ISO 15214:1998

Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of mesophilic lactic acid bacteria — Colony-count technique at 30 degrees C

Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le dénombrement des bactéries lactiques mésophiles — Technique par comptage des colonies à 30 degrés C

La présente Norme internationale spécifie une méthode horizontale pour le dénombrement des bactéries lactiques mésophiles viables par comptage des colonies obtenues en milieu solide après incubation à 30 °C pendant 3 jours. NOTE Dans certains produits alimentaires, il existe des bactéries lactiques psychrotrophes ou thermophiles devant être cultivées à des températures différentes de 30 °C. De plus, toutes les bactéries lactiques ne croissent pas sur la gélose MRS à pH 5,7 et certaines ne croissent que faiblement. La présente Norme internationale est applicable aux produits destinés à la consommation humaine ou à l'alimentation animale, avec les quelques restrictions signalées dans l'introduction et dans la note ci-dessus.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 22-Jul-1998
• ICS: 07.100.30 - Food microbiology
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 9 - Microbiology
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 9 - Microbiology
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 26-Jan-2021

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 15214
First edition
1998-08-01
Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Horizontal method for the
emumeration of mesophilic lactic acid
bacteria — Colony-count technique at 30 °C
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le dénombrement
des bactéries lactiques mésophiles — Techniques par comptage des
colonies à 30 °C
A
Reference number
ISO 15214:1998(E)

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ISO 15214:1998(E)
Contents Page
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Definitions . 1
4 Principle . 2
5 Diluent and culture medium . 2
6 Apparatus and glassware . 3
7 Sampling . 3
8 Preparation of test sample . 4
9 Procedure . 4
10 Expression of results . 5
11 Confidence limits . 6
12 Test report . 6
Annex A (informative) Bibliography . 7
©  ISO 1998
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced
or utilized in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying and
microfilm, without permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
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Internet [e-mail]
Printed in Switzerland
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ISO ISO 15214:1998(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (ISO member bodies). The work of
preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which
a technical committee has been established has the right to be represented
on that committee. International organizations, governmental and non-
governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission
(IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard ISO 15214 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 34, Agricultural food products, Subcommittee SC 9, Microbiology.
Annex A of this International Standard is for information only.
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ISO 15214:1998(E) ISO
Introduction
Because of the large variety of food and feed products, this horizontal
method may not be appropriate in every detail for certain products. In this
case, different methods which are specific to these products may be used if
absolutely necessary for justified technical reasons. Nevertheless, every
attempt should be made to apply this horizontal method as far as possible.
When this International Standard is next reviewed, account will be taken of
all information then available regarding to extent to which this horizontal
method has been followed and the reasons for deviations from this method
in the case of particular products.
The harmonization of test methods cannot be immediate, and for certain
groups of products International Standards and/or national standards may
already exist that do not comply with this horizontal method. It is hoped that
when such standards are reviewed they will be changed to comply with this
International Standard so that eventually the only remaining departures
from this horizontal method will be those necessary for well-established
technical reasons.
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INTERNATIONAL STANDARD  ISO ISO 15214:1998(E)
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal
method for the enumeration of mesophilic lactic acid bacteria —
Colony-count technique at 30 °C
1  Scope
This International Standard specifies a horizontal method for the enumeration of viable mesophilic lactic acid
bacteria by counting the colonies growing in a solid medium after incubation at 30 °C for 3 days.
NOTE  In some food products, there exist psychotrophic or thermophilic lactic acid bacteria necessitating culture temperatures
different from 30 °C. Moreover, not all lactic acid bacteria grow on MRS agar at pH 5,7 and some grow only weakly.
Subject to the limitations discussed in the introduction and in the note above, this International Standard is
applicable to products intended for human consumption or animal foodstuffs.
2  Normative references
The following standards contain provisions which, through reference in this text, constitute provisions of this
International Standard. At the time of the publication, the editions indicated were valid. All standards are subject to
revision, and parties to agreement based on the International Standard are encouraged to investigate the possibility
of applying the most recent editions of the standards inidicated below. Members of IEC and ISO maintain registers
of currently valid International Standards.
1)
ISO 6887-1:— , Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of the intial
suspension and decimal dilutions.
ISO 7218:1996, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General rules for microbiological examinations.
3  Definitions
For the purposes of this International Standard, the following definition applies.
3.1
mesophilic lactic acid bacteria
bacteria which form colonies at 30 °C in a solid selective medium (MRS at pH 5,7) under the test conditions
specified in this International Standard

