ISO 20184-3:2021
(Main)Molecular in vitro diagnostic examinations — Specifications for pre-examination processes for frozen tissue — Part 3: Isolated DNA
Molecular in vitro diagnostic examinations — Specifications for pre-examination processes for frozen tissue — Part 3: Isolated DNA
This document specifies requirements and gives recommendations for the handling, storage, processing, and documentation of frozen tissue specimens intended for DNA examination during the pre-examination phase before a molecular examination is performed. This document is applicable to molecular in vitro diagnostic examinations including laboratory developed tests performed by medical laboratories and molecular pathology laboratories that evaluate DNA isolated from frozen tissue. It is also intended to be used by laboratory customers, in vitro diagnostics developers and manufacturers, biobanks, institutions and commercial organizations performing biomedical research, and regulatory authorities. Tissues that have undergone chemical stabilization pre-treatment before freezing are not covered in this document. NOTE International, national, or regional regulations or requirements can also apply to specific topics covered in this document.
Analyses de diagnostic moléculaire in vitro — Spécifications relatives aux processus préanalytiques pour les tissus congelés — Partie 3: ADN extrait
Le présent document spécifie des exigences et fournit des recommandations relatives à la manipulation, au stockage, au traitement et à la documentation de prélèvements de tissus congelés destinés à l’analyse de l’ADN durant la phase préanalytique précédant la réalisation d’une analyse moléculaire. Le présent document s’applique aux analyses de diagnostic moléculaire in vitro, y compris les essais développés en laboratoires, réalisées par les laboratoires de biologie médicale et les laboratoires de pathologie moléculaire qui évaluent l’ADN extrait de tissus congelés. Il est également destiné à être utilisé par les clients de laboratoires, les développeurs et fabricants de l’industrie du diagnostic in vitro, ainsi que par les biobanques, les institutions et les organismes commerciaux spécialisés en recherche biomédicale et les autorités réglementaires. Le cas des tissus ayant subi un prétraitement de stabilisation chimique avant la congélation n’est pas couvert par le présent document. NOTE Des réglementations ou exigences internationales, nationales ou régionales peuvent également s’appliquer à des sujets spécifiques traités dans le présent document.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20184-3
First edition
2021-05
Molecular in vitro diagnostic
examinations — Specifications for
pre-examination processes for frozen
tissue —
Part 3:
Isolated DNA
Analyses de diagnostic moléculaire in vitro — Spécifications relatives
aux processus préanalytiques pour les tissus congelés —
Partie 3: ADN extrait
Reference number
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©
ISO 2021
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ISO 20184-3:2021(E)
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Phone: +41 22 749 01 11
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Published in Switzerland
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ISO 20184-3:2021(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 General considerations . 5
5 Outside the laboratory . 6
5.1 Specimen collection . 6
5.1.1 General. 6
5.1.2 Information about the patient/specimen donor . 6
5.1.3 Information about the specimen . 6
5.1.4 Specimen processing . 6
5.2 Fresh tissue transport requirements . 7
5.2.1 General. 7
5.2.2 Preparations for the transport . 7
5.2.3 During transport . 8
6 Inside the laboratory . 8
6.1 Information about the reception of the specimen . 8
6.2 Evaluation of the pathology of the specimen and selection of the sample(s) . 8
6.3 Freezing of the specimen or sample(s) . 9
6.4 Storage requirements .11
6.5 DNA isolation .11
6.5.1 General.11
6.5.2 Using commercial kits .12
6.5.3 Using laboratory developed protocols .12
6.6 Quantity and quality assessment of isolated DNA .12
6.7 Storage of isolated DNA .13
Bibliography .14
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ISO 20184-3:2021(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 212, Clinical laboratory testing and in
vitro diagnostic test systems, in collaboration with the European Committee for Standardization (CEN)
Technical Committee CEN/TC 140, In vitro diagnostic medical devices, in accordance with the Agreement
on technical cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
A list of all parts in the ISO 20184 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
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ISO 20184-3:2021(E)
Introduction
Molecular in vitro diagnostics, including molecular pathology, has enabled significant progress in
medicine. Further progress is expected with new technologies analysing nucleic acids, proteins, and
metabolites in human tissues and body fluids. However, integrity and profile of these molecules can
change during specimen collection, transport, storage, and processing. As a consequence the outcome
from diagnostics or research can become unreliable or even impossible because the subsequent
examination assay might not determine the real situation in the patient but instead, an artificial profile
which is generated during the pre-examination process.
DNA integrity in tissues can change during processing and storage. Modifications of the DNA molecules
can impact the validity and reliability of the examination test results. It is essential to take special
measures to minimize the described DNA changes and modifications for subsequent examination.
Therefore, a standardization of the entire process from specimen collection to DNA examination is
needed. Studies have been undertaken to determine the important influencing factors. This document
draws upon such work to codify and standardize the steps for frozen tissue with regard to DNA
examination in what is referred to as the pre-examination phase.
In this document, the following verbal forms are used:
— “shall” indicates a requirement;
— “should” indicates a recommendation;
— “may” indicates a permission;
— “can” indicates a possibility or a capability.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 20184-3:2021(E)
Molecular in vitro diagnostic examinations —
Specifications for pre-examination processes for frozen
tissue —
Part 3:
Isolated DNA
1 Scope
This document specifies requirements and gives recommendations for the handling, storage,
processing, and documentation of frozen tissue specimens intended for DNA examination during the
pre-examination phase before a molecular examination is performed.
This document is applicable to molecular in vitro diagnostic examinations including laboratory
developed tests performed by medical laboratories and molecular pathology laboratories that
evaluate DNA isolated from frozen tissue. It is also intended to be used by laboratory customers, in
vitro diagnostics developers and manufacturers, biobanks, institutions and commercial organizations
performing biomedical research, and regulatory authorities.
Tissues that have undergone chemical stabilization pre-treatment before freezing are not covered in
this document.
NOTE International, national, or regional regulations or requirements can also apply to specific topics
covered in this document.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 15189, Medical laboratories — Requirements for quality and competence
ISO 15190, Medical laboratories — Requirements for safety
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 15189 and the following apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
3.1
aliquot
portion of a larger amount of homogenous material, assumed to be taken with negligible sampling error
Note 1 to entry: The term is usually applied to fluids. Solid tissues are heterogeneous and therefore cannot be
aliquoted.
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ISO 20184-3:2021(E)
[SOURCE: Compendium of Chemical Terminology Gold Book. International Union of Pure and Applied
Chemistry. Version 2.3.3., 2014; the PAC, 1990,62,1193 (Nomenclature for sampling in analytical
chemistry (Recommendations 1990)) p. 1206; and the PAC 1990, 62, 2167 (Glossary of atmospheric
chemistry terms (Recommendations 1990)) p. 2173.]
3.2
ambient temperature
unregulated temperature of the surrounding air
3.3
analyte
component represented in the name of a measurable quantity
[SOURCE: ISO 17511:2020, 3.2, modified — The example was not taken over.]
3.4
analytical test performance
accuracy, precision, and sensitivity of a test to measure the analyte (3.3) of interest
Note 1 to entry: Other test performance characteristics such as robustness, repeatability can apply as well.
3.5
biobanking
process of acquisitioning and storing, together with some or all of the activities related to collection,
preparation, preservation, testing, analysing and distributing defined biological material as well as
related information and data
[SOURCE: ISO 20387:2018, 3.6]
3.6
cold ischemia
condition after removal of the tissue from the body until its stabilization or fixation
[SOURCE: ISO 20184-2:2018, 3.5]
3.7
diagnosis
identification of a health or disease state from its signs and/or symptoms, where the diagnostic process
can involve examinations (3.10) and tests for classification of an individual's condition into separate
and distinct categories or subclasses that allow medical decisions about treatment and prognosis to be
made
[SOURCE: ISO 20184-2:2018, 3.6]
3.8
DNA
deoxyribonucleic acid
polymer of deoxyribonucleotides occurring in a double-stranded (dsDNA) or single-stranded (ssDNA)
form
[SOURCE: ISO 22174:2005, 3.1.2]
3.9
DNase
deoxyribonuclease
enzyme that catalyzes the degradation of DNA (3.8) into smaller components
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.8]
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ISO 20184-3:2021(E)
3.10
examination
analytical test
set of operations with the object of determining the value or characteristics of a property
Note 1 to entry: Processes that start with the isolated analyte (3.3) and include all kinds of parameter testing or
chemical manipulation for quantitative or qualitative examination.
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.7, modified — Notes to entry 1 to 3 have been removed. Note 1 to entry has
been added and “analytical test” has been added as a preferred term.]
3.11
grossing
gross examination
inspection of pathology specimens with the bare eye to obtain diagnostic information, while being
processed for further microscopic examination (3.10)
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.10]
3.12
homogeneous
uniform in structure and composition
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.11]
3.13
interfering substance
endogenous substance of a specimen (3.18)/sample (3.17) or exogenous substance (e.g. stabilization
solution) that can alter an examination (3.10) result
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.12]
3.14
pre-examination process
preanalytical phase
preanalytical workflow
process that starts in chronological order, from the clinician’s request and include the examination
(3.10) request, preparation and identification of the patient, collection of the primary sample(s) (3.18),
transportation to and within the medical or pathology laboratory, isolation of analytes (3.3), and ends
when the analytical examination (3.10) begins
Note 1 to entry: The pre-examination phase includes preparative processes that influence the outcome of the
intended examination (3.10).
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.15, modified — An additional term was added and more detail was
included.]
3.15
proficiency test
evaluation of participant performance against pre-established criteria by means of inter-laboratory
comparisons
[SOURCE: ISO/IEC 17043:2010, 3.7, modified — The term and definition are used here without the
original notes.]
3.16
room temperature
for the purpose of this document, temperature in the range of 18 °C to 25 °C
Note 1 to entry: Local or national regulations can have different definitions.
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.19]
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ISO 20184-3:2021(E)
3.17
sample
one or more parts taken from a primary sample (3.19)
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.24, modified — The example was not taken over.]
