ISO 16472:2006
(Main)Animal feeding stuffs — Determination of amylase-treated neutral detergent fibre content (aNDF)
Animal feeding stuffs — Determination of amylase-treated neutral detergent fibre content (aNDF)
ISO 16472:2006 specifies methods for the determination of amylase-treated neutral detergent insoluble fibrous residue content in all types of animal feed. It includes a gravimetric routine method and a reference method.
Aliments des animaux — Détermination du contenu en fibre par traitement à l'amylase et au détergent neutre (aNDF)
L'ISO 16472:2006 décrit une méthode de détermination du contenu en fibres résiduelles, insolubles, traitées à l'amylase et au détergent neutre, dans tous les types d'aliments pour animaux. Elle inclut une méthode par gravimétrie courante et une méthode de référence.
General Information
Relations
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 16472
First edition
2006-04-15
Animal feeding stuffs — Determination of
amylase-treated neutral detergent fibre
content (aNDF)
Aliments des animaux — Détermination du contenu en fibre détergente
neutre traitée à l'amylase
Reference number
©
ISO 2006
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Contents Page
Foreword. iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions. 1
4 Principle. 1
5 Reagents. 2
6 Apparatus . 2
7 Sampling. 3
8 Preparation of test sample. 3
9 Procedure . 4
9.1 Procedure for traditional method as described in Reference [1] . 4
9.2 Determination using Fibertec-type apparatus . 5
9.3 Modifications for specific types of samples . 7
9.4 Quality assurance. 8
10 Calculation and expression of results. 8
10.1 Calculation. 8
10.2 Expression of results . 9
11 Precision. 9
11.1 Interlaboratory test . 9
11.2 Repeatability. 9
11.3 Reproducibility. 10
12 Test report . 10
Annex A (informative) Results of interlaboratory test. 11
Annex B (informative) Standardization of heat-stable alpha-amylase working solution. 14
Bibliography . 16
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 16472 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 10, Animal
feeding stuffs.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 16472:2006(E)
Animal feeding stuffs — Determination of amylase-treated
neutral detergent fibre content (aNDF)
WARNING — The use of this International Standard may involve the use of hazardous materials,
operations and equipment. This International Standard does not purport to address all the safety risks
associated with its use. It is the responsibility of the user of this International Standard to establish
appropriate safety and health practices and determine the applicability of local regulatory limitations
prior to use.
1 Scope
This International Standard specifies methods for the determination of amylase-treated neutral detergent
insoluble fibrous residue content in all types of animal feed.
It includes a gravimetric routine method and a reference method.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 6498, Animal feeding stuffs — Preparation of test samples
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
amylase-treated neutral detergent fibre content
aNDF content
mass fraction of insoluble fibre residues determined by the procedure specified in this International Standard
NOTE The aNDF content is expressed as a percentage by mass.
4 Principle
Neutral detergent (ND) solution and heat-stable alpha-amylase are used to dissolve the easily digestible
proteins, lipids, sugars, starches and pectins in feeds, leaving an insoluble fibrous residue that is primarily cell
wall components of plant materials (cellulose, hemicellulose and lignin) and indigestible nitrogenous matter in
animal products.
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or demineralized
water or water of equivalent purity.
5.1 Sodium sulfite, anhydrous (Na SO ).
2 3
5.2 Dried hominy corn (corn grits, raw), ground to pass through a 1 mm screen in a cutter mill.
5.3 Iodine solution, containing 2 g of potassium iodide and 1 g of iodine in 100 ml of water.
Store the solution in an amber or opaque bottle.
5.4 Heat-stable alpha-amylase, as a solution or a water extract of lyophilised enzyme powder (approx. 1 g
of powder extracted in 100 ml of water).
EXAMPLE Termamyl 120 l from Novo Enzymes or equivalent.
Standardize the heat-stable alpha-amylase solution or enzyme powder extract so that two additions of 2 ml
will remove starch from 0,5 g of raw corn starch (5.2). For a detailed procedure on standardizing heat-stable
alpha-amylase solution, see Annex B.
5.5 Neutral-detergent (ND) solution
Pour between 400 ml and 500 ml of water into a 1 l flask. Add 4,0 g of sodium hydroxide (NaOH) 14,6 g of
EDTA, 4,56 g of sodium hydrogen phosphate (Na HPO ), and 6,81 g of sodium borate decahydrate
2 4
⋅
(Na B O 10 H O) and mix until dissolved (heat if necessary). The NaOH and EDTA may be replaced with
2 4 7 2
18,6 g of disodium EDTA.
