ISO 13685:1997
(Main)Ginger and its oleoresins — Determination of the main pungent components (gingerols and shogaols) — Method using high-performance liquid chromatography
Ginger and its oleoresins — Determination of the main pungent components (gingerols and shogaols) — Method using high-performance liquid chromatography
Gingembre et oléorésines de gingembre — Dosage des principaux composés piquants (gingérols et shogaols) — Méthode par chromatographie en phase liquide à haute performance
La présente Norme internationale décrit une méthode pour la détermination des gingérols [6]-G, [8]-G et [10]-G et des shogaols correspondants [6]-S, [8]-S et [10]-S dans le gingembre séché ou dans les oléorésines de gingembre, par chromatographie liquide à haute performance en phase inverse. NOTE -- La structure chimique des gingérols et shogaols sont données en annexe A.
Ingverjevi oleorezini - Določevanje glavnih pekočih sestavin (gingerols in shogaols) - Metoda s tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti
General Information
Standards Content (Sample)
SLOVENSKI STANDARD
01-april-1998
,QJYHUMHYLROHRUH]LQL'RORþHYDQMHJODYQLKSHNRþLKVHVWDYLQ JLQJHUROVLQ
VKRJDROV 0HWRGDVWHNRþLQVNRNURPDWRJUDILMRYLVRNHORþOMLYRVWL
Ginger and its oleoresins -- Determination of the main pungent components (gingerols
and shogaols) -- Method using high-performance liquid chromatography
Gingembre et oléorésines de gingembre -- Dosage des principaux composés piquants
(gingérols et shogaols) -- Méthode par chromatographie en phase liquide à haute
performance
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 13685:1997
ICS:
67.220.10 =DþLPEH Spices and condiments
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.
INTERNATIONAL IS0
STANDARD 13685
First edition
1997-08- 15
Ginger and its oleoresins - Determination
of the main pungent components (gingerols
and shogaols) - Method using high-
performance liquid chromatography
Gingembre et okorksines de gingembre - Dosage des principaux
compos& piquants (gingkrols et shogaols) - Mkthode par
chromatographie en phase liquide A haute performance
Reference number
IS0 13685:1997(E)
IS0 13685:1997(E)
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
IS0 technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. IS0 collaborates closely
with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for
voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies
casting a vote.
International Standard IS0 13685 was prepared by Technical Committee ISOmC 34, Agriculfural food
products, Subcommittee SC 7, Spices and condiments.
Annexes A to E of this International Standard are for information only.
0 IS0 1997
means,
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case postale 56 l CH-1211 Geneve 20 l Switzerland
Internet central @ iso.ch
x.400 c=ch; a=400net; p=iso; o=isocs; s=central
Printed in Switzerland
ii
IS0 13685: 1997(E)
@ IS0
Introduction
This method, initially based on Wood ’s publications [Overseas Development Natural Resources
Institutes (ODNRI)], enables one to know without any ambiguity the identity of the peaks obtained
by HPLC, for the quality control of ginger extracts It is particular-y useful in this case as the
pungent compounds of interest are very sensitive to heat.
The method has been validated by two international interlaboratory tests carried out by seven
laboratories.
After examination of the results, it is estimated that the method may be considered as the best that
can be achieved for the moment but it could be improved, in particular for the precision data.
This page intentionally left blank
INTERNATIONAL STANDARD o Iso IS0 13685:1997(E)
Ginger and its oleoresins - Determination of the main pungent
components (gingerols and shogaols) - Method using high=
performance liquid chromatography
1 Scope
This international Standard describes a method for the determination of gingerols [61-G, [81-G and
[101-G and the corresponding shogaols [61-S, [81-S and [101-S in dried ginger or in oleoresins of
ginger, by high-performance liquid chromatography (HPLC) in the reverse phase.
NOTE - Chemical structures of gingerols and shogaols are shown in annex A.
2 Normative references
The following standards contain provisions which, through reference in this text, constitute
provisions of this International Standard. At the time of the publication, the editions indicated were
valid. All standards are subject to revision, and parties to agreements based on the International
Standard are encouraged to investigate the possibility of applying the most recent editions of the
standards indicated below. Members of IEC and IS0 maintain registers of currently valid
International Standards.
IS0 939:1980, Spices and condiments - Determination of moisture con tent - En trainmen t
method.
IS0 2825: 1981, Spices and condiments - Preparation of a ground sample for analysis.
3 Principle
From ground and dried ginger, extraction of the pungent components by methanol at atmospheric
temperature and concentration at reduced pressure of part of the extract. The oleoresins are
dissolved in the methanol.
