ISO/TS 21569-4:2016

Horizontal methods for molecular biomarker analysis — Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products — Part 4: Real-time PCR based screening methods for the detection of the P-nos and P-nos-nptII DNA sequences

ISO/TS 21569-4:2016 specifies a procedure for the detection of a DNA sequence of the promoter region of the nopaline synthase gene (P-nos) from Agrobacterium tumefaciens and a procedure for the detection of the DNA transition sequence between P-nos and the neomycin-phosphotransferase gene (nptII) from the Tn5 transposon of Escherichia coli K12. The nos-promoter and the P-nos-nptII-construct are frequently found in genetically modified plants. The P-nos and P-nos-nptII specific methods are based on real-time PCR and can be used for qualitative screening purposes. For identification and quantification of a specific genetically modified plant (event) a follow-up analysis has to be carried out. The methods described are applicable for the analysis of DNA extracted from foodstuffs. They may also be suitable for the analysis of DNA extracted from other products such as feedstuffs and seeds. The application of these methods requires the extraction of an adequate amount of amplifiable DNA from the relevant matrix. The DNA sequence amplified by the P-nos element-specific method can be detected in samples which contain DNA of the naturally occurring Ti-plasmid of A. tumefaciens. For this reason, it is necessary to confirm a positive screening result. Further analyses are required using construct-specific or event specific methods.

Méthodes horizontales d'analyse moléculaire de biomarqueurs — Méthodes d'analyse pour la détection des organismes génétiquement modifiés et des produits dérivés — Partie 4: Méthodes de criblage par PCR en temps réel pour la détection des séquences ADN P-nos et P-nos-nptII

L'ISO/TS 21569-4:2016 spécifie un mode opératoire permettant la détection d'une séquence d'ADN de la région du promoteur du gène codant la nopaline synthase (P-nos) d'Agrobacterium tumefaciens et un mode opératoire permettant la détection de la séquence d'ADN de transition entre le P-nos et le gène de la néomycine phosphotransférase (nptII) du transposon Tn5 d'Escherichia coli K12. Le promoteur nos et le construit P-nos-nptII sont fréquemment observés dans les plantes génétiquement modifiées. Les méthodes spécifiques de P-nos et P-nos-nptII sont basées sur une méthode par PCR en temps réel et peuvent être utilisées à des fins de criblage qualitatif. Pour l'identification et la quantification d'une plante génétiquement modifiée (événement) spécifique, une analyse complémentaire doit être effectuée. Les méthodes décrites sont applicables à l'analyse de l'ADN extrait de produits alimentaires. Elles peuvent être également utilisées pour analyser l'ADN extrait d'autres produits tels que des aliments pour animaux et des semences. L'application de ces méthodes exige qu'une quantité adéquate d'ADN amplifiable soit extraite de la matrice étudiée. La séquence d'ADN amplifiée par la méthode spécifique à l'élément P-nos peut être détectée dans des échantillons contenant l'ADN du plasmide Ti d'A. tumefaciens présent dans la nature. Pour cette raison, il est nécessaire de confirmer un résultat positif de criblage. D'autres analyses sont nécessaires au moyen de méthodes spécifiques aux construits ou spécifiques aux événements.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 01-Nov-2016
• ICS: 67.050 - General methods of tests and analysis for food products
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 16 - Horizontal methods for molecular biomarker analysis
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 16 - Horizontal methods for molecular biomarker analysis
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 18-Jul-2023

Standards Content (Sample)

TECHNICAL ISO/TS
SPECIFICATION 21569-4
First edition
2016-11-01
Horizontal methods for molecular
biomarker analysis — Methods
of analysis for the detection of
genetically modified organisms and
derived products —
Part 4:
Real-time PCR based screening
methods for the detection of the P-nos
and P-nos-nptII DNA sequences
Méthodes horizontales d’analyse moléculaire de biomarqueurs —
Méthodes d’analyse pour la détection des organismes génétiquement
modifiés et des produits dérivés —
Partie 4: Méthodes de dépistage PCR en temps réel pour la détection
des séquences ADN P-nos et P-nos-nptII
Reference number
ISO/TS 21569-4:2016(E)
©
ISO 2016

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ISO/TS 21569-4:2016(E)

COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
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the requester.
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ISO/TS 21569-4:2016(E)

Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Reagents and materials . 2
5.1 General . 2
5.2 PCR reagents . 2
6 Apparatus . 3
7 Procedure. 3
7.1 Preparation of test sample . 3
7.2 Preparation of DNA extracts . 3
7.3 PCR setup . 3
7.4 Temperature-time programme . 4
8 Accept/reject criteria . 4
8.1 General . 4
8.2 Identification . 4
9 Validation status and performance criteria . 5
9.1 General . 5
9.2 Robustness of the method . 5
9.3 Collaborative trial . 5
9.4 Sensitivity . 7
9.5 Specificity . 7
10 Test report . 9
Bibliography .10
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ISO/TS 21569-4:2016(E)

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity assessment,
as well as information about ISO’s adherence to the World Trade Organization (WTO) principles in the
Technical Barriers to Trade (TBT) see the following URL: www.iso.org/iso/foreword.html.
The committee responsible for this document is ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 16,
Horizontal methods for molecular biomarker analysis.
A list of all the parts in the ISO/TS 21569 series can be found on the ISO website.
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TECHNICAL SPECIFICATION ISO/TS 21569-4:2016(E)
Horizontal methods for molecular biomarker analysis —
Methods of analysis for the detection of genetically
modified organisms and derived products —
Part 4:
Real-time PCR based screening methods for the detection
of the P-nos and P-nos-nptII DNA sequences
1 Scope
This document specifies a procedure for the detection of a DNA sequence of the promoter region of the
nopaline synthase gene (P-nos) from Agrobacterium tumefaciens and a procedure for the detection of the
DNA transition sequence between P-nos and the neomycin-phosphotransferase gene (nptII) from the
Tn5 transposon of Escherichia coli K12. The nos-promoter and the P-nos-nptII-construct are frequently
found in genetically modified plants. The P-nos and P-nos-nptII specific methods are based on real-
time PCR and can be used for qualitative screening purposes. For identification and quantification of a
specific genetically modified plant (event) a follow-up analysis has to be carried out.
The methods described are applicable for the analysis of DNA extracted from foodstuffs. They may also
be suitable for the analysis of DNA extracted from other products such as feedstuffs and seeds. The
application of these methods requires the extraction of an adequate amount of amplifiable DNA from
the relevant matrix.
The DNA sequence amplified by the P-nos element-specific method can be detected in samples which
contain DNA of the naturally occurring Ti-plasmid of A. tumefaciens. For this reason, it is necessary to
confirm a positive screening result. Further analyses are required using construct-specific or event
specific methods.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 21569, Foodstuffs — Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and
derived products — Qualitative nucleic acid based methods
ISO 21570, Foodstuffs — Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and
derived products — Quantitative nucleic acid based methods
ISO 21571:2005, Foodstuffs — Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and
derived products — Nucleic acid extraction
ISO 24276, Foodstuffs — Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and
derived products — General requirements and definitions
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 16577 apply.
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ISO/TS 21569-4:2016(E)

ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— IEC Electropedia: available at http://www.electropedia.org/
— ISO Online browsing platform: available at http://www.iso.org/obp
4 Principle
DNA is extracted from the test sample applying a suitable method (see ISO 21571). The DNA analysis
consists of two parts:
a) verification of the amount and amplifiability of the extracted DNA, e.g. by means of a target taxon
specific real-time PCR (according to ISO 21570), see also Reference [1];
b) detection of the P-nos and/or P-nos-nptII sequence in a real-time PCR, see References [2], [3] and [4].
5 Reagents and materials
5.1 General
For the purpose of this document, only chemicals and water of recognized analytical grade, appropriate
for molecular biology shall be used. Unless stated otherwise, solutions should be prepared by dissolving
the corresponding reagents in water and be autoclaved. For all operations in which gloves are used, it
should be ensured that these are powder-free. The use of aerosol-protected pipette tips as protection
against cross contamination is recommended.
5.2 PCR reagents
5.2.1 Thermostable DNA polymerase (for hot-start PCR).
5.2.2 PCR buffer solution (containing magnesium chloride and deoxyribonucleoside
triphosphates, dNTPs).
Ready-to-use reagent mixtures or mixes of individual components can be used. Reagents and
polymerases which lead to equal or better results may also be used.
5.2.3 Oligonucleotides (see Tables 1 and 2).
Table 1 — Oligonucleotides for detection of P-nos element
Final concentration
Name DNA sequence of the oligonucleotide
in the PCR
[4]
P-nos as target sequence :
Primer p-nos-F1 5’-AAg CAC ATA CgT CAg AAA CCA TTA TT-3’ 400 nmol/l
Primer p-nos-R 5’-TCA gTg gAg CAT TTT TgA CAA gAA-3’ 400 nmol/l
a
Probe p-nos-Tm 5’-(FAM)-CgC gTT CAA AAg TCg CCT AAg gTC AC-(BBQ)-3’ 100 nmol/l
a
FAM: 6-Carboxyfluorescein, BBQ: BlackBerry® Quencher. This information is given for convenience of users of
this document and does not constitute an endorsement by ISO of the product named. Equivalent products from other
manufacturers may be used if they can be shown to give equivalent or better results.
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ISO/TS 21569-4:2016(E)