Under a safety hood, add 30 g of sodium lauryl sulfate and, after dissolution, add 10 ml of triethylene glycol
(anti-foaming aid). Add water to about 950 ml and mix. Adjust the pH to between 6,95 and 7,05 with
concentrated hydrochloric acid (HCl) or sodium hydroxide (NaOH) and dilute to 1 000 ml with water. If the pH
is off the range by more than 0,5, discard the solution.
Store the ND solution at room temperature. If precipitation occurs, warm the solution to 25 °C and mix before
use. Record the date the ND solution was prepared, the pH measurements and any adjustments in a reagent
log book.
6 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
6.1 Analytical balance, capable of weighing to the nearest 0,1 mg, with a readability of 0,1 mg.
6.2 Cyclone mill with 2 mm screen, or cutter mill with 1 mm screen, capable of grinding samples to obtain
a geometric mean particle size of 220 µm to 260 µm
6.3 Refluxing apparatus, with individual heating units and cold water condensers that fit 600 ml flasks.
Any conventional apparatus suitable for crude fibre determinations is acceptable. Calibrate the heating unit
settings so that 50 ml of water boils within 4 min to 5 min when using cold water condensers. A Fibertec type
apparatus may be used and should boil 50 ml of water within 10 min.
6.4 Fritted-disc Gooch crucibles, coarse porosity (pore size 40 µm to 60 µm) crucibles, high-form, 40 ml
to 50 ml capacity, or P2 (pore size 40 µm to 100 µm), 26 ml to 28 ml capacity.
2 © ISO 2006 – All rights reserved
Clean new crucibles and ash at 500 °C for 1 h. Clean crucibles after each use by ashing at 500 °C for 3 h,
removing ash, inverting in a detergent solution and sonicating for 7 min to 10 min. Rinse crucibles in hot water,
and soak in water at room temperature for at least 30 min. Fit the top of each crucible with a rubber stopper
fitted with a port that is connected to a trap and vacuum line. Back-flush each crucible with water, by
repeatedly plunging and removing the bottom of the crucible into water to create a vigorous rinsing action.
Occasionally check the filtration rate as follows. Fill each crucible with 50 ml of distilled water (25 ml for
Fibertec P2 crucibles) and record the time required to drain completely without vacuum (should be
180 s ± 60 s for Gooch or 75 s ± 30 s for P2). If the drain time is < 100 s (or < 30 s for P2), discard the crucible.
If it is < 120 s (or < 45 s for P2), check for cracks in the fritted disc. If the filtration takes > 240 s (or > 105 s for
P2), clean the crucible with acid or alkaline cleaning solution (see Reference [1]). If cleaning does not improve
the filtration rate, discard the crucible.
Instead of P2 crucibles, stainless-steel metal crucibles with a 90 µm aperture stainless-steel metal sieve may
also be used.
6.5 Vacuum filter manifold (e.g. Fibertec type), that allows adequate soaking of fibrous residues.
The manifold should provide a vacuum-tight seal with the crucible to reduce foam formation in vacuum lines.
Use thick-walled vacuum tubing to connect the manifold to a trap (4 l to 18 l) and vacuum source. A vacuum
reservoir (18 l) between the trap and vacuum source is recommended to ensure adequate vacuum capacity to
remove the foam.
6.6 Boiling water supply
Use a continuous boiling water generator as described in Reference [1] or a suitable alternative. The
apparatus shall be capable of supplying boiling water (> 95 °C) in a quantity sufficient for all samples being
washed at one time, through a nozzle producing a fine stream (flow rate of 35 ml to 40 ml per 10 s; a 2,5 ml
disposable plastic pipette tip makes an acceptable nozzle). A fine nozzle minimizes the water needed to
transfer particles to the crucible, but provides the water pressure needed to remove residues attached to the
side of the flask. It is critical that water is boiling when added to the crucibles, especially for samples
containing starches, pectic substances, mucilages or glyco-proteins. For Fibertec type apparatus, use a
syringe with a cone-spray nozzle to rinse the condensers and a 60 ml disposable syringe with 12 gauge
needle that is 10 cm in length to dislodge any residues adhering to the condensers.
