ISO/TS 17383:2014
(Main)Determination of the triacylglycerol composition of fats and oils — Determination by capillary gas chromatography
Determination of the triacylglycerol composition of fats and oils — Determination by capillary gas chromatography
ISO/TS 17383:2014 describes the procedure for the capillary gas chromatographic determination of the qualitative and semi-quantitative composition of individual triglycerides of fats, oils, and fat mixtures. The separation of the triglycerides is based on their retention depending on the carbon number of the fatty acids in the triglycerides and their degree of unsaturation. ISO/TS 17383:2014 is applicable to animal and vegetable fats, as well as to mixtures of natural and synthetic triglycerides, as long as the oil fatty acid composition does not contain high content of linolenic acid such as linseed oil and the total chain length does not exceed a total carbon number of C60.
Détermination de la composition en triglycérides des corps gras — Détermination par chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire
L'ISO/TS 17383:2014 décrit le mode opératoire pour la détermination, par chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire, de la composition qualitative et semi-quantitative des triglycérides individuels présents dans les corps gras et leurs mélanges. La séparation des triglycérides repose sur leur rétention qui dépend du nombre de carbones des acides gras des triglycérides et de leur degré d'insaturation. L'ISO/TS 17383:2014 s'applique aux corps gras d'origines animale et végétale, ainsi qu'aux mélanges de triglycérides naturels et synthétiques, dans la mesure où la composition en acides gras du corps gras ne contient pas une teneur élevée en acide linolénique (l'huile de lin, par exemple) et la longueur totale de la chaîne n'excède pas 60 atomes de carbone.
General Information
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TECHNICAL ISO/TS
SPECIFICATION 17383
First edition
2014-09-01
Determination of the triacylglycerol
composition of fats and oils —
Determination by capillary gas
chromatography
Détermination de la composition des triacylglycérols des corps
gras — Détermination par chromatographie en phase gazeuse sur
colonne capillaire
Reference number
©
ISO 2014
© ISO 2014
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Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents . 1
6 Apparatus . 2
7 Sampling . 3
8 Preparation of test sample . 3
9 Procedure. 3
9.1 Sample purification (if necessary) . 3
9.2 Separation of individual triglycerides by GC . 3
9.3 Identification . 3
9.4 Verification of the response factors . 3
10 Calculation . 4
11 Precision . 4
11.1 Interlaboratory test. 4
11.2 Repeatability limit (r) . 4
11.3 Reproducibility limit (R) . 5
12 Test report . 5
Annex A (informative) Chromatograms . 6
Annex B (informative) Results of interlaboratory test .10
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of any
patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or on
the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity
assessment, as well as information about ISO’s adherence to the WTO principles in the Technical Barriers
to Trade (TBT) see the following URL: Foreword - Supplementary information
The committee responsible for this document is ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11, Animal
and vegetable fats and oils.
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TECHNICAL SPECIFICATION ISO/TS 17383:2014(E)
Determination of the triacylglycerol composition of fats
and oils — Determination by capillary gas chromatography
1 Scope
This Technical Specification describes the procedure for the capillary gas chromatographic
determination of the qualitative and semi-quantitative composition of individual triglycerides of fats,
oils, and fat mixtures. The separation of the triglycerides is based on their retention depending on the
carbon number of the fatty acids in the triglycerides and their degree of unsaturation.
This Technical Specification is applicable to animal and vegetable fats, as well as to mixtures of natural
and synthetic triglycerides, as long as
— the oil fatty acid composition does not contain high content of linolenic acid such as linseed oil and
— the total chain length does not exceed a total carbon number of C60.
NOTE If quantitative results are expected, the response factors of several triglycerides have to be checked as
the increase of the triglyceride unsaturation reduces the sensitivity.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 661, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of test sample
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
proportion of the triglyceride or triglyceride group
composition of the mixture of triglycerides is expressed as a percentage of area assuming the total of the
triglyceride peaks is normalized to 100 %
4 Principle
Triglycerides of different polarities are separated by capillary gas chromatography on a highly polar
stationary phase without any further sample preparation. After normalization of all peak areas, the
content of the relevant triglycerides of the same retention time is expressed as a percentage proportion
of the sum of all peak areas in percent.
