ISO 6799:1991
(Main)Animal and vegetable fats and oils — Determination of composition of the sterol fraction — Method using gas chromatography
Animal and vegetable fats and oils — Determination of composition of the sterol fraction — Method using gas chromatography
Specifies a method using packed or capillary columns. Describes the principle, the reagents, the apparatus, the sampling, the test procedure, the expression of results, and the contents of the test report.
Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination de la composition de la fraction stérolique — Méthode par chromatographie en phase gazeuse
Rastlinske in živalske maščobe in olja - Določanje vsebnosti sterolov - Preskus z uporabo plinske kromatografije
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL
STANDARD
Second edition
19914245
Animal and vegetable fats and oils -
Determination of composition of the sterol
fraction - Method using gas chromatography
Corps gras d’origines animale et vkg&tale - D&termination de la
composition de la fraction stkolique - Mgthode par chromatographie
en phase gazeuse
Reference number
Is0 6799:1991(E)
---------------------- Page: 1 ----------------------
IS0 6799:1991(E)
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (IS0 member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through IS0
technical committees. Each member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has the right to be
represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the
work. IS0 collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an Inter-
national Standard requires approval by at least 75 % of the member
bodies casting a vote.
International Standard IS0 6799 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 34, Agricultural food products, Sub-Committee SC 11, Animal and
vegetable fats and oils.
This second edition cancels and replaces the first edition (IS0
6799:1983), of which it constitutes a technical revision.
Annex A of this International Standard is for information only.
0 IS0 1991
All rights reserved. No part of this publication may be reproduced or utilized in any form
or by any means, electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without
permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case Postale 56 l Cl-l-121 1 Geneve 20 l Switzerland
Printed in Switzerland
I
ii
---------------------- Page: 2 ----------------------
IS0 6799:1991(E)
Introduction
Sterols are characteristic constituents of fats whether these are liquid
or solid at ambient temperature. Animal fats always contain cholesterol,
whereas vegetable fats contain a mixture of sterols, for example
stigmasterol and /?-sitosterol, called phytosterols. Meanwhile, some
vegetable fats, e.g. colza, maize and palm, contain a small percentage
of cholesterol in the total sterols.
The results of the method specified in this International Standard can
be used for checking the purity of a fat, for checking conformity of a fat
with a sales description or advertised composition, or for checking a fat
for nutritional purposes.
For detecting the presence of animal fats in vegetable fats, the small
quantities of cholesterol, which may be present in vegetable fats, need
to be taken into account. In this case, it is necessary to carry out other
methods of analysis in addition to the identification of sterols, for ex-
ample the determination of the composition of fatty acids by gas chro-
matography (see IS0 5508 and IS0 5509). In practice, branched fatty
acids and fatty acids with an odd number of carbon atoms are only
present in appreciable quantities in animal fats.
---------------------- Page: 3 ----------------------
This page intentionally left blank
---------------------- Page: 4 ----------------------
IS0 6799:1991 (E)
INTERNATIONAL STANDARD
Animal and vegetable fats and oils - Determination of
composition of the sterol fraction - Method using gas
chromatography
3 Principle
1 Scope
Saponification of a test portion, extraction of the
This international Standard specifies a gas chro-
matographic method using packed or capillary col- unsaponifiable matter and separation of sterols in
umns for the determination of the composition of the the unsaponifiable matter by thin-layer chromatog-
sterol fraction of animal and vegetable fats and oils. raphy. Analysis of the separated sterols, or of pre-
by gas chromatography using
pared derivatives,
Des-sterols are determined but substituted sterols
packed or capillary columns.
(i.e. methyl and dimethyl) may interfere and care is
needed in interpreting the results.
4 Reagents
Hazardous compounds are marked with an asterisk.
2 Normative references
Use only reagents of recognized analytical grade,
The following standards contain provisions which,
unless otherwise stated, and water complying with
through reference in this text, constitute provisions
grade 3 of IS0 3696,
of this International Standard. At the time of publi-
cation, the editions indicated were valid. All stan-
dards are subject to revision, and parties to 4.1 Reagents for the preparation of
agreements based on this International Standard
unsaponifiable matter
are encouraged to investigate the possibility of ap-
plying the most recent editions of the standards in- See IS0 3596-l or IS0 3596-2.
dicated below. Members of IEC and IS0 maintain
registers of currently valid International Standards.
4.2 Reagents for the separation of sterols
IS0 661:1989, Animal and vegetable fats and oils -
Preparation of test sample.
4.2.1 Ethanol, 95 % (V/v).
IS0 3596-l :1988, Animal and vegetable fats and oils
4.2.2 Light petroleum, distilling in the range 30 OC
- Determination of unsaponifiable matter - Part I:
to 60 “C.
Method using diethyl ether extraction (Reference
method).
4.2.3 Acetone
IS0 3596-2:1988, Animal and vegetable fats and oils
- Determination of unsaponifiable matter - Part 2:
4.2.4 Developing solvent, such as chloroform* or
Rapid method using hexane extraction.
hexane/ethyl acetate [80 + 20 (V/v)] mixture or
toluene*/acetone [95 + 5 (V/Q] mixture.
IS0 3696:1987, Water for analytical laboratory use -
Specification and test methods.
4.2.5 Ethyl acetate or diethyl ether, free from per-
oxides and residues.
IS0 5508:1990, Animal and vegetable fats and oils -
Analysis by gas chromatography of methyl esters of
fatty acids. 4.2.6 Silica powder with binder, thin-layer chro-
1
---------------------- Page: 5 ----------------------
IS0 6799:1991(E)
carried out, the solutions of pure sterols may be re-
matographic qualityI) (if necessary; see 8.2.1).
placed by a 25 g/l solution of sterols of sunflower oil,
a 25 g/l solution of sterols of rapeseed oil and a
4.2.7 Indicator solution, for example rhodamine 6G,
20 g/l solution of cholesterol. The sterols of these
0,5 g/l solution.
solutions shall be prepared as described in 8.1 and
8.2.
Any other colouring product or detection agent, such
as a 0,5 g/l solution of 2’,7’-dichlorofluorescein in
95 % (V/V) ethanol, may be used provided that it
5 Apparatus
does not react with the sterols.
Usual laboratory apparatus and, in particular, the
4.2.8 Cholesterol, 100 g/l solution in chloroform.
following.
