ISO 16140:2003/Amd 1:2011

Microbiology of food and animal feeding stuffs — Protocol for the validation of alternative methods — Amendment 1

Microbiologie des aliments — Protocole pour la validation des méthodes alternatives — Amendement 1

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 03-Aug-2011
• Withdrawal Date: 03-Aug-2011
• ICS: 07.100.30 - Food microbiology
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 9 - Microbiology
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 9/WG 2 - Statistics
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 17-Jun-2016

Relations

• Revised: ISO 16140-6:2019 - Microbiology of the food chain — Method validation — Part 6: Protocol for the validation of alternative (proprietary) methods for microbiological confirmation and typing procedures
• Effective Date: 29-Mar-2014
• Revised: ISO 16140-5:2020 - Microbiology of the food chain — Method validation — Part 5: Protocol for factorial interlaboratory validation for non-proprietary methods
• Effective Date: 29-Mar-2014
• Revised: ISO 16140-4:2020 - Microbiology of the food chain — Method validation — Part 4: Protocol for method validation in a single laboratory
• Effective Date: 29-Mar-2014
• Revised: ISO 16140-3:2021 - Microbiology of the food chain — Method validation — Part 3: Protocol for the verification of reference methods and validated alternative methods in a single laboratory
• Effective Date: 29-Mar-2014
• Revised: ISO 16140-2:2016 - Microbiology of the food chain — Method validation — Part 2: Protocol for the validation of alternative (proprietary) methods against a reference method
• Effective Date: 05-Nov-2015
• Revised: ISO 16140-1:2016 - Microbiology of the food chain — Method validation — Part 1: Vocabulary
• Effective Date: 05-Nov-2015
• Amends: ISO 16140:2003 - Microbiology of food and animal feeding stuffs — Protocol for the validation of alternative methods
• Effective Date: 14-Jul-2018

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 16140
First edition
2003-05-01
AMENDMENT 1
2011-08-15


Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Protocol for the validation of
alternative methods
AMENDMENT 1
Microbiologie des aliments — Protocole pour la validation des
méthodes alternatives
AMENDEMENT 1





Reference number
ISO 16140:2003/Amd.1:2011(E)
©
ISO 2011

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ISO 16140:2003/Amd.1:2011(E)

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E-mail [e-mail]
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Published in Switzerland

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ISO 16140:2003/Amd.1:2011(E)
Contents Page
Foreword . iv
6.3 Interlaboratory study . 2
6.3.1 General . 2
6.3.2 Terms and definitions . 2
6.3.3 Measurement protocol and samples . 4
6.3.4 Determination of the trueness and precision characteristics . 5
6.3.5 Scrutiny of the measurement results for consistency . 7
6.3.6 Comparison of the trueness and precision characteristics of the reference method and
the alternative method . 8
Annex Q (normative) Calculation of Rousseeuw's scale estimator Q . 9
n
Annex V (informative) Indicators for Mandel's robust h- and k-statistics . 11
Annex W (informative) Example: Determination of E. coli . 12
Bibliography additions . 18

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ISO 16140:2003/Amd.1:2011(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
Amendment 1 to ISO 16140:2003 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products,
Subcommittee SC 9, Microbiology.

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ISO 16140:2003/Amd.1:2011(E)