5 Reagents
WARNING — Attention is drawn to the regulations which specify the handling of hazardous
substances. Technical, organizational, and personal safety measures shall be followed.
Unless otherwise stated, analytically pure reagents are to be used.
5.1 n-Hexane, analytical grade.
5.2 Diethyl ether, analytical grade.
5.3 Solvent mixture of hexane/diethyl ether, volume fraction hexane φ = 87 ml/100 ml, volume
fraction diethyl ether φ = 13 ml/100 ml.
5.4 Isooctane, analytical grade.
5.5 Reference substances, triglycerides such as tripalmitin, tristearin, triolein, trilinolein, etc., as well
as vegetable and animal fats of known composition.
5.6 Synthetic air, suitable for gas chromatography.
5.7 Hydrogen, for gas chromatography.
6 Apparatus
6.1 Injection vials for GC.
6.2 Gas chromatograph (GC), a chromatograph fitted with a cold on-column injection system and a
flame ionization detector (FID).
NOTE Alternative injection systems, e.g. a split injector, a programmed-temperature vaporizer (PTV), or a
moving-needle injector, can be used provided the same results are obtained as indicated in Annex A.
6.3 The separation and detection has been proven to be satisfactory if the following experimental
conditions are followed:
— High temperature capillary GC column: fused silica coated with thermo stable 50 % to 65 %
phenylmethyl-polysiloxane, 25 m to 30 m × 0,25 i.d., film thickness of 0,1 μm to 0,15 μm.
— Temperature program: 100 °C held 1 min (initial temperature), 100 °C to 325 °C at 30 °C/min, 325 °C
to 345 °C at 1 °C/min, 345 °C to 370 °C at 5 °C/min, 370 °C held 5 min (final temperature).
— Carrier gas: hydrogen (purity ≥99,999 %).
NOTE Operating conditions and type of GC column should be used provided the same results are obtained as
indicated in Annex A.
6.4 Microliter syringe for the GC, injection volume 1 μl to 2 μl.
6.5 Pipettes, 1 ml.
6.6 Analytical balance, readability 0,1 mg.
6.7 Volumetric flasks, 10 ml.
6.8 Silica gel cartridges for solid phase extraction, 1 g (6 ml).
6.9 Rotary evaporator.
6.10 Micropipette.
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7 Sampling
A representative sample should have been sent to the laboratory. It should not have been damaged or
changed during transport or storage.
Sampling is not part of the method specified in this International Standard. A recommended sampling
method is given in ISO 5555.
8 Preparation of test sample
Prepare the test sample in accordance with ISO 661.
Heat solid and semi-solid fats to temperatures slightly above their melting point to be completely clear,
then mix well. Filter liquid or melted samples, or their solutions, which still contain visible contaminations.
9 Procedure
9.1 Sample purification (if necessary)
If a sample contains monoglycerides, diglycerides, free fatty acids, or polymerized fats in greater
proportions, they should be separated in advance by preparative column chromatography according to
the following procedure.
Wash an SPE silica gel cartridge (6.8) with 6 ml of hexane. Place a conical flask under the cartridge. Load
a solution of the sample (0,12 g, approximately) in 0,5 ml of hexane (5.1) into the column and then elute
the triglycerides fraction with 10 ml of the solvent mixture (5.3) of hexanediethyl ether (87:13 v/v).
Evaporate to dryness the eluted solvent in a rotary evaporator (6.9) under reduced pressure at room
temperature.
NOTE Oil purification can also be done using a silica gel column, as described in ISO 8420.
9.2 Separation of individual triglycerides by GC
Prepare a solution of the sample at approx. 0,50 mg/ml in isooctane (5.4). Weigh 50 mg of the sample in a
10 ml volumetric flask (6.7) and bring to volume with isooctane (5.4). Pipette 1 ml (6.5) of the resulting
solution in another 10 ml volumetric flask (6.7) and bring to volume with the same solvent.
Inject 1,0 μl of the final test solution into the GC system using the cold on-column injection system.
Working (temperature) conditions shall be used to get a good separation C50-triglycerides (POP/PLP),
C52-triglycerides (POS/POO/PLO), and C54-triglycerides (SOO/OOO/OLO) as shown in Annex A.