4.3 Reagents for the preparation of sterol
5.1 Apparatus for the preparation of
derivatives
unsaponifiable matter
4.3.1 Pyridine, anhydrous?
See IS0 3596-l or IS0 3596-2.
4.3.2 Hexamethyldisilazane
5.2 Apparatus for the separation of sterols
4.3.3 Trimethylchlorosilane
52.1 Developing tank, made of glass, with a ground
glass lid, suitable for use with plates of dimensions
4.3.4 Acetic anhydride
200 mm x 200 mm.
4.3.5 Hexane
52.2 Spreader and platform, for preparation of the
plates (if necessary; see 8.2.1).
4.3.6 Sodium hydrogen carbonate, IO g/l solution.
of dimensions 200 mm x
52.3 Prepared plates,
4.3.7 Hydrochloric acid, c(HCI) = 0,5 mol/l.
200 mm, or glass plates, of the same dimensions.
4.3.8 Sodium sulfate, anhydrous.
5.2.4 Micropipettes or microsyringes, capable of
delivering droplets of 0,3 pl to 0,4 ul. An automatic
drop applicator may be used.
4.4 Reagents for analysis by gas
chromatography
s for spraying the indicator solution
5.2.5 Apparatu
the plates
onto
4.4.1 Carrier gas
Inert gas (nitrogen, helium, argon, hydrogen, etc.),
5.2.6 Microspatula
thoroughly dried and with an oxygen content of less
than 10 mg/kg.
of being operated at
5.2.7 Oven, capable
103 “C + 2 OC.
-
NOTE 1 Hydrogen, which is used only with capillary
columns, can double the speed of analysis but is hazard-
ous. Safety devices are available.
52.8 Boiling water-bath
4.4.2 Pure sterols, such as cholesterol, stigma-
52.9 Filter paper, of 55 mm diameter, fluted, for
sterol, brassicasterol, /?-sitosterol and campesterol,
retaining fine particles.
standard solutions in diethyl ether or any other
suitable solvent, corresponding to 20 g of sterol per
52.10 Conical flasks, of 25 ml capacity.
Iitre.
NOTE 2 Most pure sterols are not commercially avail- 5.2.11 Conical flask, of 250 ml capacity.
able. The European Community Bureau of Reference
(BCR) is preparing sterol reference materials, e.g. RM162
5.2.12 Reflux condenser, to fit the 25 ml conica
(maize and soya in equal masses).
flasks 5.2.10).
If it is impossible to obtain the various pure sterols,
5.2.13 Desiccator, containing an efficient desiccant
and particularly if only the qualitative analysis is
available.
1) Silica gels containing the indicator solution (4.2.7) are commercially
2
---------------------- Page: 6 ----------------------
IS0 6799:1991 (E)
5.2.14 Ultraviolet lamp
6 Sampling -
Sampling should have been carried out in accord-
5.3 Apparatus for the preparation of sterol
ance with IS0 5555.
derivatives (if required)
7 Preparation of the test sample
53.1 Reaction tube, internally conical, of 5 ml ca-
pacity, with a screw cap, preferably lined with poly-
Prepare the test sample in accordance with IS0 661.
tetrafluoroethylene (PTFE) or haemolysis tube, of
5 ml capacity.
8 Procedure
53.2 Haemolysis tube, of 10 ml capacity.
WARNING - Avoid prolonged exposure to pyridine
or chloroform by, for example, carrying out all oper-
53.3 Graduated micropipettes
ations, so far as possible, in a fume cupboard.
5.4 Apparatus for analysis of sterols 8.1 Preparation of unsaponifiable matter
Using 5 g + 0,2 g of the test sample (clause 7) pre-
5.4.1 Gas chromatograph, with flame ionization de-
pare the uisaponifiable matter in accordance with
tector and recorder, with a packed column (5.4.2) or
IS0 3596-l or IS0 3596-2. Remove the solvent until
capillary (5.4.3) column and a suitable injector, such
about 1 ml of solution remains.
as a split type.
NOTES
5.4.2 Packed column, made of glass, 180 cm to
7 For fats having low sterol contents [approximately less
200 cm long and 2 mm to 4 mm in diameter, filled
than 0,l o/‘o (m/m)], it is advisable to increase the size of
with 2 % (m/m) to 5 % (m/m) of methylpoly-
the test portion in order to obtain at least 5 mg of sterols;
siloxanes*) or diatomaceous earth of particle size
the quantities of reagents would need to be modified as
150 pm to 180 pm or 120 urn to 150 pm3), coated with
a consequence.
methylphenylpolysiloxanes4), acid-washed and sila-
nized.
8 If the solvent is completely evaporated and the residue
dissolved in hexane, a better separation may be obtained
NOTES
in 8.2 .
3 As sterols tend to decompose at high temperatures if
8.2 Separation of sterols by thin-layer
they come into contact with metals (except silver), it is
recommended that an entirely glass system be used. chromatography
However, a stainless steel column may be used provided
that its efficiency and resolution are tested with a known
8.2.1 Preparation of plates
mixture of sterols and it is confirmed that there is no de-
composition or retention of sterols present in small quan-
If prepared plates are not available, prepare them
ti ties.
as follows. Carefully clean the glass plates (5.2.3)
using the ethanol (4.2.1), the light petroleum (4.2.2)
4 The separation of the sterols depends, to a large ex-
tent, on the stationary phase used (see 8.4.1.3). and the acetone (4.2.3) until fatty matter is totally
eliminated.
5.4.3 Capillary column, 10 m to 25 m long, of
For the preparation of five plates, put 30 g of the
internal diameter 0,2 mm to 0,5 mm, deactivated by
silica powder (4.2.6) into the 250 ml conical flask
silanization, then coated with methylpolysiloxanes*)
(5.2.11) and add 60 ml of water. Stopper and shake
or methylphenylpolysiloxanes4) or
...
SLOVENSKI STANDARD
SIST ISO 6799:1996
01-januar-1996
5DVWOLQVNHLQåLYDOVNHPDãþREHLQROMD'RORþDQMHYVHEQRVWLVWHURORY3UHVNXV]
XSRUDERSOLQVNHNURPDWRJUDILMH
Animal and vegetable fats and oils -- Determination of composition of the sterol fraction --
Method using gas chromatography
Corps gras d'origines animale et végétale -- Détermination de la composition de la
fraction stérolique -- Méthode par chromatographie en phase gazeuse
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 6799:1991
ICS:
67.200.10 5DVWOLQVNHLQåLYDOVNH Animal and vegetable fats
PDãþREHLQROMD and oils
SIST ISO 6799:1996 en
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.
