ISO 9308-1:2000
(Main)Water quality — Detection and enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria — Part 1: Membrane filtration method
Water quality — Detection and enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria — Part 1: Membrane filtration method
Qualité de l'eau — Recherche et dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes — Partie 1: Méthode par filtration sur membrane
La présente partie de ISO 9308 décrit une méthode de référence (essai standard) pour la recherche et le dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes présents dans l'eau destinée à la consommation humaine. L'essai standard consiste en une filtration sur membrane, suivie d'une mise en culture dans une gélose de différentiation et d'un calcul du nombre des organismes cibles présents dans l'échantillon. L'essai standard étant peu sélectif, les bactéries endommagées peuvent être détectées. En raison du caractère peu sélectif de cette méthode, la flore bactérienne générale peut perturber la fiabilité du dénombrement des bactéries coliformes et des E. coli, par exemple, dans certaines eaux potables, telles que les eaux de puits peu profonds, qui n'ont pas été désinfectées et abritent une importante flore interférente. La présente partie de ISO 9308 est donc recommandée pour les eaux désinfectées, et autres eaux potables, ne contenant qu'un petit nombre de bactéries. La présente partie de ISO 9308 inclut une méthode rapide (essai rapide) de recherche des E. coli seuls dans les eaux destinées à la consommation humaine, en moins de 24 h, et qui peut s'avérer utile dans les cas où il y a besoin d'une information rapide. L'essai rapide consiste en une filtration sur membrane, suivie d'une mise en culture dans des conditions sélectives et d'un calcul des E. coli présents dans l'échantillon. L'essai standard et l'essai rapide décrits dans la présente partie de ISO 9308 peuvent être appliqués à d'autres types d'eau, à condition que les matières en suspension ou la microflore ne créent pas d'interférence avec la filtration, la mise en culture et le comptage.
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 9308-1
Второе издание
2000-09-15
Качество воды. Выявление и оценка
количества Escherichia coli и
колиподобных бактерий.
Часть 1.
Метод мембранной фильтрации
Water quality — Detection and enumeration of Escherichia coli and coliform
bacteria —
Part 1:
Membrane filtration method
Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO
Ссылочный номер
ISO 9308-1:2000(R)
©
ISO 2000
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 9308-1:2000(R)
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или смотреть на экране, но его нельзя изменить, пока не будет получена лицензия на
установку интегрированных шрифтов в компьютере, на котором ведется редактирование. В случае загрузки настоящего файла
заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий фирмы Adobe.
Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe - торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General Info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все меры
предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами ISO. В редких
случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба проинформировать Центральный секретариат по
адресу, приведенному ниже.
ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ
© ISO 2006
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в какой-
либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без предварительного
письменного согласия ISO, которое должно быть получено после запроса о разрешении, направленного по адресу, приведенному
ниже, или в комитет-член ISO в стране запрашивающей стороны.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO 2000 – Все права сохраняются
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 9308-1:2000(R)
Содержание Страница
Предисловие.iv
Введение .v
1 Область применения.1
2 Нормативные ссылки .1
3 Термины и определения .2
4 Принцип метода .2
5 Приборы и стеклянная посуда.3
6 Питательные среды и реактивы.4
7 Отбор проб.4
8 Методика.4
9 Представление результатов.6
10 Протокол испытания.6
11 Обеспечение качества .7
Приложение А (информативное) Дополнительная микробиологическая информация о
колиподобных бактериях.8
Приложение B (нормативное) Питательные среды и реактивы.9
Библиография .12
iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 9308-1:2000(R)
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией национальных
организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов обычно
осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член, заинтересованный в деятельности,
для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в этом комитете.
Международные правительственные и неправительственные организации, имеющие связи с ISO, также
принимают участие в работах. ISO работает в тесном сотрудничестве с Международной
электротехнической комиссией (IEC) по всем вопросам стандартизации в области электротехники.
Международные стандарты разрабатываются в соответствии с правилами, установленными в Директивах
ISO/IEC, Часть 2.
Основная задача технических комитетов состоит в подготовке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, одобренные техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам на
голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения, по меньшей
мере, 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.
Следует иметь в виду, что некоторые элементы этого документа могут быть объектом патентных прав. ISO
не должен нести ответственность за идентификацию какого-либо одного или всех патентных прав.