9.3 Identification
For the identification of the peaks in the gas chromatogram, the relative retention times, e.g. relative to
tripalmitin, shall be compared to those of the test substances.
In general, triglycerides appear in order of increasing number of C atoms and of increasing unsaturation
for the same number of C atoms. The elution order of the triglycerides is given in the example
chromatograms (Annex A).
9.4 Verification of the response factors
Prepare a solution of the reference substances (5.5) at approx. 0,1 mg/ml in isooctane (5.4). Weigh
50 mg of the sample in a 10 ml
...
SPÉCIFICATION ISO/TS
TECHNIQUE 17383
Première édition
2014-09-01
Détermination de la composition
en triglycérides des corps gras —
Détermination par chromatographie
en phase gazeuse sur colonne
capillaire
Determination of the triacylglycerol composition of fats and oils —
Determination by capillary gas chromatography
Numéro de référence
©
ISO 2014
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l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à
l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2014 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 1
5 Réactifs . 2
6 Appareillage . 2
7 Échantillonnage . 3
8 Préparation de l’échantillon pour essai . 3
9 Mode opératoire. 3
9.1 Purification des échantillons (le cas échéant) . 3
9.2 Séparation des triglycérides individuels par GC . 3
9.3 Identification . 4
9.4 Vérification des coefficients de réponse . 4
10 Calculs . 4
11 Fidélité . 5
11.1 Essais interlaboratoires . . 5
11.2 Limite de répétabilité (r) . 5
11.3 Limite de reproductibilité (R) . 5
12 Rapport d’essai . 5
Annexe A (informative) Chromatogrammes . 6
Annexe B (informative) Résultats des essais interlaboratoires .10
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne
la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les
références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration
du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par
l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de
la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes de l’OMC concernant
les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos — Informations
supplémentaires.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 11, Corps gras d’origines animale et végétale.
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SPÉCIFICATION TECHNIQUE ISO/TS 17383:2014(F)
Détermination de la composition en triglycérides des corps
gras — Détermination par chromatographie en phase
gazeuse sur colonne capillaire
1 Domaine d’application
La présente Spécification technique décrit le mode opératoire pour la détermination, par chromatographie
en phase gazeuse sur colonne capillaire, de la composition qualitative et semi-quantitative des
triglycérides individuels présents dans les corps gras et leurs mélanges. La séparation des triglycérides
repose sur leur rétention qui dépend du nombre de carbones des acides gras des triglycérides et de leur
degré d’insaturation.
La présente Spécification technique s’applique aux corps gras d’origines animale et végétale, ainsi qu’aux
mélanges de triglycérides naturels et synthétiques, dans la mesure où
— la composition en acides gras du corps gras ne contient pas une teneur élevée en acide linolénique
(l’huile de lin, par exemple) et
— la longueur totale de la chaîne n’excède pas 60 atomes de carbone.
NOTE Si les résultats attendus sont d’ordre quantitatif, les coefficients de réponse de plusieurs triglycérides
doivent être vérifiés car l’augmentation du degré d’insaturation des triglycérides réduit la sensibilité.
2 Références normatives
Les documents ci-après, dans leur intégralité ou non, sont des références normatives indispensables à
l’application du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 661, Corps gras d’origines animale et végétale — Préparation de l’échantillon pour essai
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
3.1
proportion du triglycéride ou du groupe de triglycérides
composition du mélange de triglycérides exprimée en pourcentage d’aire, en considérant que l’aire totale
des pics des triglycérides est normalisée à 100 %
4 Principe
Les triglycérides de polarités différentes sont séparés par chromatographie en phase gazeuse sur une
colonne capillaire contenant une phase stationnaire fortement polaire, sans autre préparation des
échantillons. Après normalisation de toutes les aires des pics, la teneur des triglycérides d’intérêt élués
au même temps de rétention est exprimée sous forme de proportion (pourcentage) de la somme de
toutes les aires de pics exprimées en pour-cent.
5 Réactifs
AVERTISSEMENT — L’attention des lecteurs est attirée sur les règles qui spécifient la manipulation
des substances dangereuses. Les mesures de sécurité sur les plans technique, organisationnel et
personnel doivent être suivies.