1)
To be published. (Revision of ISO 6887:1983)
1

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ISO
ISO 15214:1998(E)
4  Principle
4.1  Preparation of two dishes using MRS agar at pH 5,7 contained in Petri dishes. Poured-plate or possibly
2)
surface inoculation of the dishes with a specified quantity of the test sample if the initial product is liquid, or with a
specified quantity of the initial suspension in the case of other products.
4.2  Inoculation of other pairs of dishes, under the same conditions, using decimal dilutions of the test sample or of
the initial suspension.
Incubation of the dishes at 30 °C for 72 h.
4.3  Calculation of the number of mesophilic lactic acid bacteria (3.1) per gram or per millilitre of test sample from
3)
the number of colonies obtained in 4.2 in the dishes selected, and possibly confirmed .
5  Diluent and culture medium
5.1  General
For current laboratory practice, see ISO 7218.
5.2  Diluent
See ISO 6887-1.
NOTE  The buffered peptone water does not always allow satisfactory resuscitation of lactic acid bacteria (see annex A,
references [1], [2], [3]).
5.3  Culture medium: MRS medium (de Man, Rogosa and Sharpe) at pH 5,7 (see reference [4])
NOTE  The use of commercially available ready-to-use media is acceptable. However, attention is drawn to the fact that
variations in composition and pH may occur between products from different manufacturers and could therefore give results
different from the ones obtained with the medium as specified in this International Standard.
5.3.1  Composition
Enzymatic digest of casein 10,0 g
Meat extract 10,0 g
Yeast extract 4,0 g
Triammonium citrate [(NH ) C H O ] 2,0 g
4 3 6 5 7
Sodium acetate (CH COONa) 5,0 g
3
Magnesium sulfate heptahydrate (MgSO ·7H O) 0,2 g
4 2
Manganese sulfate tetrahydrate (MnSO ·4H O) 0,05 g
4 2
Dipotassium hydrogen phosphate (K HPO ) 2,0 g
2 4
Glucose (C H O ) 20,0 g
6 12 6
Polyoxyethylenesorbitan monooleate (Tween 80) 1,08 g
1)
Agar 12 g to 18 g
Water 1 000 ml
1) Depending on the gel strength of the agar.

2)
See note 1 in 9.2.
3)
See note 2 in 9.3.
2

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ISO
ISO 15214:1998(E)
5.3.2  Preparation
5.3.2.1  Dissolve the components or the dehydrated complete medium in the water by boiling.
4)
Using the pH-meter (6.7), adjust the pH so that after sterilization it is 5,7 ± 0,1 a
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 15214
Première édition
1998-08-01
Microbiologie des aliments — Méthode
horizontale pour le dénombrement des
bactéries lactiques mésophiles —
Technique par comptage des colonies
à 30 °C
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the
enumeration of mesophilic lactic acid bacteria — Colony-count technique
at 30 °C
A
Numéro de référence
ISO 15214:1998(F)

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ISO 15214:1998(F)
Sommaire Page
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Définitions . 1
4 Principe . 2
5 Diluant et milieu de culture . 2
6 Appareillage et verrerie . 3
7 Échantillonnage . 3
8 Préparation de l’échantillon pour essai . 4
9 Mode opératoire . 4
10 Expression des résultats . 5
11 Limites de confiance . 6
12 Rapport d’essai . 6
Annexe A (informative) Bibliographie . 7
©  ISO 1998
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord
écrit de l'éditeur.
Organisation internationale de normalisation
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Internet [e-mail]
Imprimé en Suisse
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ISO ISO 15214:1998(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d'organismes nationaux de normalisation (comités membres de
l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales,
en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore
étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en
ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 15214 a été élaborée par le comité technique
ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 9, Micro-
biologie.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement à
titre d’information.
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ISO 15214:1998(F) ISO
Introduction
En raison de la diversité des produits alimentaires, il est possible que cette
méthode horizontale ne soit pas applicable dans tous ses détails à certains
d'entre eux. Dans ce cas, des méthodes différentes, spécifiques à ces
produits, pourront être utilisées si cela s'avère absolument nécessaire pour
des raisons techniques justifiées. Néanmoins, il convient que tous les
efforts soient faits pour appliquer cette méthode horizontale chaque fois
que possible.
Lors du réexamen périodique de la présente Norme internationale, il sera
tenu compte de toutes les évolutions intervenues depuis sa publication et,
notamment, dans quelle mesure cette méthode horizontale aura été suivie
ainsi que les raisons des dérogations dans le cas de produits particuliers.
L'harmonisation de toutes les méthodes d'essai ne peut être réalisée de
façon immédiate; de ce fait, il peut déjà exister des Normes internationales
et/ou nationales pour certains groupes de produits, qui ne concordent pas
avec cette méthode horizontale. Lorsque de telles normes viendront en
révision, il serait souhaitable de les aligner avec les prescriptions de la
présente Norme internationale et de ne conserver que les seules
divergences justifiées indispensables pour des raisons techniques.
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NORME INTERNATIONALE  ISO ISO 15214:1998(F)
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le
dénombrement des bactéries lactiques mésophiles — Technique
par comptage des colonies à 30 °C
1  Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode horizontale pour le dénombrement des bactéries lactiques
mésophiles viables par comptage des colonies obtenues en milieu solide après incubation à 30 °C pendant 3 jours.
NOTE  Dans certains produits alimentaires, il existe des bactéries lactiques psychrotrophes ou thermophiles devant être
cultivées à des températures différentes de 30 °C. De plus, toutes les bactéries lactiques ne croissent pas sur la gélose MRS à
pH 5,7 et certaines ne croissent que faiblement.
La présente Norme internationale est applicable aux produits destinés à la consommation humaine ou à
l'alimentation animale, avec les quelques restrictions signalées dans l'introduction et dans la note ci-dessus.
2  Références normatives
Les normes suivantes contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui en est faite, constituent des
dispositions valables pour la présente Norme internationale. Au moment de la publication, les éditions indiquées
étaient en vigueur. Toute norme est sujette à révision et les parties prenantes des accords fondés sur la présente
Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer les éditions les plus récentes des normes
indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de l'ISO possèdent le registre des Normes internationales en vigueur
à un moment donné.
1)
ISO 6887-1:— , Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des dilutions
décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 1: Règles générales pour la préparation de la suspension
mère et des dilutions décimales.
ISO 7218:1996, Microbiologie des aliments — Règles générales pour les examens microbiologiques.
3  Définitions
Pour les besoins de la présente Norme internationale, la définition suivante s'applique.
3.1
bactéries lactiques mésophiles
bactéries qui, à 30 °C, forment des colonies en milieu sélectif solide (milieu MRS à pH 5,7) lorsque l'essai est
effectué dans les conditions spécifiées dans la présente Norme internationale