Microbiology of food and animal feeding stuffs — Protocol for
the validation of alternative methods
AMENDMENT 1
Page 22, 6.3
Replace the existing text with that commencing on p. 2.
Page 61, Annex Q
Replace the existing text with that commencing on p. 9.
Page 74, Bibliography
Insert Annexes V and W commencing on p. 11 before the bibliography.
Additions to the bibliography are given on p. 18.
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ISO 16140:2003/Amd.1:2011(E)
6.3 Interlaboratory study
6.3.1 General
An interlaboratory study aims to determine the comparative performance characteristics (trueness and
precision characteristics) of the alternative method against the reference method.
Guidelines and requirements for organizing, dispatching and conducting the interlaboratory study are given in
Annex H and in ISO 5725-2.
At least eight laboratories shall participate in an interlaboratory study.
The organizing laboratory is responsible for the preparation of the test protocol and a data sheet (see below)
to be used by each laboratory for recording all measurement results and critical experimental conditions
(see H.3).
The analyst in each collaborating laboratory shall demonstrate competence in the use of the alternative
method and of the reference method prior to participating in the study.
In microbiology, the data {y} of repeated measurements do not always show a normal (Gaussian) distribution.
Therefore, the distribution of these data should be checked for normality if more than 30 values are available
at the same level. In order to get a more symmetric distribution, take logarithms of the counts.
The data obtained from interlaboratory studies often contain outliers, i.e. measurement values that deviate so
much from comparable measurements that they are considered inconsistent. If they are retained in the data
set, the trueness and precision characteristics (averages, standard deviations, etc.) obtained with classical
methods of statistical analysis are unreliable. Therefore, ISO 5725-2 includes outlier tests (Cochran, Grubbs)
in order to detect and eventually discard outliers and to obtain reliable trueness and precision characteristics.
Often this causes disputes as to which of the outliers should be discarded from or retained in the statistical
analysis. In order to avoid such disputes, robust estimates of the trueness and precision characteristics are
used in this International Standard. Since they are insensitive to any extreme values, they always use the
complete data set obtained from the interlaboratory study.
However, each extreme value should be checked for a clerical error in transcribing the measurement result,
an error in computation, a slip in performing the measurement or an analysis of the wrong sample. If possible,
such values should be replaced by the correct values. Other extreme measurement results or laboratories
reporting extreme values are not excluded from the statistical analysis unless exclusion is based on
sound microbiological reasons.
6.3.2 Terms and definitions
For the purpose of this document, the following terms and definitions apply.
6.3.2.1
accuracy
closeness of agreement between a test result or measurement result and the true value
NOTE 1 In practice, the accepted reference value is substituted for the true value.
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.1]
NOTE 2 Accuracy refers to a combination of trueness and precision.
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ISO 16140:2003/Amd.1:2011(E)
6.3.2.2
trueness
closeness of agreement between the expectation of a test result or a measurement result and the true value
NOTE 1 The measure of trueness is usually expressed in terms of bias.
NOTE 2 In practice, the accepted reference value is substituted for the true value.
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.3]
6.3.2.3
precision
closeness of agreement between independent test/measurement results obtained under stipulated conditions
NOTE Quantitative measures of precision depend critically on the stipulated conditions. Repeatability conditions and
reproducibility conditions are particular sets of extreme stipulated conditions.
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.4]
6.3.2.4
repeatability
precision under repeatability conditions
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.5]
6.3.2.5
repeatability conditions
observation conditions where independent test/measurement results are obtained with the same method on
identical test/measurement items in the same test or measuring facility by the same operator using the same
equipment within short intervals of time
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.6]
6.3.2.6
repeatability standard deviation
standard deviation of test result or measurement results obtained under repeatability conditions
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.7]
6.3.2.7
repeatability limit
r
value less than or equal to which the absolute difference between two measurement results obtained under
repeatability conditions is expected to be with a probability of 95 %
[13]
NOTE Adapted from ISO 3534-2:2006 , 3.3.9.
6.3.2.8
reproducibility
precision under reproducibility conditions
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.10]
6.3.2.9
reproducibility conditions
observation conditions where independent test/measurement results are obtained with the same method on
identical test/measurement items in different test or measuring facilities with different operators using different
equipment
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.11]
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ISO 16140:2003/Amd.1:2011(E)
6.3.2.10
reproducibility standard deviation
standard deviation of test results or measurement results obtained under reproducibility conditions
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.12]
6.3.2.11
reproducibility limit
R
value less than or equal to which the absolute difference between two measurement results obtained under
reproducibility conditions is expected to be with a probability of 95 %
[13]
NOTE Adapted from ISO 3534-2:2006 , 3.3.14.
6.3.3 Measurement protocol and samples
The protocol is the following.
 One relevant food matrix is used (see Annex B).
 The analyte concentrations should be chosen to cover at least the lower, middle and upper levels of the
entire range of the alternative method. The organizing laboratory shall assure that the samples are
homogeneous (Reference [14]). A negative control should also be included.
 Artificial contamination of a food sample with the target analyte may be used.
 To compare the alternative method with the reference method the same samples shall be used for each
method. Four sub-samples from each level (or two aliquots, each measured by both methods) are
prepared for each laboratory. These are blind coded but labelled so that two are measured by the
reference method and two are measured by the alternative method.
 Liquid samples (compared to solid samples) give greater assurance of homogeneity if prepared and
dispatched without change in microbiological content and used correctly. In specific cases, it could be
necessary to subdivide the samples immediately before measurement with both methods.
 The measurements shall be performed in each collaborative laboratory and the organizing laboratory at a
stipulated date using common batches of media and kits.
 The rounding of results shall be set by the organizing laboratory.
 For each level j, the results of the interlaboratory study shall be presented as shown in Table 9.
Table 9 — Presentation of the results of the interlaboratory study at level j
Laboratory Reference method (coded) Alternative method (coded)
i
Duplicate 1 Duplicate 2 Duplicate 1 Duplicate 2
1
2
…
p
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ISO 16140:2003/Amd.1:2011(E)
6.3.4 Determination of the trueness and precision characteristics
6.3.4.1 General
For each level j, the following trueness and precision characteristics are determined:
 the median of the laboratory means of the measurement results of the reference method and of the
alternative method (for the estimation of bias);
 the repeatability standard deviation of the reference method and of the alternative method based on the
calculation of Rousseeuw's Q (see Annex Q);
n
 the reproducibility standard deviation of the reference method and of the alternative method based on
Rousseeuw's Q (see Annex Q).
n
6.3.4.2 Calculations
For each level j, perform the calculations according to the following steps. In the following text, the subscript j
is omitted.
Step 1. With the measurement results for the reference method (Table 9, columns 2 and 3), prepare Table 10
for each level j.
Table 10 — Measurement results, means and deviations at level j
(for the reference method or for the alternative method)
1 2 3 4 5 6
Laboratory Measurement Mean Deviation from the mean
1 y y y d d
11 12 11 12
1
2 y y y d d
21 22 2 21 22
… … … … … …
i y y y d d
i1 i2 i i1 i2
… … … … … …
p y y y d d
p1 p2 p1 p2
p
In Table 10,
yy
ii12

