dans les aliments — Exigences relatives à l'amplification et à la détection pour
les méthodes qualitatives
ISO 22118, Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la détection et la
quantification des micro-organismes pathogènes dans les aliments — Caractéristiques de performance
ISO 22119, Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) en temps réel pour la
détection des micro-organismes pathogènes dans les aliments — Exigences générales et définitions
ISO 22174, Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la recherche de
micro-organismes pathogènes dans les aliments — Exigences générales et définitions
La Spécification technique suivante est en cours d'élaboration:
ISO/TS 13136, Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour la détection d'Escherichia coli
produisant des Shiga-toxines (STEC) appartenant aux séro-groupes O157, O111, O26, O103 et O145 —
Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) qualitative en temps réel
iv © ISO 2011 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 22118:2011(F)
Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en
chaîne (PCR) pour la détection et la quantification des micro-
organismes pathogènes dans les aliments — Caractéristiques
de performance
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie les exigences minimales relatives aux caractéristiques de
performance pour la détection de séquences d'acide nucléique (ADN ou ARN) par méthodes moléculaires. La
présente Norme internationale s'applique à la détection de micro-organismes pathogènes présents dans les
aliments et les extraits obtenus à partir de ces aliments en employant des méthodes de détection
moléculaires fondées sur la réaction de polymérisation en chaîne (PCR).
La présente Norme internationale peut également être utilisée, par exemple, pour la détection de micro-
organismes pathogènes d'origine alimentaire dans des prélèvements environnementaux ainsi que dans les
aliments pour animaux.
NOTE En raison de la rapidité des progrès dans ce domaine, les exemples fournis sont ceux les plus fréquemment
utilisés au moment de l'élaboration de la présente Norme internationale.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence (y compris les éventuels amendements) s'applique.
ISO 16140:2003, Microbiologie des aliments — Protocole pour la validation des méthodes alternatives
ISO 22174:2005, Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la
recherche de micro-organismes pathogènes dans les aliments — Exigences générales et définitions
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
analyte
composant détecté ou mesuré à l'aide de la méthode d'analyse
NOTE 1 L'analyte peut être un micro-organisme ou un virus, ses composants ou ses produits.
NOTE 2 Adapté de l'ISO 16140:2003, 3.4.
© ISO 2011 – Tous droits réservés 1
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 22118:2011(F)
3.2
méthode qualitative
méthode d'analyse dont la réponse est soit la présence soit l'absence de l'analyte détecté soit directement
soit indirectement dans une quantité d'échantillon donnée
[ISO 16140:2003, 3.5]
3.3
méthode quantitative
méthode d'analyse dont la réponse est la quantité de l'analyte mesurée soit directement soit indirectement
dans une quantité d'échantillon donnée
NOTE Adapté de l'ISO 16140:2003, 3.6.
3.4
essai de robustesse
〈microbiologie des aliments〉 soumission de la méthode proposée à de légères modifications du mode
opératoire ou à des facteurs environnementaux afin de déterminer leur éventuelle influence sur les
performances de la méthode
3.5
sélectivité
〈microbiologie des aliments〉 mesure de l'inclusivité (détection du micro-organisme ou virus cible) et de
l'exclusivité (non détection de micro-organismes ou virus non cibles)
3.6
sensibilité
〈microbiologie des aliments〉 mesure du plus faible nombre de cellules, particules ou molécules d'analyte
pouvant être détecté en une seule réaction
3.7
spécificité
aptitude à reconnaître exclusivement la cible à détecter en la distinguant de substances et impuretés
analogues
[ISO 22174:2005, 3.6.4]
3.8
justesse
étroitesse de l'accord entre l'espérance mathématique d'un résultat d'essai ou d'un résultat de mesure et une
valeur vraie
[1]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.3]
3.9
limite de détection
LDD
plus petite concentration ou teneur en organisme cible par rapport à la quantité définie de matrice pouvant
être immanquablement détectée dans les conditions expérimentales décrites par la méthode
NOTE Adapté de l'ISO 22174:2005, 3.1.8.
3.10
limite de quantification
LDQ
〈microbiologie des aliments〉 plus petite quantité d'analyte (c'est-à-dire le plus petit nombre réel d'organismes)
qui peut être mesurée et quantifiée avec une justesse et une fidélité définies, dans les conditions
expérimentales de la méthode en cours de validation
NOTE Adapté de l'ISO 16140:2003, 6.2.2.2.3.