Table 2 — Oligonucleotides for detection of P-nos-nptII construct
Final concentration
Name DNA sequence of the oligonucleotide
in the PCR
[4]
P-nos-nptII as target sequence :
Primer p-nos-F2 5’-TTC CCC TCg gTA TCC AAT TAg Ag-3’ 400 nmol/l
Primer NPTII-R 5’-gAT TgT CTg TTg TgC CCA gTC A-3’ 400 nmol/l
a
Probe NPTII-Tm2 5’-(FAM)-AgC CgA ATA gCC TCT CCA CCC AAg C-(BBQ)-3’ 100 nmol/l
a
FAM: 6-Carboxyfluorescein, BBQ: BlackBerry® Quencher. This information is given for convenience of users of
this document and does not constitute an endorsement by ISO of the product named. Equivalent products from other
manufacturers may be used if they can be shown to give equivalent or better results.
6 Apparatus
Requirements concerning apparatus and materials shall be according to ISO 21569. In addition to the
usual laboratory equipment, the following equipment is required.
6.1 Real-time PCR device, suitable for the excitation of fluorescent molecules and the detection of
fluorescence signals generated during PCR.
7 Procedure
7.1 Preparation of test sample
It should be ensured that the test sample used for DNA extraction is representative of the laboratory
sample, e.g. by grinding or homogenizing of the samples. Measures and operational steps to be taken
into consideration are described in ISO 21571 and ISO 24276.
7.2 Preparation of DNA extracts
Concerning the preparation of DNA from the test sample, the general instructions and measures
described in ISO 21571 shall be followed. It is recommended to choose one of the DNA extraction
methods d
...

SPÉCIFICATION ISO/TS
TECHNIQUE 21569-4
Première édition
2016-11-01
Méthodes horizontales d’analyse
moléculaire de biomarqueurs —
Méthodes d’analyse pour la détection
des organismes génétiquement
modifiés et des produits dérivés —
Partie 4:
Méthodes de criblage par PCR en
temps réel pour la détection des
séquences ADN P-nos et P-nos-nptII
Horizontal methods for molecular biomarker analysis — Methods
of analysis for the detection of genetically modified organisms and
derived products —
Part 4: Real-time PCR based screening methods for the detection of
the P-nos and P-nos-nptII DNA sequences
Numéro de référence
ISO/TS 21569-4:2016(F)
©
ISO 2016

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ISO/TS 21569-4:2016(F)

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
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sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur
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l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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ISO/TS 21569-4:2016(F)

Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe . 2
5 Réactifs et matériaux . 2
5.1 Généralités . 2
5.2 Réactifs PCR . 2
6 Appareillage . 3
7 Mode opératoire. 3
7.1 Préparation de l’échantillon pour essai . 3
7.2 Préparation des extraits d’ADN . 3
7.3 Réaction PCR . 3
7.4 Programme d’amplification . 4
8 Critères d’acceptation/rejet . 4
8.1 Généralités . 4
8.2 Identification . 5
9 État de validation et critères de performance . 5
9.1 Généralités . 5
9.2 Robustesse de la méthode . 5
9.3 Essai interlaboratoires . 5
9.4 Sensibilité . 7
9.5 Spécificité . 8
10 Rapport d’essai . 9
Bibliographie .10
© ISO 2016 – Tous droits réservés iii

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ISO/TS 21569-4:2016(F)

Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation
de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes de l’Organisation
mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien
suivant: www.iso.org/iso/fr/avant-propos.html
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 16, Méthodes horizontales pour l’analyse moléculaire de biomarqueurs.
Une liste de toutes les parties de l’ISO/TS 21569 est disponible sur le site de l’ISO.
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SPÉCIFICATION TECHNIQUE ISO/TS 21569-4:2016(F)
Méthodes horizontales d’analyse moléculaire de
biomarqueurs — Méthodes d’analyse pour la détection
des organismes génétiquement modifiés et des produits
dérivés —
Partie 4:
Méthodes de criblage par PCR en temps réel pour la
détection des séquences ADN P-nos et P-nos-nptII
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie un mode opératoire permettant la détection d’une séquence d’ADN de la
région du promoteur du gène codant la nopaline synthase (P-nos) d’Agrobacterium tumefaciens et un
mode opératoire permettant la détection de la séquence d’ADN de transition entre le P-nos et le gène
de la néomycine phosphotransférase (nptII) du transposon Tn5 d’Escherichia coli K12. Le promoteur
nos et le construit P-nos-nptII sont fréquemment observés dans les plantes génétiquement modifiées.
Les méthodes spécifiques de P-nos et P-nos-nptII sont basées sur une méthode par PCR en temps réel
et peuvent être utilisées à des fins de criblage qualitatif. Pour l’identification et la quantification d’une
plante génétiquement modifiée (événement) spécifique, une analyse complémentaire doit être effectuée.
Les méthodes décrites sont applicables à l’analyse de l’ADN extrait de produits alimentaires. Elles
peuvent être également utilisées pour analyser l’ADN extrait d’autres produits tels que des aliments
pour animaux et des semences. L’application de ces méthodes exige qu’une quantité adéquate d’ADN
amplifiable soit extraite de la matrice étudiée.
La séquence d’ADN amplifiée par la méthode spécifique à l’élément P-nos peut être détectée dans des
échantillons contenant l’ADN du plasmide Ti d’A. tumefaciens présent dans la nature. Pour cette raison,
il est nécessaire de confirmer un résultat positif de criblage. D’autres analyses sont nécessaires au
moyen de méthodes spécifiques aux construits ou spécifiques aux événements.
2 Références normatives
Les documents suivants cités dans le texte constituent, pour tout ou partie de leur contenu, des
exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 21569, Produits alimentaires — Méthodes d’analyse pour la détection des organismes génétiquement
modifiés et des produits dérivés — Méthodes qualitatives basées sur l’utilisation des acides nucléiques
ISO 21570, Produits alimentaires — Méthodes d’analyse pour la détection des organismes génétiquement
modifiés et des produits dérivés — Méthodes quantitatives basées sur l’utilisation des acides nucléiques
ISO 21571:2005, Produits alimentaires — Méthodes d’analyse pour la détection des organismes
génétiquement modifiés et des produits dérivés — Extraction des acides nucléiques
ISO 24276, Produits alimentaires — Méthodes d’analyse pour la détection des organismes génétiquement
modifiés et des produits dérivés — Exigences générales et définitions
© ISO 2016 – Tous droits réservés 1

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ISO/TS 21569-4:2016(F)

3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions donnés dans l’ISO 16577 s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http://www.electropedia.org/
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse http://www.iso.org/obp
4 Principe
L’ADN est extrait de l’échantillon pour essai en appliquant une méthode appropriée (voir l’ISO 21571).
L’analyse de l’ADN comprend deux parties:
a) vérification de la quantité et de l’amplificabilité de l’ADN extrait, par exemple au moyen d’une
PCR en temps réel spécifique pour le taxon cible (conformément à l’ISO 21570), voir également la
Référence [1];
b) détection des séquences P-nos et/ou P-nos-nptII par une PCR en temps réel, voir les
Références [2],[3] et [4].
5 Réactifs et matériaux
5.1 Généralités
Pour les besoins du présent document, seules des substances chimiques et de l’eau de qualité analytique
reconnue, appropriées pour la biologie moléculaire, doivent être utilisées. Sauf indication contraire,
il convient de préparer les solutions par dissolution des réactifs correspondants dans l’eau et par
traitement à l’autoclave. Pour toutes les opérations nécessitant le port de gants, il convient de s’assurer
que ceux-ci ne sont pas poudrés. Pour éviter toute contamination croisée, il est recommandé d’utiliser
des embouts de pipette protégés contre les aérosols.
5.2 Réactifs PCR
5.2.1 ADN polymérase thermostable (pour PCR «à démarrage à chaud»).
5.2.2 Solution tampon pour PCR (contenant du chlorure de magnésium et des désoxyribonucléosides
triphosphates, dNTP).
Il est possible d’utiliser des mélanges de réactifs ou des préparations de composants individuels prêts
à l’emploi. Des réactifs et des polymérases conduisant à des résultats équivalents ou meilleurs peuvent
être également utilisés.
5.2.3 Oligonucléotides (voir Tableaux 1 et 2).
2 © ISO 2016 – Tous droits réservés