Международный стандарт ISO 9308-1 подготовлен Техническим Комитетом ISO/TC 147, Качество воды,
Подкомитетом SC 4, Микробиологические методы.
Настоящее второе издание отменяет и заменяет первое издание (ISO 9308-1:1990), подвергнутое
техническому пересмотру.
Международный стандарт ISO 9308, имеющий общее название Качество воды. Выявление и оценка
Escherichia coli и колиподобных бактерий, состоит из следующих частей:
⎯ Часть 1. Метод мембранной фильтрации
⎯ Часть 2. Метод обогащения жидкости
⎯ Часть 3. Миниатюризированный метод выявления и оценки E. coli в поверхностных и сточных
водах (Метод наиболее вероятного количества (МНВК)).
Приложение B представляет нормативные сведения в данной части ISO 9308. Приложение A является
исключительно информационным.
iv © ISO 2000 – Все права сохраняются
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 9308-1:2000(R)
Введение
Определение присутствия и степени фекального загрязнения является важным элементом оценки качества
водоема и риска для здоровья человека, связанного с инфекционными заболеваниями. Показателем такого
загрязнения является наличие в пробах воды кишечной палочки (Escherichia coli), которая обычно
присутствует в кишечнике человека и теплотворных животных. Результаты анализа на колиподобные
бактерии труднее поддаются интерпретации, поскольку некоторые бактерии данной группы живут в почве и
пресных поверхностных водах, и не все эти бактерии имеют кишечное происхождение. Тем не менее,
присутствие колиподобных бактерий, хотя и не является доказательством фекального загрязнения, может
указывать на нарушения очистки и распределения. Определение штаммов выделенных бактерий в
некоторых случаях помогает установить их происхождение.
© ISO 2000 – Все права сохраняются v
---------------------- Page: 5 ----------------------
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ ISO 9308-1:2000(R)
Качество воды. Выявление и оценка количества Escherichia
coli и колиподобных бактерий.
Часть 1.
Метод мембранной фильтрации
1 Область применения
В данной части международного стандарта ISO 9308 описан эталонный метод (стандартный анализ)
выявления и оценки количества Escherichia coli и колиподобных бактерий в воде, потребляемой человеком.
Стандартный анализ основан на мембранной фильтрации, последующем культивировании бактерий на
различных агаровых средах и расчете количества оцениваемых организмов в пробе.
Стандартный анализ имеет низкую избирательность, позволяющую обнаруживать поврежденные бактерии.
В связи с низкой избирательностью анализа надежной оценке количества колиподобных бактерий и E. coli
может препятствовать фоновый рост бактерий, в частности, в некоторых водах, используемых для питья,
например, в воде мелких недезинфицированных колодцев, характеризующейся высоким фоновым ростом
бактерий. Таким образом, данная часть ISO 9308 в наибольшей степени применима к дезинфицированной
воде и другим водам, используемым для питья с низким количеством бактерий.
В данной части ISO 9308 представлен экспресс-метод (экспресс-анализ), предназначенный для
обнаружения E. coli в воде, потребляемой человеком, только в течение 24 ч, и который может быть
использован в особых случаях, когда требуется быстрое получение информации. Экспресс-анализ основан
на мембранной фильтрации, последующем культивировании в избирательных условиях и расчете
количества E. coli в пробе.
Стандартный анализ и экспресс-анализ, описанные в данной части ISO 9308, применимы и к другим видам
воды при условии отсутствия нарушения фильтрации, культивирования и подсчета под влиянием
взвешенных частиц или фоновой микрофлоры.
2 Нормативные ссылки
Следующие нормативные документы содержат положения, которые, в связи со ссылками на них в этом
тексте, составляют положения данной части ISO 9308. Для жестких ссылок любые последующие
публикации изменений или пересмотров не применяются. Однако сторонам-участницам соглашений на
основании данной части ISO 9308 рекомендуется выяснить возможность применения самых последних
изданий нормативных документов, указанных ниже. Для плавающих ссылок необходимо использовать
самое последнее издание нормативного ссылочного документа. Страны-члены ISO и IEC ведут указатели
действующих международных стандартов.
ISO/IEC Guide 2, Стандартизация и связанные с ней виды деятельности. Общая терминология.
ISO 3696:1987, Вода, предназначенная для использования в аналитических лабораторных целях.
Спецификация и методы анализа.
ISO 5667-1:1980, Качество воды. Отбор проб. Часть 1. Руководство по разработке программ отбора проб.
