ISO 9167:2019
(Main)Rapeseed and rapeseed meals — Determination of glucosinolates content — Method using high-performance liquid chromatography
Rapeseed and rapeseed meals — Determination of glucosinolates content — Method using high-performance liquid chromatography
This document specifies a method for the determination of the individual glucosinolates content in rapeseeds and rapeseed meals using high-performance liquid chromatography with gradient elution. This method was tested on rapeseeds and rapeseed meals (Brassica rapa, Brassica napus and Brassica juncea) but is applicable to other plant materials, on the condition that the occurring glucosinolates previously identified are described in this document. On the contrary, the quantitative analysis of the concerned glucosinolate(s) is not carried out. NOTE This method does not determine glucosinolates that are substituted on the glucose molecule, but these compounds are of little importance in commercial rapeseed and rapeseed meal. Annex A presents the results of the interlaboratory trials for the gradient elution HPLC method. Annex B presents how to check the titre of the prepared internal standard solution. Annex C presents how to prepare and test the purified sulfatase solution and how to check the desulphation step on the ion exchange column. Annex D presents the HPLC and column performance criteria qualification. The analysis of glucosinolates content in rapeseed can also be done using an isocratic elution mode. This requires some modifications of the method (internal, standard, HPLC column and HPLC buffers), as described in Annex E.
Graines et tourteaux de colza — Dosage des glucosinolates — Méthode par chromatographie liquide à haute performance
Le présent document spécifie une méthode de dosage des glucosinolates individuels dans les graines et tourteaux de colza par chromatographie en phase liquide à haute performance avec élution par gradient. Cette méthode a été soumise à essai sur les graines et tourteaux de colza (Brassica rapa, Brassica napus et Brassica juncea), mais elle est applicable à d'autres matériaux végétaux, à condition que les glucosinolates identifiés précédemment soient décrits dans le présent document. Sinon, l'analyse quantitative du ou des glucosinolates concernés n'est pas effectuée. NOTE Cette méthode ne dose pas les glucosinolates ayant des substituants sur la partie glucose, mais ces composés sont peu importants dans les graines et tourteaux de colza commercialisés. L'Annexe A présente les résultats des essais interlaboratoires pour la méthode de CLHP avec élution par gradient. L'Annexe B présente comment vérifier le titre de la solution préparée d'étalon interne. L'Annexe C présente comment préparer et analyser la solution purifiée de sulfatase et contrôler l'étape de désulfatation sur la colonne échangeuse d'ions. L'Annexe D présente la qualification du système de CLHP et des critères de performance de la colonne. Les glucosinolates des graines de colza peuvent également être dosés en utilisant un mode d'élution isocratique. Cela nécessite un certain nombre de modifications de la méthode (étalon interne, colonne de CLHP et solutions tampons pour CLHP), comme décrit dans l'Annexe E.
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Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 9167
First edition
2019-05
Rapeseed and rapeseed meals —
Determination of glucosinolates
content — Method using high-
performance liquid chromatography
Graines et tourteaux de colza — Dosage des glucosinolates —
Méthode par chromatographie liquide à haute performance
Reference number
©
ISO 2019
© ISO 2019
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address
below or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
Email: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2019 – All rights reserved
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Reagents . 2
6 Apparatus . 4
7 Sampling . 5
8 Preparation of the test sample . 6
9 Procedure. 6
9.1 Test portion . 6
9.2 Extraction of glucosinolates . 6
9.3 Blank test . 7
9.4 Preparation of ion-exchange columns . 7
9.5 Purification and desulfatation . 7
9.6 Chromatography with gradient elution . 7
9.6.1 General. 7
9.6.2 Adjustment of the apparatus . 8
10 Expression of results . 9
10.1 Calculation of the content of each glucosinolate . 9
10.2 Relative proportionality factors . 9
10.3 Calculation of the total glucosinolate content .10
11 Precision .10
11.1 Interlaboratory test.10
11.2 Repeatability .10
11.3 Reproducibility .10
12 Test report .11
Annex A (informative) Results of interlaboratory trials — Gradient elution HPLC method .12
Annex B (normative) Checking of the titre of the prepared internal standard solution.14
Annex C (normative) Preparation and test of purified sulfatase solution and checking of the
desulphation step on ion-exchange columns .15
Annex D (informative) HPLC system and column performance criteria qualification .20
Annex E (informative) Elution in the isocratic mode .22
Bibliography .28
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso
.org/iso/foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 2,
Oleaginous seeds and fruits and oilseed meals.