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SIST ISO 6799:1996
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SIST ISO 6799:1996
INTERNATIONAL
STANDARD
Second edition
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Animal and vegetable fats and oils -
Determination of composition of the sterol
fraction - Method using gas chromatography
Corps gras d’origines animale et vkg&tale - D&termination de la
composition de la fraction stkolique - Mgthode par chromatographie
en phase gazeuse
Reference number
Is0 6799:1991(E)
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IS0 6799:1991(E)
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (IS0 member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through IS0
technical committees. Each member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has the right to be
represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the
work. IS0 collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an Inter-
national Standard requires approval by at least 75 % of the member
bodies casting a vote.
International Standard IS0 6799 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 34, Agricultural food products, Sub-Committee SC 11, Animal and
vegetable fats and oils.
This second edition cancels and replaces the first edition (IS0
6799:1983), of which it constitutes a technical revision.
Annex A of this International Standard is for information only.
0 IS0 1991
All rights reserved. No part of this publication may be reproduced or utilized in any form
or by any means, electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without
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Printed in Switzerland
I
ii
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SIST ISO 6799:1996
IS0 6799:1991(E)
Introduction
Sterols are characteristic constituents of fats whether these are liquid
or solid at ambient temperature. Animal fats always contain cholesterol,
whereas vegetable fats contain a mixture of sterols, for example
stigmasterol and /?-sitosterol, called phytosterols. Meanwhile, some
vegetable fats, e.g. colza, maize and palm, contain a small percentage
of cholesterol in the total sterols.
The results of the method specified in this International Standard can
be used for checking the purity of a fat, for checking conformity of a fat
with a sales description or advertised composition, or for checking a fat
for nutritional purposes.
For detecting the presence of animal fats in vegetable fats, the small
quantities of cholesterol, which may be present in vegetable fats, need
to be taken into account. In this case, it is necessary to carry out other
methods of analysis in addition to the identification of sterols, for ex-
ample the determination of the composition of fatty acids by gas chro-
matography (see IS0 5508 and IS0 5509). In practice, branched fatty
acids and fatty acids with an odd number of carbon atoms are only
present in appreciable quantities in animal fats.
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INTERNATIONAL STANDARD
Animal and vegetable fats and oils - Determination of
composition of the sterol fraction - Method using gas
chromatography
3 Principle
1 Scope
Saponification of a test portion, extraction of the
This international Standard specifies a gas chro-
matographic method using packed or capillary col- unsaponifiable matter and separation of sterols in
umns for the determination of the composition of the the unsaponifiable matter by thin-layer chromatog-
sterol fraction of animal and vegetable fats and oils. raphy. Analysis of the separated sterols, or of pre-
by gas chromatography using
pared derivatives,
Des-sterols are determined but substituted sterols
packed or capillary columns.
(i.e. methyl and dimethyl) may interfere and care is
needed in interpreting the results.
4 Reagents
Hazardous compounds are marked with an asterisk.
2 Normative references
Use only reagents of recognized analytical grade,
The following standards contain provisions which,
unless otherwise stated, and water complying with
through reference in this text, constitute provisions
grade 3 of IS0 3696,
of this International Standard. At the time of publi-
cation, the editions indicated were valid. All stan-
dards are subject to revision, and parties to 4.1 Reagents for the preparation of
agreements based on this International Standard
unsaponifiable matter
are encouraged to investigate the possibility of ap-
plying the most recent editions of the standards in- See IS0 3596-l or IS0 3596-2.
dicated below. Members of IEC and IS0 maintain
registers of currently valid International Standards.
4.2 Reagents for the separation of sterols
IS0 661:1989, Animal and vegetable fats and oils -
Preparation of test sample.
4.2.1 Ethanol, 95 % (V/v).
IS0 3596-l :1988, Animal and vegetable fats and oils
4.2.2 Light petroleum, distilling in the range 30 OC
- Determination of unsaponifiable matter - Part I:
to 60 “C.
Method using diethyl ether extraction (Reference
method).
4.2.3 Acetone
IS0 3596-2:1988, Animal and vegetable fats and oils
- Determination of unsaponifiable matter - Part 2:
4.2.4 Developing solvent, such as chloroform* or
Rapid method using hexane extraction.
hexane/ethyl acetate [80 + 20 (V/v)] mixture or
toluene*/acetone [95 + 5 (V/Q] mixture.
IS0 3696:1987, Water for analytical laboratory use -
Specification and test methods.
4.2.5 Ethyl acetate or diethyl ether, free from per-
oxides and residues.
IS0 5508:1990, Animal and vegetable fats and oils -
Analysis by gas chromatography of methyl esters of
fatty acids. 4.2.6 Silica powder with binder, thin-layer chro-
1
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IS0 6799:1991(E)
carried out, the solutions of pure sterols may be re-
matographic qualityI) (if necessary; see 8.2.1).
placed by a 25 g/l solution of sterols of sunflower oil,
a 25 g/l solution of sterols of rapeseed oil and a
4.2.7 Indicator solution, for example rhodamine 6G,
20 g/l solution of cholesterol. The sterols of these
0,5 g/l solution.
solutions shall be prepared as described in 8.1 and
8.2.
Any other colouring product or detection agent, such
as a 0,5 g/l solution of 2’,7’-dichlorofluorescein in
95 % (V/V) ethanol, may be used provided that it
5 Apparatus
does not react with the sterols.
Usual laboratory apparatus and, in particular, the
4.2.8 Cholesterol, 100 g/l solution in chloroform.
following.
4.3 Reagents for the preparation of sterol
5.1 Apparatus for the preparation of
derivatives
unsaponifiable matter
4.3.1 Pyridine, anhydrous?
See IS0 3596-l or IS0 3596-2.
4.3.2 Hexamethyldisilazane
5.2 Apparatus for the separation of sterols
4.3.3 Trimethylchlorosilane
52.1 Developing tank, made of glass, with a ground
glass lid, suitable for use with plates of dimensions
4.3.4 Acetic anhydride
200 mm x 200 mm.
4.3.5 Hexane
52.2 Spreader and platform, for preparation of the
plates (if necessary; see 8.2.1).
