ISO 6799:1983
(Main)Animal and vegetable fats and oils — Determination of composition of the sterol fraction — Method by gas-liquid chromatography
Animal and vegetable fats and oils — Determination of composition of the sterol fraction — Method by gas-liquid chromatography
Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination de la composition de la fraction stérolique — Méthode par chromatographie en phase gazeuse
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
International Standard 6799
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATlONOME~YHAPOLlHAfl OPiAHRJAUHfl Il0 CTAH~qAPTH3AUHH.ORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Animal and vegetable fats and oils - Determination
0
of composition of the sterol fraction - Method
by g as4 i q u i d c h rom at o g rap h y
Corps gras d'origines animale et végétale - Détermination de la composition de la fraction stérolique - Méthode par
chromatographie en phase gazeuse
First edition - 1983-05-01
Ref. No. IS0 6799-1983 (E)
UDC 664.3 : 543.544.45 : 547.92
Descriptors : agricultural products, animal fats, vegetable fats, tests, determination of content, sterols, gas chromatographic analysis.
Price based on 5 pages
---------------------- Page: 1 ----------------------
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies). The work of developing Inter-
national Standards is carried out through IS0 technical committees. Every member
body interested in a subject for which a technical committee has been authorized has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with EO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council.
International Standard IS0 6799 was developed by Technical Committee ISO/TC 34,
Agricultural food products, and was circulated to the member bodies in April 1981.
It has been approved by the member bodies of the following countries:
Australia India Romania
Brazil Iran South Africa, Rep. of
Canada Israel Spain
Czechoslovakia Kenya Sri Lanka
Dominican Republic Korea, Rep. of Tanzania
Egypt, Arab Rep. of Malaysia Thailand
Ethiopia Mexico United Kingdom
France New Zealand USSR
Germany, F.R. Philippines Yugoslavia
Hungary Portugal
The member bodies of the following countries expressed disapproval of the document
on technical grounds :
Netherlands
USA
This International Standard has also been approved by the International Union of Pure
and Applied Chemistry (IUPAC).
O International Organization for Standardization, 1983 0
Printed in Switzerland
---------------------- Page: 2 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD IS0 6799-1983 (E)
Animal and vegetable fats and oils - Determination
of composition of the sterol fraction - Method
by gas-liquid chromatography
O Introduction saponifiable matter by thin-layer chromatography. Analysis of
the separated sterols, or of prepared derivatives, by gas-liquid
Sterols form a part of the characteristic constituents of fats and column chromatography.
oils. Animal fats always contain cholesterol, whereas vegetable
fats and oils contain a mixture of sterols, for example
stigmasterol and fi-sitosterol, called phytosterols. However, 4 Reagents
various vegetable fats and oils, in particular palm oil, contain a
0
small percentage of cholesterol in the total sterols. All reagents shall be of recognized analytical quality. The water
used shall be distilled water or water of at least equivalent
purity.
1 Scope and field of application
4.1 Reagents for the preparation of unsaponifiable
matter
This International Standard specifies a gas-liquid column
chromatographic method for the determination of the composi-
These will be specified in IS0 3569 which will specify a method
tion of the sterol fraction of animal and vegetable fats and oils.
for the preparation and determination of unsaponifiable matter.
The method is used for checking the purity of a fat or oil, or for
4.2 Reagents for the separation of sterols
checking the conformity of a fat or oil to its sales description or
advertized composition, and applies to animal and vegetable
fats and oils and to mixtures of the two.
4.2.1 Ethanol, 95 % (l‘/VI.
If this method is used for detecting the presence of animal fats
4.2.2 Light petroleum, distilling in the range 30 to 60 OC.
in vegetable fats, the small quantities of cholesterol, which may
be present in vegetable fats, need to be taken into account. In
this case, it is necessary to carry out other methods of analysis 4.2.3 Acetone.
in addition to the identification of sterols, for example the
determination of the composition of fatty acids by gas-liquid
4.2.4 Chloroform or, if the use of chloroform is considered
0
chromatography (see IS0 5508 and IS0 5509). In practice,
to present a safety hazard, any other suitable solvent or
branched fatty acids and fatty acids with an odd number of car-
mixture of suitable solvents, for example a hexane/ethyl
bon atoms are only present in appreciable quantities in animal
acetate [80 + 20 ( V/ VI1 mixture or a toluene/acetone [95 + 5
fats and oils.