The resulting solutions are analysed directly (without any cleaning) by reverse-phase HPLC on a
column filled with octadecylsilyl silica, with a mixture of acetonitrile and aqueous acetic acid as the
mobile phase and by UV detection at 280 nm.
Quantification is carried out using an external standard, nonanoic acid vanillylamide, which has a
retention time comparable to that of gingerol-[6] (and a similar UV absorption spectrum).
IS0 13685:1997(E) 0 IS0
Reagents and products
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and water of HPLC
grade.
4.1 External standard: Nonanoic acid vanillylamide (NVA), with melting point between 42 OC
and 44 “C and giving primarily a unique peak (at least 98 % of the total area of the peak between
3 min and 8 min) when analysed by HPLC under the conditions described in this International
Standard.
WARNING: Nonanoic acid vanillylamide is a product which can cause irritation.
NOTE - NVA is also known as nonyl vanillylamide or pelargonic acid vanillylamide.
4.2 Solvents
WARNING: Acetonitrile is a toxic product which must be used with caution. Studies are
underway to replace it by another product.
4.2.1 Methanol, HPLC grade, for preparation of the NVA standard.
4.2.2 Methanol, analytical grade, for dilution and extraction of the test samples.
4.2.3 Acetonitrile, HPLC grade.
4.2.4 Glacial acetic acid.
Apparatus
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
5.1 Chromatograph
Apparatus equipped for HPLC analysis:
- an injection system capable of delivering portions of 20 ~1 of the sample solution with
considerable precision;
- an ultraviolet (UV) detector measuring absorbance at a wavelengh of 280 nm;
- a recorder/integrator capable of precisely measuring the area of the peaks with appropriate
baseline corrections, with a sensitivity of 0,25 to 0,5 a.u.f.s.
5.2 Stainless-steel column, of 250 mm length and 4,6 mm diameter (or of comparable
dimensions) filled with type C,, stationary phase with particles of 5 urn?)
I) ODS distributed by Phase Separations Ltd UK, is an example of a suitable product available
commekcially.This information is given for the ’konvenience of users of International Standard and does not
constitute an endorsement by IS0 of this product.
IS0 13685: 1997(E)
@ IS0
5.3 Rotary vacuum evaporator, fitted with a thermostatically controlled water bath.
5.4 Vacuum filtration apparatus
with 0,5 urn pores, for organic solvents.
5.5 FH-type Millipore filters*),
with 0,45 urn pores, for aqueous solvents.
5.6 HA-type Millipore filters*),
5.7 Pipettes, with two marks, class A, of capacity 20 ml.
5.8 Pasteur pipette
5.9 Volumetric flasks, of 5 ml, 25 ml and 100 ml capacities.
5.10 Round-bottom flask, of 100 ml capacity.
5.11 Analytical balance, capable of weighing to the nearest * 0,001 g.
6 Preparation of test sample
6.1 Dried ginger
Unless it is already in fine powder form, the dry ginger shall be ground as described in IS0 2825,
to allow it to pass through a sieve of 1 mm aperture.
The moisture content of the ground product shall be determined in accordance with IS0 939.
6.2 Oleoresins in ginger
Stir well and homogenize the oleoresin before taking test samples.
7 Procedure
7.1 Preparation of standard solutions of NVA
Weigh, to the nearest 0,001 g, 0,l g of NVA (4.1) and dissolve in methanol (4.2.1). Dilute the
solution to 100 ml. Preserve this solution (about 1,O mg/mI) at -10 “C and when required, prepare
the standard solutions (about 0,2 mg/mI and 0,4 mg/mI) by diluting the initial solution (5 ml
and 10 ml, respectively, diluted to 25 ml) with methanol (4.2.1). Note the exact concentrations.
7.2 Preparation of sample solutions of NVA
7.2.1 Dried ginger
In a 100 ml volumetric flask (5.9), weigh to the nearest 0,001 g, 1 g of ground ginger. Dilute to the
mark with methanol (4.2.2). Plug the flask and shake it vigorously. After 2 h, again shake it
vigorously, and then leave it to rest for at least 12 h. With the help of a pipette (5.7) and without
2) Millipore filters are examples of suitable products available commercially.This information is given for the
convenience of users of International Standard and does not constitute an endorsement by IS0 of these
products.
IS0 13685: 1997(E) @ IS0
touching the deposit at the bottom of the flask, take an aliquot of 20,O ml of
...