This first edition cancels and replaces ISO 9167-1:1992, which has been technically revised. It also
incorporates the amendment ISO 9167-1:1992/Amd.1:2013. The main changes are as follows:
— rapeseed meals have been added to the scope with the addition of a new collaborative trial;
[6]
— in 9.2, methanol 70 % has been replaced by ethanol 50 % for lower toxicity ;
— in 9.2, only one extraction is carried out instead of two;
— in 10.2 and E.5.1, the term “relative proportionality factor” has been used instead of “response
factor”;
— the isocratic mode has been added in Annex E.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/members .html.
iv © ISO 2019 – All rights reserved
Introduction
The glucosinolates in rapeseed can be analysed by chromatographic, enzymatic or spectroscopic
methods. This document describes a chromatographic method with two conditions (gradient and
isocratic) of elution for qualitative and quantitative analysis of individual glucosinolates in rapeseed
and rapeseed meals. The method with gradient elution is considered as the reference method whereas
the method with isocratic elution is considered as a simplified method and is presented in Annex E as
information.
This document specifies a method using high-performance liquid chromatography (HPLC) with
gradient elution as reference method. For the isocratic mode, the choice of the internal standard, the
chromatographic conditions and the separation results are different from the reference method. These
aspects are discussed in Annex E.
INTERNATIONAL STANDARD ISO 9167:2019(E)
Rapeseed and rapeseed meals — Determination of
glucosinolates content — Method using high-performance
liquid chromatography
1 Scope
This document specifies a method for the determination of the individual glucosinolates content in
rapeseeds and rapeseed meals using high-performance liquid chromatography with gradient elution.
This method was tested on rapeseeds and rapeseed meals (Brassica rapa, Brassica napus and Brassica
juncea) but is applicable to other plant materials, on the condition that the occurring glucosinolates
previously identified are described in this document. On the contrary, the quantitative analysis of the
concerned glucosinolate(s) is not carried out.
NOTE This method does not determine glucosinolates that are substituted on the glucose molecule, but
these compounds are of little importance in commercial rapeseed and rapeseed meal.
Annex A presents the results of the interlaboratory trials for the gradient elution HPLC method.
Annex B presents how to check the titre of the prepared internal standard solution. Annex C presents
how to prepare and test the purified sulfatase solution and how to check the desulphation step on the
ion exchange column. Annex D presents the HPLC and column performance criteria qualification.
The analysis of glucosinolates content in rapeseed can also be done using an isocratic elution mode.
This requires some modifications of the method (internal, standard, HPLC column and HPLC buffers),
as described in Annex E.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 664, Oilseeds — Reduction of laboratory sample to test sample
ISO 665, Oilseeds — Determination of moisture and volatile matter content
ISO 771, Oilseed residues — Determination of moisture and volatile matter content
ISO 3696, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods
ISO 5502, Oilseed residues — Preparation of test samples
3 Terms and definitions
No terms and definitions are listed in this document.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https: //www .iso .org/obp
— IEC Electropedia: available at http: //www .electropedia .org/
4 Principle
Extraction of glucosinolates by a water-ethanol mixture, then purification and enzymatic desulfatation
on ion-exchange columns. Determination using reverse phase liquid chromatography with gradient
elution (reference method) or isocratic elution (rapid method) and detection by ultraviolet
absorptiometry.
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless
...