y 
i
2
is the mean of the two measurements in laboratory i and
yy
ii12
dyy
ii11 i
2
yy
ii21
dyy
ii22 i
2
are the deviations of these two measurements from their mean.
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ISO 16140:2003/Amd.1:2011(E)
Step 2. Use the deviations of Table 10, columns 5 and 6 as a series of n  2p values and calculate
Rousseeuw's bias corrected scale estimator Q :
intra
Q  c Q with n  2p
intra n n
as described in Annex Q.
Step 3. Calculate Rousseeuw's bias corrected scale estimator Q :
inter
Q  c Q with n  p
inter n n
of the laboratory means of Table 10, column 4 as described in Annex Q.
Step 4. Calculate the median m of the laboratory means of the results of the reference method (Table 10,
column 4).
Step 5. Calculate the repeatability standard deviation s :
r
sQ 2
r intra
1)
Calculate the coefficient of variation of repeatability, C :
V,r
s
r
C 
Vr,
m
r:
Calculate the repeatability limit
r  2,8s
r
Step 6. Calculate the between laboratories standard deviation s :
L
22
sQQ
L inter intra
22
or 0, if QQ 0 .
inter intra
Calculate the reproducibility standard deviation s :
R
22
sss
R r
L
1)
Calculate the coefficient of variation of reproducibility, C :
V,R
s
R
C 
VR,
m
Calculate the reproducibility limit, R:
R  2,8s
R