3.18
specimen
primary sample
discrete portion of a body fluid, breath, hair or tissue taken for examination (3.10), study or analysis of
one or more quantities or properties assumed to apply for the whole
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.14]
3.19
stability
ability of a sample (3.17) material, when stored under specified conditions, to maintain a stated
property value within specified limits for a specified period of time
Note 1 to entry: The analyte (3.3) for the purpose of this document is DNA (3.7).
[SOURCE: ISO Guide 30:2015, 2.1.15, modified — The words “reference material” were replaced by
“sample material”.]
3.20
storage
maintenance of biological material under defined and standardized conditions for the intended use
Note 1 to entry: Long-term storage typically occurs in laboratory archives or in biobanks.
3.21
validation
confirmation, through the provision of objective evidence, that the requirements for a specific intended
use or application have been fulfilled
Note 1 to entry: The term “validated” is used to designate the corresponding status.
[SOURCE: ISO 9000:2015, 3.8.13, modified — Note 1 and Note 3 were not taken over.]
3.22
verification
confirmation, through provision of objective evidence, that specified requirements have been fulfilled
Note 1 to entry: The term “verified” is used to designate the corresponding status.
Note 2 to entry: Confirmation can comprise activities such as:
— performing alternative calculations,
— comparing a new design specification with a similar proven design specification,
— undertaking tests and demonstrations, and
— reviewing documents prior to issue.
[SOURCE: ISO 9000:2015, 3.8.12, modified — Note 1 and Note 2 to entry have been deleted; Note 3 to
entry has been renumbered as Note 1 to entry; new Note 2 to entry has been added.]
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ISO 20184-3:2021(E)
3.23
warm ischemia
condition before the tissue is removed from the body, but where it is deprived of its normal blood supply
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.25]
Note 1 to entry: Disruption of normal blood supply varies significantly case by case. Therefore, warm ischemia
duration and its effects depend on individual cases and it also can depend on the anatomy of the arterial blood
supply.
3.24
workflow
series of activities necessary to complete a task
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.26 ]
4 General considerations
For general statements on medical laboratory quality management systems and in particular on
specimen collection, reception and handling (including avoidance of cross contaminations) see
ISO 15189, ISO/IEC 17025 or ISO/IEC 17020. The requirements on laboratory equipment, reagents, and
consumables according to ISO 15189 shall be followed; ISO/IEC 17025 and ISO/IEC 17020 can also apply.
All steps of the pre-examination, examination and post-examination processes (i.e. the entire
workflow) can influence the diagnosis or research study results. Thus, this entire workflow shall be
specified, verified and validated during the development of the examination. This includes specifically
all pre-examination process steps such as the examination request, preparation and identification of
the patient, collection of the primary sample(s), transport to and within the medical laboratory, storage
and isolation of analytes. Workflow steps which cannot always be controlled (e.g. warm ischemia) shall
be documented.
In contrast to RNA or proteins, DNA in tissue is relatively stable during warm and cold ischemia.
Changes of DNA sequence or copy numbers (e.g. comparative genomic hybridization (CGH) profiles)
[9]
due to longer warm and cold ischemia durations are unknown . However, DNA methylation profiles
[10]
may change in response to ischemia . The duration until the specimen is frozen should be kept as
short as possible in order to avoid enzymatic degradation of DNA. The duration before freezing shall be
[9]
documented and the temperature before freezing should be documented .
During the design and development of a DNA based examination, a risk assessment shall be performed
(see also ISO 14971). Mitigation measures for eliminating or reducing identified risks shall be
established where required for ensuring the performance of the examination.
Safety requirements on specimen transport and handling shall be considered as given in ISO 15189 and
ISO 15190. International, national, or regional regulations or requirements can also apply.
During the whole pre-examination process, precautions shall be taken to avoid cross contamination
between different specimens/samples, e.g. by using single-use material whenever feasible or
appropriate cleaning procedures between processing of different specimens/samples.
Where the examination manufacturer has specified instructions for pre-examination steps, these shall
be followed. When, for justified reasons (e.g. unmet patient needs), a commercial product is not used
in accordance to the manufacturer's instructions, responsibility for its validation, verification, use and
performance lies with the user.
For general considerations on specimen collection, transport, receipt, and handling, see ISO 20658 and
ISO 20387.
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ISO 20184-3:2021(E)
5 Outside the laboratory
5.1 Specimen collection
5.1.1 General
Where the intended examination is known, its instructions for use including requirements for pre-
examination steps such as specimen collection shall be followed (see also Clause 6 and ISO 15189).
5.1.2 Information about the patient/specimen donor
The documentation shall include the identity of the patient/specimen donor, which can be in the form
of a code. The documentation shall be undertaken by the department collecting the specimen from the
patient and should include, but is not limited to:
a) the relevant health status of the patient/specimen donor (e.g. healthy, disease type, concomitant
disease and demographics (e.g. age and gender);
b) the relevant information about routine medical treatment and special treatment prior to tissue
collection (e.g. anaesthetics, medications, surgical or diagnostic procedures);
c) the appropriate consent from the patient/specimen donor.
5.1.3 Information about the specimen
The documentation shall include, but is not limited to:
a) if required for the examination, the start of ischemia within the body (warm ischemia) by
documentation of the ischemia-relevant vessel ligation/clamping time point (usually arterial
clamping time);
NOTE Not needed where small tissue biopsy resection for freezing is performed.
b) the time and date when tissue is removed from the body and the method of removal (e.g. core-
needle biopsy, resection, biopsy device used for the collection);
c) the description of tissue type and origin, tissue condition (e.g. diseased, unaffected by the disease),
including references to any marking applied in or outside the operating theatre made by surgeon,
radiologist or pathologist;
If the freezing of the tissue is performed outside the laboratory, the documentation steps described
under 6.2, where pathology evaluation is required, and 6.3 shall be performed.
The documentation should also include the identity of the responsible person collecting the specimen,
this can be in the form of a code.
5.1.4 Specimen processing
Tissues that need to be frozen for diagnostic purposes can originate from a large specimen or can be
small specimens e.g. biopsies taken by endoscopy or taken from patients during a surgical procedure
where fast frozen section diagnosis is required.
a) Any additions or modifications to the specimen after removal from the body (e.g. labelling for the
orientation of the specimen (e.g. ink-marking, stitches, incision(s)) shall be documented.
Where a pathology diagnosis is required on the specimen, sampling shall be performed by or under
supervision or guidance of a medically qualified (e.g. board certified) pathologist (see 6.2) and
these personnel should be aware of all examinations for the specimen to ensure proper handling.
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ISO 20184-3:2021(E)
Where the specimen was removed without the requirement of pathology diagnosis, the evaluation,
selection and documentation of specimens may be done by other qualified persons than
pathologists.
b) Formalin fixation can have a negative impact on DNA based examinations (see ISO 20166-3). Frozen
tissue samples are therefore preferred depending on the specific analytical examination. Where
both DNA and RNA are intended to be examined, see ISO 20184-1.
c) Cold ischemia can alter the DNA (e.g. methylation); therefore, the specimen/sample should be
frozen without delay, as long as not differently specified for the intended examination (see 6.3).
Freezing can be performed outside the laboratory or inside the laboratory under the direction or
supervision of a pathologist.
In case the specimen or sample is frozen outside the laboratory, proceed with 6.2 without delay.
In case the specimen or sample is frozen inside the laboratory, fresh tissue specimens need to be
transported to the laboratory. The steps described under 5.2 for fresh tissue transport shall be
performed without delay.
5.2 Fresh tissue transport requirements
5.2.1 General
Where transport of the specimen or sample to the laboratory is required for freezing, the laboratory
in partnership with the clinical or surgery department shall provide instructions for the transport
procedure of the specimen.
5.2.2 Preparations for the transport
The following steps shall be performed:
a) the selection and use of containers and packages (e.g. cooling box, box for storing and transportation,
vacuum packaging);
NOTE 1 This will be in accordance with applicable transport regulations.
b) the selection and use of stabilization procedures (e.g. cooling methods) for transport;
NOTE 2 Accidentally freezing of the fresh tissue (e.g. by using cool packs incorrectly) can lead to DNA
degradation when the tissue thaws. It can also impact the morphological characterization.
c) the labelling of the container (e.g. registration-number, barcode, specimen type, quantity, and
organ tissue of origin) and additional documentation (information as specified in 5.1.2, 5.1.3, 5.1.4,
and 5.2.2, a) to b)).
A single container may only contain several specimens if these specimens come from the same location
(i.e. similar or corresponding anatomical or histological organ parts) and have the same macroscopic
features such as tissue type and disease status (e.g. inflammation, tumour and necrosis).
NOTE 3 Specimens that have the same macroscopic features can have different molecular features.
After removal from the body, specimens should be transferred without delay into the container. The
container should then be kept on wet-ice or at 2 °C to 8 °C in order to minimize changes to the DNA (e.g.
fragmentation). Alternatively, short exposure (e.g. up to 3 hours) to room temperature can be acceptable
depending on the anticipated examination requirements. During the development of the examination,
the maximum storage duration at defined temperature ranges shall be specified and verified.
The temperatures of the collection container's surroundings during cold ischemia (e.g. temperatures in
different rooms, transport) should be documented. If the temperature is not measured, the temperature
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ISO 20184-3:2021(E)
range should be estimated by classification as ambient temperature, room temperature, or at 2 °C to
8 °C.
5.2.3 During transport
Temperature monitoring should be applied in a suitable manner (e.g. temperature tracking). If the
temperature cannot be measured, the highest temperature during transport should be estimated and
documented (e.g. as ambient temperature, room temperature, at 2 °C to 8 °C or wet ice (pack)).
If the specimen is not already frozen, it should be transported on wet ice (pack) or at 2 °C to 8 °C without
delay in order to minimize changes to the DNA.
