ISO 8968-2:2001

Milk — Determination of nitrogen content — Part 2: Block-digestion method (Macro method)

ISO 8968-2|IDF 20-2:2001 specifies a method for the determination of the nitrogen content of liquid milk, whole or skimmed, by the block-digestion principle.

Lait — Détermination de la teneur en azote — Partie 2: Méthode de minéralisation en bloc (Méthode macro)

L'ISO 8968-2|FIL 20-2:2001 spécifie une méthode pour la détermination de la teneur en azote du lait liquide, entier ou écrémé, selon le principe de la minéralisation en bloc.

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 19-Dec-2001
• Withdrawal Date: 19-Dec-2001
• ICS: 67.100.10 - Milk and processed milk products
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 03-Feb-2014

Relations

• Revised: ISO 8968-1:2014 - Milk and milk products — Determination of nitrogen content — Part 1: Kjeldahl principle and crude protein calculation
• Effective Date: 26-Nov-2011
• Consolidates: ISO 7823-2:1989 - Plastics — Poly(methyl methacrylate) sheets — Types, dimensions and characteristics — Part 2: Melt-calendered extruded sheets
• Effective Date: 06-Jun-2022

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 8968-2
IDF
20-2
First edition
2001-12-15


Milk — Determination of nitrogen
content —
Part 2:
Block-digestion method (Macro method)
Lait — Détermination de la teneur en azote —
Partie 2: Méthode de minéralisation en bloc (Méthode macro)




Reference numbers
ISO 8968-2:2001(E)
IDF 20-2:2001(E)
©
 ISO and IDF 2001

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ISO 8968-2:2001(E)
IDF 20-2:2001(E)
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ISO 8968-2:2001(E)
IDF 20-2:2001(E)
Contents Page
Foreword.iv
1 Scope.1
2 Normative reference.1
3 Term and definition .1
4 Principle.1
5 Reagents.2
6 Apparatus.3
7 Sampling.3
8 Preparation of test sample.3
9 Procedure.4
9.1 Test portion and pretreatment .4
9.2 Determination.4
9.3 Blank test.5
9.4 Recovery tests.6
10 Calculation and expression of results.7
10.1 Calculation of nitrogen content .7
10.2 Calculation of crude protein content.7
11 Precision.8
11.1 Interlaboratory test.8
11.2 Repeatability.8
11.3 Reproducibility.8
12 Test report.8
Bibliography.9


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ISO 8968-2:2001(E)
IDF 20-2:2001(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical
committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards adopted
by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this part of ISO 8968IDF 20 may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
International Standard ISO 8968-2IDF 20-2 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products,
Subcommittee SC 5, Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with
AOAC International. It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.
ISO 8968IDF 20 consists of the following parts, under the general title Milk — Determination of nitrogen content:
— Part 1: Kjeldahl method
— Part 2: Block-digestion method (Macro method)
— Part 3: Block-digestion method (Semi-micro rapid routine method)
— Part 4: Determination of the non-protein-nitrogen content
— Part 5: Determination of the protein-nitrogen content

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ISO 8968-2:2001(E)
IDF 20-2:2001(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a worldwide federation of the dairy sector with a National Committee in
every member country. Every National Committee has the right to be represented on the IDF Standing Committees
carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO and AOAC International in the development of standard
methods of analysis and sampling for milk and milk products.
Draft International Standards adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the National
Committees for voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 50 % of National
Committees casting a vote.
International Standard ISO 8968-2IDF 20-2 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products,
Subcommittee SC 5, Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with
AOAC International. It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.
All work was carried out by the Joint ISO/IDF/AOAC Action Team, Nitrogen compounds, under the aegis of its
project leader, Mr D.M. Barbano (US).

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ISO 8968-2:2001(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 20-2:2001(E)