ISO 5667-2:1991, Качество воды. Отбор проб. Часть 2. Руководство по методикам отбора проб.
© ISO 2000 – Все права сохраняются 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 9308-1:2000(R)
ISO 5667-3:1994, Качество воды. Отбор проб. Часть 3. Руководство по сохранению образцов и
обращению с ними.
ISO 6887-1:1999, Микробиология пищи и кормов для животных. Приготовление опытных образцов,
исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологического исследования. Часть 1. Общие
правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений.
ISO 8199:1988, Качество воды. Общее руководство по количественной оценке микроорганизмов с
помощью культивирования.
3 Термины и определения
В данной части стандарта ISO 9308 применяются термины и определения, приведенные в Руководстве
ISO/IEC Guide 2, а также указанные ниже.
3.1
лактозоположительные бактерии
lactose-positive bacteria
бактерии 〈стандартный анализ〉, способные формировать колонии аэробно при (36 ± 3) °C на избирательной
и дифференциальной лактозной питательной среде с образованием кислоты в течение (21 ± 3) ч инкубации
3.2
колиподобные бактерии
coliform bacteria
лактозоположительные бактерии 〈стандартный анализ〉, согласно определению, представленному в 3.1,
которые являются оксидазоотрицательными
3.3
Escherichia coli
колиподобные бактерии 〈стандартный анализ〉, согласно определению, представленному в 3.2, которые
также образуют индол из триптофана при (44,0 ± 0,5) °C в течение (21 ± 3) ч инкубации
3.4
Escherichia coli
бактерии 〈экспресс анализ〉 стойкие к воздействию желчи, которые также образуют индол из триптофана
при (44,0 ± 0,5) °C в течение (21 ± 3) ч инкубации
4 Принцип метода
4.1 Общее описание метода
Метод основан на мембранной фильтрации и состоит из двух частей – эталонного стандартного анализа и
необязательного экспресс-анализа, который может быть выполнен параллельно в соответствии с
представленным ниже описанием. Стандартный анализ включает в себя инкубацию мембраны на
избирательной среде с последующей дополнительной биохимической идентификацией типичных
лактозоположительных колоний, обеспечивающей возможность выявления и оценки количества
колиподобных бактерий и E. coli в течение от 2 до 3 дней. Экспресс анализ состоит из двух этапов
инкубации, позволяющих выявить и оценить количество E. coli с течение (21 ± 3) ч. В случае параллельного
использования обоих анализов, стандартного анализа и экспресс-анализа, окончательным результатом
считается большее из выявленных значений E. coli.
2 © ISO 2000 – Все права сохраняются
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 9308-1:2000(R)
4.2 Фильтрация и инкубация
Исследуемые порции пробы фильтруют через мембраны, задерживающие бактерии. Одну мембрану
(стандартный анализ) помещают на избирательную лактозную агаровую питательную среду, которую
инкубируют при (36 ± 2) °C в течение (21 ± 3) ч; а другую мембрану (экспресс-анализ) сначала помещают на
агаровую среду, содержащую казеин (ферментированный трипсином), и инкубируют при (36 ± 2) °C в
течение 4-5 часов, а затем на агаровую питательную среду, содержащую казеин (ферментированный
трипсином) и соли желчных кислот, и инкубируют при (44,0 ± 0,5) °C в течение 19 - 20 ч.
4.3 Оценка и подтверждение, стандартный анализ
Обнаруживаемые на мембране характерные колонии подсчитывают как лактозоположительные бактерии.
Проводят подтверждающий тест на колиподобные бактерии и E. coli, ( по образованию оксидазы и индола)
путем субкультивирования случайно отобранных характерных колоний. Рассчитывают вероятные
количества лактозоположительных колиподобных бактерий и E. coli, присутствующие в 100 мл пробы.
4.4 Оценка и подтверждение, экспресс-анализ
Имеющиеся на мембране колонии, способные вырабатывать индол из триптофана, присутствующего в
агаровой питательной среде, подсчитывают как E. coli. Рассчитывают количество E. coli, вероятно
присутствующее в 100 мл пробы.
5 Приборы и стеклянная посуда
Обычное оборудование микробиологических лабораторий, в частности:
5.1 Аппарат для стерилизации паром (автоклав).
Приборы и стеклянная посуда, поставляемые в нестерильном состоянии, должны стерилизоваться в
соответствии с инструкциями, приведенными в ISO 8199.
