ISO 5542:1984
(Main)Milk — Determination of protein content — Amido black dye-binding method (Routine method)
Milk — Determination of protein content — Amido black dye-binding method (Routine method)
Is applicable to raw or thermally or mechanically processed whole milk, partly skimmed and skimmed milk provided that the samples are in good condition. In some cases it can also be applied to preserved samples. The principle of determination consists in adding amido black solution to a test portion resulting in the formation of an insoluble dye-protein complex which is removed by centrifuging or filtration, followed by determination of the protein content from the absorbance of the resulting solution containing an excess of dye.
Lait — Détermination de la teneur en protéines — Méthode au noir amido (Méthode pratique)
1.1 La présente Norme internationale spécifie une méthode pratique utilisant le noir amido pour la détermination de la teneur en protéines du lait. La composition du colorant au noir amido pouvant varier, la méthode décrite est empirique et dépend d'une référence constante à la teneur en protéines déduite de la détermination de la teneur en azote du lait par la méthode de référence selon Kjeldahl (par exemple, telle que décrite dans la Norme FIL 20). 1.2 La méthode est applicable au lait cru ou ayant subi un traitement thermique ou mécanique (par exemple pasteurisé, stérilisé, homogénéisé, reconstitué) entier, partiellement écrémé ou écrémé, pour autant que les échantillons soient en bon état. Sous certaines conditions, les échantillons additionnés de conservateur peuvent également être analysés par cette méthode (voir 10.1). La méthode permet une détermination rapide et simple de la teneur en protéines du lait et elle est valable pour une seule détermination ou pour des dé
General Information
Buy Standard
Standards Content (Sample)
International Standard
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATlON.MElKKP(YHAPO~HAR OPTAHM3AUMR fl0 CTAHAAPTM3ALWl~ORGANlSATiON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
- Determination of protein content - Amido black
Milk
dye-binding method (Routine method)
- Mthode au noir amido ftWthode pratique)
Lait - D&termination de la teneur en protknes
First edition - 1984-06-01
Ref. No. IS0 5542-1984 (E)
UDC 637.12 : 543.865
agricultural products, dairy products, milk, chemical analysis, determination of content, proteins.
Descriptors :
Price based on 5 pages
---------------------- Page: 1 ----------------------
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies). The work of developing International
Standards is carried out through IS0 technical committees. Every member body
interested in a subject for which a technical committee has been authorized has the
right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council.
lnternationa I Standard IS0 5542 was developed by Technical Committee ISO/ TC 34,
Agricultural food products, and was circulated to the member bodies in April 1983.
It has been approved by the member bodies of the following countries :
Australia
Iran South Africa, Rep. of
Austria Iraq Spain
Belgium
Korea, Dem. P. Rep. of Sri Lanka
Canada Malaysia Tanzania
Cuba
Netherlands Thailand
Czechoslovakia New Zealand Turkey
Egypt, Arab Rep. of Philippines United Kingdom
France Poland USSR
Germany, F. R. Portugal Yugoslavia
Hungary Romania
No member body expressed disapproval of the document.
NOTE - The method specified in this International Standard has been developed jointly with the
International Dairy Federation (IDF) and the Association of Official Analytical Chemists (AOAC)
and will also be published by these organizations.
0 International Organization for Standardization, 1984
Printed in Switzerland
---------------------- Page: 2 ----------------------
IS0 55424984 (E)
INTERNATIONAL STANDARD
Milk
- Determination of protein content - Amido black
dye-binding method (Routine method)
1 Scope and field of application IDF Standard 20 : Determination of the nitrogen content of
milk by the Kjeldahl method.
1 .I This International Standard describes the amido black
dye-binding method, used as a routine method, for the deter-
3 Definition
mination of the protein content of milk.
As the composition of the amido black dyestuff is variable, the protein content : A conventional value obtained by multiply-
method described is empirical and depends upon constant ing the nitrogen content, expressed as a percentage by mass,
reference to the protein content derived from determination of determined in accordance with the Kjeldahl reference method
(for example, as described in IDF Standard 201, by an ap-
the nitrogen content of milk by the Kjeldahl reference method
(for example, as described in IDF Standard 20). propriate factor.