Milk — Determination of nitrogen content —
Part 2:
Block digestion method (Macro method)
WARNING — The use of this part of ISO 8968IDF 20 may involve the use of hazardous materials,
operations, and equipment. This standard does not purport to address all the safety risks associated with
its use. It is the responsibility of the user of this standard to establish appropriate safety and healthy
practices and determine the applicability of local regulatory limitations prior to use.
1 Scope
This part of ISO 8968IDF 20 specifies a method for the determination of the nitrogen content of liquid milk, whole
or skimmed, by the block-digestion principle.
2 Normative reference
The following normative document contains provisions which, through reference in this text, constitute provisions of
this part of ISO 8968IDF 20. For dated references, subsequent amendments to, or revisions of, any of these
publications do not apply. However, parties to agreements based on this part of ISO 8968IDF 20 are encouraged
to investigate the possibility of applying the most recent edition of the normative document indicated below. For
undated references, the latest edition of the normative document referred to applies. Members of ISO and IEC
maintain registers of currently valid International Standards.
ISO 385-1, Laboratory glassware — Burettes — Part 1: General requirements
3 Term and definition
For the purposes of this part of ISO 8968IDF 20, the following term and definition apply.
3.1
nitrogen content
mass fraction of substances determined by the procedure specified in this part of ISO 8968IDF 20
NOTE The nitrogen content is expressed as a percentage by mass.
4 Principle
A test portion is digested by using a block-digestion apparatus with a mixture of concentrated sulfuric acid and
potassium sulfate, using copper(II) sulfate as a catalyst to thereby convert organic nitrogen present to ammonium
sulfate. The function of the potassium sulfate is to elevate the boiling point of the sulfuric acid and to provide a
stronger oxidizing environment. Excess sodium hydroxide is added to the cooled digest to liberate ammonia. The
liberated ammonia is steam distilled, using either a manual or semi-automatic steam distillation unit, into an excess
of boric acid solution then titrated with hydrochloric acid. The nitrogen content is calculated from the amount of
ammonia produced.
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ISO 8968-2:2001(E)
IDF 20-2:2001(E)
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or demineralized water
or water of equivalent purity.
5.1 Potassium sulfate (K SO ), nitrogen free.
2 4
5.2 Copper(II) sulfate solution, c(CuSO ) = 5,0 g per 100 ml.
4
Dissolve 5,0 g of copper(II) sulfate pentahydrate (CuSO ⋅5H O) in water in a 100 ml one-mark volumetric flask.
4 2
Dilute to the mark with water and mix.
5.3 Sulfuric acid (H SO ), with a mass faction of between 95 % to 98 %, nitrogen free (ρ = 1,84 g/ml
2 4 20
approximately).
5.4 Sodium hydroxide solution (NaOH), nitrogen free, containing 50 g of sodium hydroxide per 100 g of solution.
A 40 % sodium hydroxide solution may be used instead of a 50 %, if plugging of the flow system in an automatic
distillation unit is a problem.
5.5 Indicator solution
Dissolve 0,1 g of methyl red in 95 % (volume fraction) ethanol. Dilute to 50 ml with the ethanol. Dissolve 0,5 g of
bromocresol green in 95 % (volume fraction) ethanol. Dilute to 250 ml with the ethanol. Mix amounts of one part of
the methyl red solution with five parts of the bromocresol green solution or combine and mix all of both solutions.
5.6 Boric acid solution, c(H BO ) = 40,0 g/l.
3 3
Dissolve 40,0 g of boric acid in 1 litre of hot water in a 1 000 ml one-mark volumetric flask. Allow the flask and its
contents to cool to 20 °C. Dilute to the mark with water, add 3 ml of the indicator solution (5.5) and mix. Store the
solution, which will be light orange in colour, in a borosilicate glass bottle. Protect the solution from light and
sources of ammonia fumes during storage.
If using the electronic pH endpoint titration, the addition of the indicator solution to the boric acid solution may be
omitted. On the other hand, the change in colour may also be used as a check of proper titration procedures.
5.7 Hydrochloric acid standard volumetric solution, c(HCl) = (0,1 ± 0,000 5) mol/l.
It is recommended that this material be purchased prestandardized by the manufacturer to meet or exceed the
above specification.
NOTE Often systematic errors (which can be avoided) introduced by an analyst diluting a concentrated stock acid and then
determining the molarity of the acid can reduce the reproducibility of the method. The analyst should not use solution for titration
that has a higher concentration than 0,1 mol/l, because this will reduce the total titration volume per sample and the uncertainty
in readability of the burette will become a larger percentage of the value. This will have a negative impact on the repeatability
and reproducibility of the method. The same issues and additional sources of error arise when another acid (e.g., sulfuric acid)
is substituted for hydrochloric acid. Thus, these substitutions are not recommended.
5.8 Ammonium sulfate [(NH ) SO ], minimum assay 99,9 % (mass fraction) on dried material.
4 2 4
Immediately before use, dry the ammonium sulfate at 102 °C ± 2 °C for not less than 2 h. Cool to room temperature
in a desiccator.
5.9 Tryptophan (C H N O ) or lysine hydrochloride (C H CIN O ), minimum assay 99 % (mass fraction).
11 12 2 2 6 15 2 2
Do not dry the reagents in an oven before use.
5.10 Sucrose, with a nitrogen content of not more than 0,002 % (mass fraction).
Do not dry the sucrose in an oven before use.
2 © ISO and IDF 2001 – All rights reserved