The compliance with the protocol for the transport procedure shall be documented. Any deviations
from the protocol shal
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 20184-3
Première édition
2021-05
Analyses de diagnostic moléculaire in
vitro — Spécifications relatives aux
processus préanalytiques pour les
tissus congelés —
Partie 3:
ADN extrait
Molecular in vitro diagnostic examinations — Specifications for pre-
examination processes for frozen tissue —
Part 3: Isolated DNA
Numéro de référence
ISO 20184-3:2021(F)
©
ISO 2021
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ISO 20184-3:2021(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
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y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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ISO 20184-3:2021(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Considérations générales . 5
5 Hors du laboratoire . 6
5.1 Recueil des prélèvements . 6
5.1.1 Généralités . 6
5.1.2 Informations relatives au patient/donneur faisant l’objet du prélèvement . 6
5.1.3 Informations relatives au prélèvement . 6
5.1.4 Traitement du prélèvement . . 7
5.2 Exigences relatives au transport de tissus frais . 7
5.2.1 Généralités . 7
5.2.2 Préparation pour le transport . 7
5.2.3 Au cours du transport . 8
6 Dans le laboratoire . 8
6.1 Informations relatives à la réception du prélèvement . 8
6.2 Évaluation de la pathologie du prélèvement et sélection de l’échantillon ou des
échantillons . 9
6.3 Congélation du prélèvement, de l’échantillon ou des échantillons .10
6.4 Exigences relatives au stockage .12
6.5 Extraction de l’ADN .12
6.5.1 Généralités .12
6.5.2 Utilisation de kits commerciaux .13
6.5.3 Utilisation des protocoles développés en laboratoire .13
6.6 Évaluation quantitative et qualitative de l’ADN extrait .14
6.7 Stockage de l’ADN extrait .14
Bibliographie .16
© ISO 2021 – Tous droits réservés iii
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ISO 20184-3:2021(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/ iso/ fr/ avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le Comité technique ISO/TC 212, Laboratoires d’analyses de
biologie médicale et systèmes de diagnostic in vitro, en collaboration avec le Comité technique CEN/
TC 140, Dispositifs médicaux de diagnostic in vitro du Comité Européen de Normalisation, conformément
à l’Accord de coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Une liste de toutes les parties de la série ISO 20184 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
iv © ISO 2021 – Tous droits réservés
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ISO 20184-3:2021(F)
Introduction
Le diagnostic moléculaire in vitro, y compris la pathologie moléculaire, a permis de faire
considérablement progresser la médecine. D’autres avancées sont attendues avec les nouvelles
technologies d’analyse des acides nucléiques, des protéines et des métabolites dans les tissus humains et
les fluides corporels. Toutefois, l’intégrité et le profil de ces molécules peuvent varier considérablement
au cours du prélèvement des échantillons primaires, du transport, du stockage et du traitement. En
conséquence, un résultat de diagnostic ou de recherche peut devenir peu fiable, voire impossible, car
l’analyse subséquente pourrait ne pas déterminer l’état réel du patient, mais plutôt un profil artificiel
qui est généré pendant le processus préanalytique.
L’intégrité de l’ADN dans les tissus peut varier pendant le traitement et le stockage. Les modifications
des molécules d’ADN peuvent avoir un impact sur la validité et la fiabilité des résultats d’analyse. Il
est essentiel de prendre des mesures particulières afin de réduire le plus possible les changements et
modifications de l’ADN décrits pour l’analyse ultérieure.
Par conséquent, une normalisation de l’ensemble du processus, allant du prélèvement des échantillons
primaires jusqu’à l’analyse de l’ADN, est nécessaire. Des études ont été réalisées afin de définir les
facteurs ayant un impact important. Le présent document se fonde sur ces travaux pour codifier et
normaliser les étapes des processus dits de la phase préanalytique pour tissus congelés au regard de
l’analyse de l’ADN.
Dans le présent document, les formes verbales suivantes sont utilisées:
— «doit» indique une exigence;
— «il convient de/que» indique une recommandation;
— «peut/il est admis/permis» indique une permission;
— «peut/il est possible» indique une possibilité ou une capacité.
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NORME INTERNATIONALE ISO 20184-3:2021(F)
Analyses de diagnostic moléculaire in vitro —
Spécifications relatives aux processus préanalytiques pour
les tissus congelés —
Partie 3:
ADN extrait
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie des exigences et fournit des recommandations relatives à la manipulation,
au stockage, au traitement et à la documentation de prélèvements de tissus congelés destinés à l’analyse
de l’ADN durant la phase préanalytique précédant la réalisation d’une analyse moléculaire.
Le présent document s’applique aux analyses de diagnostic moléculaire in vitro, y compris les essais
développés en laboratoires, réalisées par les laboratoires de biologie médicale et les laboratoires de
pathologie moléculaire qui évaluent l’ADN extrait de tissus congelés. Il est également destiné à être
utilisé par les clients de laboratoires, les développeurs et fabricants de l’industrie du diagnostic in vitro,
ainsi que par les biobanques, les institutions et les organismes commerciaux spécialisés en recherche
biomédicale et les autorités réglementaires.
Le cas des tissus ayant subi un prétraitement de stabilisation chimique avant la congélation n’est pas
couvert par le présent document.
NOTE Des réglementations ou exigences internationales, nationales ou régionales peuvent également
s’appliquer à des sujets spécifiques traités dans le présent document.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 15189, Laboratoires de biologie médicale — Exigences concernant la qualité et la compétence
ISO 15190, Laboratoires de biologie médicale — Exigences pour la sécurité
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions de l’ISO 15189 ainsi que les suivants,
s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp;
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www .electropedia .org/
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ISO 20184-3:2021(F)
3.1
aliquote
partie d’une quantité plus importante d’un matériau homogène, prélevée avec une erreur
d’échantillonnage présumée négligeable
Note 1 à l'article: Le terme s’applique généralement à des fluides. Les tissus solides sont hétérogènes et ne peuvent
donc pas être aliquotés.
[SOURCE: Compendium of Chemical Terminology Gold Book. International Union of Pure et Applied
Chemistry. Version 2.3.3, 2014; the PAC, 1990,62,1193 (Nomenclature for sampling in analytical
chemistry (Recommendations 1990)) p. 1206; et the PAC 1990, 62, 2167 (Glossary of atmospheric
chemistry terms (Recommendations 1990)) p. 2173.]
3.2
température ambiante
température non régulée de l’air environnant
3.3
analyte
composant représenté au nom d’une grandeur mesurable
[SOURCE: ISO 17511:2020, 3.2, modifiée — L’exemple n’a pas été repris.]
3.4
performance analytique
l’exactitude, la précision et la sensibilité d’un essai pour mesurer l’analyte (3.3) concerné
Note 1 à l'article: D’autres caractéristiques de performance d’essai, telles que la robustesse ou la répétabilité,
peuvent également s’appliquer.
3.5
«biobanking»mise en banque de matériel biologique
processus d’acquisition et de stockage, ainsi que tout ou partie des activités liées au prélèvement, à la
préparation, à la préservation, aux tests, à l’analyse et à la distribution de matériels biologiques définis,
y compris les informations et les données associées
[SOURCE: ISO 20387:2018, 3.6]
3.6
ischémie froide
état d’un tissu suite à son prélèvement de l’organisme jusqu’à sa stabilisation ou sa fixation
[SOURCE: ISO 20184-2:2018, 3.5]
3.7
diagnostic
identification d’un état de santé sain ou pathologique à partir de ses signes et/ou symptômes, dans
laquelle le processus de diagnostic peut impliquer des analyses (3.10) et essais pour la classification
de l’état d’un individu en catégories ou sous-classes distinctes, laquelle permet la prise de décisions
médicales concernant le traitement et le pronostic à établir
[SOURCE: ISO 20184-2:2018, 3.6]
3.8
ADN
acide désoxyribonucléique
polymère de désoxyribonucléotides se présentant sous la forme de double brin (ADNdb) ou de brin
simple (ADNsb)
[SOURCE: ISO 22174:2005, 3.1.2]
2 © ISO 2021 – Tous droits réservés
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ISO 20184-3:2021(F)
3.9
DNase
désoxyribonucléase
enzyme catalysant la dégradation de l’ADN (3.8) en composants plus petits
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.8]
3.10
analyse
phase analytique
ensemble des opérations destinées à déterminer la valeur ou les caractéristiques d’une propriété
Note 1 à l'article: Les processus débutent avec l’analyte (3.3) extrait et comprennent toutes sortes d’essais
paramétriques ou de manipulations chimiques en vue de réaliser l’analyse quantitative ou qualitative.
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.7, modifiée — Les Notes à l’Article 1 à 3 ont été supprimées. La Note 1 à
l’article a été ajoutée, le terme a été modifié et «phase analytique» a été ajouté comme terme privilégié.]
3.11
macroscopie
analyse macroscopique
contrôle de prélèvements pathologiques à l’œil nu, au cours de leur traitement à des fins d’analyse (3.10)
microscopique ultérieure, en vue d’obtenir des informations de diagnostic
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.10]
3.12
homogène
de structure et de composition uniformes
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.11]
3.13
substance interférente
substance endogène d’un prélèvement (3.18)/échantillon (3.17) ou substance exogène (par exemple
solution de stabilisation) susceptible d’altérer le résultat d’une analyse (3.10)
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.12]
3.14
processus préanalytique
phase préanalytique
flux de travail préanalytique
processus commençant chronologiquement par la prescription des analyses par le clinicien, comprenant
la demande d’analyse (3.10), la préparation et l’identification du patient, le prélèvement de l’échantillon
primaire (3.18), son acheminement jusqu’au laboratoire et au sein du laboratoire médical ou de
pathologie, l’extraction des analytes (3.3), et finissant au début de l’analyse (3.10)
Note 1 à l'article: La phase préanalytique comprend des processus de préparation qui influencent le résultat de
l’analyse (3.10) prévue.
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.15, modifiée — Un terme supplémentaire a été ajouté et des détails
supplémentaires ont été inclus.]
3.15
essai d’aptitude
évaluation de la performance d’un participant par rapport à des critères préétablis au moyen de
comparaisons interlaboratoires
[SOURCE: ISO/IEC 17043:2010, 3.7, modifiée — Le terme et la définition sont repris ici sans les notes
d’origine.]
© ISO 2021 – Tous droits réservés 3
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ISO 20184-3:2021(F)
3.16
température de laboratoire
pour les besoins du présent document, température dans la plage de 18 °C à 25 °C
Note 1 à l'article: Des réglementations locales ou nationales peuvent stipuler des définitions différentes.