5.2 Водная баня и/или инкубатор, с термостатическим регулированием на уровне (36 ± 2) °C.
5.3 Водная баня и/или инкубатор, с термостатическим регулированием на уровне (44,0 ± 0,5) °C.
ПРИМЕЧАНИЕ При проведении экспресс-анализа вместо инкубаторов, указанных в 5.2 and 5.3, может
использоваться программируемый инкубатор с двойной настройкой, установленной на (36 ± 2) °C и (44,0 ± 0,5) °C.
5.4 pH-метр (измеритель кислотности), с точностью измерения ± 0,1.
5.5 Оборудование для мембранной фильтрации в соответствии с ISO 8199.
5.6 Мембранные фильтры, изготовленные из эфиров целлюлозы, обычно имеющие диаметр 47 мм или
50 мм, с характеристиками фильтрации эквивалентными номинальному диаметру пор, равному 0,45 мкм, и
желательно с сетками.
Фильтры должны быть лишены каких-либо свойств, подавляющих или усиливающих рост микроорганизмов;
присутствующая на сетке печатная краска не должна оказывать воздействие на рост бактерий. Фильтры,
получаемые нестерильными, должны стерилизоваться в соответствии с инструкциями изготовителя.
Каждая партия мембран должна подвергаться испытаниям на пригодность к данному анализу, в
соответствии с
...
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 9308-1
Second edition
2000-09-15
Water quality — Detection and enumeration
of Escherichia coli and coliform bacteria —
Part 1:
Membrane filtration method
Qualité de l'eau — Recherche et dénombrement des Escherichia coli et
des bactéries coliformes —
Partie 1: Méthode par filtration sur membrane
Reference number
ISO 9308-1:2000(E)
©
ISO 2000
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 9308-1:2000(E)
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but shall not
be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In downloading this
file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. The ISO Central Secretariat accepts no liability in this
area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation parameters
were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies. In the unlikely event
that a problem relating to it is found, please inform the Central Secretariat at the address given below.
© ISO 2000
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means, electronic
or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or ISO's member body
in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 � CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.ch
Web www.iso.ch
Printed in Switzerland
ii © ISO 2000 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 9308-1:2000(E)
Contents Page
Foreword.iv
Introduction.v
1 Scope .1
2 Normative references .1
3 Terms and definitions .2
4 Principle.2
5 Apparatus and glassware .3
6 Culture media and reagents .3
7 Sampling.4
8 Procedure .4
9 Expression of results .5
10 Test report .5
11 Quality assurance.5
Annex A (informative) Further microbiological information on coliform bacteria .6
Annex B (normative) Culture media and reagents .7
Bibliography.10
© ISO 2000 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 9308-1:2000(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO
member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical
committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting.
Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this part of ISO 9308 may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
International Standard ISO 9308-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality,
Subcommittee SC 4, Microbiological methods.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 9308-1:1990), which has been technically revised.
ISO 9308 consists of the following parts, under the general title Water quality — Detection and enumeration of
Escherichia coli and coliform bacteria:
� Part 1: Membrane filtration method
� Part 2: Liquid enrichment method
� Part 3: Miniaturized method (Most Probable Number, MPN) for detection and enumeration of E. coli in surface
and waste water
Annex B forms a normative part of this part of ISO 9308. Annex A is for information only.
iv © ISO 2000 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 9308-1:2000(E)
Introduction
The presence and extent of faecal pollution is an important factor in assessing the quality of a body of water and
the risk to human health from infection. Examination of water samples for the presence of Escherichia coli,which
normally inhabits the bowel of man and other warm-blooded animals, provides an indication of such pollution.
Examination for coliform bacteria can be more difficult to interpret because some coliform bacteria live in soil and
surface fresh water, and are not always intestinal. Therefore, the presence of coliform bacteria, although not a
proof of faecal contamination, may indicate failure in treatment or distribution. The identification of the strains
isolated can sometimes provide an indication of their origin.
© ISO 2000 – All rights reserved v
---------------------- Page: 5 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD ISO 9308-1:2000(E)
Water quality — Detection and enumeration of Escherichia coli
and coliform bacteria —
Part 1:
Membrane filtration method
1 Scope
This part of ISO 9308 describes a reference method (Standard Test) for the detection and enumeration of
Escherichia coli and coliform bacteria in water for human consumption. The Standard Test is based on membrane
filtration, subsequent culture on a differential agar medium and calculation of the number of target organisms in the
sample.