NOTE - Care should be taken to distinguish the “protein content” of
1.2 The method is applicable to raw or thermally or
milk as defined above from the “true protein content” which excludes
mechanically processed (for example pasteurized, sterilized,
the non-protein nitrogen (NPN) fraction of milk.
homogenized, reconstituted) whole milk, partially skimmed
milk and skimmed milk, provided that the samples are in good
condition. The method is also applicable, in some cases, to
preserved samples (see 10.1). 4 Principle
The method allows a rapid and simple determination of the pro-
Addition of amido black solution, buffered at pH 2,4, to a test
tein content of milk to be made and is suitable for a single portion, resulting in the formation of an insoluble dye-protein
determination or for determinations on small numbers of
complex. Removal of the insoluble complex by centrifuging (or
samples and for series of multiple determinations. For deter-
filtration), and determination of the protein content from the
minations in series, special apparatus (i.e. multiple pipetting ap-
absorbance of the resulting solution containing an excess of
paratus, centrifuges for racks) is required (see 6.4 and 6.71, and dye.
frequent checking of control samples for correction of “drift” is
required (see 8.6.2). In view of the time-consuming method of
calibration, laboratories which make only a few determinations
5 Reagents
on certain types of samples often have recourse to central
laboratories for dye solutions and control samples.
All reagents shall be of recognized analytical grade unless
otherwise stated. The water used shall be distilled water or
NOTE - According to the origin of the sample and the reference
water of at least equivalent purity.
method used, the method described in this International Standard may
be used not only for the usual determination of the protein content
of milk (i.e. total nitrogen x 6,381, but also for the determination of
NOTE
- Calcium ions interfere with the determination.
the “true protein” content, or with modifications, the casein or whey
protein content of cow ’s milk and milk from other species (goat,
5.1 Amido black IOB dyestuff (acid black 1, Cl 2047OW for
sheep, etc. ).
milk testing, having a moisture content #of less than 5 %
(m/m), or a further purified product.
2 References
NOTE - The dyestuff is hygroscopic and should be protected from
IS0 707, Milk and milk products - Methods of sampling. moisture uptake.
1) Suitable material is available commercially. Details may be obtained from the Secretariat of lSO/TC 34 (MSZH, Hungary) or from IS0 Central
Secretariat.
1
---------------------- Page: 3 ----------------------
IS0 55424984 (E)
NOTE - As the concentration of amido black may vary from batch to
5.2 Standard amido black solution.
batch, it is necessary that, for each new batch, the concentration be
adjusted to that of the primary standard as prepared in 5.21, in order
Prepare a standard solution according to one of the following
that the absorbances of the standard matching solutions prepared in
res.
procedu
5.32 and 5.3.3 will be the same as those obtained during calibration
(see 8.5).
5.2.1 Primary sta ndard, for preparing standard reference
solutio ins.
5.2.3 Standard solution, for routine determinations in
series.
Introduce into a 1 000 ml volumetric flask containing about
600 ml of water :
Completely dissolve, by mechanical agitation for 2 h, in a vessel
with a mark (marks) for (an) accurate multiple(s) of 1 000 ml,
purified prepara-
0,900 g of a amid 0 black 10B dyestuff
the corresponding multiple quantities of the chemicals
tion with a high dye con tent;
specified in 5.2.2 in a quantity of water which reaches
somewhat below the appropriate mark. Adjust the pH to
- 2,08 g of disodium hydrogenorthophosphate dihydrate
2,40 + OJO as described in 5.2.1. Dilute to the mark and stir
(Na,HP0,.2H,O);
for another 15 min. Allow to stand overnight.
- 15,8 g of citric acid monohydrate (C,H& H@
Prepare, from this primary solution, the standard matching
solutions specified in 5.3.2 and 5.3.3 and determine their absor-
Dissolve by mechanical agitation for 2 h. Using a pH meter
bances relative to distilled water as described in 5.2.1. Dilute
(6.8) check the pH, which shall be 2,40 Ifi 0,lO at 20 OC; if
this primary solution with the calculated quantity of citrate buf-
necessary, adjust the pH by the addition of sulfuric acid solu-
fer solution (5.2.4) to obtain the standard solution which yields
tion or sodium hydroxide solution. Dilute to the mark with
standard matching solutions with the same absorbance as
water and shake for 15 min.
those obtained from the primary standard (5.2.1).
Allow the solution to stand overnight before use. If the solution
Preserve as described in 5.2.1 and allow to stand overnight.
is to be used over several days, preserve it by adding 0,l ml of a
5 % solution of thymol in 94 to 97 % (I/l V) ethanol.
See the note to 5.2.2.
From this primary standard, prepare standard matching solu-
A final check and adjustment of the concentration should be
tions as described in 5.3.2 and 5.3.3. Determine the absorbance
made using a control sample of milk taken from a large bulk
relative to distilled water at a standard wavelength in a standard
(see 8.6) for which the protein content has been determined by
cell.
the Kjeldahl reference method (IDF Standard 20).
5.2.2 Standard solution, for routine determinations in
5.2.4 Buffer solution, for dilution.
limited numbers.