4.3.6 Sodium hydrogen carbonate, IO g/l solution.
of dimensions 200 mm x
52.3 Prepared plates,
4.3.7 Hydrochloric acid, c(HCI) = 0,5 mol/l.
200 mm, or glass plates, of the same dimensions.
4.3.8 Sodium sulfate, anhydrous.
5.2.4 Micropipettes or microsyringes, capable of
delivering droplets of 0,3 pl to 0,4 ul. An automatic
drop applicator may be used.
4.4 Reagents for analysis by gas
chromatography
s for spraying the indicator solution
5.2.5 Apparatu
the plates
onto
4.4.1 Carrier gas
Inert gas (nitrogen, helium, argon, hydrogen, etc.),
5.2.6 Microspatula
thoroughly dried and with an oxygen content of less
than 10 mg/kg.
of being operated at
5.2.7 Oven, capable
103 “C + 2 OC.
-
NOTE 1 Hydrogen, which is used only with capillary
columns, can double the speed of analysis but is hazard-
ous. Safety devices are available.
52.8 Boiling water-bath
4.4.2 Pure sterols, such as cholesterol, stigma-
52.9 Filter paper, of 55 mm diameter, fluted, for
sterol, brassicasterol, /?-sitosterol and campesterol,
retaining fine particles.
standard solutions in diethyl ether or any other
suitable solvent, corresponding to 20 g of sterol per
52.10 Conical flasks, of 25 ml capacity.
Iitre.
NOTE 2 Most pure sterols are not commercially avail- 5.2.11 Conical flask, of 250 ml capacity.
able. The European Community Bureau of Reference
(BCR) is preparing sterol reference materials, e.g. RM162
5.2.12 Reflux condenser, to fit the 25 ml conica
(maize and soya in equal masses).
flasks 5.2.10).
If it is impossible to obtain the various pure sterols,
5.2.13 Desiccator, containing an efficient desiccant
and particularly if only the qualitative analysis is
available.
1) Silica gels containing the indicator solution (4.2.7) are commercially
2
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SIST ISO 6799:1996
IS0 6799:1991 (E)
5.2.14 Ultraviolet lamp
6 Sampling -
Sampling should have been carried out in accord-
5.3 Apparatus for the preparation of sterol
ance with IS0 5555.
derivatives (if required)
7 Preparation of the test sample
53.1 Reaction tube, internally conical, of 5 ml ca-
pacity, with a screw cap, preferably lined with poly-
Prepare the test sample in accordance with IS0 661.
tetrafluoroethylene (PTFE) or haemolysis tube, of
5 ml capacity.
8 Procedure
53.2 Haemolysis tube, of 10 ml capacity.
WARNING - Avoid prolonged exposure to pyridine
or chloroform by, for example, carrying out all oper-
53.3 Graduated micropipettes
ations, so far as possible, in a fume cupboard.
5.4 Apparatus for analysis of sterols 8.1 Preparation of unsaponifiable matter
Using 5 g + 0,2 g of the test sample (clause 7) pre-
5.4.1 Gas chromatograph, with flame ionization de-
pare the uisaponifiable matter in accordance with
tector and recorder, with a packed column (5.4.2) or
IS0 3596-l or IS0 3596-2. Remove the solvent until
capillary (5.4.3) column and a suitable injector, such
about 1 ml of solution remains.
as a split type.
NOTES
5.4.2 Packed column, made of glass, 180 cm to
7 For fats having low sterol contents [approximately less
200 cm long and 2 mm to 4 mm in diameter, filled
than 0,l o/‘o (m/m)], it is advisable to increase the size of
with 2 % (m/m) to 5 % (m/m) of methylpoly-
the test portion in order to obtain at least 5 mg of sterols;
siloxanes*) or diatomaceous earth of particle size
the quantities of reagents would need to be modified as
150 pm to 180 pm or 120 urn to 150 pm3), coated with
a consequence.
methylphenylpolysiloxanes4), acid-washed and sila-
nized.
8 If the solvent is completely evaporated and the residue
dissolved in hexane, a better separation may be obtained
NOTES
in 8.2 .
3 As sterols tend to decompose at high temperatures if
8.2 Separation of sterols by thin-layer
they come into contact with metals (except silver), it is
recommended that an entirely glass system be used. chromatography
However, a stainless steel column may be used provided
that its efficiency and resolution are tested with a known
8.2.1 Preparation of plates
mixture of sterols and it is confirmed that there is no de-
composition or retention of sterols present in small quan-
If prepared plates are not available, prepare them
ti ties.
as follows. Careful
...
NORME
INTERNATIONALE
Deuxième édition
19914245
Corps gras d’origines animale et végétale -
Détermination de la composition de la fraction
stérolique - Méthode par chromatographie en
phase gazeuse
Animal and vegetable fats and oils - Determination of composition of
the sterol fraction - Method using gas chromatography
Numéro de référence
ISO 6799:1991(F)
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ISO 6799:1991 (F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres
de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre inté-
ressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique créé
à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux tra-
vaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique
internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotech-
nique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techni-
ques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins
des comités membres votants.
La Norme internationale ISO 6799 a été élaborée par le comité techni-
que ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 11,
Corps gras d’origines animale et végétale.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition
(ISO 6799:1983), dont elle constitue une révision technique.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement
à titre d’information.
0 ISO 1991
Droits de reproduction réservés. Aucune partie de cette publication ne peut être repro-
duite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique OU
mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-1211 Genève 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
ii
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 6799:1991 (F)
Introduction
Les stérols font partie des constituants caractéristiques des corps gras.
Les graisses animales contiennent toujours du cholestérol, tandis que
les huiles et les graisses végétales renferment un mélange de stérols,
par exemple de stigmastérol et de /3-sitostérol, appelés phytostérols.
Cependant, cetaines huiles et graisses végétales, par exemple I’huile
de colza, de maïs et de palme, contiennent un faible pourcentage de
cholestérol dans les stérols totaux.
Les résultats de la méthode spécifiée dans la présente Norme interna-
tionale peuvent être utilisés pour vérifier la pureté d’un corps gras, la
conformité d’un corps gras à sa dénomination de vente ou à la compo-
sition annoncée, ou pour contrôler les propriétés nutritionnelles d’un
corps gras alimentaire.
Pour déceler la présence de graisses animales dans des graisses vé-
gétales, les petites quantités de cholestérol, qui peuvent originellement
être présentes dans ces dernières, doivent être prises en considération.