The Standard Test has a low selectivity, allowing the detection of injured bacteria. Due to the low selectivity,
background growth can interfere with the reliable enumeration of coliform bacteria and E. coli, for example in some
drinking waters, like shallow well waters, that have not been disinfected and yield a high background growth. This
part of ISO 9308 is therefore especially suitable for disinfected water and other drinking waters of low bacterial
numbers.
This part of ISO 9308 includes a rapid method (Rapid Test) for the detection of E. coli only within 24 h in water for
human consumption, which can be useful in special cases when information is needed quickly. The Rapid Test is
based on membrane filtration, subsequent culture under selective conditions and calculation of the number of
E. coli in the sample.
Standard and Rapid Tests described in this part of ISO 9308 are applicable to other kinds of water provided that
suspended matter or background flora does not interfere with filtration, culture and counting.
2 Normative references
The following normative documents contain provisions which, through reference in this text, constitute provisions of
this part of ISO 9308. For dated references, subsequent amendments to, or revisions of, any of these publications
do not apply. However, parties to agreements based on this part of ISO 9308 are encouraged to investigate the
possibility of applying the most recent editions of the normative documents indicated below. For undated
references, the latest edition of the normative document referred to applies. Members of ISO and IEC maintain
registers of currently valid International Standards.
ISO/IEC Guide 2, Standardization and related activities — General vocabulary.
ISO 3696:1987, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods.
ISO 5667-1:1980, Water quality — Sampling — Part 1: Guidance on the design of sampling programmes.
ISO 5667-2:1991, Water quality — Sampling — Part 2: Guidance on sampling techniques.
ISO 5667-3:1994, Water quality — Sampling — Part 3: Guidance on the preservation and handling of samples.
© ISO 2000 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 9308-1:2000(E)
ISO 6887-1:1999, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of the initial
suspension and decimal dilutions.
ISO 8199:1988, Water quality — General guide to the enumeration of micro-organisms by culture.
3 Terms and definitions
For the purposes of this part of ISO 9308, the terms and definitions given in ISO/IEC Guide 2 and the following
apply.
3.1
lactose-positive bacteria
�Standard Test� bacteria capable of forming colonies aerobically at (36� 3) °C on a selective and differential
lactose culture medium with the production of acid within (21� 3) h
3.2
coliform bacteria
�Standard Test� lactose-positive bacteria as defined in 3.1 which are oxidase-negative
3.3
Escherichia coli
�Standard Test� coliform bacteria as defined in 3.2 which also produce indole from tryptophan at (44,0� 0,5) °C
within (21� 3) h
3.4
Escherichia coli
�Rapid Test� bile-resistant bacteria which also produce indole from tryptophan at (44,0� 0,5) °C within (21� 3) h
4Principle
4.1 General description of the method
The method is based on membrane filtration and consists of two parts, the reference Standard Test and the
optional Rapid Test, which can be performed in parallel as described below. The Standard Test includes incubation
of the membrane on a selective medium with subsequent further biochemical characterization of the typical lactose-
positive colonies, leading to the detection and enumeration of coliform bacteria and E. coli within 2 d to 3 d. The
Rapid Test consists of two incubation steps allowing the detection and enumeration of E. coli within (21� 3) h. If
both tests, Standard Test and Rapid Test, are performed in parallel, the final result for E. coli shall be the higher of
the two.
4.2 Filtration and incubation
Test portions of the sample are filtered through membranes which retain the bacteria. One membrane (Standard
Test) is placed on a selective lactose agar medium which is incubated at (36� 2) °Cfor (21� 3) h and one
membrane (Rapid Test) on a casein (tryptic digest)-containing agar medium incubated at (36� 2) °C for 4h to 5h,
followed by incubation at (44,0� 0,5) °C for 19 h to 20 h on an agar medium containing casein (tryptic digest) and
bilesalts.
4.3 Evaluation and confirmation, Standard Test
The characteristic colonies on the membrane are counted as lactose-positive bacteria. For coliform bacteria and
E. coli, subculture is carried out of randomly selected characteristic colonies for confirmatory tests: oxidase and
indole production. The numbers of lactose-positive coliform bacteria and E. coli likely to be present in 100 ml of the
sample are counted.