Introduce into a 1 000 ml volumetric flask containing about
Completely dissolve in a beaker :
600 ml of water :
- 0,90 to 0,95 g (depending on the dyestuff content) of
- 2,08 g of disodium hydrogenorthosphosphate
the amido black 10B dyestuff (5.11,
dihydrate (NazHPOdm2H20);
-
- 2,08 g of disodium hydrogenorthophosphate dihydrate 15,8 g of citric acid monohydrate K&l~O~m H,O).
(Na,HPO,~2H,O),
Dissolve by agitation and dilute to the mark with water.
- 15,8 g of citric acid monohydrate (C,H,O,~H,O),
Multiple quantities of these
chemicals and water may be taken
in 100 to 200 ml of water at 70 to 80 OC, or double or triple as required.
quantities of these chemicals and water.
Any dilution required shall be carried out with this buffer solu-
Cool and transfer to a 1 000, 2 000 or 3 000 ml volumetric flask, tion.
dilute to about 600, 1 200 or 1 800 ml, respectively, and mix.
Adjust the pH to 2,40 + OJO at 20 OC as described in 5.2.1.
5.3 Amido black, standard matching solutions.
Dilute to the mark and shake for 15 min. Allow to stand over-
night.
Prepare dilutions (standard matching solutions) of the standard
amido black solution (5.2) as follows.
Prepare, from this primary solution, the standard matching
solutions specified in 5.3.2 and 5.3.3 and determine their absor-
5.3.1 Mix 10 volumes of the standard amido black solution
bances relative to distilled water as described in 5.2.1. Dilute
with 90 volumes of water by pipetting 10 ml into a 100 ml one-
this primary solution with the calculated quantity of citrate buf-
mark volumetric flask and diluting to the mark.
fer solution (5.2.4) to obtain the standard solution which yields
standard matching solutions with the same absorbance as
NOTE - This solution is used instead of water to establish the zero
those obtained from the primary standard (5.2.1).
scale reading of the spectrometer (6.61, so that scale expansion is ob-
tained and the part of the logarithmic scale where divisions are wider
may be used.
Preserve as described in 5.2.1 and allow to stand overnight.
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
IS0 55424984 (E)
This acceleration is produced by centrifuges having effective
5.3.2 Mix 50 volumes of the standard amido black solution
radii (horizontal distances between the centre of the centrifuge
with 50 volumes of water by pipetting 50 ml into a 100 ml one-
spindle and the lower end of the test-tube) and operating at the
...
Norme internationale
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATIONoMEXflYHAPOAHAR OPI-AHM3ALWlR Il0 CTAH~APTM3ALWlM.ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Lait - Détermination de la teneur en protéines -
Méthode au noir amido (Méthode pratique)
Mk - Determination of protein content - Amido black dye-binding method (Routine methodl
Première édition - 1984-06-01
CDU 637.12: 543.865 Réf. no : ISO 5542-1984 (F)
î
Descripteurs : produit agricole, produit laitier, lait, analyse chimique, dosage, protéine.
Prix basé sur 5 pages
---------------------- Page: 1 ----------------------
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
correspondant. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO.
La Norme internationale ISO 5542 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires, et a été soumise aux comités membres en avril 1983.
Les comités membres des pays suivants l’ont approuvée :
Afrique du Sud, Rép. d’
France Roumanie
Allemagne, R. F.
Hongrie Royaume-Uni
Australie Iran Sri Lanka
Autriche
Iraq Tanzanie
Belgique Malaisie Tchécoslovaquie
Canada Nouvelle-Zélande Thaïlande
Corée, Rép. dém. p. de Pays- Bas Turquie
Cuba Philippines URSS
Égypte, Rép. arabe d’ Yougoslavie
Pologne
Espagne Portugal
Aucun comité membre ne l’a désapprouvée.
NOTE - La méthode spécifiée dans la présente Norme internationale a été élaborée conjointe-
ment avec la FIL (Fédération internationale de laiterie) et I’AOAC (Association des chimistes
analytiques officiels), et sera également publiée par ces organisations.
0 Organisation internationale de normalisation, 1984
Imprimé en Suisse
---------------------- Page: 2 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 5542-1984 (F)
Lait - Détermination de la teneur en protéines -
Méthode au noir amido (Méthode pratique)
1 Objet et domaine d’application 2 Références
ISO 707, Lait et produits laitiers - Méthodes d’échantillon-
1 .l La présente Norme internationale spécifie une méthode
nage.
pratique utilisant le noir amido pour la détermination de la
teneur en protéines du lait.
Norme FIL 20, Détermination de la teneur du lait en matière
azotée par la méthode de Kjeldahl.