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.19]
3.17
échantillon
une ou plusieurs parties prélevées à partir d’un échantillon primaire (3.19)
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.24, modifiée — L’exemple n’a pas été repris.]
3.18
spécimen
échantillon primaire
prélèvement
partie discrète d’un liquide corporel, d’une haleine, d’un cheveu ou d’un tissu prélevé à des fins d’analyse
(3.10), d’étude ou d’analyse d’une ou plusieurs grandeurs ou propriétés pour déterminer le caractère de
l’ensemble
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.14]
3.19
stabilité
caractéristique d’un échantillon (3.17), lorsqu’il est entreposé dans des conditions spécifiées, à
conserver une valeur de propriété spécifiée dans des limites spécifiées pendant une période de temps
spécifiée
Note 1 à l'article: L’analyte (3.3) pour les besoins du présent document est l’ADN (3.7).
[SOURCE: Guide ISO 30:2015, 2.1.15, modifié — L’expression «matériau de référence» a été remplacée
par «échantillon».]
3.20
stockage
conservation d’une matière biologique dans des conditions définies et normalisées en vue de l’utilisation
prévue
Note 1 à l'article: Le stockage à long terme a généralement lieu dans les sites d’archivage des laboratoires ou dans
les biobanques.
3.21
validation
confirmation par des preuves objectives que les exigences pour une utilisation spécifique ou une
application prévues ont été satisfaites
Note 1 à l'article: Le terme «validé» est utilisé pour désigner l’état correspondant.
[SOURCE: ISO 9000:2015, 3.8.13, modifiée — Les Notes 1 et 3 n’ont pas été reprises.]
3.22
vérification
confirmation par des preuves objectives que les exigences spécifiées ont été satisfaites
Note 1 à l'article: Le terme «vérifié» est utilisé pour désigner l’état correspondant.
Note 2 à l'article: La confirmation peut couvrir des activités telles que:
— la réalisation d’autres calculs;
4 © ISO 2021 – Tous droits réservés
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ISO 20184-3:2021(F)
— la comparaison d’une spécification de conception nouvelle avec une spécification de conception similaire
éprouvée;
— la réalisation d’essais et de démonstrations;
— la revue de documents avant diffusion.
[SOURCE: ISO 9000:2015, 3.8.12, modifiée — La Note 1 et la Note 2 à l’article ont été supprimées; la
Note 3 à l’article a été renumérotée en tant que Note 1 à l’article; une nouvelle Note 2 à l’article a été
ajoutée.]
3.23
ischémie chaude
situation avant que le tissu soit prélevé de l’organisme, mais dans laquelle il est privé de son apport
sanguin normal
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.25]
Note 1 à l'article: La perturbation de l’apport sanguin normal varie significativement d’un cas à un autre. Par
conséquent, la durée de l’ischémie chaude et ses effets dépendent des cas individuels et peuvent également
dépendre de l’anatomie artérielle.
3.24
flux de travail
série d’activités nécessaires à la réalisation d’une tâche
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.26]
4 Considérations générales
Pour les instructions générales relatives aux systèmes de management de la qualité de laboratoire
de biologie médicale et portant en particulier sur le prélèvement, la réception et la manipulation
d’échantillons primaires (y compris la prévention des contaminations croisées), voir l’ISO 15189,
l’ISO/IEC 17025 ou l’ISO/IEC 17020. Les exigences relatives aux équipements de laboratoire, aux
réactifs et aux consommables conformément à l’ISO 15189 doivent être respectées; l’ISO/IEC 17025 et
l’ISO/IEC 17020 peuvent également s’appliquer.
Toutes les étapes des processus préanalytiques, analytiques et postanalytiques (c’est-à-dire le flux
de travail complet) peuvent influencer le diagnostic ou les résultats de l’étude de recherche. Par
conséquent, ce flux de travail complet doit être spécifié, vérifié et validé au cours du développement
de l’analyse. Cela comprend notamment toutes les étapes du processus préanalytique telles que la
demande d’analyse, la préparation et l’identification du patient, le prélèvement de l’échantillon ou des
échantillons primaires, leur acheminement jusqu’au laboratoire de biologie médicale et au sein du
laboratoire de biologie médicale, le stockage et l’extraction des analytes. Les étapes du flux de travail
qui ne peuvent pas toujours être contrôlées (par exemple, l’ischémie chaude) doivent être documentées.
Contrairement à l’ARN ou aux protéines, l’ADN dans le tissu est relativement stable durant les ischémies
chaude et froide. Les modifications de l’ADN, des séquences et des nombres de copies (par exemple,
profils d’hybridation génomique comparative [CGH]) dues à de longues durées d’ischémies froide et
[9]
chaude sont inconnues . Cependant, les profils de méthylation de l’ADN peuvent varier en réponse à
[10]
l’ischémie . Il convient d’écourter autant que possible le délai jusqu’à la congélation du prélèvement
afin d’éviter une dégradation enzymatique de l’ADN. La durée avant la congélation doit être consignée
[9]
et il convient de documenter la température avant la congélation .
Au cours de la conception et du développement d’une analyse basée sur l’ADN, une appréciation du
risque doit être effectuée (voir également l’ISO 14971). Des mesures d’atténuation visant à réduire ou
éliminer les risques identifiés doivent être prises, le cas échéant, afin de garantir les performances de
l’analyse.
© ISO 2021 – Tous droits réservés 5
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ISO 20184-3:2021(F)
Les exigences en matière de sécurité pour le transport et la manipulation du prélèvement doivent
être prises en considération comme indiqué dans l’ISO 15189 et l’ISO 15190. Des réglementations ou
exigences internationales, nationales ou régionales peuvent également s’appliquer.
Des précautions doivent être prises au cours de l’ensemble du processus préanalytique afin d’éviter
toute contamination croisée entre les différents prélèvements/échantillons, par exemple en utilisant,
dans la mesure du possible, du matériel à usage unique ou en mettant en place des méthodes de
nettoyage appropriées entre les traitements des différents prélèvements/échantillons.
Lorsque le fabricant du kit d’analyse spécifie des instructions pour les étapes préanalytiques, celles-ci
doivent être respectées. Si, pour des raisons justifiées (besoins de patients non satisfaits, par exemple),
un produit commercial n’est pas utilisé selon les instructions du fabricant, la responsabilité de sa
validation, de sa vérification, de son utilisation et de sa performance incombe à l’utilisateur.
Pour les considérations générales, relatives au prélèvement, au transport, à la réception et à la
manipulation des échantillons primaires, voir l’ISO 20658 et l’ISO 20387.
5 Hors du laboratoire
5.1 Recueil des prélèvements
5.1.1 Généralités
Lorsque l’analyse prévue est connue, les instructions correspondantes, notamment les exigences
concernant les phases préanalytiques, comme le prélèvement des échantillons, doivent être suivies
(voir également l’Article 6 et l’ISO 15189).
5.1.2 Informations relatives au patient/donneur faisant l’objet du prélèvement
La documentation doit inclure l’identifiant du patient/donneur faisant l’objet du prélèvement, lequel
peut se présenter sous la forme d’un code. La documentation doit être réalisée par le service prélevant
les échantillons du patient et il convient qu’elle comprenne, sans s’y limiter:
a) l’état de santé correspondant du patient/donneur faisant l’objet du prélèvement (par exemple, sain,
type de maladie, maladie concomitante et données démographiques [par exemple, âge et sexe]);
b) les informations pertinentes concernant le traitement médical de routine et le traitement particulier
avant le prélèvement du tissu (par exemple, anesthésiques, médicaments, protocoles chirurgicaux
ou de diagnostic);
c) le consentement approprié du patient/donneur faisant l’objet du prélèvement.
5.1.3 Informations relatives au prélèvement
La documentation doit mentionner, sans toutefois s’y limiter:
a) si requis pour l’analyse, le début d’ischémie dans l’organisme (ischémie chaude) établi par
une documentation de l’heure de la ligature/du clampage du vaisseau concerné par l’ischémie
(généralement l’heure du clampage artériel);
NOTE Cela n’est pas nécessaire lorsqu’une résection biopsique de petits tissus pour la congélation est
réalisée.
b) l’heure et la date auxquelles le tissu est prélevé sur l’organisme, ainsi que la méthode de prélèvement
(par exemple, biopsie au trocart, résection, dispositif de biopsie utilisé pour le prélèvement);
c) la description du type et de l’origine du tissu, de l’état du tissu (par exemple, pathologique, exempt
de la maladie), y compris les références de tout marquage réalisé par le chirurgien, le radiologue ou
le pathologiste à l’intérieur ou à l’extérieur du bloc opératoire.
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ISO 20184-3:2021(F)
Si la congélation du tissu est réalisée hors du laboratoire, la documentation des étapes décrites en 6.2,
lorsque l’évaluation de la pathologie est requise, et en 6.3, doit être effectuée.
Il convient que la documentation comprenne l’identifiant de la personne responsable du prélèvement
des échantillons primaires, lequel peut se présenter sous la forme d’un code.
5.1.4 Traitement du prélèvement
Les tissus qui nécessitent d’être congelés à des fins de diagnostic peuvent provenir d’un prélèvement de
grande taille ou être des prélèvements de petite taille, tels que des biopsies prélevées par endoscopie
ou sur des patients au cours d’une intervention chirurgicale où un diagnostic sur une coupe rapidement
congelée est requis.
a) Tout ajout ou changement apporté à l’échantillon primaire après le prélèvement sur l’organisme
(par exemple, étiquetage pour l’orientation du prélèvement [tel que marquage à l’encre, points de
suture, incision(s)]) doit être documenté.
Lorsqu’un diagnostic pathologique est requis sur le prélèvement, l’échantillonnage doit être effectué
par un professionnel de santé (par exemple, docteur en médecine détenteur d’un certificat de
spécialiste en anatomopathologie), sous sa supervision ou conformément à ses recommandations
(voir 6.2), et il convient que le personnel ait connaissance de l’ensemble des analyses effectuées sur
le prélèvement afin d’assurer sa manipulation appropriée.