2 © ISO 2000 – All rights reserved
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 9308-1:2000(E)
4.4 Evaluation and confirmation, Rapid Test
The colonies on the membrane which are able to form indole from the tryptophan supplied in the agar medium are
counted as E. coli. The numbers of E. coli likely to be present in 100 ml of the sample are counted.
5 Apparatus and glassware
Usual microbiological laboratory equipment, and in particular:
5.1 Apparatus for sterilization by steam (autoclave).
Apparatus and glassware not supplied sterile shall be sterilized according to the instructions given in ISO 8199.
5.2 Water bath and/or incubator, thermostatically controlled at (36� 2) °C.
5.3 Water bath and/or incubator, thermostatically controlled at (44,0� 0,5) °C.
NOTE For the Rapid Test, instead of the incubators 5.2 and 5.3 a programmable incubator with dual setting may be used,
set to (36 � 2) °C and (44,0 � 0,5) °C.
5.4 pH meter, with an accuracy of � 0,1.
5.5 Equipment for membrane filtration, in accordance with ISO 8199.
5.6 Membrane filters, composed of cellulose esters, usually about 47 mm or 50 mm in diameter, with filtration
characteristics equivalent to a rated nominal pore diameter of 0,45µm and preferably with grids.
The filters shall be free from growth-inhibiting or growth-promoting properties and the printing ink used for the grid
shall not affect the growth of bacteria. If not obtained sterile, they shall be sterilize
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 9308-1
Deuxième édition
2000-09-15
Qualité de l'eau — Recherche et
dénombrement des Escherichia coli et des
bactéries coliformes —
Partie 1:
Méthode par filtration sur membrane
Water quality — Detection and enumeration of Escherichia coli and
coliform bacteria —
Part 1: Membrane filtration method
Numéro de référence
ISO 9308-1:2000(F)
©
ISO 2000
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 9308-1:2000(F)
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier peut
être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifiéà moins que l'ordinateur employéà cet effet ne bénéficie d'une licence autorisant
l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées acceptent de fait la
responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO décline toute responsabilité en la
matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la créationduprésent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info du
fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir l'exploitation de
ce fichier par les comités membres de l'ISO. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème d'utilisation, veuillez en informer le
Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.
© ISO 2000
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque
forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit de l’ISO à
l’adresse ci-aprèsouducomité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 � CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax. + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.ch
Web www.iso.ch
Imprimé en Suisse
ii © ISO 2000 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 9308-1:2000(F)
Sommaire Page
Avant-propos.iv
Introduction.v
1 Domaine d'application.1
2Références normatives .1
3Termesetdéfinitions.2
4 Principe.2
5 Appareillage et verrerie.3
6 Milieux de culture et réactifs .4
7 Échantillonnage .4
8 Mode opératoire.4
9 Expression des résultats .5
10 Rapport d’essai.5
11 Assurance qualité.6
Annexe A (informative) Informations microbiologiques complémentaires sur les coliformes .7
Annexe B (normative) Milieux de culture et réactifs .8
Bibliographie .12
© ISO 2000 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 9308-1:2000(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiéeaux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude aledroit de fairepartie ducomité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI, Partie 3.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour
vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments delaprésente partie de l’ISO 9308 peuvent faire
l’objet de droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de
ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
La Norme internationale ISO 9308-1 a étéélaboréepar le comité technique ISO/TC 147, Qualité de l'eau,
sous-comité SC 4, Méthodes microbiologiques.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 9308-1:1990), dont elle constitue une révision
technique.
L'ISO 9308 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Qualité de l'eau — Recherche et
dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes:
� Partie 1: Méthode par filtration sur membrane
� Partie 2: Méthode par enrichissement en milieu liquide
� Partie 3: Méthode miniaturisée (nombre le plus probable) pour la recherche et le dénombrement des E. coli
dans les eaux de surface et les eaux résiduaires
L’annexe B constitue un élément normatif de la présente partie de l’ISO 9308. L’annexe A est donnée uniquement
à titre d’information.
iv © ISO 2000 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 9308-1:2000(F)
Introduction
La présence et l'étendue de la pollution fécale est un facteur important dans l'évaluation de la qualité d'une masse
d'eau ainsi que du risque infectieux représenté pour la santé humaine. L'examen d'échantillons d'eau pour y
rechercher des Escherichia coli, normalement présents dans les intestins de l'homme et des animaux
homéothermes, fournit une indication sur ce type de pollution. Les résultats de l'examen des bactéries coliformes
peuvent s'avérer plus difficiles à interpréter en raison du fait que certains coliformes vivent également dans le sol et
dans les eaux douces de surface, et ne sont donc pas toujours d'origine intestinale. La présence de bactéries
coliformes peut donc, bien que ce ne soit pas la preuve d’une contamination d'origine fécale, indiquer une
défaillance du traitement ou de la distribution de l'eau. L'identification des souches isolées permet quelquefois
d'apporter une indication quant à leur origine.