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ISO 8968-2:2001(E)
IDF 20-2:2001(E)
6 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
6.1 Water bath, capable of being maintained at 38 °C ± 2 °C.
6.2 Analytical balance, capable of weighing to the nearest 0,1 mg.
6.3 Digestion block, aluminium alloy block or equivalent block, fitted with an adjustable temperature control and
device for measuring the temperature of the block.
6.4 Digestion tubes, of capacity 250 ml, suitable for use with the digestion block (6.3).
6.5 Exhaust manifold, suitable for use with the digestion tubes (6.4).
6.6 Centrifugal scrubber apparatus or filter pump or aspirator, constructed of acid-resistant material, for use
with mains water supply.
6.7 Burette or automatic pipette, capable for delivering 1,0 ml portions of the copper sulfate solution (5.2).
6.8 Graduated measuring cylinders, of capacity 25 ml, 50 ml and 100 ml.
6.9 Distillation unit, capable of steam distilling, manual or semi-automatic, suited to accept the 250 ml digestion
tubes (6.4) and the 500 ml conical flasks (6.10).
6.10 Conical flasks, of capacity 500 ml, graduated at every 200 ml.
6.11 Burette, of capacity 50 ml, graduated at least at every 0,01 ml, complying with the requirements of
ISO 385-1, class A.
Alternatively, an automatic burette may be used if it fulfils the same requirements.
6.12 Automatic titrator provided with a pH-meter
The pH-meter should be correctly calibrated in the range of pH 4 to 7 following normal laboratory pH-calibration
procedures.
7 Sampling
Sampling is not part of the method specified in this part of ISO 8968IDF 20. A recommended sampling method is
given in ISO 707.
It is important that the laboratory receive a sample which is truly representative and has not been damaged or
changed during transport or storage.
8 Preparation of test sample
Warm the test sample in the water bath (6.1) set at 38 °C. Gently mix the test sample thoroughly by repeatedly
inverting the sample bottle without causing frothing or churning. Cool the sample to room temperature immediately
prior to weighing the test portion (9.1).
NOTE For advice on sample size to apply this method to dairy products other than milk, see annex A of
ISO 8968-1IDF 20-1:2001.
© ISO and IDF 2001 – All rights reserved 3

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ISO 8968-2:2001(E)
IDF 20-2:2001(E)
9 Procedure
9.1 Test portion and pretreatment
Add to a clean and dry digestion tube (6.4), 12,0 g of potassium sulfate (5.1), 1,0 ml of the copper(II) sulfate
solution (5.2), approximately 5 ml ± 0,1 ml of the prepared test sample, weighed to the nearest 0,1 mg, and 20 ml
of the sulfuric acid (5.3). Use the sulfuric acid to wash down any copper sulfate solution, potassium sulfate or test
portion le
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 8968-2
FIL
20-2
Première édition
2001-12-15


Lait — Détermination de la teneur en
azote —
Partie 2:
Méthode de minéralisation en bloc
(Méthode macro)
Milk — Determination of nitrogen content —
Part 2: Block-digestion method (Macro method)




Numéros de référence
ISO 8968-2:2001(F)
FIL 20-2:2001(F)
©
 ISO et FIL 2001

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ISO 8968-2:2001(F)
FIL 20-2:2001(F)
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ISO copyright office Fédération Internationale de Laiterie
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Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
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Imprimé en Suisse

ii © ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés

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ISO 8968-2:2001(F)
FIL 20-2:2001(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d'application.1
2 Référence normative.1
3 Terme et définition.1
4 Principe.1
5 Réactifs.2
6 Appareillage.3
7 Échantillonnage.3
8 Préparation de l'échantillon pour essai .4
9 Mode opératoire.4
9.1 Prise d'essai et prétraitement.4
9.2 Détermination.4
9.3 Essai à blanc .6
9.4 Essais de récupération .6
10 Calcul et expression des résultats .7
10.1 Calcul de la teneur en azote .7
10.2 Calcul de la teneur en matière azotée totale.8
11 Fidélité.8
11.1 Essai interlaboratoires.8
11.2 Répétabilité.8
11.3 Reproductibilité.8
12 Rapport d'essai.9
Bibliographie.10


© ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés iii

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ISO 8968-2:2001(F)
FIL 20-2:2001(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI, Partie 3.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres votants.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments de la présente partie de l'ISO 8968FIL 20 peuvent
faire l’objet de droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour
responsable de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
La Norme internationale ISO 8968-2FIL 20-2 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits
alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL), en
collaboration avec l’AOAC International. Elle est publiée conjointement par l’ISO et la FIL, et séparément par
l’AOAC International.
L'ISO 8968FIL 20 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Lait — Détermination de la
teneur en azote:
— Partie 1: Méthode Kjeldahl
— Partie 2: Méthode de minéralisation en bloc (Méthode macro)
— Partie 3: Méthode de minéralisation en bloc (Méthode pratique semi-micro)
— Partie 4: Détermination de la teneur en azote non protéique
— Partie 5: Détermination de la teneur en azote protéique
iv © ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés

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ISO 8968-2:2001(F)
FIL 20-2:2001(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération internationale de laiterie) est une fédération mondiale du secteur laitier avec un Comité
National dans chacun de ses pays membres. Chaque Comité National a le droit de faire partie des Comités
permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux techniques. La FIL collabore avec l’ISO et avec l’AOAC
International pour l’élaboration de méthodes normalisées d’analyse et d’échantillonnage pour le lait et les produits
laitiers.
Les projets de Normes internationales adoptés par les Équipes d’Action et les Comités permanents sont soumis
aux Comités Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 50 %
au moins des Comités Nationaux votants.
La Norme internationale ISO 8968-2FIL 20-2 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits
alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL), en
collaboration avec l’AOAC International. Elle est publiée conjointement par l’ISO et la FIL, et séparément par
l’AOAC International.
L’ensemble des travaux a été confié à l’Équipe d’Action mixte ISO/FIL/AOAC, Composés azotés, du Comité
permanent chargé des Composants principaux du lait, sous la conduite de son chef de projet, M. D.M. Barbano
(États-Unis d’Amérique).

© ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés v

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ISO 8968-2:2001(F)
NORME INTERNATIONALE
FIL 20-2:2001(F)

Lait — Détermination de la teneur en azote —
Partie 2:
Méthode de minéralisation en bloc (Méthode macro)
AVERTISSEMENT — L’utilisation de la présente partie de l’ISO 8968FIL 20 peut impliquer l’utilisation de

produits et la mise en œuvre de modes opératoires et d’appareillages à caractère dangereux. La présente
Norme internationale ne prétend pas aborder tous les risques liés à son utilisation. Il incombe à
l’utilisateur de la présente Norme internationale d’établir, avant de l’utiliser, des pratiques appropriées
d’hygiène et de sécurité et de déterminer l’applicabilité de restrictions réglementaires locales.
1 Domaine d'application
La présente partie de l’ISO 8968FIL 20 spécifie une méthode pour la détermination de la teneur en azote du lait
liquide, entier ou écrémé, selon le principe de la minéralisation en bloc.
2 Référence normative
Le document normatif suivant contient des dispositions qui, par suite de la référence qui y est faite, constituent des
dispositions valables pour la présente partie de l’ISO 8968FIL 20. Pour les références datées, les amendements
ultérieurs ou les révisions de ces publications ne s’appliquent pas. Toutefois, les parties prenantes aux accords
fondés sur la présente partie de l’ISO 8968FIL 20 sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer l'édition la
plus récente du document normatif indiqué ci-après. Pour les références non datées, la dernière édition du
document normatif en référence s’applique. Les membres de l'ISO et de la CEI possèdent le registre des Normes
internationales en vigueur.
ISO 385-1, Verrerie de laboratoire — Burettes — Partie 1: Spécifications générales
3 Terme et définition
Pour les besoins de la présente partie de l’ISO 8968FIL 20, le terme et la définition suivants s'appliquent.
3.1
teneur en azote
rapport de masse d’azote, déterminé par le mode opératoire décrit dans la présente partie de l’ISO 8968FIL 20
NOTE La teneur en azote est exprimée sous forme de pourcentage en masse.
4 Principe
Minéralisation d'une prise d'essai, au moyen d’un appareil de minéralisation en bloc, avec un mélange d'acide
sulfurique concentré et de sulfate de potassium, en utilisant du sulfate de cuivre(II) comme catalyseur pour
convertir ainsi l'azote organique présent en sulfate d'ammonium. (La fonction du sulfate de potassium est d’élever
le point d’ébullition de l’acide sulfurique et de permettre d’obtenir un mélange oxydant plus fort pour la
minéralisation.) Addition d'hydroxyde de sodium excédentaire au minéralisat refroidi pour libérer de l'ammoniac.
Distillation de l'ammoniac libéré, à l'aide d'un appareil manuel ou semi-automatique de distillation à la vapeur, dans
© ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés 1