La composition du colorant au noir amido pouvant varier, la
méthode décrite est empirique et dépend d’une référence cons-
3 Définition
tante à la teneur en protéines déduite de la détermination de la
teneur en azote du lait par la méthode de référence selon Kjel-
: Valeur conventionnelle obtenue en mul-
teneur en protéines
dahl (par exemple, telle que décrite dans la Norme FIL 20).
tipliant par un facteur approprié la teneur en azote total,
exprimé en pourcentage en masse, et déterminée en utilisant la
méthode de référence selon Kjeldahl (par exemple, telle que
1.2 La méthode est applicable au lait cru ou ayant subi un
décrite dans la Norme FIL 20).
traitement thermique ou mécanique (par exemple pasteurisé,
stérilisé, homogénéisé, reconstitué) entier,
partiellement NOTE - II convient d’établir une distinction entre la «teneur en protéi-
écrémé ou écrémé, pour autant que les échantillons soient en nes» du lait, définie ci-dessus, et la «teneur en protéines vraies» qui ne
tient pas compte de la matière azotée non protéique du lait (ANP).
bon état. Sous certaines conditions, les échantillons addition-
nés de conservateur peuvent également être analysés par cette
méthode (voir 10.1).
4 Principe
La méthode permet une détermination rapide et simple de la
Addition d’une solution de noir amido, tamponnée à un pH de
teneur en protéines du lait et elle est valable pour une seule
2,4, à une prise d’essai, ce qui conduit à la formation d’un com-
détermination ou pour des déterminations sur un petit nombre
plexe insoluble colorant-protéines. Élimination du complexe
d’échantillons, ainsi que pour des déterminations en série. Pour
insoluble par centrifugation (ou filtration) et détermination de la
les déterminations en série, un appareillage spécial (à savoir un
teneur en protéines à partir de I’absorbance de la solution résul-
appareillage pour pipettes en série, centrifugeurs) (voir 6.4 et
tante contenant un excès de colorant.
6.7), ainsi que de fréquentes vérifications des échantillons de
contrôle en vue de corriger la «direction» (voir 8.6.2) sont
nécessaires. En raison du temps nécessaire pour les méthodes
5 Réactifs
d’étalonnage, les laboratoires qui effectuent seulement un petit
nombre de déterminations sur certains types d’échantillons ont
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique reconnue,
souvent recours à des laboratoires centraux pour les solutions
sauf s’il est précisé autrement. L’eau utilisée doit être de l’eau
de colorants et les échantillons de contrôle.
distillée ou de l’eau de pureté au moins équivalente.
NOTE - Les ions calcium interfèrent dans la détermination.
NOTE - Selon l’origine de l’échantillon et la méthode de référence uti-
lisée, la méthode décrite dans la présente Norme internationale peut
5.1 colorant noir amido 10B (noir acide 1, Cl 2047O)l) pour
être utilisée non seulement pour la détermination habituelle de la teneur
l’analyse du lait ayant une teneur en eau inférieure à 5 %
en protéines du lait (c’est-à-dire matière azotée totale x 6,381, mais
également pour la détermination de la teneur en «protéines vraies» et
(mlrn), ou un produit purifié ultérieurement.
même, dans une version modifiée, pour la détermination de la teneur
en caséine ou en protéines du sérum, tant du lait de vache que du lait NOTE - Ce colorant est hygroscopique et doit être protégé contre une
d’autres espèces animales (chèvre, brebis, etc.). reprise éventuelle d’humidité.
1) Le produit approprié est disponible dans le commerce. Des détails peuvent être obtenus auprès du Secrétariat de I’ISO/TC 34 (MSZH, Hongrie)
ou du Secrétariat central de I’ISO.
---------------------- Page: 3 ----------------------
SO 55424984 (FI
5.2 Noir amido, solution étalon. Diluer cette solution primaire avec la quantité calculée de solu-
tion tampon de citrate (5.2.4) afin d’obtenir la solution étalon
Préparer une solution étalon selon un des modes opératoires donnant des solutions témoins ayant la même absorbante que
suivants. celles obtenues à partir de l’étalon primaire (52.1).
Conserver comme décrit en 5.2.1 et laisser reposer une nuit.
5.2.1 Étalon primai re, en vue de la p réparation des solutions
étalons de référence.
NOTE - La concentration du noir amido pouvant varier d’une livraison
à l’autre, il est nécessaire d’adapter la concentration pour chaque livrai-
Introdu ire dans une fiole jaugée de 1 000 ml contenant environ
son nouvelle à celle de l’étalon primaire tel que préparé en 5.2.1, afin
600 ml d’eau :
que les absorbantes des solutions témoins préparées en 5.3.2 et 5.3.3
soient les mêmes que celles obtenues au cours de l’étalonnage (voir
8.5).