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 9167
First edition
2019-05
Rapeseed and rapeseed meals —
Determination of glucosinolates
content — Method using high-
performance liquid chromatography
Graines et tourteaux de colza — Dosage des glucosinolates —
Méthode par chromatographie liquide à haute performance
Reference number
©
ISO 2019
© ISO 2019
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address
below or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
Email: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2019 – All rights reserved
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Reagents . 2
6 Apparatus . 4
7 Sampling . 5
8 Preparation of the test sample . 6
9 Procedure. 6
9.1 Test portion . 6
9.2 Extraction of glucosinolates . 6
9.3 Blank test . 7
9.4 Preparation of ion-exchange columns . 7
9.5 Purification and desulfatation . 7
9.6 Chromatography with gradient elution . 7
9.6.1 General. 7
9.6.2 Adjustment of the apparatus . 8
10 Expression of results . 9
10.1 Calculation of the content of each glucosinolate . 9
10.2 Relative proportionality factors . 9
10.3 Calculation of the total glucosinolate content .10
11 Precision .10
11.1 Interlaboratory test.10
11.2 Repeatability .10
11.3 Reproducibility .10
12 Test report .11
Annex A (informative) Results of interlaboratory trials — Gradient elution HPLC method .12
Annex B (normative) Checking of the titre of the prepared internal standard solution.14
Annex C (normative) Preparation and test of purified sulfatase solution and checking of the
desulphation step on ion-exchange columns .15
Annex D (informative) HPLC system and column performance criteria qualification .20
Annex E (informative) Elution in the isocratic mode .22
Bibliography .28
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso
.org/iso/foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 2,
Oleaginous seeds and fruits and oilseed meals.
This first edition cancels and replaces ISO 9167-1:1992, which has been technically revised. It also
incorporates the amendment ISO 9167-1:1992/Amd.1:2013. The main changes are as follows:
— rapeseed meals have been added to the scope with the addition of a new collaborative trial;
[6]
— in 9.2, methanol 70 % has been replaced by ethanol 50 % for lower toxicity ;
— in 9.2, only one extraction is carried out instead of two;
— in 10.2 and E.5.1, the term “relative proportionality factor” has been used instead of “response
factor”;
— the isocratic mode has been added in Annex E.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/members .html.
iv © ISO 2019 – All rights reserved
Introduction
The glucosinolates in rapeseed can be analysed by chromatographic, enzymatic or spectroscopic
methods. This document describes a chromatographic method with two conditions (gradient and
isocratic) of elution for qualitative and quantitative analysis of individual glucosinolates in rapeseed
and rapeseed meals. The method with gradient elution is considered as the reference method whereas
the method with isocratic elution is considered as a simplified method and is presented in Annex E as
information.
This document specifies a method using high-performance liquid chromatography (HPLC) with
gradient elution as reference method. For the isocratic mode, the choice of the internal standard, the
chromatographic conditions and the separation results are different from the reference method. These
aspects are discussed in Annex E.
INTERNATIONAL STANDARD ISO 9167:2019(E)
Rapeseed and rapeseed meals — Determination of
glucosinolates content — Method using high-performance
liquid chromatography
1 Scope
This document specifies a method for the determination of the individual glucosinolates content in
rapeseeds and rapeseed meals using high-performance liquid chromatography with gradient elution.
This method was tested on rapeseeds and rapeseed meals (Brassica rapa, Brassica napus and Brassica
juncea) but is applicable to other plant materials, on the condition that the occurring glucosinolates
previously identified are described in this document. On the contrary, the quantitative analysis of the
concerned glucosinolate(s) is not carried out.
NOTE This method does not determine glucosinolates that are substituted on the glucose molecule, but
these compounds are of little importance in commercial rapeseed and rapeseed meal.
Annex A presents the results of the interlaboratory trials for the gradient elution HPLC method.
Annex B presents how to check the titre of the prepared internal standard solution. Annex C presents
how to prepare and test the purified sulfatase solution and how to check the desulphation step on the
ion exchange column. Annex D presents the HPLC and column performance criteria qualification.