7 Sampling
Sampling is not part of the method specified in this International S
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 16472
Première édition
2006-04-15
Aliments des animaux — Détermination
du contenu en fibre par traitement à
l'amylase et au détergent neutre (aNDF)
Animal feeding stuffs — Determination of amylase-treated neutral
detergent fibre content (aNDF)
Numéro de référence
©
ISO 2006
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Publié en Suisse
ii © ISO 2006 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos. iv
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions. 1
4 Principe. 1
5 Réactifs . 2
6 Appareillage . 2
7 Échantillonnage . 3
8 Préparation de l'échantillon pour essai. 4
9 Mode opératoire . 4
9.1 Mode opératoire relatif à la méthode courante décrite dans la Référence [1] . 4
9.2 Détermination avec un appareillage de type Fibertec . 6
9.3 Modification applicables pour certains types d'échantillons . 7
9.4 Assurance qualité. 8
10 Calculs et expression des résultats. 9
10.1 Calculs . 9
10.2 Expression des résultats . 10
11 Fidélité . 10
11.1 Essai interlaboratoires . 10
11.2 Répétabilité. 10
11.3 Reproductibilité. 11
12 Rapport d'essai . 11
Annexe A (informative) Résultats d'essai interlaboratoires . 12
Annexe B (informative) Étalonnage de la solution de travail d'alpha-amylase thermostable. 15
Bibliographie . 17
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 16472 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 10,
Aliments des animaux.
iv © ISO 2006 – Tous droits réservés
NORME INTERNATIONALE ISO 16472:2006(F)
Aliments des animaux — Détermination du contenu en fibre par
traitement à l'amylase et au détergent neutre (aNDF)
AVERTISSEMENT — L'utilisation de la présente Norme internationale peut impliquer l'utilisation de
substances, de manipulations ou d'appareils dangereux. La présente Norme internationale n'a pas
pour objectif de traiter tous les risques associés à la sécurité de son utilisation. L'utilisateur du
présent document est responsable de définir les consignes de sécurité à observer et de déterminer
les réglementations à appliquer avant toute utilisation.
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode de détermination du contenu en fibres résiduelles,
insolubles, traitées à l'amylase et au détergent neutre, dans tous les types d'aliments pour animaux.
Elle inclut une méthode par gravimétrie courante et une méthode de référence.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 6498, Aliments des animaux — Préparation des échantillons pour essai
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
contenu en fibres traitées à l'amylase et au détergent neutre
contenu en aNDF
fraction massique de fractions fibreuses insolubles, déterminée selon le mode opératoire décrit dans la
présente Norme internationale
NOTE Le contenu en aNDF est exprimé en pourcentage en masse.
4 Principe
Une solution de détergent neutre (ND) et une alpha-amylase thermostable sont utilisées pour dissoudre les
pectines, les amidons, les sucres, les lipides et les protéines faciles à digérer dans les aliments, laissant une
fibre résiduelle insoluble; il s'agit principalement de composants de la paroi cellulaire des végétaux (cellulose,
hémicellulose et lignine) d'une part et, d'autre part, de matière azotée indigeste dans les produits pour
animaux.
5 Réactifs
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue ainsi que de l'eau
distillée ou déminéralisée, ou bien de pureté équivalente.
5.1 Sulfite de sodium, anhydre (Na SO ).
2 3
5.2 Semoule de maïs sec (gruaux de maïs, maïs cru), réduit en poudre dans un broyeur à dents pour
passer au travers d'un tamis de 1 mm d'ouverture de maille.
5.3 Solution d'iode, contenant 2 g d'iodure de potassium et 1 g d'iode dans 100 ml d'eau.
Conserver dans un flacon ambré ou opaque.
5.4 Alpha-amylase thermostable, en solution ou en extrait aqueux de poudre d'enzyme lyophilisée
(environ 1 g d'extrait de poudre pour 100 ml d'eau).
EXEMPLE Enzymes Termamyl 120 l de Novo ou équivalent.
Étalonner la solution d'alpha-amylase thermostable ou l'extrait de poudre d'enzyme de sorte que deux ajouts
de 2 ml éliminent l'amidon contenu dans 0,5 g d'amidon de maïs cru (5.2). Pour plus d'informations sur le
mode opératoire relatif à l'étalonnage d'une solution d'alpha-amylase thermostable, voir l'Annexe B.