(I// Vi1 mixture.
4.2.5 Diethyl ether, free from peroxides and residues.
2 References
Alternatively, ethyl acetate or carbon disulphide may be used to
IS0 5508, Animal and vegetable fats and oils - Analysis by
dissolve the sterols.
gas-liquid chromatography of methyl esters of fatty acids.
4.2.6 Silica powder with binder, thin-layer chromato-
IS0 5509, Animal and vegetable fats and oils - Preparation of
graphic quality.1)
methyl esters of fatty acids.
4.2.7 Indicator solution : rhodamine 6 G, 0,5 g/l solution.
3 Principle Any other colouring product or detection agent, such as a
0,5 g/l solution of 2’,7’-dichloro-fluoresceine in 95 % ( V/ V)
Saponification of a test portion, extraction of the un- ethanol may be used, provided that it does not react with the
sterols.
saponifiable matter, then separation of sterols from the un-
Silica gels containing the indicator solution (4.2.7) are commercially available.
1)
1
---------------------- Page: 3 ----------------------
IS0 6799-1983 (E)
5.2.3 Glass plates, of dimensions 200 mm x 200 mm.
4.2.8 Cholesterol, 100 g/l solution in chloroform.
5.2.4 Micro-pipettes or micro-syringes, capable of deliver-
4.3 Reagents for preparation of sterol derivatives
ing droplets of 0,3 to 0,4 pl. An automatic drop applicator can
be used.
4.3.1 Pyridine, anhydrous.
5.2.5 Apparatus for spraying the indicator solution onto
Hexamethyldisilazane. the plates.
4.3.2
4.3.3 Trimethylchlorosilane. 5.2.6 Microspatula.
4.3.4 Acetic anhydride. 5.2.7 Oven, capable of being controlled at 103 I 2 OC.
4.3.5 Hexane. 5.2.8 Boiling water bath.
Sodium hydrogen carbonate, 10 g/l solution.
4.3.6 5.2.9 Filter paper, of diameter 55 mm, for retaining fine par-
ticles, fluted.
4.3.7 Hydrochloric acid, 0,5 mol/l solution.
5.2.10 Conical flasks, of capacity 25 ml.
4.3.8 Sodium sulphate, anhydrous.
5.2.11 Conical flask, of capacity 250 ml.
4.4 Reagents for analysis by gas-liquid chromatography
5.2.12 Reflux condenser, adaptable to the 25 ml conical
flasks (5.2.10).
4.4.1 Carrier gas : an inert gas such as nitrogen, helium or
argon.
5.2.13 Desiccator, containing an efficient desiccant.
4.4.2 Pure sterolsl), such as cholesterol, stigmasterol,
5.2.14 Ultraviolet lamp.
brassicasteroi, p-sitosterol and campesterol, standard solutions
in diethyl ether or any other suitable solvent, corresponding to
5.3 Apparatus for preparation of sterol derivatives (if
20 g of sterol per litre.
required)
NOTE - If it is impossible to obtain the various pure sterols, and par-
is carried out, the solutions of
ticularly if only the qualitative analysis
5.3.1 Reaction tube, internally conical, of capacity 5 ml,
pure sterols may be replaced by a 25 g/l solution of sterols of
with a screw top, or a haemolysis tube, of capacity 5 ml.
sunflower oil, a 25 g/l solution of sterols of rapeseed oil and a 20 g/l
solution of cholesterol.
5.3.2 Haemolysis tube, of capacity 10 ml.
5 Apparatus
5.3.3 Graduated micropipettes.
5.1 Apparatus for the preparation of unsaponifiable
matter
5.4 Apparatus for analysis of sterols
This will be specified in IS0 3596 (see 4.1).