Dans ces conditions, il est nécessaire, en plus de l’identification des
stérols, de mettre également en œuvre d’autres méthodes d’analyse,
par exemple la détermination de la composition en acides gras par
chromatographie en phase gazeuse (voir ISO 5508 et ISO 5509). En
pratique, les acides gras ramifiés et les acides gras à nombre impair
d’atomes de carbone ne sont présents en quantité appréciable que dans
les corps gras d’origine animale.
. . .
III
---------------------- Page: 3 ----------------------
Page blanche
---------------------- Page: 4 ----------------------
~--~ ~~~
ISO 6799:1991 (F)
NORME INTERNATIONALE
Corps gras d’origines animale et végétale - Détermination
de la composition de la fraction stérolique - Méthode par
chromatographie en phase gazeuse
insaponifiables - Partie 2: Méthode rapide par ex-
1 Domaine d’application
traction à I’hexane.
La présente Norme internationale spécifie une mé-
ISO 3696:1987, Eau pour laboratoire à usage analyti-
thode de détermination, par chromatographie en
- Spécifkation et méthodes d’essai.
que
phase gazeuse sur colonne remplie ou capillaire,
de la composition de la fraction stérolique des corps
ISO 5508:1990, Corps gras d’origines animale et vé-
gras d’origines animale et végétale.
gétale - Analyse par chromatographie en phase ga-
zeuse des esters méthyliques d’acides gras.
Les désoxystérols sont déterminés mais les stérols
substitués (c’est-à-dire méthyle et diméthyle) peu-
vent interférer et il faut y prêter attention lors de
3 Principe
l’interprétation des résultats.
Saponification d’une prise d’essai, extraction de
I’insaponifïable et isolement des stérols de I’insa-
ponifiable par chromatographie en couche mince.
2 Références normatives
Analyse des stérols isolés ou de dérivés préparés
à partir de ceux-ci, par chromatographie en phase
Les normes suivantes contiennent des dispositions
gazeuse sur colonne remplie ou capillaire.
qui, par suite de la référence qui en est faite,
constituent des dispositions valables pour la pré-
4 Réactifs -
sente Norme internationale. Au moment de la pu-
blication, les éditions indiquées étaient en vigueur.
Les composés dangereux sont marqués d’un asté-
Toute norme est sujette à révision et les parties
risque.
prenantes des accords fondés sur la présente
Norme internationale sont invitées à rechercher la
Sauf indication différente, utiliser uniquement des
possibilité d’appliquer les éditions les plus récentes
réactifs de qualité analytique reconnue et de l’eau
des normes indiquées ci-après. Les membres de la
conforme au grade 3 de I’ISO 3696.
CEI et de I’ISO possèdent le registre des Normes
internationales en vigueur à un moment donné.
4.1 Réactifs pour la préparation de
I’insaponifiable
ISO 661:1989, Corps gras d’origines animale et vé-
gétale - Préparation de /‘échantillon pour essai.
Voir I’ISO 3596-l ou I’ISO 3596-2.
ISO 3596-l :1988, Corps gras d’origines animale et
4.2 Réactifs pour l’isolement des stérols
végétale - Détermination de la teneur en matières
insaponifiables - Partie 1: Méthode par extraction
4.2.1 Éthanol, à 95 % (V/v).
à /‘oxyde diéthylique (méthode de référence).
ISO 3596-2:1988, Corps gras d’origines animale et 4.2.2 Éther de pétrole, point d’ébullition de 30 “C à
végétale - Détermination de la teneur en matières 60 “C.
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 6799:1991(F)
d’analyse mais présente des dangers. II existe cependant
4.2.3 Acétone
des dispositifs de sécurité.
4.2.4 Solvant de dévelopement, tel que du
4.4.2 Stérols purs, tels * que cholestérol, stigma-
chloroforme* ou un mélange d’hexane-acétate
stérol, brassicastérol, p-sitostérol et campestérol,
d’éthyle [SO + 20 (v/v)] ou un mélange de
solutions étalons dans de l’oxyde diéthylique ou tout
toluène*-acétone [95 + 5 (v/v)].
autre solvant convenable, correspondant à 20 g par
litre.
Acétate d’éthyle ou oxyde diéthylique, exempt
4.2.5
de peroxydes et de résidus.
NOTE 2 La plupart des stérols purs ne sont pas com-
mercialisés. Le Bureau Communautaire de Références
4.2.6 Silice en poudre, avec liant, de qualité pour (BCR) prépare des stérols étalons, par exemple RM162
(maïs et soja en masses égales).
chromatographie en couche mince’) (si nécessaire,
voir 8.2.1).
Dans le cas où il est impossible de se procurer les
divers stérols purs, et principalement lorsque seu-
4.2.7 Révélateur, par exemple rhodamine 6G, solu-
lement l’analyse qualitative est effectuée, les solu-
tion a 0,5 g/l.
tions de stérols purs peuvent être remplacées par
Tout autre produit colorant ou agent de détection, tel une solution contenant 25 g/l de stérols d’huile de
que la dichloro-2’,7’ fluorescéine en solution à tournesol, 25 g/l de stérols d’huile de colza et
0,5 g/l dans I’éthanol à 95 % (V/I/), peut être utilisé 20 g/l de cholestérol. Les stérols de ces solutions
à condition de ne pas réagir avec les stérols. doivent être préparés comme décrit en 8.1 et 8.2.
4.2.8 Cholestérol, solution chloroformique à
5 Appareillage
100 g/l.
Matériel courant de laboratoire, et notamment
4.3 Réactifs pour la préparation des dérivés
des stérols
5.1 Appareillage pour la préparation de
I’insaponifiable
4.3.1 Pyridine, anhydre.*
Voir I’ISO 3596-l ou I’ISO 3596-2.
4.3.2 Hexaméthyldisilazane
5.2 Appareillage pour l’isolement des stérols
4.3.3 Triméthylchlorosilane
52.1 Cuve de développement, en verre, avec cou-
4.3.4 Anhydride acétique vercle en verre rodé, susceptible de recevoir des
plaques de dimensions 200 mm x 200 mm.
4.35 Hexane
5.2.2 Étaleur et socle, pour la préparation des pla-
ques (si necessaire, voir 8.2.1).
4.3.6 Hydrogénacarbonate de sodium, sol ut ion à
10 g/l.