1) The predecessor term to “coefficient of variation” used in ISO 16140:2003, “relative standard deviation” is deprecated
in ISO 3534-1:2006, 2.38, Note 2. In this amendment, the symbol C is used in place of RSD.
V
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ISO 16140:2003/Amd.1:2011(E)
Step 7. Repeat steps 1 to 6 for the alternative method.
After having carried out the calculations of steps 1 to 7 for each level j, combine the results of the
determinations for all q levels, as in Table 11.
A functional relationship between the repeatability standard deviation or the reproducibility standard deviation
and the median level m may exist. Methods for their establishment can be found in ISO 5725-2.
Table 11 — Results of the statistical analysis
Reference method Alternative method
Level
repeatability reproducibility repeatability reproducibility
median median
s.d. s.d. s.d. s.d.
1 m s s m s s
1,ref r1,ref R1,ref 1,alt r1,alt R1,alt
… … … … … … …
j m s s m s s
j,ref rj,ref Rj,ref j,alt rj,alt Rj,alt
… … … … … … …
q m s s m s s
q,ref rq,ref Rq,ref q,alt rq,alt Rq,alt
6.3.5 Scrutiny of the measurement results for consistency
In order to identify measurement results or laboratories that are inconsistent with the other measurement
results or laboratories, two graphical consistency techniques are applied, i.e. Mandel's h- and k- statistics in a
robustified version.
6.3.5.1 For the reference method, calculate the between-laboratory consistency statistic, Mandel's h , for
ij
each of the p laboratories, i  1 . p, and for each of the q levels j  1 . q by dividing the mean y (Table 10,
ij
column 4, for each level j) minus the median m (Table 11, column 2) for that level j by Rousseeuw's bias
j
corrected scale estimator Q for that level j (as determined in Step 3),
inter,j
ym
ij j
h 
ij
Q
inter, j
Plot the p q values (h ) sequentially in the order: laboratory 1, levels 1 … q, laboratory 2, levels, 1 … q, … to
ij
laboratory p, levels 1 … q (see Figure
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 16140
Première édition
2003-05-01
AMENDEMENT 1
2011-08-15



Microbiologie des aliments — Protocole
pour la validation des méthodes
alternatives
AMENDEMENT 1
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Protocol for the
validation of alternative methods
AMENDMENT 1





Numéro de référence
ISO 16140:2003/Amd.1:2011(F)
©
ISO 2011

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quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
de l'ISO à l'adresse ci-après ou du comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56  CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
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Publié en Suisse

ii © ISO 2011 – Tous droits réservés

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ISO 16140:2003/Amd.1:2011(F)
Sommaire Page
Avant-propos . iv
6.3 Étude interlaboratoires . 2
6.3.1 Généralités . 2
6.3.2 Termes et définitions . 2
6.3.3 Protocole de mesure et échantillons . 4
6.3.4 Détermination des caractéristiques de justesse et de fidélité. 5
6.3.5 Contrôle de la cohérence des résultats de mesurage . 7
6.3.6 Comparaison des caractéristiques de justesse et de fidélité de la méthode de référence et
de la méthode alternative . 8
Annexe Q (normative) Calcul de l'estimateur d'échelle Q de Rousseeuw . 10
n
Annexe V (informative) Indicateurs pour les statistiques h et k robustes de Mandel . 12
Annexe W (informative) Exemple: Détermination de E. coli . 13
Ajouts à la Bibliographie . 19

© ISO 2011 – Tous droits réservés iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 16140:2003/Amd.1:2011(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'Amendement 1 à l'ISO 16140:2003 a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires,
sous-comité SC 9, Microbiologie.

iv © ISO 2011 – Tous droits réservés

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ISO 16140:2003/Amd.1:2011(F)

Microbiologie des aliments — Protocole pour la validation des
méthodes alternatives
AMENDEMENT 1
Page 30, 6.3
Remplacer le texte existant par le texte commençant en page 2.
Page 71, Annexe Q
Remplacer le texte existant par le texte commençant en page 10.
Page 85, Bibliographie
Insérer les Annexes V et W commençant en page 12 avant la Bibliographie.
Les ajouts faits à la Bibliographie sont indiqués en page 19.
© ISO 2011 – Tous droits réservés 1