900 g d’une réparati on purifiée de col orant noir
- 0’
10B a yant un teneur élevée en colorant;
amido
5.2.3 Solution étalon, pour des déterminations de routine en
- 2’08 g d’hydrogéno-orthophosphate disodique dihy-
série.
draté (Na,HP0,.2H,O);
Dissoudre complètement, au moyen d’une agitation mécanique
-
15,8 g d’acide citrique monohydraté pendant 2 h, dans un récipient muni d’un trait repère d’un mul-
(C,H,O,Ji,O). tiple déterminé de 1 000 ml, les quantités multiples correspon-
dantes des produits chimiques spécifiés en 5.2.2, dans une
Dissoudre par agitation mécanique pendant 2 h. Au moyen
quantité d’eau légèrement inférieure à la hauteur du trait repère
d’un pH-mètre (6.81, contrôler le pH qui doit se situer dans les
approprié. Ajuster le pH à 2,40 + O,lO, comme décrit en 5.2.1.
limites de 2,40 + 0,lO à 20 OC; l’ajuster, si nécessaire, par
Compléter au trait repère et agiter encore pendant 15 min. Lais-
l’adjonction de solution d’acide sulfurique ou de solution
ser reposer une nuit.
d’hydroxyde de sodium. Compléter au trait repère et agiter
encore pendant 15 min.
À partir de la solution primaire, préparer les solutions témoins
spécifiées en 5.3.2 et 5.3.3 et déterminer leur absorbante par
Laisser reposer la solution une nuit avant de l’utiliser. Si la solu-
rapport à l’eau distillée, comme décrit en 5.2.1. Diluer cette
tion doit servir pendant plusieurs jours, en assurer la conserva-
solution primaire avec la quantité calculée de solution tampon
tion en ajoutant 0,l ml d’une solution de thymol à 5 % dans
de citrate (5.2.4) afin d’obtenir la solution étalon donnant des
I’éthanol à 94-97 % WV).
solutions témoins ayant la même absorbante que celles obte-
nues à partir de l’étalon primaire (5.2.1).
À partir de cet étalon primaire, préparer les solutions témoins
comme décrit en 5.3.2 et 5.3.3. Déterminer leur absorbante par
Conserver comme décrit en 5.2.1 et laisser reposer une nuit.
rapport à l’eau distillée à une longueur d’onde normalisée dans
une cellule normalisée.
Voir la note en 5.2.2.
II convient de procéder à une ultime vérification et à un dernier
5.2. 2 Solution étalon, pour des déterminations de routine
ajustement de la concentration au moyen d’un échantillon de
nombreuses
Peu
contrôle prélevé dans une quantité de lait (voir 8.6) dont la
teneur en protéines a été déterminée par la méthode de réfé-
Dissoudre complètement dans un bécher :
rence selon Kjeldahl (Norme FIL 20).
-
0’90 à 0,95 g (selon la teneur en colorant) de colorant
noir amido 10B (5.1)’
52.4 Solution tampon, pour dilution.
- 2’08 g d’hydrogéno-orthophosphate .disodique dihy-
Introduire dans une fiole jaugée de 1 000 ml contenant environ
draté (Na2HP0,*2 H,O),
600 ml d’eau :
- 15,8 g d’acide citrique monohydraté (C,H,O,.H,O),
- 2,08 g d’hydrogéno-orthophosphate disodique dihy-
draté (Na,HP0,.2H,O);
dans 100 à 200 ml d’eau à 70 à 80 OC, ou des quantités double
ou triple de ces produits chimiques et d’eau.
- 15,8 g d’acide citrique monohydraté (CsH,07*H20).
Refroidir et transvaser dans des fioles jaugées de 1 000, 2 000
ou 3 000 ml, compléter à environ 600, 1 200 ou 1 800 ml, res- Dissoud re par agitation et compléter au trait repère avec
pectivement, et homogénéiser. Ajuster le pH à 2,40 + 0’10 à l’eau.
20 OC comme décrit en 5.2.1. Compléter au trait repère et agiter
pendant 15 min. Laisser reposer une nuit. Des quan tités mul tiples de ces p chimiques et d’eau peu-
vent être utilisées si nécessaire.
À partir de cette solution primaire, préparer les solutions
témoins spécifiées en 5.3.2 et 5.3.3, et déterminer leur absor- II y a lieu d’effectuer toute dil ution nécessaire au moyen
bance par rapport à l’eau distillée, comme décrit en 5.2.1. cette solution tampon.
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 5542-1984 (F)
5.3 Noir amido, solutions témoins. 6.5 Agitateur mécanique ou mélangeur rotatif ou appa-
reil de mélange à air comprimé, si nécessaire.
Préparer comme suit les dilutions (solutions témoins) de la solu-
tion étalon de noir amido (5.2).
