ISO 10727:1995

Tea and instant tea in solid form — Determination of caffeine content — Method using high-performance liquid chromatography

The method specified is based on extracting the caffeine from a test portion with water at 90 °C in the presence of magnesium oxide, filtration followed by determination of the caffeine content by HPLC with UV detection. Applies to teas and instant teas with a caffeine content of greater than 0,3 % (m/m).

Thé et thé soluble sous forme solide — Détermination de la teneur en caféine — Méthode par chromatographie liquide à haute performance

La présente Norme internationale prescrit une méthode de détermination de la teneur en caféine par chromatographie liquide à haute performance (CLHP) dans les thés et thés solubles dont la teneur en caféine est supérieure à 0,3 % (m/m).

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 18-Jan-1995
• Withdrawal Date: 18-Jan-1995
• ICS: 67.140.10 - Tea
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 8 - Tea
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 8 - Tea
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 15-Aug-2002

Relations

• Revised: ISO 10727:2002 - Tea and instant tea in solid form — Determination of caffeine content — Method using high-performance liquid chromatography
• Effective Date: 15-Apr-2008

Standards Content (Sample)

IS0
INTERNATIONAL
10727
STANDARD
First edition
1995-01-15
Tea and instant tea in solid form -
Determination of caffeine content -
Method using high-performance liquid
chromatography
- D&ermination de la teneur en
Thk et th6 soluble sous forme solide
caf&ne - M&hode par chromatographie liquide ;i haute performance
Reference number
IS0 10727: 1995(E)

---------------------- Page: 1 ----------------------
IS0 10727:1995(E)
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (IS0 member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through IS0
technical committees. Each member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has the right to be
represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. IS0
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission
(I EC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard IS0 10727 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 34, Agricultural food products, Subcommittee SC 8, Tea.
Annexes A and B of this International Standard are for information only.
0 IS0 1995
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced
or utilized in any form or by any means, electronrc or mechanrcal, including photocopying and
microfilm, without permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case Postale 56 l CH-1211 Geneve 20 l Switzerland
Printed in Switzerland
ii

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IS0 10727:1995(E)
INTERNATIONAL STANDARD 0 ISO
- Determination of
Tea and instant tea in solid form
caffeine content - Method using high-performance
liquid chromatography
4 Reagents
1 Scope
Use only reagents of recognized analytical grade, un-
This International Standard specifies a method for the
less otherwise specified, and water in accordance
determination of the caffeine content by high-
with grade 1 of IS0 3696.
performance liquid chromatography (HPLC) of teas
and instant teas with a caffeine content of greater
than 0,3 % (m/m).
4.1 Methanol, HPLC grade.
4.2 Mobile phase, methanol/water mixture.
2 Normative references
Add 600 ml of the methanol (4.1) to a 2 litre one-mark
The following standards contain provisions which,
volumetric flask. Dilute to the mark with water, mix,
through reference in this text, constitute provisions
and filter the mixture through a filter of 0,45 pm pore
of this International Standard. At the time of publi-
size (5.3).
cation, the editions indicated were valid. All standards
are subject to revision, and parties to agreements
NOTE 1 By adjusting the methanol concentration, the
based on this International Standard are encouraged
retention time of the caffeine can be modified so as to op-
to investigate the possibility of applying the most re-
timize the HPLC separation. This can also be done by in-
creasing the column temperature, but a temperature of
cent editions of the standards indicated below.
60 “C should not be exceeded.
Members of IEC and IS0 maintain registers of cur-
rently valid International Standards.
4.3 Ethanol/water mixture, l/4 (V/V).
IS0 1572:1980, Tea - Preparation of ground sample
of known dry matter content.
4.4 Magnesium oxide (so-called “dense mag-
IS0 3696: 1987, Water for analytical laboratory use -
nesium oxide”).
Specification and test methods.
4.5 Caffeine stock solution, corresponding to
IS0 7513:1990, Instant tea in solid form - Determi-
0,500 g of caffeine per litre.
nation of moisture con tent (loss in mass at 103 O C).
Weigh, to the nearest 0,001 g, 0,125 g of caffeine
into a 250 ml one-mark volumetric flask made of am-
3 Principle
ber glass. Add sufficient ethanol/water mixture (4.3)
to half-fill the flask. Swirl to dissolve the caffeine and
Extraction of the caffeine from a test portion with
then dilute to the mark with the ethanol/water mix-
water at 90 “C in the presence of magnesium oxide.
ture.
Filtration followed by determination of the caffeine
This solution is stable for up to 1 month if stored in a
content by high-performance liquid chromatography
refrigerator.
with ultraviolet detection.
1