5.2.3 Plaques prêtes à l’emploide dimensions
200 mm x 200 mm, ou plaques en verre, de mêmes
4.3.7 Acide chlorhydrique, solution
dimensions.
c(HCl) = 0,5 molll.
5.2.4 Microplpettes ou microseringues, permettant
4.3.8 Sulfate de sodium, anhydre.
de délivrer des gouttelettes de 0,3 pl à 0,4 ~1. Un
appareil automatique pour le dépôt des gouttelettes
4.4 Réactifs pour l’analyse par
peut être utilisé.
chromatographie en phase gazeuse
5.2.5 Appareil pour pulvériser le révélateur sur les
4.4.1 Gaz vecteur plaques
Gaz inerte (tel que azote, hélium, argon ou hydro-
5.2.6 Microspatule
géne, etc.) soigneusement desséché et contenant
moins de 10 mg/kg d’oxygène.
5.2.7 Étuve, réglable à 303 “C + 2 “C.
-
NOTE 1 L’hydrogène que l’on utilise seulement avec
5.2.8 Bain d’eau bouillante
une colonne capillaire permet de doubler la vitesse
Il existe dans le commerce, des gels de silice contenant le révélateur (4.2.7)
1)
2
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 6799:1991 (F)
composition ou de rétention des stérols présents en fai-
5.2.9 Papier-fiitre, de diamètre 55 mm, plissé pour
bfes quantités.
la rétention des particules fines.
4 La séparation des stérols dépend, en grande partie,
52.10 Fioles coniques, de 25 ml de capacité.
me utilisée (voir 8. 4.1.
de la phase stationnair
3).
5.2.11 Fiole conique, de 250 ml de capacité. 5.4.3 Colonne capillaire, de 10 m à 25 m de long,
0,2 mm à 0,5 mm, de diamètre intérieur, désactivée
par silanisation, puis imprégnée de méthylpoly-
52.12 Réfrigérant à reflux, s’adaptant aux fioles
siloxanes*) ou de méthylphénylpolysiloxanes3) ou de
coniques de 25 ml (5.2.10).
toute autre phase appropriée.
5.2.13 Dessiccateur, contenant un déshydratant ef-
NOTES
ficace.
tableau 2 pour les temps de rétention relatifs par
5 Voir
au choies térol.
rapport
5.2.14 Lampe à ultratviolet
6 Voir note 4 en 5.4.2.
5.3 Appareillage pour la préparation des
dérivés des stérols (éventuellement)
6 Échantillonnage
5.3.1 Tube à réaction, conique intérieurement, de L’échantillonnage doit avoir été effectué conformé-
5 ml de capacité, muni d’un bouchon à vis doublé, ment à I’ISO 5555.
de préférence, de polytétrafluoroéthylène (PTFE), ou
tube à hémolyse, de 5 ml de capacité.
7 Préparation de l’échantillon pour l’essai
5.3.2 Tube à hémolyse, de 10 ml de capacité.
Préparer l’échantillon pour essai conformément à
I’ISO 661.
5.3.3 Micropipettes graduées
8 Mode opératoire
5.4 Appareillage pour l’analyse des stérols
AVERTISSEMENT - Éviter toute exposition prolon-
5.4.1 Chromatographe en phase gazeuse, avec dé-
gée à la pyridine ou au chloroforme, par exemple,
tecteur a ionisation de flamme et enregistreur,
en effectuant toutes les opérations, dans la mesure
équipé d’une colonne remplie (5.4.2) ou d’une co- du possible, sous une hotte d’aspiration.
lonne capillaire (5.4.3) et d’un injecteur approprié
tel qu’un injecteur à division.
8.1 Préparation de i’insaponifiabie
5.4.2 Colonne remplie, en verre, de 180 cm à
En utilisant 5 g + 0,2 g d’échantillon pour l’essai
200 cm de long, de 2 mm à 4 mm de diamétre,
(voir article 7), -préparer I’insaponifiable selon
silanisée et imprégnée de 2 % (m/m) à 5 % (m/m)
I’ISO 3596-l ou I’ISO 3596-2, en éliminant le solvant
de méthylpolysiloxanes *) ou de méthylphénylpoly-
jusqu’à obtention d’environ 1 ml de solution.
siloxanes3) sur terre de diatomées de granulométrie
NOTES
150 pm à 180 pm ou 120 pm à 150 pm4).
NOTES 7 Pour les corps gras à faible teneur en stérols
[approximativement inférieure à 0,l % (m/m)], il est
3 Étant donné que les stérols ont tendance à se décom- conseillé d’augmenter la prise d’essai afin de disposer
poser à haute température lorsqu’ils sont en contact avec d’au moins 5 mg de stérols; modifier en conséquence les
des métaux (l’argent excepté), il est recommandé d’em- quantités de réactifs.
ployer un système entièrement en verre. Toutefois, on
peut utiliser une colonne en acier inoxydable, à condition 8 On peut obtenir une meilleure séparation en 8.2 si fe
solvant est complètement évaporé et si le résidu se dis-
de tester l’efficacité et la résolution de celle-ci avec un
mélange connu de stérols, et de vérifier l’absence de dé- sout dans I’hexane.
2) SE 30, JXR ou OV 1 sont des exemples de produits appropriés disponibles sur le marché. Cette information est donnée
à l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recom-
mande l’emploi exclusif de
...
IS0
NORME
6799
I NTE R NAT1 O NALE
Deuxième &dition
199 1-1 2-1 5
Corps gras d’origines animale et végétale -
Détermination de la composition de la fraction
- Méthode par chromatographie en
stérolique
phase gazeuse
Animal and vegetable fats and oils - Determination of composition of
the sterol fraction - Method using gas chromatography
Numéro de référence
IS0 6799: 1991 (F)
---------------------- Page: 1 ----------------------
IS0 6799:1991(F)
Avant- propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mond i ale d ’org a n is mes nation aux de norm a I is at ion (com it és m e m b res
de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre inté-
ressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique créé
à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux tra-
vaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique
internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotech-
nique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techni-
ques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 au moins
des comités membres votants.
La Norme internationale IS0 6799 a été élaborée par le comité techni-
que ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 11,
Corps gras d‘origines animale et végétale.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition
(IS0 6799:1983), dont elle constitue une révision technique.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement
à tltre d’information.