The analysis of glucosinolates content in rapeseed can also be done using an isocratic elution mode.
This requires some modifications of the method (internal, standard, HPLC column and HPLC buffers),
as described in Annex E.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 664, Oilseeds — Reduction of laboratory sample to test sample
ISO 665, Oilseeds — Determination of moisture and volatile matter content
ISO 771, Oilseed residues — Determination of moisture and volatile matter content
ISO 3696, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods
ISO 5502, Oilseed residues — Preparation of test samples
3 Terms and definitions
No terms and definitions are listed in this document.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https: //www .iso .org/obp
— IEC Electropedia: available at http: //www .electropedia .org/
4 Principle
Extraction of glucosinolates by a water-ethanol mixture, then purification and enzymatic desulfatation
on ion-exchange columns. Determination using reverse phase liquid chromatography with gradient
elution (reference method) or isocratic elution (rapid method) and detection by ultraviolet
absorptiometry.
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 9167
Première édition
2019-05
Graines et tourteaux de colza —
Dosage des glucosinolates — Méthode
par chromatographie liquide à haute
performance
Rapeseed and rapeseed meals — Determination of glucosinolates
content — Method using high-performance liquid chromatography
Numéro de référence
©
ISO 2019
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2019
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2019 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Réactifs . 2
6 Appareillage . 4
7 Échantillonnage . 5
8 Préparation de l’échantillon pour essai . 6
9 Mode opératoire. 6
9.1 Prise d’essai . 6
9.2 Extraction des glucosinolates . 6
9.3 Essai à blanc . 7
9.4 Préparation des colonnes échangeuses d’ions . 7
9.5 Purification et désulfatation . 7
9.6 Chromatographie avec élution par gradient . 8
9.6.1 Généralités . 8
9.6.2 Réglage de l’appareil . . 8
10 Expression des résultats. 9
10.1 Calcul de la teneur de chaque glucosinolate . 9
10.2 Facteurs de proportionnalité relatifs .10
10.3 Calcul de la teneur totale en glucosinolate .10
11 Fidélité .10
11.1 Essai interlaboratoires .10
11.2 Répétabilité .11
11.3 Reproductibilité .11
12 Rapport d’essai .11
Annexe A (informative) Résultats des essais interlaboratoires — Méthode de CLHP avec
élution par gradient .12
Annexe B (normative) Vérification du titre de la solution préparée d’étalon interne .14
Annexe C (normative) Préparation et analyse d’une solution purifiée de sulfatase et
contrôle de l’étape de désulfatation sur colonnes échangeuses d’ions .15
Annexe D (informative) Qualification du système de CLHP et des critères de performance
de la colonne .20
Annexe E (informative) Élution en mode isocratique .22
Bibliographie .29
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.
L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/directives).
L'attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l'élaboration du document sont indiqués dans l'Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l'ISO (voir www .iso .org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion
de l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 2, Graines et fruits oléagineux et farines de graines oléagineuses.
Cette première édition annule et remplace l’ISO 9167-1:1992, qui a fait l’objet d’une révision technique.
Elle incorpore également l’amendement ISO 9167-1:1992/Amd.1:2013. Les principales modifications
sont les suivantes:
— les tourteaux de colza ont été ajoutés au domaine d’application, avec l’ajout d’un nouvel essai
interlaboratoires;
[6]
— en 9.2, le méthanol à 70 % a été remplacé par l’éthanol à 50 % pour une toxicité moindre ;
— en 9.2, une seule extraction est réalisée au lieu de deux;
— en 10.2 et E.5.1, le terme «facteur de proportionnalité relatif» a été utilisé au lieu de «facteur de
réponse»;
— le mode isocratique a été ajouté dans l’Annexe E.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.
iv © ISO 2019 – Tous droits réservés
Introduction
Les glucosinolates dans les graines de colza peuvent être analysés au moyen de méthodes
chromatographiques, enzymatiques ou spectroscopiques. Le présent document décrit une méthode
chromatographique avec deux conditions (par gradient et isocratique) d’élution pour l’analyse
qualitative et quantitative des glucosinolates individuels dans les graines et tourteaux de colza. La
méthode avec élution par gradient est considérée comme la méthode de référence, tandis que la
méthode avec élution isocratique est considérée comme une méthode simplifiée et est présentée dans
l’Annexe E pour information.