Sauf indication contraire, les réactifs utilisés doivent être analytiquement purs.
5.1 n-hexane, de qualité analytique.
5.2 Éther diéthylique, de qualité analytique.
5.3 Mélange de solvants hexane/éther diéthylique, fraction volumique d’hexane φ = 87 ml/100 ml,
fraction volumique d’éther diéthylique φ = 13 ml/100 ml.
5.4 Isooctane, de qualité analytique.
5.5 Substances de référence, triglycérides (tripalmitine, tristéarine, trioléine, trilinoléine, etc.) et
corps gras d’origines végétale et animale de composition connue.
5.6 Air synthétique, approprié pour la chromatographie en phase gazeuse.
5.7 Hydrogène, adapté à la chromatographie en phase gazeuse.
6 Appareillage
6.1 Flacons d’injection pour GC.
6.2 Chromatographe en phase gazeuse (GC), équipé d’un système d’injection à froid sur colonne (on-
column) et d’un détecteur à ionisation de flamme (FID).
NOTE D’autres systèmes d’injection, par exemple un injecteur à débit divisé, un vaporisateur à température
programmable (PTV) ou un injecteur à aiguille mobile, peuvent être employés à condition qu’ils produisent les
mêmes résultats que ceux indiqués en Annexe A.
6.3 La séparation et la détection se sont avérées satisfaisantes lorsque les conditions expérimentales
suivantes sont satisfaites:
— Colonne capillaire pour GC haute température: silice fondue revêtue de phénylméthylpolysiloxane à
50 % à 65 % thermostable, 25 m à 30 m (longueur) × 0,25 (diamètre intérieur), épaisseur de film de
0,1 μm à 0,15 μm.
— Programme de température: maintien à 100 °C pendant 1 min (température initiale), passage de
100 °C à 325 °C à 30 °C/min, de 325 °C à 345 °C à 1 °C/min, de 345 °C à 370 °C à 5 °C/min, maintien
à 370 °C pendant 5 min (température finale).
— Gaz vecteur: hydrogène (pureté ≥ 99,999 %).
NOTE Il convient d’employer des conditions opératoires et un type de colonne GC permettant d’obtenir des
résultats identiques à ceux indiqués en Annexe A.
6.4 Microseringue pour GC, volume d’injection 1 μl à 2 μl.
6.5 Pipettes, de 1 ml.
2 © ISO 2014 – Tous droits réservés
6.6 Balance d’analyse, offrant une précision de lecture de 0,1 mg.
6.7 Fioles jaugées, de 10 ml.
6.8 Cartouches de gel de silice pour extraction en phase solide, de 1 g (6 ml).
6.9 Évaporateur rotatif.
6.10 Micropipette.
7 Échantillonnage
Il convient de transmettre au laboratoire un échantillon représentatif. Il convient également que cet
échantillon n’ait pas été endommagé ou modifié lors du transport ou du stockage.
L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente Spécification technique.
Une méthode d’échantillonnage recommandée est donnée dans l’ISO 5555.
8 Préparation de l’échantillon pour essai
Préparer l’échantillon pour essai conformément à l’ISO 661.
Chauffer les corps gras solides et semi-solides à des températures légèrement supérieures à leur point
de fusion jusqu’à ce qu’ils soient parfaitement limpides, puis bien les mélanger. Filtrer les échantillons
liquides ou fondus, ou leurs solutions, s’ils contiennent encore une contamination visible.
9 Mode opératoire
9.1 Purification des échantillons (le cas échéant)
Il convient de fractionner au préalable les échantillons contenant des monoglycérides, des diglycérides,
des acides gras libres ou des graisses polymérisées en proportions plus élevées, par chromatographie
sur colonne préparative, selon le mode opératoire ci-après.
Laver une cartouche de gel de silice pour SPE (6.8) avec 6 ml d’hexane. Placer un flacon conique sous
la cartouche. Introduire une solution de l’échantillon (environ 0,12 g) dans 0,5 ml d’hexane (5.1) dans
la colonne, puis éluer la fraction de triglycérides avec 10 ml du mélange de solvants (5.3) hexane-éther
diéthylique (87:13 v/v). Évaporer à sec le solvant élué, dans un
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.