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ISO/TS 21569-4:2016(F)

Tableau 1 — Oligonucléotides pour la détection de l’élément P-nos
Concentration finale
Nom Séquence d’ADN de l’oligonucléotide
dans la PCR
[4]
P-nos comme séquence cible :
Amorce p-nos-F1 5’-AAg CAC ATA CgT CAg AAA CCA TTA TT-3’ 400 nmol/l
Amorce p-nos-R 5’-TCA gTg gAg CAT TTT TgA CAA gAA-3’ 400 nmol/l
a
Sonde p-nos-Tm 5’-(FAM)-CgC gTT CAA AAg TCg CCT AAg gTC AC-(BBQ)-3’ 100 nmol/l
a
FAM: carboxy-6-fluorescéine, BBQ: Extincteur BlackBerry®. Cette information est donnée à l’intention des utilisateurs
du présent document et ne signifie nullement que l’ISO approuve ou recommande l’emploi exclusif du produit ainsi désigné.
Des produits équivalents commercialisés par d’autres fabricants peuvent être utilisés s’il peut être démontré qu’ils donnent
des résultats similaires ou meilleurs.
Tableau 2 — Oligonucléotides pour la détection du construit P-nos-nptII
Concentration finale
Nom Séquence d’ADN de l’oligonucléotide
dans la PCR
[4]
P-nos-nptII comme séquence cible :
Amorce p-nos-F2 5’-TTC CCC TCg gTA TCC AAT TAg Ag-3’ 400 nmol/l
Amorce NPTII-R 5’-gAT TgT CTg TTg TgC CCA gTC A-3’ 400 nmol/l
a
Sonde NPTII-Tm2 5’-(FAM)-AgC CgA ATA gCC TCT CCA CCC AAg C-(BBQ)-3’ 100 nmol/l
a
FAM: carboxy-6-fluorescéine, BBQ: Extincteur BlackBerry®. Cette information est donnée à l’intention des utilisateurs
du présent document et ne signifie nullement que l’ISO approuve ou recommande l’emploi exclusif du produit ainsi désigné.
Des produits équivalents commercialisés par d’autres fabricants peuvent être utilisés s’il peut être démontré qu’ils donnent
des résultats similaires ou meilleurs.
6 Appareillage
Les exigences concernant l’appareillage et les matériaux doivent être conformes à l’ISO 21569. Outre le
matériel courant de laboratoire, l’équipement suivant est requis.
6.1 Appareil de PCR en temps réel, approprié pour l’excitation des molécules fluorescentes et pour
la détection des signaux de fluorescence générés pendant la PCR.
7 Mode opératoire
7.1 Préparation de l’échantillon pour essai
Il convient de s’assurer que l’échantillon pour essai utilisé pour l’extraction de l’ADN soit représentatif
de l’échantillon pour laboratoire, par exemple en broyant ou homogénéisant les échantillons. Les
mesures et étapes opératoires à prendre en considération sont décrites dans l’ISO 21571 et l’ISO 24276.
7.2 Préparation des extraits d’ADN
Concernant la préparation d’ADN de l’échantillon pour essai, il convient de suivre les instructions
générales et les mesures spécifiées dans l’ISO 21571. Il est recommandé de choisir l’une des méthodes
d’extraction d’ADN décrites dans l’ISO 21571:2005, Annexe A.
7.3 Réaction PCR
La méthode est décrite pour un volume total de 25 µl par réaction PCR. Le mélange réactionnel est
indiqué dans le Tableau 3.
Les réactifs sont totalement décongelés à température ambiante. Il convient de s’assurer que chaque
réactif est soigneusement mélangé et brièvement centrifu
...