5.4.1 Gas-liquid chromatograph, with flame ionization
detector and recorder, comprising a glass column, of length
180 to 200 cm and 2 to 4 mm in diameter, filled with 2 to 5 % of
Apparatus for the separation of sterols
5.2
methylpolysiloxanes2) or methylphenylpolysiloxanes~) on diato-
maceous earth of particle size 150 to 180 pm or 120 to
5.2.1 Developing tank, made of glass, with a ground glass
150 wm4), acid-washed and silanized.
lid, suitable for use with plates of dimensions
200mm x 200rnm.
NOTES
1 As sterols tend to decompose at high temperatures if they come
5.2.2 Spreader and platform, for preparation of the plates. into contact with metals (except silver), it is recommended that an en-
Most pure sterols are not commercially available.
1)
SE 30, JXR or OV 1 are suitable.
2)
3) OV 17 is suitable.
4) 80 to 100 mesh or 100 to 120 mesh.
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
IS0 6799-1983 (E)
tirely glass system is used. However, a stainless steel column may be 6.2.3 Separation of sterols
used provided that its efficiency and resolution are tested with a known
mixture of sterols and it is confirmed that there is no decomposition or
By means of the micro-pipette or micro-syringe (5.2.41,transfer
absorption of sterols present in small quantities.
50 to 60 pI of the solution obtained in 6.1 onto a prepared plate
(see 6.2.1), 20 mm from one of the edges, in a continuous line
2 The separation of the sterols depends, to a large extent, on the sta-
tionary phase used (see 6.4.3). of droplets which are as fine as possible, leaving a width of
25 mm o
...
Norme internationale 6799
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDlZATlON*ME~YHAPO~HAR OPrAHHIAUHR il0 CTAHAAPTH3AUHH.ORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
r) Corps gras d'origines animale et végétale -
Détermination de la composition de la fraction
stérolique - Méthode par chromatographie en phase
gazeuse
Animal and vegetable fats and oils - Determination of composition of the sterol fraction - Method by gas-liquid
chromatography
Première édition - 1983-05-01
G CDU 664.3 : 543.544.45 : 547.92 Réf. no : IS0 6799-1983 (FI
-
Descripteurs : produit agricole, corps gras animal, corps gras végétal, dosage, stérol, méthode chromatographique en phase gazeuse.
8
O
2 Prix basé sur 5 pages
---------------------- Page: 1 ----------------------
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d'organismes nationaux de normalisation (comités membres de I'ISO). L'élaboration
1'60. Chaque
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
correspondant. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I'ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I'ISO.
La Norme internationale IS0 6799 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires, et a été soumise aux comités membres en avril 1981.
Les comités membres des pays suivants l'ont approuvée
Afrique du Sud, Rép. d' France Portugal
Allemagne, R. F. Hongrie Roumanie
Inde Royaume- Uni
Australie
Brésil Iran Sri Lanka
Israël Tanzanie
Canada
Tchécoslovaquie
Corée, Rép. de Kenya
Dominicaine, République Malaisie Thaïlande
Égypte, Rép. arabe d' Mexico URSS
Espagne Nouvelle-Zélande Yougoslavie
Philippines
Éthiopie
Les comités membres des pays suivants l'ont désapprouvée pour des raisons
techniques :
Pays-Bas
USA
Cette Norme internationale a également été approuvée par l'Union internationale de
chimie pure et appliquée (UICPA).
0 Organisation internationale de normalisation, 1983 O
Imprimé en Suisse
---------------------- Page: 2 ----------------------
NORM E INTER NAT1 O NALE IS0 6799-1983 (FI
Corps gras d'origines animale et végétale -
Détermination de la composition de la fraction
stérolique - Méthode par chromatographie en phase
gazeuse
O Introduction
3 Principe
Les stérols font partie des constituants caractéristiques des hui- Saponification d'une prise d'essai, extraction de I'insaponifia-
les et des graisses. Les graisses animales contiennent toujours
ble, puis isolement des stérols de I'insaponifiable par chromato-
du cholestérol, tandis que les huiles et les graisses végétales
graphie en couche mince. Analyse des stérols isolés ou de déri-
renferment un mélange de stérols, par exemple de stigmastérol
vés préparés à partir de ceux-ci, par chromatographie en phase
0 et de P-sitostérol, appelés phytostérols. Cependant, diverses
gazeuse sur colonne remplie.
huiles et graisses végétales, notamment l'huile de palme, con-
tiennent un faible pourcentage de cholestérol dans les stérols
totaux.