2 © ISO 2011 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 22118:2011(F)
3.11
fidélité
étroitesse d'accord entre des résultats d'essai/de mesure indépendants obtenus sous des conditions stipulées
NOTE 1 La fidélité dépend uniquement de la distribution des erreurs aléatoires et n'a aucune relation avec la valeur
vraie ou la valeur spécifiée.
NOTE 2 La mesure de la fidélité est généralement exprimée en termes d'infidélité et est calculée à partir de l'écart-type
des résultats d'essai ou des résultats de mesure. Une fidélité faible est reflétée par un grand écart-type.
NOTE 3 Les mesures quantitatives de la fidélité dépendent de façon critique des conditions stipulées. Les conditions
de répétabilité et de reproductibilité sont des ensembles particuliers de conditions extrêmes stipulées.
[1]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.4]
4 Caractéristiques de performance des méthodes de détection qualitatives et
quantitatives
4.1 Généralités
Une méthode de détection moléculaire doit satisfaire à des caractéristiques de performance conformément à
la présente Norme internationale. Les informations relatives aux caractéristiques de performance de la
méthode de détection moléculaire doivent être disponibles. Elles comprennent des informations spécifiques
sur les essais dans un seul ou plusieurs laboratoires, y compris les informations pertinentes obtenues au
cours de la pré-validation de la méthode (par exemple variation des paramètres, des réactifs).
4.2 Domaine d'application de la méthode
Il convient d'indiquer l'objectif de la méthode. Les informations relatives à l'utilisation prévue et aux limites des
méthodes doivent être fournies. En particulier, le fournisseur de la méthode doit préciser que les critères
définis dans la présente Norme internationale sont satisfaits.
4.3 Base scientifique
Il convient de donner un aperçu des principes et de fournir des références à des publications scientifiques
pertinentes.
4.4 Sélectivité
4.4.1 Essai d'inclusivité
4.4.1.1 Généralités
Il convient de fournir les résultats empiriques obtenus à la suite d'essais de la méthode sur les micro-
organismes ou virus cibles. Il convient que ces essais incluent toutes les variantes ou types pertinents de
micro-organismes ou de virus conformément au domaine d'application de la méthode (4.2).
4.4.1.2 Exigences minimales de spécificité
Il convient de détecter les variantes des séquences des micro-organismes ou virus cibles avec une efficacité
d'amplification équivalente, même s'il existe des différences de séquences au niveau des sites d'hybridation
des amorces et/ou des sondes comme indiqué dans le domaine d'application de la méthode (4.2).
Si possible, il convient de tester 50 souches du micro-organisme ou virus cible spécifique.
© ISO 2011 – Tous droits réservés 3
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 22118:2011(F)
4.4.2 Essai d'exclusivité
4.4.2.1 Généralités
Il convient de fournir les résultats empiriques obtenus à la suite d'essais de la méthode avec des micro-
organismes ou virus non cibles. Il convient que ces essais incluent des micro-organismes ou virus aussi bien
proches qu'éloignés d'un point de vue taxonomique.
Il convient que la méthode fasse nettement la distinction entre les micro-organismes ou virus cibles et non
cibles.
4.4.2.2 Systèmes d'essai pour la détection des bactéries
Sélectionner au moins 30 souches pouvant provoquer des interférences avec le micro-organisme cible et les
souches alimentaires naturellement présentes dans chaque matériau d'essai alimentaire. Des exemples
d'organismes appropriés sont listés en Annexe A.
Il convient d'inclure des virus, le cas échéant, par exemple s'il existe des similitudes entre les séquences
d'oligonucléotides et les séquences d'acide nucléique viral.
Il convient que 90 % des souches au minimum soient composées de bactéries. Il convient que les souches
restantes soient des levures, des moisissures ou des virus.
Pour les essais de sélectivité, il convient d'utiliser une quantité facilement détectable d'ADN, représentant par
6
exemple l'ADN de 10 cellules. Il convient que l'aptitude de l'ADN utilisé pour l'amplification soit confirmée, par
exemple par un système de PCR consensus basé sur de l'ADN ribosomique.
4.4.2.3 Systèmes d'essai pour la détection des champigno
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.