INTERNATIONAL IS0
STANDARD 13685
First edition
1997-08- 15
Ginger and its oleoresins - Determination
of the main pungent components (gingerols
and shogaols) - Method using high-
performance liquid chromatography
Gingembre et okorksines de gingembre - Dosage des principaux
compos& piquants (gingkrols et shogaols) - Mkthode par
chromatographie en phase liquide A haute performance
Reference number
IS0 13685:1997(E)
IS0 13685:1997(E)
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
IS0 technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. IS0 collaborates closely
with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for
voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies
casting a vote.
International Standard IS0 13685 was prepared by Technical Committee ISOmC 34, Agriculfural food
products, Subcommittee SC 7, Spices and condiments.
Annexes A to E of this International Standard are for information only.
0 IS0 1997
means,
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
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Printed in Switzerland
ii
IS0 13685: 1997(E)
@ IS0
Introduction
This method, initially based on Wood ’s publications [Overseas Development Natural Resources
Institutes (ODNRI)], enables one to know without any ambiguity the identity of the peaks obtained
by HPLC, for the quality control of ginger extracts It is particular-y useful in this case as the
pungent compounds of interest are very sensitive to heat.
The method has been validated by two international interlaboratory tests carried out by seven
laboratories.
After examination of the results, it is estimated that the method may be considered as the best that
can be achieved for the moment but it could be improved, in particular for the precision data.
This page intentionally left blank
INTERNATIONAL STANDARD o Iso IS0 13685:1997(E)
Ginger and its oleoresins - Determination of the main pungent
components (gingerols and shogaols) - Method using high=
performance liquid chromatography
1 Scope
This international Standard describes a method for the determination of gingerols [61-G, [81-G and
[101-G and the corresponding shogaols [61-S, [81-S and [101-S in dried ginger or in oleoresins of
ginger, by high-performance liquid chromatography (HPLC) in the reverse phase.
NOTE - Chemical structures of gingerols and shogaols are shown in annex A.
2 Normative references
The following standards contain provisions which, through reference in this text, constitute
provisions of this International Standard. At the time of the publication, the editions indicated were
valid. All standards are subject to revision, and parties to agreements based on the International
Standard are encouraged to investigate the possibility of applying the most recent editions of the
standards indicated below. Members of IEC and IS0 maintain registers of currently valid
International Standards.
IS0 939:1980, Spices and condiments - Determination of moisture con tent - En trainmen t
method.
IS0 2825: 1981, Spices and condiments - Preparation of a ground sample for analysis.
3 Principle
From ground and dried ginger, extraction of the pungent components by methanol at atmospheric
temperature and concentration at reduced pressure of part of the extract. The oleoresins are
dissolved in the methanol.
The resulting solutions are analysed directly (without any cleaning) by reverse-phase HPLC on a
column filled with octadecylsilyl silica, with a mixture of acetonitrile and aqueous acetic acid as the
mobile phase and by UV detection at 280 nm.
Quantification is carried out using an external standard, nonanoic acid vanillylamide, which has a
retention time comparable to that of gingerol-[6] (and a similar UV absorption spectrum).
IS0 13685:1997(E) 0 IS0
Reagents and products
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and water of HPLC
grade.
4.1 External standard: Nonanoic acid vanillylamide (NVA), with melting point between 42 OC
and 44 “C and giving primarily a unique peak (at least 98 % of the total area of the peak between
3 min and 8 min) when analysed by HPLC under the conditions described in this International
Standard.
WARNING: Nonanoic acid vanillylamide is a product which can cause irritation.
NOTE - NVA is also known as nonyl vanillylamide or pelargonic acid vanillylamide.
4.2 Solvents
WARNING: Acetonitrile is a toxic product which must be used with caution. Studies are
underway to replace it by another product.
4.2.1 Methanol, HPLC grade, for preparation of the NVA standard.
4.2.2 Methanol, analytical grade, for dilution and extraction of the test samples.
4.2.3 Acetonitrile, HPLC grade.
4.2.4 Glacial acetic acid.
Apparatus
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
5.1 Chromatograph
Apparatus equipped for HPLC analysis:
- an injection system capable of delivering portions of 20 ~1 of the sample solution with
considerable precision;
- an ultraviolet (UV) detector measuring absorbance at a wavelengh of 280 nm;
- a recorder/integrator capable of precisely measuring the area of the peaks with appropriate
baseline corrections, with a sensitivity of 0,25 to 0,5 a.u.f.s.
5.2 Stainless-steel column, of 250 mm length and 4,6 mm diameter (or of comparable
dimensions) filled with type C,, stationary phase with particles of 5 urn?)
I) ODS distributed by Phase Separations Ltd UK, is an example of a suitable product available
commekcially.This information is given for the ’konvenience of users of International Standard and does not
constitute an endorsement by IS0 of this product.