4 Réactifs
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique reconnue.
1 Objet et domaine d'application
L'eau utilisée doit être de l'eau distillée ou de l'eau de pureté au
moins équivalente.
La présente Norme internationale spécifie une méthode de
détermination, par chromatographie en phase gazeuse sur
colonne remplie, de la composition de la fraction stérolique des
4.1 Réactifs pour la préparation de I'insaponifiable
corps gras d'origines animale et végétale.
Ceux-ci seront spécifiés dans une méthode de préparation et de
Cette méthode est utilisée pour vérifier, soit la pureté d'un
détermination des matières insaponifiables qui fera l'objet de
corps gras, soit la conformité d'un corps gras à sa dénomina-
"O 3596.
tion de vente ou à la composition annoncée, et elle est applica-
ble aux corps gras animaux, végétaux ainsi qu'aux mélanges
Réactifs pour l'isolement des stérols
4.2
des deux.
4.2.1 Éthanol, à 95 % ( V/ Vi.
Si l'on utilise cette méthode pour déceler la présence de grais-
ses animales dans des graisses végétales, les petites quantités
de cholestérol, qui peuvent originellement être présentes dans
4.2.2 Éther de pétrole, point d'ébullition de 30 à 60 OC.
ces dernières, doivent être prises en considération. Dans ces
conditions, il est nécessaire, en plus de l'identification des sté-
4.2.3 Acétone.
rols, de mettre également en œuvre d'autres méthodes
d'analyse, par exemple la détermination de la composition en
acides gras par chromatographie en phase gazeuse (voir IS0
4.2.4 Chloroforme, ou, si en particulier l'emploi du chloro-
5508 et IS0 5509). En pratique, les acides gras ramifiés et les
forme pose des problèmes de sécurité, tout autre solvant ou
acides gras à nombre impair d'atomes de carbone ne sont pré-
mélange de solvants convenable, par exemple un mélange
sents en quantité appréciable que dans les huiles et graisses
d'hexane-acétate d'éthyle [80 + 20 ( W VI ou un mélange de
animales.
toluène-acétone [95 + 5 ( V/ VI.
4.2.5 Oxyde diéthylique, exempt de peroxydes et de
2 Références
résidus.
IS0 5508, Corps gras d'origines animale et végétale - Analyse
Au lieu d'oxyde diéthylique, on peut utiliser de l'acétate
par chromatographie en phase gazeuse des esters méthyliques
d'éthyle ou du sulfure de carbone pour dissoudre les stérols.
d'acides gras.
IS0 5509, Corps gras d'origines animale et végétale - Prépara- 4.2.6 Silice en poudre, avec liant, de qualité pour chroma-
tion des esters méthyliques d'acides gras.
tographie en couche mince').
II existe dans le commerce, des gels de silice contenant le révélateur (4.2.7).
1)
1
---------------------- Page: 3 ----------------------
IS0 6799-1983 (FI
5.2 Appareillage pour l'isolement des stérols
4.2.7 Révélateur : rhodamine 6G, solution à 0,5 g/l.
Tout autre produit colorant ou agent de détection, tel que la
5.2.1 Cuve de développement, en verre, avec couvercle en
dichloro-2',7" fluorescéine en solution à 0,5 g/l dans l'éthanol à
verre rodé, susceptible de recevoir des plaques de dimensions
95 % ( V/ V), peut être utilisé à condition de ne pas réagir avec
200 mm x 200 mm.
les stérols.
5.2.2 Étaleur et socle, pour la préparation des plaques.
4.2.8 Cholestérol, solution chloroformique à 100 g/l.
5.2.3 Plaques en verre, de dimensions 200 mm x 200 mm.
Réactifs pour la préparation des dérivés des stérols
4.3
5.2.4 Micropipettes ou microseringues, permettant de
4.3.1 Pyridine, anhydre.
0,3 à 0,4 MI. Un appareil automati-
délivrer des gouttelettes de
que pour le dépôt des gouttelettes peut être utilisé.