Lorsque l’échantillon primaire a été prélevé en l’absence d’une exigence de diagnostic pathologique,
l’évaluation, la sélection et la documentation des prélèvements peuvent être effectuées par d’autres
personnes qualifiées que des pathologistes.
b) La fixation au formol peut avoir un effet négatif sur les analyses basées sur l’ADN (voir l’ISO 20166-3).
Des échantillons de tissus congelés sont donc privilégiés en fonction de l’analyse spécifique.
Lorsqu’il est prévu d’analyser à la fois l’ADN et l’ARN, l’ISO
...
FINAL
INTERNATIONAL ISO/FDIS
DRAFT
STANDARD 20184-3
ISO/TC 212
Molecular in vitro diagnostic
Secretariat: ANSI
examinations — Specifications for
Voting begins on:
2021-02-11 pre-examination processes for frozen
tissue —
Voting terminates on:
2021-04-08
Part 3:
Isolated DNA
Analyses de diagnostic moléculaire in vitro — Spécifications relatives
aux processus préanalytiques pour les tissus congelés —
Partie 3: ADN extrait
ISO/CEN PARALLEL PROCESSING
RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED TO
SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS, NOTIFICATION
OF ANY RELEVANT PATENT RIGHTS OF WHICH
THEY ARE AWARE AND TO PROVIDE SUPPOR TING
DOCUMENTATION.
IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS
Reference number
BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL, TECHNO-
ISO/FDIS 20184-3:2021(E)
LOGICAL, COMMERCIAL AND USER PURPOSES,
DRAFT INTERNATIONAL STANDARDS MAY ON
OCCASION HAVE TO BE CONSIDERED IN THE
LIGHT OF THEIR POTENTIAL TO BECOME STAN-
DARDS TO WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN
©
NATIONAL REGULATIONS. ISO 2021
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/FDIS 20184-3:2021(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2021
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
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CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: +41 22 749 01 11
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Published in Switzerland
ii © ISO 2021 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO/FDIS 20184-3:2021(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 General considerations . 5
5 Outside the laboratory . 6
5.1 Specimen collection . 6
5.1.1 General. 6
5.1.2 Information about the patient/specimen donor . 6
5.1.3 Information about the specimen . 6
5.1.4 Specimen processing . 6
5.2 Fresh tissue transport requirements . 7
5.2.1 General. 7
5.2.2 Preparations for the transport . 7
5.2.3 During transport . 8
6 Inside the laboratory . 8
6.1 Information about the reception of the specimen . 8
6.2 Evaluation of the pathology of the specimen and selection of the sample(s) . 8
6.3 Freezing of the specimen or sample(s) . 9
6.4 Storage requirements .11
6.5 DNA isolation .11
6.5.1 General.11
6.5.2 Using commercial kits .12
6.5.3 Using laboratory developed protocols .12
6.6 Quantity and quality assessment of isolated DNA .12
6.7 Storage of isolated DNA .13
Bibliography .14
© ISO 2021 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO/FDIS 20184-3:2021(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 212, Clinical laboratory testing and in
vitro diagnostic test systems, in collaboration with the European Committee for Standardization (CEN)
Technical Committee CEN/TC 140, In vitro diagnostic medical devices, in accordance with the Agreement
on technical cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
A list of all parts in the ISO 20184 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
iv © ISO 2021 – All rights reserved
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ISO/FDIS 20184-3:2021(E)
Introduction
Molecular in vitro diagnostics, including molecular pathology, has enabled significant progress in
medicine. Further progress is expected with new technologies analysing nucleic acids, proteins, and
metabolites in human tissues and body fluids. However, integrity and profile of these molecules can
change during specimen collection, transport, storage, and processing. As a consequence the outcome
from diagnostics or research can become unreliable or even impossible because the subsequent
examination assay might not determine the real situation in the patient but instead, an artificial profile
which is generated during the pre-examination process.
DNA integrity in tissues can change during processing and storage. Modifications of the DNA molecules
can impact the validity and reliability of the examination test results. It is essential to take special
measures to minimize the described DNA changes and modifications for subsequent examination.
Therefore, a standardization of the entire process from specimen collection to DNA examination is
needed. Studies have been undertaken to determine the important influencing factors. This document
draws upon such work to codify and standardize the steps for frozen tissue with regard to DNA
examination in what is referred to as the pre-examination phase.
In this document, the following verbal forms are used:
— “shall” indicates a requirement;
— “should” indicates a recommendation;
— “may” indicates a permission;
— “can” indicates a possibility or a capability.
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FINAL DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/FDIS 20184-3:2021(E)
Molecular in vitro diagnostic examinations —
Specifications for pre-examination processes for frozen
tissue —
Part 3:
Isolated DNA
1 Scope
This document specifies requirements and gives recommendations for the handling, storage,
processing, and documentation of frozen tissue specimens intended for DNA examination during the
pre-examination phase before a molecular examination is performed.
This document is applicable to molecular in vitro diagnostic examinations including laboratory
developed tests performed by medical laboratories and molecular pathology laboratories that
evaluate DNA isolated from frozen tissue. It is also intended to be used by laboratory customers, in
vitro diagnostics developers and manufacturers, biobanks, institutions and commercial organizations
performing biomedical research, and regulatory authorities.
Tissues that have undergone chemical stabilization pre-treatment before freezing are not covered in
this document.
NOTE International, national, or regional regulations or requirements can also apply to specific topics
covered in this document.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 15189, Medical laboratories — Requirements for quality and competence
ISO 15190, Medical laboratories — Requirements for safety
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 15189 and the following apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
3.1
aliquot
portion of a larger amount of homogenous material, assumed to be taken with negligible sampling error
Note 1 to entry: The term is usually applied to fluids. Solid tissues are heterogeneous and therefore cannot be
aliquoted.
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ISO/FDIS 20184-3:2021(E)
[SOURCE: Compendium of Chemical Terminology Gold Book. International Union of Pure and Applied
Chemistry. Version 2.3.3., 2014; the PAC, 1990,62,1193 (Nomenclature for sampling in analytical
chemistry (Recommendations 1990)) p. 1206; and the PAC 1990, 62, 2167 (Glossary of atmospheric
chemistry terms (Recommendations 1990)) p. 2173.]
3.2
ambient temperature
unregulated temperature of the surrounding air
3.3
analyte
component represented in the name of a measurable quantity
[SOURCE: ISO 17511:2020, 3.2, modified — The example was not taken over.]
3.4
analytical test performance
accuracy, precision, and sensitivity of a test to measure the analyte (3.3) of interest
Note 1 to entry: Other test performance characteristics such as robustness, repeatability can apply as well.
3.5
biobanking
process of acquisitioning and storing, together with some or all of the activities related to collection,
preparation, preservation, testing, analysing and distributing defined biological material as well as
related information and data
[SOURCE: ISO 20387:2018, 3.6]
3.6
cold ischemia
condition after removal of the tissue from the body until its stabilization or fixation
[SOURCE: ISO 20184-2:2018, 3.5]
3.7
diagnosis
identification of a health or disease state from its signs and/or symptoms, where the diagnostic process
can involve examinations (3.10) and tests for classification of an individual's condition into separate and
distinct categories or subclasses that allow medical decisions about treatment and prognosis to be made
[SOURCE: ISO 20184-2:2018, 3.6]
3.8
DNA
deoxyribonucleic acid
polymer of deoxyribonucleotides occurring in a double-stranded (dsDNA) or single-stranded
(ssDNA) form
[SOURCE: ISO 22174:2005, 3.1.2]
3.9
DNase
deoxyribonuclease
enzyme that catalyzes the degradation of DNA (3.8) into smaller components
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.8]
2 © ISO 2021 – All rights reserved
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ISO/FDIS 20184-3:2021(E)
3.10
examination
analytical test
set of operations with the object of determining the value or characteristics of a property
Note 1 to entry: Processes that start with the isolated analyte (3.3) and include all kinds of parameter testing or
chemical manipulation for quantitative or qualitative examination.
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.7, modified — Notes to entry 1 to 3 have been removed. Note 1 to entry has
been added and “analytical test” has been added as a preferred term.]
3.11
grossing
gross examination
inspection of pathology specimens with the bare eye to obtain diagnostic information, while being
processed for further microscopic examination (3.10)
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.10]
3.12
homogeneous
uniform in structure and composition
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.11]
3.13
interfering substance
endogenous substance of a specimen (3.18)/sample (3.17) or exogenous substance (e.g. stabilization
solution) that can alter an examination (3.10) result
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.12]
3.14
pre-examination process
preanalytical phase
preanalytical workflow
process that starts in chronological order, from the clinician’s request and include the examination
(3.10) request, preparation and identification of the patient, collection of the primary sample(s) (3.18),
transportation to and within the medical or pathology laboratory, isolation of analytes (3.3), and ends
when the analytical examination (3.10) begins
Note 1 to entry: The pre-examination phase includes preparative processes that influence the outcome of the
intended examination (3.10).
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.15, modified — An additional term was added and more detail was
included.]
3.15
proficiency test
evaluation of participant performance against pre-established criteria by means of inter-laboratory
comparisons
[SOURCE: ISO/IEC 17043:2010, 3.7, modified — The term and definition are used here without the
original notes.]
3.16
room temperature
for the purpose of this document, temperature in the range of 18 °C to 25 °C
Note 1 to entry: Local or national regulations can have different definitions.
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.19]
© ISO 2021 – All rights reserved 3
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ISO/FDIS 20184-3:2021(E)
3.17
sample
one or more parts taken from a primary sample (3.19)
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.24, modified — The example was not taken over.]
3.18
specimen
primary sample
discrete portion of a body fluid, breath, hair or tissue taken for examination (3.10), study or analysis of
one or more quantities or properties assumed to apply for the whole
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.14]
3.19
stability
ability of a sample (3.17) material, when stored under specified conditions, to maintain a stated
property value within specified limits for a specified period of time
Note 1 to entry: The analyte (3.3) for the purpose of this document is DNA (3.7).
[SOURCE: ISO Guide 30:2015, 2.1.15, modified — The words “reference material” were replaced by
“sample material”.]