6.6 Spectromètre, permettant d’opérer dans des longueurs
d’onde de 550 à 620 nm, muni de cuves (de préférence à flux
5.3.1 Mélanger 10 volumes de la solution étalon de noir continu) de 0,2 à 1,0 mm de parcours optique.
amido avec 90 volumes d’eau, en introduisant à la pipette 10 ml
NOTE - II n’est pas nécessaire d’opérer à la longueur d’onde corres-
dans une fiole jaugée de 100 ml et en complétant au trait
pondant exactement à la sensibilité maximale étant donné qu’il s’avère
repère.
en pratique que les déviations peuvent être compensées par étalon-
nage (voir 8.4).
NOTE - Cette solution est utilisée au lieu d’eau, pour régler le spec-
tromètre (6.6) au zéro de l’échelle; on peut de la sorte utiliser la partie
de l’échelle loragithmique où les divisions sont plus larges. 6.7 Centrifugeuse ou appareil de filtration.
6.7.1 Centrifugeuse, à porte-tubes oscillants, capable
5.3.2 Mélanger 50 volumes de la solution étalon de noir
d’atteindre, dans les 2 min, une accélération dè (350 It: 50) g à
amido avec 50 volumes d’eau, en introduisant à la
...
Norme internationale
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATIONoMEXflYHAPOAHAR OPI-AHM3ALWlR Il0 CTAH~APTM3ALWlM.ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Lait - Détermination de la teneur en protéines -
Méthode au noir amido (Méthode pratique)
Mk - Determination of protein content - Amido black dye-binding method (Routine methodl
Première édition - 1984-06-01
CDU 637.12: 543.865 Réf. no : ISO 5542-1984 (F)
î
Descripteurs : produit agricole, produit laitier, lait, analyse chimique, dosage, protéine.
Prix basé sur 5 pages
---------------------- Page: 1 ----------------------
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
correspondant. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO.
La Norme internationale ISO 5542 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires, et a été soumise aux comités membres en avril 1983.
Les comités membres des pays suivants l’ont approuvée :
Afrique du Sud, Rép. d’
France Roumanie
Allemagne, R. F.
Hongrie Royaume-Uni
Australie Iran Sri Lanka
Autriche
Iraq Tanzanie
Belgique Malaisie Tchécoslovaquie
Canada Nouvelle-Zélande Thaïlande
Corée, Rép. dém. p. de Pays- Bas Turquie
Cuba Philippines URSS
Égypte, Rép. arabe d’ Yougoslavie
Pologne
Espagne Portugal
Aucun comité membre ne l’a désapprouvée.
NOTE - La méthode spécifiée dans la présente Norme internationale a été élaborée conjointe-
ment avec la FIL (Fédération internationale de laiterie) et I’AOAC (Association des chimistes
analytiques officiels), et sera également publiée par ces organisations.
0 Organisation internationale de normalisation, 1984
Imprimé en Suisse
---------------------- Page: 2 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 5542-1984 (F)
Lait - Détermination de la teneur en protéines -
Méthode au noir amido (Méthode pratique)
1 Objet et domaine d’application 2 Références
ISO 707, Lait et produits laitiers - Méthodes d’échantillon-
1 .l La présente Norme internationale spécifie une méthode
nage.
pratique utilisant le noir amido pour la détermination de la
teneur en protéines du lait.
Norme FIL 20, Détermination de la teneur du lait en matière
azotée par la méthode de Kjeldahl.
La composition du colorant au noir amido pouvant varier, la
méthode décrite est empirique et dépend d’une référence cons-
3 Définition
tante à la teneur en protéines déduite de la détermination de la
teneur en azote du lait par la méthode de référence selon Kjel-
: Valeur conventionnelle obtenue en mul-
teneur en protéines
dahl (par exemple, telle que décrite dans la Norme FIL 20).
tipliant par un facteur approprié la teneur en azote total,
exprimé en pourcentage en masse, et déterminée en utilisant la
méthode de référence selon Kjeldahl (par exemple, telle que
1.2 La méthode est applicable au lait cru ou ayant subi un
décrite dans la Norme FIL 20).
traitement thermique ou mécanique (par exemple pasteurisé,
stérilisé, homogénéisé, reconstitué) entier,
partiellement NOTE - II convient d’établir une distinction entre la «teneur en protéi-
écrémé ou écrémé, pour autant que les échantillons soient en nes» du lait, définie ci-dessus, et la «teneur en protéines vraies» qui ne
tient pas compte de la matière azotée non protéique du lait (ANP).
bon état. Sous certaines conditions, les échantillons addition-
nés de conservateur peuvent également être analysés par cette
méthode (voir 10.1).