Le présent document spécifié une méthode par chromatographie liquide à haute performance (CLHP)
avec élution par gradient comme méthode de référence. Pour le mode isocratique, le choix de l’étalon
interne, les conditions chromatographiques et les résultats de séparation sont différents de la méthode
de référence. Ces aspects sont discutés dans l’Annexe E.
NORME INTERNATIONALE ISO 9167:2019(F)
Graines et tourteaux de colza — Dosage des glucosinolates
— Méthode par chromatographie liquide à haute
performance
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de dosage des glucosinolates individuels dans les graines
et tourteaux de colza par chromatographie en phase liquide à haute performance avec élution par
gradient.
Cette méthode a été soumise à essai sur les graines et tourteaux de colza (Brassica rapa, Brassica
napus et Brassica juncea), mais elle est applicable à d’autres matériaux végétaux, à condition que les
glucosinolates identifiés précédemment soient décrits dans le présent document. Sinon, l’analyse
quantitative du ou des glucosinolates concernés n’est pas effectuée.
NOTE Cette méthode ne dose pas les glucosinolates ayant des substituants sur la partie glucose, mais ces
composés sont peu importants dans les graines et tourteaux de colza commercialisés.
L’Annexe A présente les résultats des essais interlaboratoires pour la méthode de CLHP avec élution
par gradient. L’Annexe B présente comment vérifier le titre de la solution préparée d’étalon interne.
L’Annexe C présente comment préparer et analyser la solution purifiée de sulfatase et contrôler l’étape
de désulfatation sur la colonne échangeuse d’ions. L’Annexe D présente la qualification du système de
CLHP et des critères de performance de la colonne.
Les glucosinolates des graines de colza peuvent également être dosés en utilisant un mode d’élution
isocratique. Cela nécessite un certain nombre de modifications de la méthode (étalon interne, colonne
de CLHP et solutions tampons pour CLHP), comme décrit dans l’Annexe E.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 664, Graines o
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 9167
Première édition
2019-05
Graines et tourteaux de colza —
Dosage des glucosinolates — Méthode
par chromatographie liquide à haute
performance
Rapeseed and rapeseed meals — Determination of glucosinolates
content — Method using high-performance liquid chromatography
Numéro de référence
©
ISO 2019
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2019
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
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Fax: +41 22 749 09 47
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Réactifs . 2
6 Appareillage . 4
7 Échantillonnage . 5
8 Préparation de l’échantillon pour essai . 6
9 Mode opératoire. 6
9.1 Prise d’essai . 6
9.2 Extraction des glucosinolates . 6
9.3 Essai à blanc . 7
9.4 Préparation des colonnes échangeuses d’ions . 7
9.5 Purification et désulfatation . 7
9.6 Chromatographie avec élution par gradient . 8
9.6.1 Généralités . 8
9.6.2 Réglage de l’appareil . . 8
10 Expression des résultats. 9
10.1 Calcul de la teneur de chaque glucosinolate . 9
10.2 Facteurs de proportionnalité relatifs .10
10.3 Calcul de la teneur totale en glucosinolate .10
11 Fidélité .10
11.1 Essai interlaboratoires .10
11.2 Répétabilité .11
11.3 Reproductibilité .11
12 Rapport d’essai .11
Annexe A (informative) Résultats des essais interlaboratoires — Méthode de CLHP avec
élution par gradient .12
Annexe B (normative) Vérification du titre de la solution préparée d’étalon interne .14
Annexe C (normative) Préparation et analyse d’une solution purifiée de sulfatase et
contrôle de l’étape de désulfatation sur colonnes échangeuses d’ions .15
Annexe D (informative) Qualification du système de CLHP et des critères de performance
de la colonne .20
Annexe E (informative) Élution en mode isocratique .22
Bibliographie .29
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.