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ISO 16140:2003/Amd.1:2011(F)
6.3 Étude interlaboratoires
6.3.1 Généralités
Une étude interlaboratoires a pour objectif de déterminer les caractéristiques de performances
comparatives (caractéristiques de justesse et de fidélité) de la méthode alternative par rapport à la méthode
de référence.
Les lignes directrices et les exigences relatives à l'organisation, à la distribution et à la gestion de l'étude
interlaboratoires sont indiquées en Annexe H ainsi que dans l'ISO 5725-2.
Au moins huit laboratoires doivent participer à une étude interlaboratoires.
Le laboratoire organisateur est chargé de préparer le protocole d'essai et une fiche de données (voir ci-
dessous) à utiliser par chacun des laboratoires pour reporter tous les résultats de mesurage et les conditions
expérimentales critiques (voir H.3).
L'analyste de chaque laboratoire participant doit faire la preuve de ses compétences quant à l'utilisation de la
méthode alternative et de la méthode de référence pour pouvoir participer à l'étude.
En microbiologie, les données {y} des mesurages répétés ne présentent pas toujours une distribution
statistique normale (distribution gaussienne). Il convient par conséquent de vérifier la normalité de la
distribution de ces données si plus de 30 valeurs sont disponibles pour le même niveau. Pour obtenir une
distribution plus symétrique, utiliser les logarithmes des dénombrements.
Les données obtenues à partir des études interlaboratoires contiennent souvent des valeurs aberrantes, c'est-
à-dire des valeurs de mesurage qui s'écartent tellement d'autres mesurages comparables qu'elles sont
considérées comme incohérentes. Si ces valeurs sont retenues dans la série de données, les caractéristiques
de justesse et de fidélité (moyennes, écarts-types, etc.) obtenues avec des méthodes d'analyse statistique
classiques ne sont pas fiables. Par conséquent, l'ISO 5725-2 comprend des essais relatifs aux valeurs
aberrantes (Cochran, Grubbs) qui permettent de détecter puis d'exclure les valeurs aberrantes et d'obtenir
des caractéristiques de justesse et de fidélité fiables. Cela engendre souvent des désaccords quant aux
valeurs aberrantes qu'il convient d'exclure ou de retenir dans l'analyse statistique. Afin d'éviter ces
désaccords, des estimations robustes des caractéristiques de justesse et de fidélité sont utilisées dans la
présente Norme internationale. Comme elles sont insensibles aux valeurs extrêmes, elles utilisent toujours
l'intégralité de la série de données obtenues à partir de l'étude interlaboratoires.
Pour chaque valeur extrême, il convient néanmoins de vérifier qu'il n'y a pas d'erreur d'écriture lors de la
retranscription du résultat de mesurage ou d'erreur de calcul, que le mesurage a été correctement réalisé et
que le bon échantillon a été analysé. Il convient si possible de remplacer ces valeurs par les valeurs correctes.
Les autres résultats de mesurage extrêmes ou laboratoires présentant des valeurs extrêmes ne sont
pas exclus de l'analyse statistique, à moins que l'exclusion ne soit fondée sur des raisons
microbiologiques justifiées.
6.3.2 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
6.3.2.1
exactitude
étroitesse de l'accord entre le résultat d'essai ou résultat de mesurage et la valeur vraie
NOTE 1 Dans la pratique, la valeur de référence acceptée remplace la valeur vraie.
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.1]
NOTE 2 L'exactitude correspond à une combinaison de la justesse et de la fidélité.
2 © ISO 2011 – Tous droits réservés