8 IS0 1991
Droits de reproduction reserves. Aucune partie de cette publication ne peut 6tre repro-
duite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, electronique ou
mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord ecrit de I’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 CH-I211 Genève 20 Suisse
Imprimé en Suisse
ii
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IS0 6799:1991 (F)
Introduction
Les stérols font partie des constituants caractéristiques des corps gras.
Les graisses animales contiennent toujours du cholestérol, tandis que
les huiles et les graisses végétales renferment un mélange de stérols,
par exemple de stigmastérol et de 1-sitostérol, appelés phytostérols.
Cependant, cetaines huiles et graisses végétales, par exemple l’huile
de colza, de mais et de palme, contiennent un faible pourcentage de
cholestérol dans les stérols totaux.
Les résultats de la méthode spécifiée dans la présente Norme interna-
tionale peuvent être utilisés pour vérifier la pureté d’un corps gras, la
conformité d’un corps gras à sa dénomination de vente ou à la compo-
sition annoncée, ou pour contrôler les propriétés nutritionnelles d’un
corps gras alimentaire.
Pour déceler la présence de graisses animales dans des graisses vé-
gétales, les petites quantités de cholestérol, qui peuvent originellement
être présentes dans ces dernières, doivent être prises en considération.
Dans ces conditions, il est nécessaire, en plus de l’identification des
stérols, de mettre également en œuvre d’autres méthodes d’analyse,
la détermination de la composition en acides gras par
par exemple
chromatographie en phase gazeuse (voir IS0 5508 et IS0 5509). En
pratique, les acides gras ramifiés et les acides gras à nombre impair
d’atomes de carbone ne sont présents en quantité appréciable que dans
les corps gras d‘origine animale.
iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
NORME INTERNATIONALE IS0 6799:1991 (F)
Corps gras d’origines animale et végétale - Détermination
de la composition de la fraction stérolique - Méthode par
chromatographie en phase gazeuse
insaponifiables - Partie 2: Méthode rapide par ex-
1 Domaine d’application
traction à I‘hexane.
La présente Norme internationale spécifie une mé-
IS0 3696:1987, €au pour laboratoire à usage analyti-
thode de détermination, par chromatographie en
que - Spécification et méthodes d‘essai.
phase gazeuse sur colonne remplie ou capillaire,
de la composition de la fraction stérolique des corps
IS0 5508:1990, Corps gras d‘origines animale et vé-
gras d’origines animale et végétale.
gétale - Analyse par chromatographie en phase ga-
zeuse des esters niéthyliques d’acides gras.
Les désoxystérols sont déterminés mais les stérols
substitués (c’est-à-dire méthyle et diméthyle) peu-
vent interférer et il faut y prêter attention lors de
3 Principe
l’interprétation des résultats.
Saponification d’une prise d’essai, extraction de
I’insaponifiable et isolement des stérols de I’insa-
ponifiable par chromatographie en couche mince.
2 Références normatives
Analyse des stérols isolés ou de dérivés préparés
à partir de ceux-ci, par chromatographie en phase
Les normes suivantes contiennent des dispositions
gazeuse sur colonne remplie ou capillaire.
qui, par suite de la référence qui en est faite,
constituent des dispositions valables pour la pré-
4 Réactifs
sente Norme internationale. Au moment de la pu-
blication, les éditions indiquées étaient en vigueur.
Les composés dangereux sont marqués d‘un asté-
Toute norme est sujette à révision et les parties
risque.
prenantes des accords fondés sur la présente
Norme internationale sont invitées à rechercher la
Sauf indication différente, utiliser uniquement des
possibilité d’appliquer les éditions les plus récentes
réactifs de qualité analytique reconnue et de l’eau
des normes indiquées ci-après. Les membres de la
conforme au grade 3 de I’ISO 3696.
CE1 et de IWO possèdent le registre des Normes
internationales en vigueur à un moment donné.
4.1 Réactifs pour la préparation de
I’insaponifiable
IS0 661:1989, Corps gras d’origines animale et vé-
gétale - Préparation de I‘échantillon pour essai.
Voir I’ISO 3596-1 ou I’ISO 3596-2.
IS0 3596-1:1988, Corps gras d’origines animale et
4.2 Réactifs pour l’isolement des stérols
végétale - Détermination de la teneur en matières
insaponifiables - Partie I: Méthode par extraction
4.2.1 Éthanol, à 95 (V/V).
à l‘oxyde diéthylique (méthode de référence).
IS0 3596-2:1988, Corps gras d’origines animale et 4.2.2 Ether de pétrole. point d‘ébullition de 30 “C à
- Détermination de la teneur en matières
végétale 60 “C.
1
---------------------- Page: 4 ----------------------
IS0 6799:1991(F)
d’analyse mais présente des dangers. II existe cependant
4.2.3 Acétone
des dispositifs de sécurité.
4.2.4 Solvant de dévelopement, tel que du
4.4.2 Stérols purs, tels ’ que cholestérol, stigma-
chloroforme* ou un mélange d’hexane-acétate
stérol, brassicastérol, !-sitostérol et campestérol,
d’éthyle [SO+ 20 (V/V)] ou un mélange de
solutions étalons dans de l’oxyde diéthylique ou tout
toluène*-acétone [95 + 5 (V/V)].
autre solvant convenable, correspondant à 20 g par
litre.
4.2.5 Acétate d’éthyle ou oxyde diéthylique, exempt
de peroxydes et de résidus.
NOTE 2 La plupart des stérols purs ne sont pas com-
mercialisés. Le Bureau Communautaire de Références
4.2.6 Silice en poudre, avec liant, de qualité pour
(BCR) prépare des stérols étalons, par exemple RM162
(maïs et soja en masses égales).
chromatographie en couche mince’) (si nécessaire,
voir 8.2.1).
Dans le cas où il est impossible de se procurer les
divers stérols purs, et principalement lorsque seu-
4.2.7 Révélateur, par exemple rhodamine 6G, solu-
lement l’analyse qualitative est effectuée, les solu-
tion à 0,5 g/l.
tions de stérols purs peuvent être remplacées par
Tout autre produit colorant ou agent de détection, tel une solution contenant 25 g/l de stérols d’huile de
que la dichloro-2’,7’ fluorescéine en solution à tournesol, 25 g/l de stérols d’huile de colza et
0,5 g/l dans I’éthanol à 95 % (VjV), peut être utilisé 20 g/l de cholestérol. Les stérols de ces solutions
à condition de ne pas réagir avec les stérols. doivent être préparés comme décrit en 8.1 et 8.2.