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ISO 8968-2:2001(F)
FIL 20-2:2001(F)
un excédent de solution d'acide borique, puis titrage en utilisant de l'acide chlorhydrique. Calcul de la teneur en
azote à partir de la quantité d'ammoniac produite.
5 Réactifs
Sauf indication différente, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l'eau distillée ou
déminéralisée, ou de l'eau de pureté au moins équivalente.
5.1 Sulfate de potassium (K SO ), exempt d’azote.
2 4
5.2 Solution de sulfate de cuivre(II), c(CuSO ) = 5,0 g par 100 ml.
4
Dans une fiole jaugée de 100 ml, dissoudre 5,0 g de sulfate de cuivre(II) pentahydraté (CuSO ,5H O) dans de
4 2
l'eau. Diluer jusqu'au repère avec de l’eau, puis mélanger.
5.3 Acide sulfurique (H SO ), avec un rapport de masse compris entre 95 % et 98 %, sans azote
2 4
(ρ = environ 1,84 g/ml).
20
5.4 Solution d'hydroxyde de sodium (NaOH), exempte d’azote, contenant 50 g d'hydroxyde de sodium par
100 g de solution.
Il est possible d'utiliser une solution d'hydroxyde de sodium à 40 % au lieu de 50 % s’il y a risque d’obturation du
système d'écoulement dans un appareil de distillation automatique.
5.5 Solution indicatrice.
Dissoudre 0,1 g de rouge de méthyle dans de l'éthanol à 95 % (rapport de volume) et diluer à 50 ml avec de
l'éthanol. Dissoudre 0,5 g de vert de bromocrésol dans de l'éthanol à 95 % (rapport de volume) et diluer à 250 ml
avec de l'éthanol. Mélanger une dose de la solution de rouge de méthyle à cinq doses de la solution de vert de
bromocrésol ou combiner et mélanger l'ensemble des deux solutions.
5.6 Solution d'acide borique, c(H BO ) = 40,0 g/l.
3 3
Dans une fiole jaugée de 1 000 ml, dissoudre 40,0 g d'acide borique dans 1 litre d'eau chaude. Laisser refroidir la
fiole et son contenu à 20 °C. Compléter au volume avec de l’eau, ajouter 3 ml de la solution indicatrice (5.5) et
mélanger. Conserver la solution, qui doit être orange clair, dans une bouteille en verre de borosilicate. Durant le
stockage, protéger la solution de la lumière et des sources de vapeurs d'ammoniac.
En cas de titrage électronique du pH avec point final, l’ajout de la solution indicatrice à la solution d’acide borique
peut être omis. D’autre part, le changement de couleur peut aussi servir à contrôler le mode opératoire de titrage.
5.7 Solution volumétrique standard d'acide chlorhydrique, c(HCl) = (0,1 ± 0,000 5) mol/l.
Il est recommandé d’acheter ce matériau déjà prénormalisé, répondant à ces spécifications.
NOTE Souvent, les erreurs systématiques (qui peuvent être évitées) introduites par un analyste qui dilue un acide
concentré, puis détermine la molarité de l’acide, peuvent diminuer la reproductibilité de la méthode. Il convient que l’analyste
n’utilise pas de solution de titrage de concentration supérieure à 0,1 mol/l car cela réduirait le volume total de titrage par
échantillon, et l’incertitude de lecture de la burette représenterait un pourcentage plus élevé de la valeur. Cela aura un impact
négatif sur la répétabilité et la reproductibilité de la méthode. Les mêmes problèmes se posent, avec le risque d’erreurs
supplémentaires, lorsqu’un autre acide (par exemple l’acide sulfurique) est substitué à l’acide chlorhydrique. Ces substitutions
ne sont donc pas recommandées.
5.8 Sulfate d'ammonium [(NH ) SO ], ayant une pureté minimale de 99,9 % (rapport de masse) sur matière
4 2 4
sèche.
Immédiatement avant l'emploi, sécher le sulfate d'ammonium à 102 °C ± 2 °C pendant au moins 2 h. Laisser
refroidir à température ambiante dans un dessiccateur.
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ISO 8968-2:2001(F)
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5.9 Tryptophane (C H N O ) ou hydrochlorure de lysine (C H ClN O ), ayant une pureté minimale de
11 12 2 2 6 15 2 2
99,9 % (rapport de masse).
Ne pas sécher ces réactifs dans une étuve avant l'emploi.