1)
À publier. (Révision de l’ISO 6887:1983)
1

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ISO 15214:1998(F)
4  Principe
4.1  Préparation de deux boîtes de Petri, à l'aide de gélose MRS de pH 5,7. Ensemencement en profondeur, ou
2)
éventuellement en surface , des boîtes avec une quantité définie de l'échantillon pour essai si le produit est liquide,
ou avec une quantité définie de suspension mère dans les autres cas.
4.2  Ensemencement d'autres paires de boîtes, dans les mêmes conditions, en utilisant les dilutions décimales
obtenues à partir de l'échantillon pour essai ou de la suspension mère.
Incubation de ces boîtes à 30 °C pendant 72 h.
4.3  Calcul du nombre de bactéries lactiques mésophiles (3.1) par gramme ou par millilitre d'échantillon à partir du
3)
nombre de colonies obtenues en 4.2 dans les boîtes de Petri sélectionnées, et éventuellement confirmées .
5  Diluant et milieu de culture
5.1  Généralités
Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir l'ISO 7218.
5.2  Diluant
Voir l'ISO 6887-1.
NOTE  L'eau peptonée tamponnée ne permet pas toujours une revivification satisfaisante de toutes les bactéries lactiques
(voir annexe A, références [1], [2], [3]).
5.3  Milieu de culture: milieu MRS (de Man, Rogosa et Sharpe) à pH 5,7 (voir la référence [4])
NOTE  L'utilisation de milieux prêts à l'emploi disponibles dans le commerce est permise. Toutefois, l'attention est attirée sur le
fait que des variations importantes de la composition et du pH peuvent être observées entre des produits provenant de
différents fabricants et peuvent ainsi donner des résultats différents de ceux obtenus avec le milieu préconisé dans la présente
Norme internationale.
5.3.1  Composition
Digestat enzymatique de caséine 10,0 g
Extrait de viande 10,0 g
Extrait de levure 4,0 g
Citrate de triammonium [(NH ) C H O ] 2,0 g
4 3 6 5 7
Acétate de sodium (CH COONa) 5,0 g
3
Sulfate de magnésium heptahydraté (MgSO ·7H O) 0,2 g
4 2
Sulfate de manganèse tétrahydraté (MnSO ·4H O) 0,05 g
4 2
Monohydrogénophosphate de potassium (K HPO ) 2,0 g
2 4
Glucose (C H O ) 20,0 g
6 12 6
Monooléate de polyoxyéthylènesorbitane (Tween 80) 1,08 g
1)
Agar-agar 12 g à 18 g
Eau 1 000 ml
1) Selon le pouvoir gélifiant de l'agar-agar.

2)
Voir note 1 en 9.2.
3)
Voir note 2 en 9.3.
2

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ISO
ISO 15214:1998(F)
5.3.2  Préparation
5.3.2.1  Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté dans l'eau, en portant à ébullition.
4)
À l'aide du pH-mètre (6.7), ajuster le pH de sorte qu'après stérilisation il soit de 5,7 ± 0,1 à 25 °C.
Répartir le
...