© ISO 2000 – Tous droits réservés v
---------------------- Page: 5 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 9308-1:2000(F)
Qualité de l'eau — Recherche et dénombrement des Escherichia
coli et des bactéries coliformes —
Partie 1:
Méthode par filtration sur membrane
1 Domaine d'application
La présente partie de ISO 9308 décrit une méthode de référence (essai standard) pour la recherche et le
dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes présents dans l'eau destinée à la consommation
humaine. L'essai standard consiste en une filtration sur membrane, suivie d'une mise en culture dans une gélose
de différentiation et d'un calcul du nombre des organismes cibles présents dans l'échantillon.
L'essai standard étant peu sélectif, les bactéries endommagées peuvent être détectées. En raison du caractère
peu sélectif de cette méthode, la flore bactérienne générale peut perturber la fiabilité du dénombrement des
bactéries coliformes et des E. coli, par exemple, dans certaines eaux potables, telles que les eaux de puits peu
profonds, qui n'ont pas été désinfectées et abritent une importante flore interférente. La présente partie de
ISO 9308 est donc recommandée pour les eaux désinfectées, et autres eaux potables, ne contenant qu'un petit
nombre de bactéries.
La présente partie de ISO 9308 inclut une méthode rapide (essai rapide) de recherche des E. coli seuls dans les
eaux destinées à la consommation humaine, en moins de 24 h, et qui peut s'avérer utile dans les cas où il y a
besoin d’une information rapide. L'essai rapide consiste en une filtration sur membrane, suivie d'une mise en
culture dans des conditions sélectives et d'un calcul des E. coli présents dans l'échantillon.
L’essai standard et l’essai rapide décrits dans la présente partie de ISO 9308 peuvent être appliqués à d'autres
types d'eau, à condition que les matières en suspension ou la microflore ne créent pas d'interférence avec la
filtration, la mise en culture et le comptage.
2Références normatives
Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui y est faite,
constituent des dispositions valables pour la présente partie de l'ISO 9308. Pour les références datées, les
amendements ultérieurs ou les révisions de ces publications ne s’appliquent pas. Toutefois, les parties prenantes
aux accords fondés sur la présentepartiedel'ISO9308sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer les
éditions les plus récentes des documents normatifs indiqués ci-après. Pour les références non datées, la dernière
édition du document normatif en référence s’applique. Les membres de l'ISO et de la CEI possèdent le registre des
Normes internationales en vigueur.
ISO/CEI Guide 2, Normalisation et activités connexes — Vocabulaire général.
ISO 3696:1987, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d'essai.
ISO 5667-1:1980, Qualité de l'eau —Échantillonnage — Partie 1: Guide général pour l'établissement des
programmes d'échantillonnage.
ISO 5667-2:1991, Qualité de l'eau —Échantillonnage — Partie 2: Guide général sur les techniques
d'échantillonnage.
© ISO 2000 – Tous droits réservés 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 9308-1:2000(F)
ISO 5667-3:1994, Qualité de l'eau —Échantillonnage — Partie 3: Guide général pour la conservation et la
manipulation des échantillons.
ISO 6887-1:1999, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l’examen microbiologique — Partie 1: Règles générales pour la préparation de la
suspension mère et des dilutions décimales.
ISO 8199:1988, Qualité de l'eau — Guide général pour le dénombrement des micro-organismes sur milieu de
culture.