4 Principe
La méthode permet une détermination rapide et simple de la
Addition d’une solution de noir amido, tamponnée à un pH de
teneur en protéines du lait et elle est valable pour une seule
2,4, à une prise d’essai, ce qui conduit à la formation d’un com-
détermination ou pour des déterminations sur un petit nombre
plexe insoluble colorant-protéines. Élimination du complexe
d’échantillons, ainsi que pour des déterminations en série. Pour
insoluble par centrifugation (ou filtration) et détermination de la
les déterminations en série, un appareillage spécial (à savoir un
teneur en protéines à partir de I’absorbance de la solution résul-
appareillage pour pipettes en série, centrifugeurs) (voir 6.4 et
tante contenant un excès de colorant.
6.7), ainsi que de fréquentes vérifications des échantillons de
contrôle en vue de corriger la «direction» (voir 8.6.2) sont
nécessaires. En raison du temps nécessaire pour les méthodes
5 Réactifs
d’étalonnage, les laboratoires qui effectuent seulement un petit
nombre de déterminations sur certains types d’échantillons ont
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique reconnue,
souvent recours à des laboratoires centraux pour les solutions
sauf s’il est précisé autrement. L’eau utilisée doit être de l’eau
de colorants et les échantillons de contrôle.
distillée ou de l’eau de pureté au moins équivalente.
NOTE - Les ions calcium interfèrent dans la détermination.
NOTE - Selon l’origine de l’échantillon et la méthode de référence uti-
lisée, la méthode décrite dans la présente Norme internationale peut
5.1 colorant noir amido 10B (noir acide 1, Cl 2047O)l) pour
être utilisée non seulement pour la détermination habituelle de la teneur
l’analyse du lait ayant une teneur en eau inférieure à 5 %
en protéines du lait (c’est-à-dire matière azotée totale x 6,381, mais
également pour la détermination de la teneur en «protéines vraies» et
(mlrn), ou un produit purifié ultérieurement.
même, dans une version modifiée, pour la détermination de la teneur
en caséine ou en protéines du sérum, tant du lait de vache que du lait NOTE - Ce colorant est hygroscopique et doit être protégé contre une
d’autres espèces animales (chèvre, brebis, etc.). reprise éventuelle d’humidité.
1) Le produit approprié est disponible dans le commerce. Des détails peuvent être obtenus auprès du Secrétariat de I’ISO/TC 34 (MSZH, Hongrie)
ou du Secrétariat central de I’ISO.
---------------------- Page: 3 ----------------------
SO 55424984 (FI
5.2 Noir amido, solution étalon. Diluer cette solution primaire avec la quantité calculée de solu-
tion tampon de citrate (5.2.4) afin d’obtenir la solution étalon
Préparer une solution étalon selon un des modes opératoires donnant des solutions témoins ayant la même absorbante que
suivants. celles obtenues à partir de l’étalon primaire (52.1).
Conserver comme décrit en 5.2.1 et laisser reposer une nuit.
5.2.1 Étalon primai re, en vue de la p réparation des solutions
étalons de référence.
NOTE - La concentration du noir amido pouvant varier d’une livraison
à l’autre, il est nécessaire d’adapter la concentration pour chaque livrai-
Introdu ire dans une fiole jaugée de 1 000 ml contenant environ
son nouvelle à celle de l’étalon primaire tel que préparé en 5.2.1, afin
600 ml d’eau :
que les absorbantes des solutions témoins préparées en 5.3.2 et 5.3.3
soient les mêmes que celles obtenues au cours de l’étalonnage (voir
8.5).
900 g d’une réparati on purifiée de col orant noir
- 0’
10B a yant un teneur élevée en colorant;
amido
5.2.3 Solution étalon, pour des déterminations de routine en
- 2’08 g d’hydrogéno-orthophosphate disodique dihy-
série.
draté (Na,HP0,.2H,O);
Dissoudre complètement, au moyen d’une agitation mécanique
-
15,8 g d’acide citrique monohydraté pendant 2 h, dans un récipient muni d’un trait repère d’un mul-
(C,H,O,Ji,O). tiple déterminé de 1 000 ml, les quantités multiples correspon-
dantes des produits chimiques spécifiés en 5.2.2, dans une
Dissoudre par agitation mécanique pendant 2 h. Au moyen
quantité d’eau légèrement inférieure à la hauteur du trait repère
d’un pH-mètre (6.81, contrôler le pH qui doit se situer dans les
approprié. Ajuster le pH à 2,40 + O,lO, comme décrit en 5.2.1.
limites de 2,40 + 0,lO à 20 OC; l’ajuster, si nécessaire, par
Compléter au trait repère et agiter encore pendant 15 min. Lais-
l’adjonction de solution d’acide sulfurique ou de solution
ser reposer une nuit.
d’hydroxyde de sodium. Compléter au trait repère et agiter
encore pendant 15 min.