3.20
storage
maintenance of biological material under defined and standardized conditions for the intended use
Note 1 to entry: Long-term storage typically occurs in laboratory archives or in biobanks.
3.21
validation
confirmation, through the provision of objective evidence, that the requirements for a specific intended
use or application have been fulfilled
Note 1 to entry: The term “validated” is used to designate the corresponding status.
[SOURCE: ISO 9000:2015, 3.8.13, modified — Note 1 and Note 3 were not taken over.]
3.22
verification
confirmation, through provision of objective evidence, that specified requirements have been fulfilled
Note 1 to entry: The term “verified” is used to designate the corresponding status.
Note 2 to entry: Confirmation can comprise activities such as:
— performing alternative calculations,
— comparing a new design specification with a similar proven design specification,
— undertaking tests and demonstrations, and
— reviewing documents prior to issue.
[SOURCE: ISO 9000:2015, 3.8.12, modified — Note 1 and Note 2 to entry have been deleted; Note 3 to
entry has been renumbered as Note 1 to entry; new Note 2 to entry has been added.]
4 © ISO 2021 – All rights reserved
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ISO/FDIS 20184-3:2021(E)
3.23
warm ischemia
condition before the tissue is removed from the body, but where it is deprived of its normal blood supply
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.25]
Note 1 to entry: Disruption of normal blood supply varies significantly case by case. Therefore, warm
ischemia duration and its effects depend on individual cases and it also can depend on the anatomy of the
arterial blood supply.
3.24
workflow
series of activities necessary to complete a task
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.26 ]
4 General considerations
For general statements on medical laboratory quality management systems and in particular on
specimen collection, reception and handling (including avoidance of cross contaminations) see
ISO 15189, ISO/IEC 17025 or ISO/IEC 17020. The requirements on laboratory equipment, reagents, and
consumables according to ISO 15189 shall be followed; ISO/IEC 17025 and ISO/IEC 17020 can also apply.
All steps of the pre-examination, examination and post-examination processes (i.e. the entire
workflow) can influence the diagnosis or research study results. Thus, this entire workflow shall be
specified, verified and validated during the development of the examination. This includes specifically
all pre-examination process steps such as the examination request, preparation and identification of
the patient, collection of the primary sample(s), transport to and within the medical laboratory, storage
and isolation of analytes. Workflow steps which cannot always be controlled (e.g. warm ischemia) shall
be documented.
In contrast to RNA or proteins, DNA in tissue is relatively stable during warm and cold ischemia.
Changes of DNA sequence or copy numbers (e.g. comparative genomic hybridization (CGH) profiles)
[9]
due to longer warm and cold ischemia durations are unknown . However, DNA methylation profiles
[10]
may change in response to ischemia . The duration until the specimen is frozen should be kept as
short as possible in order to avoid enzymatic degradation of DNA. The duration before freezing shall be
[9]
documented and the temperature before freezing should be documented .
During the design and development of a DNA based examination, a risk assessment shall be performed
(see also ISO 14971). Mitigation measures for eliminating or reducing identified risks shall be
established where required for ensuring the performance of the examination.
Safety requirements on specimen transport and handling shall be considered as given in ISO 15189 and
ISO 15190. International, national, or regional regulations or requirements can also apply.
During the whole pre-examination process, precautions shall be taken to avoid cross contamination
between different specimens/samples, e.g. by using single-use material whenever feasible or
appropriate cleaning procedures between processing of different specimens/samples.
Where the examination manufacturer has specified instructions for pre-examination steps, these shall
be followed. When, for justified reasons (e.g. unmet patient needs), a commercial product is not used
in accordance to the manufacturer's instructions, responsibility for its validation, verification, use and
performance lies with the user.
For general considerations on specimen collection, transport, receipt, and handling, see ISO 20658 and
ISO 20387.
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ISO/FDIS 20184-3:2021(E)
5 Outside the laboratory
5.1 Specimen collection
5.1.1 General
Where the intended examination is known, its instructions for use including requirements for pre-
examination steps such as specimen collection shall be followed (see also Clause 6 and ISO 15189).
5.1.2 Information about the patient/specimen donor
The documentation shall include the identity of the patient/specimen donor, which can be in the form
of a code. The documentation shall be undertaken by the department collecting the specimen from the
patient and should include, but is not limited to:
a) the relevant health status of the patient/specimen donor (e.g. healthy, disease type, concomitant
disease and demographics (e.g. age and gender);
b) the relevant information about routine medical treatment and special treatment prior to tissue
collection (e.g. anaesthetics, medications, surgical or diagnostic procedures);
c) the appropriate consent from the patient/specimen donor.
5.1.3 Information about the specimen
The documentation shall include, but is not limited to:
a) if required for the examination, the start of ischemia within the body (warm ischemia) by
documentation of the ischemia-relevant vessel ligation/clamping time point (usually arterial
clamping time);
NOTE Not needed where small tissue biopsy resection for freezing is performed.
b) the time and date when tissue is removed from the body and the method of removal (e.g. core-
needle biopsy, resection, biopsy device used for the collection);
c) the description of tissue type and origin, tissue condition (e.g. diseased, unaffected by the disease),
including references to any marking applied in or outside the operating theatre made by surgeon,
radiologist or pathologist;
If the freezing of the tissue is performed outside the laboratory, the documentation steps described
under 6.2, where pathology evaluation is required, and 6.3 shall be performed.
The documentation should also include theidentity of the responsible person collecting the specimen,
this can be in the form of a code.
5.1.4 Specimen processing
Tissues that need to be frozen for diagnostic purposes can originate from a large specimen or can be
small specimens e.g. biopsies taken by endoscopy or taken from patients during a surgical procedure
where fast frozen section diagnosis is required.
a) Any additions or modifications to the specimen after removal from the body (e.g. labelling for the
orientation of the specimen (e.g. ink-marking, stitches, incision(s)) shall be documented.
Where a pathology diagnosis is required on the specimen, sampling shall be performed by or under
supervision or guidance of a medically qualified (e.g. board certified) pathologist (see 6.2) and
these personnel should be aware of all examinations for the specimen to ensure proper handling.
6 © ISO 2021 – All rights reserved
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ISO/FDIS 20184-3:2021(E)
Where the specimen was removed without the requirement of pathology diagnosis, the evaluation,
selection and documentation of specimens may be done by other qualified persons than
pathologists.
b) Formalin fixation can have a negative impact on DNA based examinations (see ISO 20166-3). Frozen
tissue samples are therefore preferred depending on the specific analytical examination. Where
both DNA and RNA are intended to be examined, see ISO 20184-1.
c) Cold ischemia can alter the DNA (e.g. methylation); therefore, the specimen/sample should be
frozen without delay, as long as not differently specified for the intended examination (see 6.3).
Freezing can be performed outside the laboratory or inside the laboratory under the direction or
supervision of a pathologist.
In case the specimen or sample is frozen outside the laboratory, proceed with 6.2 without delay.
In case the specimen or sample is frozen inside the laboratory, fresh tissue specimens need to be
transported to the laboratory. The steps described under 5.2 for fresh tissue transport shall be
performed without delay.
5.2 Fresh tissue transport requirements
5.2.1 General
Where transport of the specimen or sample to the laboratory is required for freezing, the laboratory
in partnership with the clinical or surgery department shall provide instructions for the transport
procedure of the specimen.
5.2.2 Preparations for the transport
The following steps shall be performed:
a) the selection and use of containers and packages (e.g. cooling box, box for storing and transportation,
vacuum packaging);
NOTE 1 This will be in accordance with applicable transport regulations.
b) the selection and use of stabilization procedures (e.g. cooling methods) for transport;
NOTE 2 Accidentally freezing of the fresh tissue (e.g. by using cool packs incorrectly) can lead to DNA
degradation when the tissue thaws. It can also impact the morphological characterization.
c) the labelling of the container (e.g. registration-number, barcode, specimen type, quantity, and
organ tissue of origin) and additional documentation (information as specified in 5.1.2, 5.1.3, 5.1.4,
and 5.2.2, a) to b)).
A single container may only contain several specimens if these specimens come from the same location
(i.e. similar or corresponding anatomical or histological organ parts) and have the same macroscopic
features such as tissue type and disease status (e.g. inflammation, tumour and necrosis).
NOTE 3 Specimens that have the same macroscopic features can have different molecular features.
After removal from the body, specimens should be transferred without delay into the container. The
container should then be kept on wet-ice or at 2 °C to 8 °C in order to minimize changes to the DNA (e.g.
fragmentation). Alternatively, short exposure (e.g. up to 3 hours) to room temperature can be acceptable
depending on the anticipated examination requirements. During the development of the examination,
the maximum storage duration at defined temperature ranges shall be specified and verified.
The temperatures of the collection container's surroundings during cold ischemia (e.g. temperatures in
different rooms, transport) should be documented. If the temperature is not measured, the temperature
range should be estimated by classification as ambient temperature, room temperature, or at 2 °C to 8 °C.
© ISO 2021 – All rights reserved 7
-----
...
PROJET
NORME ISO/FDIS
FINAL
INTERNATIONALE 20184-3
ISO/TC 212
Analyses de diagnostic moléculaire
Secrétariat: ANSI
in vitro — Spécifications relatives aux
Début de vote:
2021-02-11 processus préanalytiques pour les
tissus congelés —
Vote clos le:
2021-04-08
Partie 3:
ADN extrait
Molecular in vitro diagnostic examinations — Specifications for pre-
examination processes for frozen tissue —
Part 3: Isolated DNA
LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET SONT
INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS OBSER-
VATIONS, NOTIFICATION DES DROITS DE PRO-
TRAITEMENT PARALLÈLE ISO/CEN
PRIÉTÉ DONT ILS AURAIENT ÉVENTUELLEMENT
CONNAISSANCE ET À FOURNIR UNE DOCUMEN-
TATION EXPLICATIVE.