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IS0 10727:1995(E)
2
4.6 Caffeine standard solutions
Standard solutions A and B shall be prepared on the
day of use.
where
t is the retention time of the peak;
4.6.1 Caffeine standard solution A, corresponding
to 0,010 g of caffeine per litre (to be used for
is the peak width at half peak height.
Wo,5
decaffeinated products).
5.3 Filters, of 0,45 pm pore size.
Allow the caffeine stock solution (4.5) to warm up to
room temperature. Using a pipette, transfer 2,0 ml of
the stock solution (4.5) to a 100 ml one-mark volu-
5.4 Water bath, capable of being maintained at
metric flask. Dilute to the mark with water and mix.
90 “C + 1 “C, with continuous shaking.
4.6.2 Caffeine standard solution B, corresponding
5.5 Bottle, of 500 ml capacity, fitted with a screw
to 0,050 g of caffeine per litre (to be used for regular
cap.
products).
. Analytical balance, capable of weighing to an
56
Follow the procedure given in 4.6.1 but take, using a
.
accuracy of + - 0,001
pipette, IO,0 ml of the stock solution (4.5). cl
6 Sampling
5 Apparatus
the laboratory receive a sample
It is important that
Usual laboratory apparatus and, in particular, the fol-
which is truly representative and has not been dam-
lowing.
aged or changed during transport or storage.
Sampling is not part of the method specified in this
5.1 High-performance liquid chromatograph,
International Standard. A recommended sampling
ultraviolet detector, allowing
equipped with an
method is given in
measurements to be made at a wavelength between
254 nm and 280 nm, and a chart recorder.
- IS0 1839 for regular green tea and black tea;
NOTES
- IS0 7516 for instant tea.
2 A wavelength close to 280 nm is preferred since the
maximum absorption by caffeine is at 272 nm.
7 Preparation of test sample
3 Where diurnal variations in temperature are wide, means
of ensuring a constant column temperature should be pro-
Grind the sample of green tea or black tea in accord-
vided, for example a column oven or water jacket.
ance with IS0 1572.
NOTE 4 Grinding is not required for instant tea samples.
5.2 Chromatographic column for HPLC, type &a,
preferably with spherical particles and having an ef-
ficiency of at least 5 000 theoretical plates?
8 Procedure
The theoretical plate number N of a column can be
NOTE 5 If it is required to check whether the repeat-
calculated as follows, from the shape of the peak ob-
ability requirement is met, carry out two single deter-
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 10727
Première édition
1995-01-I 5
Thé et thé soluble sous forme solide -
Détermination de la teneur en caféine -
Méthode par chromatographie liquide à
haute performance
- Determination of caffeine
Tea and instant tea in solid form content -
Method using high-performance liquid chroma tograph y
Numéro de référence
ISO 10727: 1995(F)

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 10727:1995(F)
Avant-propos
LIS0 (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen-
tales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO colla-
bore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI)
en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des co-
mités membres votants.
La Norme internationale ISO 10727 a été élaborée par le comité technique
lSO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 8, Thé.
Les annexes A et B de la présente Norme internationale sont données
uniquement à titre d’information.
0 ISO 1995
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms sans l’accord
écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-l 211 Genève 20 l Suisse
Imprimé en Suisse