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ISO 16140:2003/Amd.1:2011(F)
6.3.2.2
justesse
étroitesse de l'accord entre l'espérance mathématique d'un résultat d'essai ou d'un résultat de mesurage et la
valeur vraie
NOTE 1 La mesure de la justesse est généralement exprimée en termes de biais.
NOTE 2 Dans la pratique, la valeur de référence acceptée remplace la valeur vraie.
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.3]
6.3.2.3
fidélité
étroitesse d'accord entre des résultats d'essai/de mesurage indépendants obtenus dans des conditions
stipulées
NOTE Les mesures quantitatives de la fidélité dépendent de façon critique des conditions stipulées. Les conditions
de répétabilité et de reproductibilité sont des ensembles particuliers de conditions extrêmes stipulées.
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.4]
6.3.2.4
répétabilité
fidélité dans des conditions de répétabilité
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.5]
6.3.2.5
conditions de répétabilité
conditions où les résultats d'essai/de mesurage indépendants sont obtenus par la même méthode sur des
éléments d'essai/de mesurage identiques sur la même installation d'essai ou de mesure, par le même
opérateur, utilisant le même équipement et pendant un court intervalle de temps
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.6]
6.3.2.6
écart-type de répétabilité
écart-type des résultats d'essai ou résultats de mesurage obtenus dans des conditions de répétabilité
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.7]
6.3.2.7
limite de répétabilité
r
valeur inférieure ou égale à laquelle la différence absolue entre deux résultats de mesurage obtenus dans des
conditions de répétabilité est attendue avec une probabilité de 95 %
[13]
NOTE Adapté de l'ISO 3534-2:2006 , 3.3.9.
6.3.2.8
reproductibilité
fidélité dans des conditions de reproductibilité
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.10]
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ISO 16140:2003/Amd.1:2011(F)
6.3.2.9
conditions de reproductibilité
conditions où les résultats d'essai/de mesurage indépendants sont obtenus par la même méthode sur des
éléments d'essai/de mesurage identiques sur différentes installations d'essai ou de mesure avec différents
opérateurs et utilisant des équipements différents
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.11]
6.3.2.10
écart-type de reproductibilité
écart-type des résultats d'essai ou résultats de mesurage obtenus dans des conditions de reproductibilité
[13]
[ISO 3534-2:2006 , 3.3.12]
6.3.2.11
limite de reproductibilité
R
valeur inférieure ou égale à laquelle la différence absolue entre deux résultats de mesurage obtenus dans des
conditions de reproductibilité est attendue avec une probabilité de 95 %
[13]
NOTE Adapté de l'ISO 3534-2:2006 , 3.3.14.
6.3.3 Protocole de mesure et échantillons
Le protocole est le suivant.
 Utiliser une matrice alimentaire appropriée (voir l'Annexe B).
 Il convient que les concentrations en analyte soient choisies pour couvrir au minimum les niveaux
inférieur, moyen et supérieur de tout le domaine de la méthode alternative. Le laboratoire organisateur
doit démontrer que les échantillons sont homogènes (Référence [14]). Il convient également d'inclure un
contrôle négatif.
 L'échantillon d'aliment peut être artificiellement contaminé avec l'analyte cible.
 Pour comparer la méthode alternative à la méthode de référence, les mêmes échantillons doivent être
utilisés avec chaque méthode. Quatre sous-échantillons de chaque niveau (ou deux aliquotes, mesurées
chacune avec les deux méthodes) sont préparés pour chaque laboratoire. Ils sont codés à l'aveugle mais
étiquetés de façon que deux soient mesurés avec la méthode de référence et deux autres avec la
méthode alternative.
 Les échantillons liquides (par opposition aux échantillons solides) sont garants d'une meilleure
homogénéité s'ils sont préparés et répartis sans modification du contenu microbiologique et utilisés
correctement. Dans des cas particuliers, il peut s'avérer nécessaire de subdiviser les échantillons juste
avant de procéder au mesurage avec les deux méthodes.
 Les mesurages doivent être effectués par chaque laboratoire participant et par le laboratoire organisateur
à une date stipulée en utilisant des lots courants de milieux et de kits.
 Les règles d'arrondi des résultats doivent être définies par le laboratoire organisateur.
 Pour chaque niveau j, les résultats de l'étude interlaboratoires doivent être présentés comme illustré dans
le Tableau 9.
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Tableau 9 — Présentation des résultats de l'étude interlaboratoires au niveau j
Méthode de référence (codée) Méthode alternative (codée)
Laboratoire
i
Duplicat 1 Duplicat 2 Duplicat 1 Duplicat 2
1
2
…
p
6.3.4 Détermination des caractéristiques de justesse et de fidélité
6.3.4.1 Généralités
Pour chaque niveau j, les caractéristiques de justesse et de fidélité suivantes sont déterminées:
 la médiane des moyennes obtenues dans les laboratoires pour les résultats de mesurage de la méthode
de référence et de la méthode alternative (pour l'estimation du biais);
 l'écart-type de répétabilité de la méthode de référence et de la méthode alternative basé sur le calcul de
l'estimateur Q de Rousseeuw (voir l'Annexe Q);
n
 l'écart-type de reproductibilité de la méthode de référence et de la méthode alternative basé sur
l'estimateur Q de Rousseeuw (voir l'Annexe Q).
n
6.3.4.2 Calculs
Pour chaque niveau j, effectuer les calculs conformément aux étapes suivantes. Dans le texte suivant, l'indice
j est omis.
Étape 1. À l'aide des résultats de mesurage obtenus pour la méthode de référence (colonnes 2 et 3 du
Tableau 9), préparer le Tableau 10 pour chaque niveau j.
Tableau 10 — Résultats de mesurage, moyennes et écarts au niveau j
(pour la méthode de référence ou pour la méthode alternative)
1 2 3 4 5 6
Laboratoire Mesurage Moyenne Écart à la moyenne
1 y y y d d
11 12 1 11 12
2 y y y d d
21 22 2 21 22
… … … … … …
i y y y d d
i1 i2 i1 i2
i
… … … … … …
p y y y d d
p1 p2 p p1 p2
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Dans le Tableau 10,
yy
ii12
y 
i
2
est la moyenne des deux mesurages dans le laboratoire i et
()yy
ii12
dyy
ii11 i
2
()yy
ii21
dyy
ii22 i
2
sont les écarts de ces deux mesurages par rapport à leur moyenne.
Étape 2. Utiliser les écarts des colonnes 5 et 6 du Tableau 10 comme une série de n  2p valeurs et calculer
l'estimateur d'échelle de Rousseeuw avec correction du biais Q :
intra
QcQ avec n  2p
intra nn
comme décrit à l'Annexe Q.
Étape 3. Calculer l'estimateur d'échelle de Rousseeuw avec correction du biais Q :
inter
QcQ avec n  p
inter nn
des moyennes de laboratoire de la colonne 4 du Tableau 10 comme décrit à l'Annexe Q.
Étape 4. Calculer la médiane m des moyennes obtenues par les laboratoires pour les résultats de la méthode
de référence (colonne 4 du Tableau 10).
Étape 5. Calculer l'écart-type de répétabilité s :
r
sQ 2
r intra
1)
Calculer le coefficient de variation de la répétabilité, C :
V,r
s
r
C 
Vr,
m
Calculer la limite de répétabilité r:
rs 2,8
r
Étape 6. Calculer l'écart-type interlaboratoires s :
L
22
sQQ
L inter intra
22
ou 0, si QQ  0.
inter intra