5.5 Solution de détergent neutre (ND)
Verser entre 400 ml et 500 ml d'eau dans une fiole de 1 l. Ajouter 4,0 g d'hydroxyde de sodium (NaOH),
14,6 g d'EDTA, 4,56 g d'hydrogénophosphate de sodium (Na HPO ) et 6,81 g de borate de sodium
2 4
décahydraté (Na B O ,10 H O), puis mélanger jusqu'à dissolution (chauffer si nécessaire). L'hydroxyde de
2 4 7 2
sodium et l'EDTA peuvent être remplacés par 18,6 g d'EDTA disodique.
Sous une hotte, ajouter 30 g de lauryl sulfate de sodium, puis, après dissolution, ajouter 10 ml de triéthylène
glycol (agent antimousse). Ajouter de l'eau jusqu'à 950 ml environ puis mélanger. Ajuster le pH entre 6,95 et
7,05 à l'aide d'acide chlorhydrique (HCl) concentré ou d'hydroxyde de sodium (NaOH), puis diluer avec de
l'eau jusqu'à 1 000 ml. Si le pH s'écarte de ces valeurs de plus de 0,5, mettre la solution au rebut.
Conserver la solution de ND à température ambiante. En cas de précipitation, chauffer à 25 °C puis mélanger
avant usage. Noter dans un journal des réactifs la date à laquelle la solution de ND a été préparée, ainsi que
les mesurages de pH et les ajustements effectués.
6 Appareillage
Appareillage courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Balance analytique, d'une précision de l'ordre de 0,1 mg pour le pesage et la lecture.
6.2 Broyeur cyclonique muni d'un tamis de 2 mm d'ouverture de maille, ou broyeur à dents muni d'un
tamis de 1 mm d'ouverture de maille, pour broyer les échantillons jusqu'à l'obtention de particules
géométriques dont la taille moyenne est comprise entre 200 µm et 260 µm.
6.3 Appareillage de reflux, muni de dispositifs de chauffage individuels et de réfrigérants d'eau froide
conçus pour des béchers de 600 ml.
Tout appareillage conventionnel adapté à la détermination de fibres brutes peut être accepté. Étalonner les
réglages des dispositifs de chauffage de sorte que 50 ml d'eau soient portés à ébullition en 4 min à 5 min lors
de l'utilisation des réfrigérants d'eau froide. Il est possible d'utiliser un appareillage de type Fibertec pouvant
bouillir 50 ml d'eau en 10 min.
2 © ISO 2006 – Tous droits réservés
6.4 Creusets de Gooch munis d'un disque en verre fritté, creusets de porosité grossière (de 40 µm à
60 µm), forme haute, de 40 ml à 50 ml de capacité ou de type P2 (porosité de 40 µm à 100 µm) de 26 ml à
28 ml de capacité.
Nettoyer les nouveaux creusets et incinérer à 500 °C pendant 1 h. Pour nettoyer les creusets après chaque
utilisation, incinérer à 500 °C pendant 3 h, retirer les cendres, plonger dans une solution détergente, puis
traiter aux ultrasons pendant 7 min à 10 min. Rincer les creusets dans l'eau chaude et immerger dans de l'eau
à température ambiante pendant au moins 30 min. Fermer chaque creuset avec un bouchon en caoutchouc
muni d'un port raccordé à un piège et à une pompe à vide. Rétrobalayer chaque creuset avec de l'eau en
plongeant et en retirant de manière répétée la partie inférieure du creuset dans l'eau. Cette technique permet
d'intensifier le rinçage.
Occasionnellement, vérifier le taux de filtration de la manière suivante. Remplir chaque creuset avec 50 ml
d'eau distillée (25 ml pour les creusets Fibertec de type P2) et relever le temps nécessaire pour évacuer l'eau
entièrement, sans système de vide (normalement 180 s ± 60 s pour les creusets de Gooch et 75 s ± 30 s pour
ceux de type P2). Si le temps d'évacuation est < 100 s (ou < 35 s pour les creusets de type P2), mettre le
creuset au rebut. S'il est < 120 s (ou < 45 s pour les creusets de type P2), vérifier la présence éventuelle de
fissures dans le verre fritté. Si le temps de filtration est > 240 s (ou > 105 s pour les creusets de type P2),
nettoyer le creuset avec un solution de nettoyage acide ou alcaline. Si le nettoyage n'améliore pas le taux de
filtration, mettre le creuset au rebut.
Les creusets de type P2 peuvent
...
Questions, Comments and Discussion
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