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 10727:1995(F)
NORME INTERNATIONALE * 60
Détermination
Thé et thé soluble sous forme solide -
- Méthode par
de la teneur en caféine
chromatographie liquide à haute performance
par chromatographie liquide à haute performance
1 Domaine d’application
avec détection aux ultraviolets.
La présente Norme internationale prescrit une mé-
thode de détermination de la teneur en caféine par
4 Réactifs
chromatographie liquide à haute performance (CLHP)
dans les thés et thés solubles dont la teneur en ca-
Sauf indication différente, utiliser uniquement des ré-
féine est supérieure à 0,3 % (m/m).
actifs de qualité analytique reconnue, et de l’eau de
qualité 1, conformément à I’ISO 3696.
2 Références normatives
4.1 Méthanol, qualité CLHP.
Les normes suivantes contiennent des dispositions
qui, par suite de la référence qui en est faite, consti-
4.2 Phase mobile, méthanoI/eau.
tuent des dispositions valables pour la présente
Norme internationale. Au moment de la publication,
Introduire 600 ml de méthanol (4.1) dans une fiole
les éditions indiquées étaient en vigueur. Toute
jaugée à un trait de 2 litres et compléter au trait re-
norme est sujette à révision et les parties prenantes
père avec de l’eau, homogénéiser et filtrer le mélange
des accords fondés sur la présente Norme internatio-
sur un filtre de 0,45 prn d’ouverture de pores (5.3).
nale sont invitées à rechercher la possibilité d’appli-
quer les éditions les plus récentes des normes NOTE 1 En ajustant la concentration du méthanol, le
temps de rétention de la caféine peut être modifié de façon
indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de I’ISO
à optimiser la séparation par CLHP. Ceci peut également
possèdent le registre des Normes internationales en
être obtenu en augmentant la température de la colonne,
vigueur à un moment donné.
mais sans dépasser 60 "C.
ISO 1572:1980, Thé - Préparation d’un échantillon
broyé de teneur en matière sèche connue.
4.3 Mélange éthanol/eau, 1/4 (V/V).
ISO 3696:1987, Eau pour laboratoire à usage analyti-
4.4 Oxyde de magnésium (également désigné
- Spécifica tion et méthodes d’essai.
que
«oxyde de magnésium dense»).
ISO 7513: 1990, Thé soluble sous forme solide -
Détermination de la teneur en eau (perte de masse à
4.5 Caféine, solution mère, correspondant à
103 OC).
0,500 g de caféine par litre.
Peser à 0,001 g près, 0,125 g de caféine dans une
fiole jaugée de 250 ml en verre inactinique (5.6).
3 Principe
Ajouter suffisamment de mélange éthanol/eau (4.3)
pour remplir la fiole jusqu’à la moitié. Dissoudre la
Extraction de la caféine d’une prise d’essai avec de
l’eau à 90 OC, en présence d’oxyde de magnésium. caféine en remuant, puis compléter au trait repère
Filtration, puis détermination de la teneur en caféine avec le même mélange éthanol/eau.
1