L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/directives).
L'attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l'élaboration du document sont indiqués dans l'Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l'ISO (voir www .iso .org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion
de l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 2, Graines et fruits oléagineux et farines de graines oléagineuses.
Cette première édition annule et remplace l’ISO 9167-1:1992, qui a fait l’objet d’une révision technique.
Elle incorpore également l’amendement ISO 9167-1:1992/Amd.1:2013. Les principales modifications
sont les suivantes:
— les tourteaux de colza ont été ajoutés au domaine d’application, avec l’ajout d’un nouvel essai
interlaboratoires;
[6]
— en 9.2, le méthanol à 70 % a été remplacé par l’éthanol à 50 % pour une toxicité moindre ;
— en 9.2, une seule extraction est réalisée au lieu de deux;
— en 10.2 et E.5.1, le terme «facteur de proportionnalité relatif» a été utilisé au lieu de «facteur de
réponse»;
— le mode isocratique a été ajouté dans l’Annexe E.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.
iv © ISO 2019 – Tous droits réservés
Introduction
Les glucosinolates dans les graines de colza peuvent être analysés au moyen de méthodes
chromatographiques, enzymatiques ou spectroscopiques. Le présent document décrit une méthode
chromatographique avec deux conditions (par gradient et isocratique) d’élution pour l’analyse
qualitative et quantitative des glucosinolates individuels dans les graines et tourteaux de colza. La
méthode avec élution par gradient est considérée comme la méthode de référence, tandis que la
méthode avec élution isocratique est considérée comme une méthode simplifiée et est présentée dans
l’Annexe E pour information.
Le présent document spécifié une méthode par chromatographie liquide à haute performance (CLHP)
avec élution par gradient comme méthode de référence. Pour le mode isocratique, le choix de l’étalon
interne, les conditions chromatographiques et les résultats de séparation sont différents de la méthode
de référence. Ces aspects sont discutés dans l’Annexe E.
NORME INTERNATIONALE ISO 9167:2019(F)
Graines et tourteaux de colza — Dosage des glucosinolates
— Méthode par chromatographie liquide à haute
performance
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de dosage des glucosinolates individuels dans les graines
et tourteaux de colza par chromatographie en phase liquide à haute performance avec élution par
gradient.
Cette méthode a été soumise à essai sur les graines et tourteaux de colza (Brassica rapa, Brassica
napus et Brassica juncea), mais elle est applicable à d’autres matériaux végétaux, à condition que les
glucosinolates identifiés précédemment soient décrits dans le présent document. Sinon, l’analyse
quantitative du ou des glucosinolates concernés n’est pas effectuée.
NOTE Cette méthode ne dose pas les glucosinolates ayant des substituants sur la partie glucose, mais ces
composés sont peu importants dans les graines et tourteaux de colza commercialisés.
L’Annexe A présente les résultats des essais interlaboratoires pour la méthode de CLHP avec élution
par gradient. L’Annexe B présente comment vérifier le titre de la solution préparée d’étalon interne.
L’Annexe C présente comment préparer et analyser la solution purifiée de sulfatase et contrôler l’étape
de désulfatation sur la colonne échangeuse d’ions. L’Annexe D présente la qualification du système de
CLHP et des critères de performance de la colonne.
Les glucosinolates des graines de colza peuvent également être dosés en utilisant un mode d’élution
isocratique. Cela nécessite un certain nombre de modifications de la méthode (étalon interne, colonne
de CLHP et solutions tampons pour CLHP), comme décrit dans l’Annexe E.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 664, Graines o
...
Questions, Comments and Discussion
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