À partir de la solution primaire, préparer les solutions témoins
spécifiées en 5.3.2 et 5.3.3 et déterminer leur absorbante par
Laisser reposer la solution une nuit avant de l’utiliser. Si la solu-
rapport à l’eau distillée, comme décrit en 5.2.1. Diluer cette
tion doit servir pendant plusieurs jours, en assurer la conserva-
solution primaire avec la quantité calculée de solution tampon
tion en ajoutant 0,l ml d’une solution de thymol à 5 % dans
de citrate (5.2.4) afin d’obtenir la solution étalon donnant des
I’éthanol à 94-97 % WV).
solutions témoins ayant la même absorbante que celles obte-
nues à partir de l’étalon primaire (5.2.1).
À partir de cet étalon primaire, préparer les solutions témoins
comme décrit en 5.3.2 et 5.3.3. Déterminer leur absorbante par
Conserver comme décrit en 5.2.1 et laisser reposer une nuit.
rapport à l’eau distillée à une longueur d’onde normalisée dans
une cellule normalisée.
Voir la note en 5.2.2.
II convient de procéder à une ultime vérification et à un dernier
5.2. 2 Solution étalon, pour des déterminations de routine
ajustement de la concentration au moyen d’un échantillon de
nombreuses
Peu
contrôle prélevé dans une quantité de lait (voir 8.6) dont la
teneur en protéines a été déterminée par la méthode de réfé-
Dissoudre complètement dans un bécher :
rence selon Kjeldahl (Norme FIL 20).
-
0’90 à 0,95 g (selon la teneur en colorant) de colorant
noir amido 10B (5.1)’
52.4 Solution tampon, pour dilution.
- 2’08 g d’hydrogéno-orthophosphate .disodique dihy-
Introduire dans une fiole jaugée de 1 000 ml contenant environ
draté (Na2HP0,*2 H,O),
600 ml d’eau :
- 15,8 g d’acide citrique monohydraté (C,H,O,.H,O),
- 2,08 g d’hydrogéno-orthophosphate disodique dihy-
draté (Na,HP0,.2H,O);
dans 100 à 200 ml d’eau à 70 à 80 OC, ou des quantités double
ou triple de ces produits chimiques et d’eau.
- 15,8 g d’acide citrique monohydraté (CsH,07*H20).
Refroidir et transvaser dans des fioles jaugées de 1 000, 2 000
ou 3 000 ml, compléter à environ 600, 1 200 ou 1 800 ml, res- Dissoud re par agitation et compléter au trait repère avec
pectivement, et homogénéiser. Ajuster le pH à 2,40 + 0’10 à l’eau.
20 OC comme décrit en 5.2.1. Compléter au trait repère et agiter
pendant 15 min. Laisser reposer une nuit. Des quan tités mul tiples de ces p chimiques et d’eau peu-
vent être utilisées si nécessaire.
À partir de cette solution primaire, préparer les solutions
témoins spécifiées en 5.3.2 et 5.3.3, et déterminer leur absor- II y a lieu d’effectuer toute dil ution nécessaire au moyen
bance par rapport à l’eau distillée, comme décrit en 5.2.1. cette solution tampon.
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 5542-1984 (F)
5.3 Noir amido, solutions témoins. 6.5 Agitateur mécanique ou mélangeur rotatif ou appa-
reil de mélange à air comprimé, si nécessaire.
Préparer comme suit les dilutions (solutions témoins) de la solu-
tion étalon de noir amido (5.2).
6.6 Spectromètre, permettant d’opérer dans des longueurs
d’onde de 550 à 620 nm, muni de cuves (de préférence à flux
5.3.1 Mélanger 10 volumes de la solution étalon de noir continu) de 0,2 à 1,0 mm de parcours optique.
amido avec 90 volumes d’eau, en introduisant à la pipette 10 ml
NOTE - II n’est pas nécessaire d’opérer à la longueur d’onde corres-
dans une fiole jaugée de 100 ml et en complétant au trait
pondant exactement à la sensibilité maximale étant donné qu’il s’avère
repère.
en pratique que les déviations peuvent être compensées par étalon-
nage (voir 8.4).
NOTE - Cette solution est utilisée au lieu d’eau, pour régler le spec-
tromètre (6.6) au zéro de l’échelle; on peut de la sorte utiliser la partie
de l’échelle loragithmique où les divisions sont plus larges. 6.7 Centrifugeuse ou appareil de filtration.
6.7.1 Centrifugeuse, à porte-tubes oscillants, capable
5.3.2 Mélanger 50 volumes de la solution étalon de noir
d’atteindre, dans les 2 min, une accélération dè (350 It: 50) g à
amido avec 50 volumes d’eau, en introduisant à la
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.