---------------------- Page: 3 ----------------------
0 ISO
ISO 10727:1995(F)
Cette solution peut être conservée pendant 1 mois Le nombre N de plateaux théoriques d’une colonne
peut être calculé comme suit, à partir du pic obtenu
au réfrigérateur.
en injectant une solution étalon (4.6) de caféine,
comme suit:
4.6 Caféine, solutions étalons
L
Les solutions étalon A et B doivent être préparées le
jour de leur utilisation.
où
4.6.1 Solution étalon A, correspondant à 0,010 g
t est le temps de rétention du pic;
de caféine par litre (pour les produits décaféinés).
est la largeur du pic à mi-hauteur.
Wo,5
Laisser la solution mère (4.5) se réchauffer à la tem-
pérature du laboratoire. Introduire à la pipette 2 ml de
cette solution dans une fiole jaugée à un trait de
5.3 Filtres, de 0,45 prn d’ouverture de pores.
100 ml. Compléter au trait repère avec de l’eau et
mélanger.
5.4 Bain d’eau, réglable à 90 “C + 1 “C sous agi-
tation continue.
4.6.2 Solution étalon B, correspondant à 0,050 g
de caféine par litre (pour les produits courants).
5.5 Flacon, de 500 ml de capacité, muni d’un bou-
Suivre le même mode opératoire qu’en 4.6.1, mais
chon à vis.
en prélevant à la pipette 10,O ml de la solution mère
(4.5).
5.6 Balance analytique, précise à + 0,001 g.
5 Appareillage
6 Échantillonnage
Matériel de laboratoire, et notamment
II est important que le laboratoire reçoive un échan-
tillon réellement représentatif, non endommagé ou
5.1 Chromatographe liquide à haute perfor-
modifié lors du transport et de l’entreposage.
mance, équipé d’un détecteur à ultraviolets, permet-
tant les mesures entre 254 nm et 280 nm, et d’un
L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode
enregistreur graphique.
spécifiée dans la présente Norme internationale. Des
méthodes d’échantillonnage recommandées sont
NOTES
données dans:
2 Une longueur d’onde proche de 280 nm est préférable,
car le maximum d’absorption de la caféine se situe à
- I’ISO 1839 pour le thé vert et le thé noir courants,
272 nm.
- I’ISO 7516 pour le thé soluble.
3 Si les variations de température diurnes sont impor-
tantes, il convient de s’assurer du maintien de la colonne à
température constante, par exemple à l’aide d’un four à
7 Préparation de l’échantillon pour essai
colonne ou d’une chemise d’eau.
Broyer l’échantillon de thé vert ou thé noir conformé-
5.2 Colonne de chromatographie pour CLHP, de
ment à I’ISO 1572.
type Cl8 avec, de préférence, des particules sphéri-
ques et ayant une efficacité d’au moins 5 000 pla-
NOTE 4 II n’est pas nécessaire de broyer les échantillons
teaux théoriques.l) de thé soluble.
1) Spheri
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 10727
Première édition
1995-01-I 5
Thé et thé soluble sous forme solide -
Détermination de la teneur en caféine -
Méthode par chromatographie liquide à
haute performance
- Determination of caffeine
Tea and instant tea in solid form content -
Method using high-performance liquid chroma tograph y
Numéro de référence
ISO 10727: 1995(F)

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ISO 10727:1995(F)
Avant-propos
LIS0 (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen-
tales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO colla-
bore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI)
en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des co-
mités membres votants.
La Norme internationale ISO 10727 a été élaborée par le comité technique
lSO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 8, Thé.
Les annexes A et B de la présente Norme internationale sont données
uniquement à titre d’information.
0 ISO 1995
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms sans l’accord
écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-l 211 Genève 20 l Suisse
Imprimé en Suisse

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ISO 10727:1995(F)
NORME INTERNATIONALE * 60
Détermination
Thé et thé soluble sous forme solide -
- Méthode par
de la teneur en caféine
chromatographie liquide à haute performance
par chromatographie liquide à haute performance
1 Domaine d’application
avec détection aux ultraviolets.
La présente Norme internationale prescrit une mé-
thode de détermination de la teneur en caféine par
4 Réactifs
chromatographie liquide à haute performance (CLHP)
dans les thés et thés solubles dont la teneur en ca-
Sauf indication différente, utiliser uniquement des ré-
féine est supérieure à 0,3 % (m/m).
actifs de qualité analytique reconnue, et de l’eau de
qualité 1, conformément à I’ISO 3696.
2 Références normatives
4.1 Méthanol, qualité CLHP.
Les normes suivantes contiennent des dispositions
qui, par suite de la référence qui en est faite, consti-
4.2 Phase mobile, méthanoI/eau.
tuent des dispositions valables pour la présente
Norme internationale. Au moment de la publication,
Introduire 600 ml de méthanol (4.1) dans une fiole
les éditions indiquées étaient en vigueur. Toute
jaugée à un trait de 2 litres et compléter au trait re-
norme est sujette à révision et les parties prenantes
père avec de l’eau, homogénéiser et filtrer le mélange
des accords fondés sur la présente Norme internatio-
sur un filtre de 0,45 prn d’ouverture de pores (5.3).
nale sont invitées à rechercher la possibilité d’appli-
quer les éditions les plus récentes des normes NOTE 1 En ajustant la concentration du méthanol, le
temps de rétention de la caféine peut être modifié de façon
indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de I’ISO
à optimiser la séparation par CLHP. Ceci peut également
possèdent le registre des Normes internationales en
être obtenu en augmentant la température de la colonne,
vigueur à un moment donné.
mais sans dépasser 60 "C.
ISO 1572:1980, Thé - Préparation d’un échantillon
broyé de teneur en matière sèche connue.
4.3 Mélange éthanol/eau, 1/4 (V/V).
ISO 3696:1987, Eau pour laboratoire à usage analyti-
4.4 Oxyde de magnésium (également désigné
- Spécifica tion et méthodes d’essai.
que
«oxyde de magnésium dense»).
ISO 7513: 1990, Thé soluble sous forme solide -
Détermination de la teneur en eau (perte de masse à
4.5 Caféine, solution mère, correspondant à
103 OC).
0,500 g de caféine par litre.
Peser à 0,001 g près, 0,125 g de caféine dans une
fiole jaugée de 250 ml en verre inactinique (5.6).
3 Principe
Ajouter suffisamment de mélange éthanol/eau (4.3)
pour remplir la fiole jusqu’à la moitié. Dissoudre la
Extraction de la caféine d’une prise d’essai avec de
l’eau à 90 OC, en présence d’oxyde de magnésium. caféine en remuant, puis compléter au trait repère
Filtration, puis détermination de la teneur en caféine avec le même mélange éthanol/eau.
1