4.2.8 Cholestérol, solution chloroformique à
5 Appareillage
100 g/l.
Matériel courant de laboratoire. et notamment
4.3 Réactifs pour la préparation des dérivés
des stérols
5.1
Appareillage pour la préparation de
I’lnsaponifla ble
4.3.1 Pyridine, anhydre.*
Voir I’ISO 3596-1 ou I‘ISO 3596-2
Hexaméthyldisilazane
4.3.2
5.2 Appareillage pour l’isolement des stérols
4.3.3 Trimethylchlorosilane
5.2.1 Cuve de développement, en verre. avec cou-
4.3.4 Anhydride acétique vercle en verre rodé, susceptible de recevoir des
plaques de dimensions 200 mm x 200 mm.
4.3.5 Hexane
5.2.2 Étaleur et socle, pour la préparation des pla-
ques (si nécessaire, voir 8.2.1).
4.3.6 Hydrogénocarbonate de sodium, solution à
10 g/l
5.2.3 Plaques prêtes à I’emploide dimensions
200 mm x 200 mm, ou plaques en verre, de mêmes
4.3.7 Acide chlorhydrique, solution
dimensions.
c(HCI) = 0,5 mol/l.
5.2.4 Microplpettes ou microseringues, permettant
4.3.8 Sulfate de sodium, anhydre
de délivrer des gouttelettes de 0,3 p1 à 0,4 pl. Un
appareil automatique pour le dépôt des gouttelettes
4.4 Réactifs pour l’analyse par
peut être utilisé.
Chromatographie en phase gazeuse
5.2.5 Appareil pour pulvériser le révélateur sur les
4.4.1 Gaz vecteur
plaques
Gaz inerte (tel que azote, hélium, argon ou hydro-
5.2.6 Microspatule
gene, etc.) soigneusement desséché et contenant
moins de 10 mg/kg d’oxygène.
5.2.7 Étuve, réglable à 103 “C k 2 “C
NOTE 1 L‘hydrogène que l’on utilise seulement avec
une colonne capillaire permet de doubler la vitesse 5.2.8 Bain d’eau bouillante
1) II existe dans le commerce, des gels de silice contenant le révélateur (4.2.7)
2
---------------------- Page: 5 ----------------------
IS0 6799:1991(F)
composition ou de rétention des stérols présents en fai-
5.2.9 Papier-filtre, de diamètre 55 rnrn, plissé pour
bles quantités.
la rétention des particules fines.
4 La séparation des stérols dépend, en grande partie,
5.2.10 Fioles coniques, de 25 ml de capacité
de la phase stationnaire utilisée (voir 8.4.1 3).
de 250 ml de capacité
5.2.11 Fiole conique, 5.4.3 Colonne capillaire, de 10 rn à 25 rn de long,
rnrn à 0,5 rnrn, de diamètre intérieur, désactivée
0,2
par silanisation, puis imprégnée de méthylpoly-
5.2.12 Réfrigérant a reflux, s’adaptant aux fioles
siloxanes*’ ou de rnéthylphénylpolysil~xanes~) ou de
coniques de 25 ml (5.2.10).
toute autre phase appropriée.
5.2.13 Dessiccateur, contenant un déshydratant ef-
NOTES
ficace.
5 Voir tableau2 pour les temps de rétention relatifs par
rapport au cholestérol.
5.2.14 Lampe a ultratviolet
6 Voir note 4 en 5.4.2.
5.3 Appareillage pour la préparation des
dérivés des stérols (éventuellement)
6 Échantillonnage
5.3.1 Tube à réaction, conique intérieurement, de L’échantillonnage doit avoir été effectué conformé-
5 rnl de capacité, muni d’un bouchon à vis doublé, ment à I’ISO 5555.
de préférence, de polytétrafluoroéthylène (PTFE), ou
tube à hémolyse, de 5 rnl de capacité.
Préparation de I’échantillon pour l’essai
7
5.3.2 Tube à hémolyse, de 10 ml de capacité.
Préparer I’échantillon pour essai conformément à
I’ISO 661.
5.3.3 Micropipettes graduées
8 Mode opératoire
Appareillage pour l’analyse des stCrols
5.4
AVERTISSEMENT - Éviter toute exposition prolon-
avec dé- gée a la pyridine ou au chloroforme, par exemple,
5.4.1 Chromatographe en phase gazeuse,
tecteur à ionisation de flamme et enregistreur, en effectuant toutes les opérations, dans la mesure
équipé d’une colonne remplie (5.4.2) ou d’une co- du possible, sous une hotte d’aspiration.
lonne capillaire (5.4.3), et d’un injecteur approprié
tel qu’un injecteur à division.
8.1 Préparation de I’insaponifiable
5.4.2 Colonne remplie, en verre, de 180 crn a
En utilisant 5 g 0.2 g d’échantillon pour l’essai
200 crn de long, de 2 rnrn à 4 rnm de diarnetre,
(voir alticle 7), préparer I’insaponifiable selon
silanisée et imprégnée de 2 % (rnirn) à 5 Oh (m,lm)
I’ISO 3596-1 ou I’ISO 3596-2, en élirninant le solvant
de rn ét hyl polysi loxa n es2) ou de rn é t hyl p h é nyl poly-
jusqu’à obtention d’environ 1 rnl de solution.
siloxanes3) sur terre de diatomées de granulométrie
NOTES
150 prn à 180 prn ou 120 prn à 150 prn4’.
7 Pour les corps gras à faible teneur en stérols
NOTES
[approximativement inférieure à 0,l O/O (rn/rn)], il est
3 Étant donné que les stérols ont tendance à se décom- conseillé d’augmenter la prise d’essai afin de disposer
poser à haute température lorsqu’ils sont en contact avec d’au moins 5 mg de stérols: modifier en conséquence les
des métaux (l’argent excepté), il est recommandé d’em- quantités de réactifs.
ployer un système entièrement en verre. Toutefois, on
8 On peut obtenir une meilleure séparation en 8.2 si le
peut utiliser une colonne en acier inoxydable, à condition
solvant est complètement évaporé et si le résidu se dis-
de tester l’efficacité et la résolution de celle-ci avec un
sout dans I’hexane.
mélange connu de stérols, et de vérifier l’absence de dé-
2) SE 30, JXR ou OV 1 sont des exemples de produits appropriés disponibles sur le marché. Cette information est donnée
à l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recom-
m
...
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