4.3.2 Hexaméthyldisilazane.
5.2.5 Appareil pour pulvériser le révélateur sur les
plaques.
4.3.3 Triméthylchlorosilane.
5.2.6 Microspatule.
4.3.4 Anhydride acétique.
5.2.7 Étuve, réglable à 103 f 2 OC.
4.3.5 Hexane.
5.2.8 Bain d'eau bouillante.
4.3.6 Hydrogénocarbonate de sodium, solution à 10 g/l.
4.3.7 Acide chlorhydrique, solution à 0.5 mol/l. 5.2.9 Filtre à plis, de diamètre 55 mm, pour la rétention des
particules fines.
4.3.8 Sulfate de sodium, anhydre.
5.2.10 Fioles coniques, de capacité 25 mi.
4.4 Réactifs pour l'analyse par chromatographie en
5.2.11 Fiole conique, de capacité 250 mi.
phase gazeuse
5.2.12 Réfrigérant à reflux, s'adaptant aux fioles coniques
4.4.1 Gaz vecteur : gaz inerte tel que azote, hélium ou
de 25 ml (5.2.10).
argon.
5.2.13 Dessiccateur, contenant un déshydratant efficace.
4.4.2 Stérols purs I), tels que cholestérol, stigmastérol, bras-
sicastérol, /I-sitostérol et campestérol, solutions étalons dans
de l'oxyde diéthylique ou tout autre solvant convenable, corres-
5.2.14 Lampe à ultraviolet.
pondant à 20 g de stérol par litre.
NOTE - Dans le cas où il est impossible de se procurer les divers sté- Appareillage pour la préparation des dérivés des
5.3
rols purs, et principalement lorsque seulement l'analyse qualitative est
stérols (éventuellement)
effectuée, les solutions de stérols purs peuvent être remplacées par
une solution contenant 25 g/l de stérols d'huile de tournesol, 25 g/l de
stérols d'huile de colza et 20 g/l de choléstérol. 5.3.1 Tube à réaction, conique intérieurement, de capacité
5 mi, muni d'un bouchon à vis ou tube à hémolyse, de
capacité 5 ml.
5 Appareillage
5.3.2 Tube à hémolyse, de capacité 10 mi.
5.1 Appareillage pour la préparation de I'insaponifiable
Celui-ci sera spécifié dans I'ISO 3596 (voir 4.1). 5.3.3 Micrbpipettes graduées.
La plupart des stérols purs ne sont pas commercialisés.
1)
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
IS0 6799-1983 (FI
5.4 Appareillage pour l‘analyse des stérols pendant 1 min. Introduire aussitôt la pâte dans I‘étaleur (5.2.2).
Étendre en couche de 0,25 mm d‘épaisseur sur les plaques
5.4.1 Chromatographe en phase gazeuse, avec détecteur
à ionisation de flamme et enregistreur, comprenant une
Laisser sécher les plaques pendant 15 min A l’air, puis dans
en verre, de à 200 cm de long, et de à mm de
l‘étuve (5.2.7) réglée à 103 f 2 OC pendant 1 h. Laisser refroi-
diamètre, remplie de à % de m~~~y~po~ys~~oxanesl) ou de
méthylphénylpolysiloxanes2) sur terre de diatomées de granula- dir avant les plaques dans un (5*2‘ 13)
juSqu” température ambiante’
métrie 150 à 180 pm ou 120 à 150 pm3), lavée aux acides et
silanisée.
NOTES 6.2.2 Préparation de la cuve
1 Étant donné que les stérols ont tendance à se décomposer à haute
Introduire une quantité de solvant (4.2.4) dans la
température lorsqu’ils sont en contact avec des métaux (l’argent
cuve à développement (5.2. 11 et mettre le couvercle. Attendre
excepté), il est recommandé d‘employer un système entièrement en
quelques heures afin d‘obtenir l‘équilibre liquide-vapeur; cet
verre. Toutefois, on peut utiliser une colonne en acier inoxydable, à
état Peut être atteint PIUS rapidement en plaçant une feuille de
condition de tester l’eff
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.