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0 ISO
ISO 10727:1995(F)
Cette solution peut être conservée pendant 1 mois Le nombre N de plateaux théoriques d’une colonne
peut être calculé comme suit, à partir du pic obtenu
au réfrigérateur.
en injectant une solution étalon (4.6) de caféine,
comme suit:
4.6 Caféine, solutions étalons
L
Les solutions étalon A et B doivent être préparées le
jour de leur utilisation.
où
4.6.1 Solution étalon A, correspondant à 0,010 g
t est le temps de rétention du pic;
de caféine par litre (pour les produits décaféinés).
est la largeur du pic à mi-hauteur.
Wo,5
Laisser la solution mère (4.5) se réchauffer à la tem-
pérature du laboratoire. Introduire à la pipette 2 ml de
cette solution dans une fiole jaugée à un trait de
5.3 Filtres, de 0,45 prn d’ouverture de pores.
100 ml. Compléter au trait repère avec de l’eau et
mélanger.
5.4 Bain d’eau, réglable à 90 “C + 1 “C sous agi-
tation continue.
4.6.2 Solution étalon B, correspondant à 0,050 g
de caféine par litre (pour les produits courants).
5.5 Flacon, de 500 ml de capacité, muni d’un bou-
Suivre le même mode opératoire qu’en 4.6.1, mais
chon à vis.
en prélevant à la pipette 10,O ml de la solution mère
(4.5).
5.6 Balance analytique, précise à + 0,001 g.
5 Appareillage
6 Échantillonnage
Matériel de laboratoire, et notamment
II est important que le laboratoire reçoive un échan-
tillon réellement représentatif, non endommagé ou
5.1 Chromatographe liquide à haute perfor-
modifié lors du transport et de l’entreposage.
mance, équipé d’un détecteur à ultraviolets, permet-
tant les mesures entre 254 nm et 280 nm, et d’un
L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode
enregistreur graphique.
spécifiée dans la présente Norme internationale. Des
méthodes d’échantillonnage recommandées sont
NOTES
données dans:
2 Une longueur d’onde proche de 280 nm est préférable,
car le maximum d’absorption de la caféine se situe à
- I’ISO 1839 pour le thé vert et le thé noir courants,
272 nm.
- I’ISO 7516 pour le thé soluble.
3 Si les variations de température diurnes sont impor-
tantes, il convient de s’assurer du maintien de la colonne à
température constante, par exemple à l’aide d’un four à
7 Préparation de l’échantillon pour essai
colonne ou d’une chemise d’eau.
Broyer l’échantillon de thé vert ou thé noir conformé-
5.2 Colonne de chromatographie pour CLHP, de
ment à I’ISO 1572.
type Cl8 avec, de préférence, des particules sphéri-
ques et ayant une efficacité d’au moins 5 000 pla-
NOTE 4 II n’est pas nécessaire de broyer les échantillons
teaux théoriques.l) de thé soluble.
1) Spheri
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