OUTRE LE FAIT D’ÊTRE EXAMINÉS POUR
ÉTABLIR S’ILS SONT ACCEPTABLES À DES FINS
INDUSTRIELLES, TECHNOLOGIQUES ET COM-
Numéro de référence
MERCIALES, AINSI QUE DU POINT DE VUE
ISO/FDIS 20184-3:2021(F)
DES UTILISATEURS, LES PROJETS DE NORMES
INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ÊTRE
CONSIDÉRÉS DU POINT DE VUE DE LEUR POSSI-
BILITÉ DE DEVENIR DES NORMES POUVANT
SERVIR DE RÉFÉRENCE DANS LA RÉGLEMENTA-
©
TION NATIONALE. ISO 2021
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ISO/FDIS 20184-3:2021(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2021
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2021 – Tous droits réservés
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ISO/FDIS 20184-3:2021(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Considérations générales . 5
5 Hors du laboratoire . 6
5.1 Recueil des prélèvements . 6
5.1.1 Généralités . 6
5.1.2 Informations relatives au patient/donneur faisant l’objet du prélèvement . 6
5.1.3 Informations relatives au prélèvement . 6
5.1.4 Traitement du prélèvement . . 7
5.2 Exigences relatives au transport de tissus frais . 7
5.2.1 Généralités . 7
5.2.2 Préparation pour le transport . 7
5.2.3 Au cours du transport . 8
6 Dans le laboratoire . 8
6.1 Informations relatives à la réception du prélèvement . 8
6.2 Évaluation de la pathologie du prélèvement et sélection de l’échantillon ou des
échantillons . 9
6.3 Congélation du prélèvement, de l’échantillon ou des échantillons .10
6.4 Exigences relatives au stockage .12
6.5 Extraction de l’ADN .12
6.5.1 Généralités .12
6.5.2 Utilisation de kits commerciaux .13
6.5.3 Utilisation des protocoles développés en laboratoire .13
6.6 Évaluation quantitative et qualitative de l’ADN extrait .14
6.7 Stockage de l’ADN extrait .14
Bibliographie .16
© ISO 2021 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO/FDIS 20184-3:2021(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/ iso/ fr/ avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le Comité technique ISO/TC 212, Laboratoires d’analyses de
biologie médicale et systèmes de diagnostic in vitro, en collaboration avec le Comité technique CEN/
TC 140, Dispositifs médicaux de diagnostic in vitro du Comité Européen de Normalisation, conformément
à l’Accord de coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Une liste de toutes les parties de la série ISO 20184 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
iv © ISO 2021 – Tous droits réservés
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ISO/FDIS 20184-3:2021(F)
Introduction
Le diagnostic moléculaire in vitro, y compris la pathologie moléculaire, a permis de faire
considérablement progresser la médecine. D’autres avancées sont attendues avec les nouvelles
technologies d’analyse des acides nucléiques, des protéines et des métabolites dans les tissus humains et
les fluides corporels. Toutefois, l’intégrité et le profil de ces molécules peuvent varier considérablement
au cours du prélèvement des échantillons primaires, du transport, du stockage et du traitement. En
conséquence, un résultat de diagnostic ou de recherche peut devenir peu fiable, voire impossible, car
l’analyse subséquente pourrait ne pas déterminer l’état réel du patient, mais plutôt un profil artificiel
qui est généré pendant le processus préanalytique.
L’intégrité de l’ADN dans les tissus peut varier pendant le traitement et le stockage. Les modifications
des molécules d’ADN peuvent avoir un impact sur la validité et la fiabilité des résultats d’analyse. Il
est essentiel de prendre des mesures particulières afin de réduire le plus possible les changements et
modifications de l’ADN décrits pour l’analyse ultérieure.
Par conséquent, une normalisation de l’ensemble du processus, allant du prélèvement des échantillons
primaires jusqu’à l’analyse de l’ADN, est nécessaire. Des études ont été réalisées afin de définir les
facteurs ayant un impact important. Le présent document se fonde sur ces travaux pour codifier et
normaliser les étapes des processus dits de la phase préanalytique pour tissus congelés au regard de
l’analyse de l’ADN.
Dans le présent document, les formes verbales suivantes sont utilisées:
— «doit» indique une exigence;
— «il convient de/que» indique une recommandation;
— «peut/il est admis/permis» indique une permission;
— «peut/il est possible» indique une possibilité ou une capacité.
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PROJET FINAL DE NORME INTERNATIONALE ISO/FDIS 20184-3:2021(F)
Analyses de diagnostic moléculaire in vitro —
Spécifications relatives aux processus préanalytiques pour
les tissus congelés —
Partie 3:
ADN extrait
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie des exigences et fournit des recommandations relatives à la manipulation,
au stockage, au traitement et à la documentation de prélèvements de tissus congelés destinés à l’analyse
de l’ADN durant la phase préanalytique précédant la réalisation d’une analyse moléculaire.
Le présent document s’applique aux analyses de diagnostic moléculaire in vitro, y compris les essais
développés en laboratoires, réalisées par les laboratoires de biologie médicale et les laboratoires de
pathologie moléculaire qui évaluent l’ADN extrait de tissus congelés. Il est également destiné à être
utilisé par les clients de laboratoires, les développeurs et fabricants de l’industrie du diagnostic in vitro,
ainsi que par les biobanques, les institutions et les organismes commerciaux spécialisés en recherche
biomédicale et les autorités réglementaires.
Le cas des tissus ayant subi un prétraitement de stabilisation chimique avant la congélation n’est pas
couvert par le présent document.
NOTE Des réglementations ou exigences internationales, nationales ou régionales peuvent également
s’appliquer à des sujets spécifiques traités dans le présent document.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 15189, Laboratoires de biologie médicale — Exigences concernant la qualité et la compétence
ISO 15190, Laboratoires de biologie médicale — Exigences pour la sécurité
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions de l’ISO 15189 ainsi que les suivants,
s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp;
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www .electropedia .org/
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ISO/FDIS 20184-3:2021(F)
3.1
aliquote
partie d’une quantité plus importante d’un matériau homogène, prélevée avec une erreur
d’échantillonnage présumée négligeable
Note 1 à l'article: Le terme s’applique généralement à des fluides. Les tissus solides sont hétérogènes et ne peuvent
donc pas être aliquotés.
[SOURCE: Compendium of Chemical Terminology Gold Book. International Union of Pure et Applied
Chemistry. Version 2.3.3, 2014; the PAC, 1990,62,1193 (Nomenclature for sampling in analytical
chemistry (Recommendations 1990)) p. 1206; et the PAC 1990, 62, 2167 (Glossary of atmospheric
chemistry terms (Recommendations 1990)) p. 2173.]
3.2
température ambiante
température non régulée de l’air environnant
3.3
analyte
composant représenté au nom d’une grandeur mesurable
[SOURCE: ISO 17511:2020, 3.2, modifiée — L’exemple n’a pas été repris.]
3.4
performance analytique
l’exactitude, la précision et la sensibilité d’un essai pour mesurer l’analyte (3.3) concerné
Note 1 à l'article: D’autres caractéristiques de performance d’essai, telles que la robustesse ou la répétabilité,
peuvent également s’appliquer.
3.5
«biobanking»mise en banque de matériel biologique
processus d’acquisition et de stockage, ainsi que tout ou partie des activités liées au prélèvement, à la
préparation, à la préservation, aux tests, à l’analyse et à la distribution de matériels biologiques définis,
y compris les informations et les données associées
[SOURCE: ISO 20387:2018, 3.6]
3.6
ischémie froide
état d’un tissu suite à son prélèvement de l’organisme jusqu’à sa stabilisation ou sa fixation
[SOURCE: ISO 20184-2:2018, 3.5]
3.7
diagnostic
identification d’un état de santé sain ou pathologique à partir de ses signes et/ou symptômes, dans
laquelle le processus de diagnostic peut impliquer des analyses (3.10) et essais pour la classification
de l’état d’un individu en catégories ou sous-classes distinctes, laquelle permet la prise de décisions
médicales concernant le traitement et le pronostic à établir
[SOURCE: ISO 20184-2:2018, 3.6]
3.8
ADN
acide désoxyribonucléique
polymère de désoxyribonucléotides se présentant sous la forme de double brin (ADNdb) ou de brin
simple (ADNsb)
[SOURCE: ISO 22174:2005, 3.1.2]
2 © ISO 2021 – Tous droits réservés
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ISO/FDIS 20184-3:2021(F)
3.9
DNase
désoxyribonucléase
enzyme catalysant la dégradation de l’ADN (3.8) en composants plus petits
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.8]
3.10
analyse
phase analytique
ensemble des opérations destinées à déterminer la valeur ou les caractéristiques d’une propriété
Note 1 à l'article: Les processus débutent avec l’analyte (3.3) extrait et comprennent toutes sortes d’essais
paramétriques ou de manipulations chimiques en vue de réaliser l’analyse quantitative ou qualitative.
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.7, modifiée — Les Notes à l’Article 1 à 3 ont été supprimées. La Note 1 à
l’article a été ajoutée, le terme a été modifié et «phase analytique» a été ajouté comme terme privilégié.]
3.11
macroscopie
analyse macroscopique
contrôle de prélèvements pathologiques à l’œil nu, au cours de leur traitement à des fins d’analyse (3.10)
microscopique ultérieure, en vue d’obtenir des informations de diagnostic
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.10]
3.12
homogène
de structure et de composition uniformes
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.11]
3.13
substance interférente
substance endogène d’un prélèvement (3.18)/échantillon (3.17) ou substance exogène (par exemple
solution de stabilisation) susceptible d’altérer le résultat d’une analyse (3.10)
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.12]
3.14
processus préanalytique
phase préanalytique
flux de travail préanalytique
processus commençant chronologiquement par la prescription des analyses par le clinicien, comprenant
la demande d’analyse (3.10), la préparation et l’identification du patient, le prélèvement de l’échantillon
primaire (3.18), son acheminement jusqu’au laboratoire et au sein du laboratoire médical ou de
pathologie, l’extraction des analytes (3.3), et finissant au début de l’analyse (3.10)
Note 1 à l'article: La phase préanalytique comprend des processus de préparation qui influencent le résultat de
l’analyse (3.10) prévue.
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.15, modifiée — Un terme supplémentaire a été ajouté et des détails
supplémentaires ont été inclus.]