3 Termes et définitions
Pour les besoins de la présente partie de ISO 9308, les termes et définitions donnésdans l’ISO/CEI Guide 2 ainsi
que les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
bactéries lactose-positives
�essai standard� bactéries pouvant former des colonies en aérobiose à (36� 2) °C sur un milieu de culture lactosé
sélectif et différentiel avec production d'acide dans les (21� 3) h
3.2
bactéries coliformes
�essai standard� bactéries lactose-positives comme définies en 3.1 et qui sont oxydase-négatives
3.3
Escherichia coli
�essai standard� bactéries coliformes comme définies en 3.2 et qui produisent également de l'indole à partir du
tryptophane dans les (21� 3) h à (44� 0,5) °C
3.4
Escherichia coli
�essai rapide� bactéries résistant à la bile et pouvant produire de l'indole à partir du tryptophane dans les (21� 3) h
à (44� 0,5) °C
4Principe
4.1 Description générale de la méthode
La méthode est fondée sur la filtration sur membrane et comprend deux parties, l’essai standard de référence et
l’essai rapide optionnel, qui peuvent être réalisées en parallèle comme décrit ci-dessous. L’essai standard
comprend une incubation de la membrane sur un milieu sélectif suivie d'une caractérisation biochimique des
colonies typiques lactose-positives, dont découlent la recherche et le dénombrement des bactéries coliformes et
des E. coli,endeux à trois jours. L’essai rapide consiste en deux étapes d'incubation permettant la recherche et le
dénombrement des E. coli dans les (21� 3) h. Si ces deux essais sont appliqués en parallèle, la valeur
correspondant au résultat final des E. coli doit être la plus élevée des deux.
4.2 Filtration et incubation
Filtration des prises d'essai de l'échantillon sur des membranes retenant les bactéries. Une membrane est placée
sur un milieu de culture sélectif gélosé lactosé,incubéà (36� 2) °C pendant (21� 3) h (essai standard), et une
autre membrane, pour l’essai rapide, est placée sur un milieu de culture de gélose de la caséine (digestat
tryptique), incubéà (36� 2) °C pendant 4 h à 5h, puis à (44� 0,5) °C pendant 19 h à 20 h sur un milieu gélosé
contenant de la caséine (digestat tryptique) et des sels biliaires.
2 © ISO 2000 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 9308-1:2000(F)
4.3 Évaluation et confirmation, essai standard
Comptage des colonies caractéristiques présentes sur la membrane comme étant des bactéries lactose-positives.
Pour les bactéries coliformes et les E. coli, repiquage de colonies caractéristiques choisies aléatoirement pour
essais de confirmation: oxydase et production d'indole. Calcul du nombre de bactéries coliformes lactose-positives
et des E. coli susceptibles d'être présentsdans100mld'échantillon.
4.4 Évaluation et confirmation, essai rapide
Comptage des colonies présentes sur la membrane et pouvant produire de l'indole à partir du tryptophane présent
dans le milieu de culture gélosé comme étant des E. coli. Calcul du nombre d'E. coli susceptibles d'être présents
dans 100 ml d'échantillon.
5 Appareillage et verrerie
Matériel courant de laboratoire microbiologique et, en particulier, ce qui suit.
5.1 Appareil de stérilisation à la vapeur (autoclave).
Tout appareil ou toute verrerie fourni(e) non stérile doit être stérilisé(e) conformément aux instructions de
l'ISO 8199.
5.2 Bain d'eau et/ou incubateur,réglable à (36� 2) °C.
5.3 Bain d'eau et/ou incubateur,réglable à (44� 0,5) °C.
NOTE Pour l’essai rapide, il est possible de remplacer les incubateurs 5.2 et 5.3 par un incubateur programmable avec
double réglage: (36 � 2) °Cet(44 � 0,5) °C.
5.4 pH-mètre, d'une exactitude de� 0,1.
5.5 Appareillage de filtration sur membrane, conformément à l'ISO 8199.
5.6 Membranes filtrantes, composées d'esters de cellulose, généralement d'environ 47 mm ou 50 mm de
diamètre, présentant des caractéristiques de filtration équivalentes à une porosité nominale de 0,45µm, munies,
de préférence, d’une grille-repère.
Les filtres doivent être exempts de propriétés susceptibles d'inhiber ou au contraire de favoriser la croissance
bactérienne, et l'encre avec laquelle la grille est imprimée ne doit pas affecter la flore bactérienne. Si elles ne sont
pas livrées stériles, elles doivent être stérilisées conformément aux instructions du fabricant. Il convient de tester
chaque lot de membranes conformément à l’ISO 7704 quant à son aptitude à l’essai, étant donné que l’utilisation
de différentes marques de filtre peut entraîner des différences dans le développement de la coloration.
NOTE Les membranes filtrantes vertes peuvent être utiles dans le cadre de la
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.