5.10 Saccharose, dont la teneur en azote est inférieure à 0,002 % (fraction massique).
Ne pas sécher la saccharose dans une étuve avant l'emploi.
6 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Bain d’eau, pouvant être maintenu à une température de 38 °C ± 2 °C.
6.2 Balance analytique, permettant de peser à 0,1 mg près.
6.3 Bloc de minéralisation, bloc en alliage d'aluminium ou bloc équivalent, équipé d'un thermostat réglable et
d'un dispositif de mesure de la température du bloc.
6.4 Tubes de minéralisation, d'une capacité de 250 ml, appropriés pour une utilisation avec le bloc de
minéralisation (6.3).
6.5 Collecteur de sortie, d'un modèle approprié pour les tubes de minéralisation (6.4).
6.6 Épurateur centrifuge ou pompe filtrante ou aspirateur, en matériau résistant à l'acide et s'adaptant à une
utilisation avec le réseau d'alimentation en eau.
6.7 Burette ou pipette automatique, permettant d'obtenir des doses de 1,0 ml de solution de sulfate de
cuivre (5.2).
6.8 Éprouvettes graduées, d'une capacité de 25 ml, 50 ml et 100 ml.
6.9 Appareil de distillation à la vapeur, manuel ou semi-automatique, pouvant recevoir les tubes de
minéralisation de 250 ml (6.4) et les fioles coniques de 500 ml (6.10).
6.10 Fioles coniques, d'une capacité de 500 ml, graduées tous les 200 ml.
6.11 Burette, d'une capacité de 50 ml, graduée au moins tous les 0,01 ml, conformes aux exigences de
l'ISO 385, classe A.
Il est également possible d’utiliser une burette automatique satisfaisant aux mêmes exigences.
6.12 Dispositif de titrage automatique pourvu d’un pH-mètre.
Il convient que le pH-mètre soit correctement étalonné dans la gamme de pH 4 à pH 7 selon les méthodes
normales d’étalonnage du pH en laboratoire.
7 Échantillonnage
L'échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente partie de l’ISO 8968FIL 20. Une
méthode d'échantillonnage recommandée est indiquée dans l'ISO 707.
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon réellement représentatif et n'ayant pas été endommagé ou
modifié durant le transport ou le stockage.
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8 Préparation de l'échantillon pour essai
Chauffer l'échantillon pour essai dans le bain d’eau (6.1) réglé à 38 °C. Bien mélanger, mais délicatement, au
moyen de retournements répétés du récipient, sans causer ni mousse ni barattage. Laisser refroidir l’échantillon à
température ambiante immédiatement avant de peser la prise d'essai (9.1).
NOTE Si l’on souhaite appliquer cette méthode à des produits laitiers autres que le lait, voir l’annexe A de
l’ISO 8968-1FIL 20-1:2001 pour des recommandations sur la taille de l’échantillon pour essai.
9 Mode opératoire
9.1 Prise d'essai et prétraitement
Ajouter successivement à un tube de minéralisation sec et propre (6.4), 12,0 g de sulfate de potassium (5.1),
1,0 ml de solution de sulfate de cuivre(ll) (5.2), environ 5 ml ± 0,1 ml de l'échantillon pour essai préparé (article 8),
pesé à 0,1 mg près, et 20 ml d'acide sulfurique (5.3). À cet effet, utiliser l'acide sulfurique pour entraîner tout résidu
de la solution de sulfate de cuivre, du sulfate de potassium ou de la prise d'essai restant sur les parois supérieures
du tube de minéralisation. Mélanger doucement le contenu du tube.
ATTENTION — Il convient que les utilisateurs de dispositifs de minéralisation en bloc tiennent compte du fait qu’il
est plus délicat pour l’analyste de maintenir suffisamment d’acide sulfurique résiduel au terme de la minéralisation
dans les dispositifs de minéralisation en bloc que dans les systèmes traditionnels. Les dispositifs de minéralisation
en bloc posent davantage de problèmes de pertes d’acide en raison de l’aspiration excessive des vapeurs que les
systèmes traditionnels.
NOTE 1 La quantité d’acide utilisé dans les dispositifs de minéralisation en bloc est inférieure à cel
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