3.15
essai d’aptitude
évaluation de la performance d’un participant par rapport à des critères préétablis au moyen de
comparaisons interlaboratoires
[SOURCE: ISO/IEC 17043:2010, 3.7, modifiée — Le terme et la définition sont repris ici sans les notes
d’origine.]
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3.16
température de laboratoire
pour les besoins du présent document, température dans la plage de 18 °C à 25 °C
Note 1 à l'article: Des réglementations locales ou nationales peuvent stipuler des définitions différentes.
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.19]
3.17
échantillon
une ou plusieurs parties prélevées à partir d’un échantillon primaire (3.19)
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.24, modifiée — L’exemple n’a pas été repris.]
3.18
spécimen
échantillon primaire
prélèvement
partie discrète d’un liquide corporel, d’une haleine, d’un cheveu ou d’un tissu prélevé à des fins d’analyse
(3.10), d’étude ou d’analyse d’une ou plusieurs grandeurs ou propriétés pour déterminer le caractère de
l’ensemble
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.14]
3.19
stabilité
caractéristique d’un échantillon (3.17), lorsqu’il est entreposé dans des conditions spécifiées, à
conserver une valeur de propriété spécifiée dans des limites spécifiées pendant une période de temps
spécifiée
Note 1 à l'article: L’analyte (3.3) pour les besoins du présent document est l’ADN (3.7).
[SOURCE: Guide ISO 30:2015, 2.1.15, modifié — L’expression «matériau de référence» a été remplacée
par «échantillon».]
3.20
stockage
conservation d’une matière biologique dans des conditions définies et normalisées en vue de
l’utilisation prévue
Note 1 à l'article: Le stockage à long terme a généralement lieu dans les sites d’archivage des laboratoires ou dans
les biobanques.
3.21
validation
confirmation par des preuves objectives que les exigences pour une utilisation spécifique ou une
application prévues ont été satisfaites
Note 1 à l'article: Le terme «validé» est utilisé pour désigner l’état correspondant.
[SOURCE: ISO 9000:2015, 3.8.13, modifiée — Les Notes 1 et 3 n’ont pas été reprises.]
3.22
vérification
confirmation par des preuves objectives que les exigences spécifiées ont été satisfaites
Note 1 à l'article: Le terme «vérifié» est utilisé pour désigner l’état correspondant.
Note 2 à l'article: La confirmation peut couvrir des activités telles que:
— la réalisation d’autres calculs;
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— la comparaison d’une spécification de conception nouvelle avec une spécification de conception similaire
éprouvée;
— la réalisation d’essais et de démonstrations;
— la revue de documents avant diffusion.
[SOURCE: ISO 9000:2015, 3.8.12, modifiée — La Note 1 et la Note 2 à l’article ont été supprimées; la
Note 3 à l’article a été renumérotée en tant que Note 1 à l’article; une nouvelle Note 2 à l’article a été
ajoutée.]
3.23
ischémie chaude
situation avant que le tissu soit prélevé de l’organisme, mais dans laquelle il est privé de son apport
sanguin normal
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.25]
Note 1 à l'article: La perturbation de l’apport sanguin normal varie significativement d’un cas à un autre. Par
conséquent, la durée de l’ischémie chaude et ses effets dépendent des cas individuels et peuvent également
dépendre de l’anatomie artérielle.
3.24
flux de travail
série d’activités nécessaires à la réalisation d’une tâche
[SOURCE: ISO 20184-1:2018, 3.26]
4 Considérations générales
Pour les instructions générales relatives aux systèmes de management de la qualité de laboratoire
de biologie médicale et portant en particulier sur le prélèvement, la réception et la manipulation
d’échantillons primaires (y compris la prévention des contaminations croisées), voir l’ISO 15189,
l’ISO/IEC 17025 ou l’ISO/IEC 17020. Les exigences relatives aux équipements de laboratoire, aux
réactifs et aux consommables conformément à l’ISO 15189 doivent être respectées; l’ISO/IEC 17025 et
l’ISO/IEC 17020 peuvent également s’appliquer.
Toutes les étapes des processus préanalytiques, analytiques et postanalytiques (c’est-à-dire le flux
de travail complet) peuvent influencer le diagnostic ou les résultats de l’étude de recherche. Par
conséquent, ce flux de travail complet doit être spécifié, vérifié et validé au cours du développement
de l’analyse. Cela comprend notamment toutes les étapes du processus préanalytique telles que la
demande d’analyse, la préparation et l’identification du patient, le prélèvement de l’échantillon ou des
échantillons primaires, leur acheminement jusqu’au laboratoire de biologie médicale et au sein du
laboratoire de biologie médicale, le stockage et l’extraction des analytes. Les étapes du flux de travail
qui ne peuvent pas toujours être contrôlées (par exemple, l’ischémie chaude) doivent être documentées.
Contrairement à l’ARN ou aux protéines, l’ADN dans le tissu est relativement stable durant les ischémies
chaude et froide. Les modifications de l’ADN, des séquences et des nombres de copies (par exemple,
profils d’hybridation génomique comparative [CGH]) dues à de longues durées d’ischémies froide et
[9]
chaude sont inconnues . Cependant, les profils de méthylation de l’ADN peuvent varier en réponse à
[10]
l’ischémie . Il convient d’écourter autant que possible le délai jusqu’à la congélation du prélèvement
afin d’éviter une dégradation enzymatique de l’ADN. La durée avant la congélation doit être consignée
[9]
et il convient de documenter la température avant la congélation .
Au cours de la conception et du développement d’une analyse basée sur l’ADN, une appréciation du
risque doit être effectuée (voir également l’ISO 14971). Des mesures d’atténuation visant à réduire ou
éliminer les risques identifiés doivent être prises, le cas échéant, afin de garantir les performances de
l’analyse.
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ISO/FDIS 20184-3:2021(F)
Les exigences en matière de sécurité pour le transport et la manipulation du prélèvement doivent
être prises en considération comme indiqué dans l’ISO 15189 et l’ISO 15190. Des réglementations ou
exigences internationales, nationales ou régionales peuvent également s’appliquer.
Des précautions doivent être prises au cours de l’ensemble du processus préanalytique afin d’éviter
toute contamination croisée entre les différents prélèvements/échantillons, par exemple en utilisant,
dans la mesure du possible, du matériel à usage unique ou en mettant en place des méthodes de
nettoyage appropriées entre les traitements des différents prélèvements/échantillons.
Lorsque le fabricant du kit d’analyse spécifie des instructions pour les étapes préanalytiques, celles-ci
doivent être respectées. Si, pour des raisons justifiées (besoins de patients non satisfaits, par exemple),
un produit commercial n’est pas utilisé selon les instructions du fabricant, la responsabilité de sa
validation, de sa vérification, de son utilisation et de sa performance incombe à l’utilisateur.
Pour les considérations générales, relatives au prélèvement, au transport, à la réception et à la
manipulation des échantillons primaires, voir l’ISO 20658 et l’ISO 20387.
5 Hors du laboratoire
5.1 Recueil des prélèvements
5.1.1 Généralités
Lorsque l’analyse prévue est connue, les instructions correspondantes, notamment les exigences
concernant les phases préanalytiques, comme le prélèvement des échantillons, doivent être suivies
(voir également l’Article 6 et l’ISO 15189).
5.1.2 Informations relatives au patient/donneur faisant l’objet du prélèvement
La documentation doit inclure l’identifiant du patient/donneur faisant l’objet du prélèvement, lequel
peut se présenter sous la forme d’un code. La documentation doit être réalisée par le service prélevant
les échantillons du patient et il convient qu’elle comprenne, sans s’y limiter:
a) l’état de santé correspondant du patient/donneur faisant l’objet du prélèvement (par exemple, sain,
type de maladie, maladie concomitante et données démographiques [par exemple, âge et sexe]);
b) les informations pertinentes concernant le traitement médical de routine et le traitement particulier
avant le prélèvement du tissu (par exemple, anesthésiques, médicaments, protocoles chirurgicaux
ou de diagnostic);
c) le consentement approprié du patient/donneur faisant l’objet du prélèvement.
5.1.3 Informations relatives au prélèvement
La documentation doit mentionner, sans toutefois s’y limiter:
a) si requis pour l’analyse, le début d’ischémie dans l’organisme (ischémie chaude) établi par
une documentation de l’heure de la ligature/du clampage du vaisseau concerné par l’ischémie
(généralement l’heure du clampage artériel);
NOTE Cela n’est pas nécessaire lorsqu’une résection biopsique de petits tissus pour la congélation est
réalisée.
b) l’heure et la date auxquelles le tissu est prélevé sur l’organisme, ainsi que la méthode de prélèvement
(par exemple, biopsie au trocart, résection, dispositif de biopsie utilisé pour le prélèvement);
c) la description du type et de l’origine du tissu, de l’état du tissu (par exemple, pathologique, exempt
de la maladie), y compris les références de tout marquage réalisé par le chirurgien, le radiologue ou
le pathologiste à l’intérieur ou à l’extérieur du bloc opératoire.
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ISO/FDIS 20184-3:2021(F)
Si la congélation du tissu est réalisée hors du laboratoire, la documentation des étapes décrites en 6.2,
lorsque l’évaluation de la pathologie est requise, et en 6.3, doit être effectuée.
Il convient que la documentation comprenne l’identifiant de la personne responsable du prélèvement
des échantillons primaires, lequel peut se présenter sous la forme d’un code.
5.1.4 Traitement du prélèvement
Les tissus qui nécessitent d’être congelés à des fins de diagnostic peuvent provenir d’un prélèvement de
grande taille ou être des prélèvements de petite taille, tels que des biopsies prélevées par endoscopie
ou sur des patients au cours d’une intervention chirurgicale où un diagnostic sur une coupe rapidement
congelée est requis.
a) Tout ajout ou changement apporté à l’échantillon primaire après le prélèvement sur l’organisme
(par exemple, étiquetage pour l’orientation du prélèvement [tel que marquage à l’encre, points de
suture, incision(s)]) doit être documenté.
Lorsqu’un diagnostic pathologique est requis sur le prélèvement, l’échantillonnage doit être effectué
par un professionnel de santé (par exemple, docteur en médecine détenteur d’un certifi
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.