1) Le terme «écart-type relatif» précédemment utilisé dans l'ISO 16140:2003 pour «coefficient de variation», est rendu
obsolète par l'ISO 3534-1:2006, 2.38, Note 2. Dans le présent amendement, le symbole C est utilisé à la place de RSD.
V
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Calculer l'écart-type de reproductibilité s :
R
22
sss
R L r
1)
Calculer le coefficient de variation de la reproductibilité, C :
V,R
s
R
C 
VR,
m
Calculer la limite de reproductibilité R:
Rs 2,8
R
Étape 7. Répéter les étapes 1 à 6 pour la méthode alternative.
Après avoir effectué les calculs des étapes 1 à 7 pour chaque niveau j, combiner les résultats des
déterminations pour tous les q niveaux, comme dans le Tableau 11.
Une relation fonctionnelle peut exister entre l'écart-type de répétabilité ou l'écart-type de reproductibilité et le
niveau médian m. Des méthodes permettant de l'établir sont indiquées dans l'ISO 5725-2.
Tableau 11 — Résultats de l'analyse statistique
Méthode de référence Méthode alternative
Niveau
écart-type de écart-type de écart-type de écart-type de
médiane médiane
répétabilité reproductibilité répétabilité reproductibilité
1 m s s m s s
1,ref r1,ref R1,ref 1,alt r1,alt R1,alt
… … … … … … …
j m s s m s s
j,ref rj,ref Rj,ref j,alt rj,alt Rj,alt
… … … … … … …
q m s s m s s
q,ref rq,ref Rq,ref q,alt rq,alt Rq,alt
6.3.5 Contrôle de la cohérence des résultats de mesurage
Deux techniques graphiques de cohérence sont appliquées pour identifier les résultats de mesurage ou les
laboratoires incohérents par rapport aux autres résultats de mesurage ou laboratoires: les statistiques h et k
de Mandel dans une version robustifiée.
6.3.5.1 Pour la méthode de référence, calculer la statistique de cohérence interlaboratoires de Mandel h ,
ij
pour chacun des p laboratoires, i  1 . p, et pour chacun des q niveaux j  1 . q en divisant la moyenne y
ij
(colonne 4 du Tableau 10 pour chaque niveau j) moins la médiane m (colonne 2 du Tableau 11) pour ce
j
niveau j par l'estimateur d'échelle de Rousseeuw avec correction du biais Q pour ce niveau j (comme
inter,j
déterminé à l'Étape 3),
ym
ij j
h 
ij
Q
inter, j
Tracer les valeurs p q (h ) de façon séquentielle d
...