IS0 13685: 1997(E)
@ IS0
5.3 Rotary vacuum evaporator, fitted with a thermostatically controlled water bath.
5.4 Vacuum filtration apparatus
with 0,5 urn pores, for organic solvents.
5.5 FH-type Millipore filters*),
with 0,45 urn pores, for aqueous solvents.
5.6 HA-type Millipore filters*),
5.7 Pipettes, with two marks, class A, of capacity 20 ml.
5.8 Pasteur pipette
5.9 Volumetric flasks, of 5 ml, 25 ml and 100 ml capacities.
5.10 Round-bottom flask, of 100 ml capacity.
5.11 Analytical balance, capable of weighing to the nearest * 0,001 g.
6 Preparation of test sample
6.1 Dried ginger
Unless it is already in fine powder form, the dry ginger shall be ground as described in IS0 2825,
to allow it to pass through a sieve of 1 mm aperture.
The moisture content of the ground product shall be determined in accordance with IS0 939.
6.2 Oleoresins in ginger
Stir well and homogenize the oleoresin before taking test samples.
7 Procedure
7.1 Preparation of standard solutions of NVA
Weigh, to the nearest 0,001 g, 0,l g of NVA (4.1) and dissolve in methanol (4.2.1). Dilute the
solution to 100 ml. Preserve this solution (about 1,O mg/mI) at -10 “C and when required, prepare
the standard solutions (about 0,2 mg/mI and 0,4 mg/mI) by diluting the initial solution (5 ml
and 10 ml, respectively, diluted to 25 ml) with methanol (4.2.1). Note the exact concentrations.
7.2 Preparation of sample solutions of NVA
7.2.1 Dried ginger
In a 100 ml volumetric flask (5.9), weigh to the nearest 0,001 g, 1 g of ground ginger. Dilute to the
mark with methanol (4.2.2). Plug the flask and shake it vigorously. After 2 h, again shake it
vigorously, and then leave it to rest for at least 12 h. With the help of a pipette (5.7) and without
2) Millipore filters are examples of suitable products available commercially.This information is given for the
convenience of users of International Standard and does not constitute an endorsement by IS0 of these
products.
IS0 13685: 1997(E) @ IS0
touching the deposit at the bottom of the flask, take an aliquot of 20,O ml of the solution floating on
the surface. Place it in a 100 ml round-bottom flask (5.10) and reduce the volume of the solvent to
about 2 ml using the rotary vacuum evaporator (5.3). The temperature of the water bath should not
exceed 40 OC.
Using a Pasteur pipette (5.8), transfer the concentrated solution and the rinsing methanol into
a 5 ml volumetric flask (5.9) and dilute to the mark with methanol (4.22). Close the flask and
shake it vigorously. Keep the two extracts (the non-concentrated (original) one and the
concentrated one) aside for HPLC analysis.
For each sample, prepare these extracts in double and note the exact concentrations in milligrams
per millilitre.
7.2.2 Ginger oleoresins
Weigh, to the nearest 0,001 g,
...
INTERNATIONAL IS0
STANDARD 13685
First edition
1997-08- 15
Ginger and its oleoresins - Determination
of the main pungent components (gingerols
and shogaols) - Method using high-
performance liquid chromatography
Gingembre et okorksines de gingembre - Dosage des principaux
compos& piquants (gingkrols et shogaols) - Mkthode par
chromatographie en phase liquide A haute performance
Reference number
IS0 13685:1997(E)
IS0 13685:1997(E)
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
IS0 technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. IS0 collaborates closely
with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for
voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies
casting a vote.
International Standard IS0 13685 was prepared by Technical Committee ISOmC 34, Agriculfural food
products, Subcommittee SC 7, Spices and condiments.
Annexes A to E of this International Standard are for information only.
0 IS0 1997
means,
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case postale 56 l CH-1211 Geneve 20 l Switzerland
Internet central @ iso.ch
x.400 c=ch; a=400net; p=iso; o=isocs; s=central
Printed in Switzerland
ii
IS0 13685: 1997(E)
@ IS0
Introduction
This method, initially based on Wood ’s publications [Overseas Development Natural Resources
Institutes (ODNRI)], enables one to know without any ambiguity the identity of the peaks obtained
by HPLC, for the quality control of ginger extracts It is particular-y useful in this case as the
pungent compounds of interest are very sensitive to heat.
The method has been validated by two international interlaboratory tests carried out by seven
laboratories.
After examination of the results, it is estimated that the method may be considered as the best that
can be achieved for the moment but it could be improved, in particular for the precision data.
This page intentionally left blank
INTERNATIONAL STANDARD o Iso IS0 13685:1997(E)
Ginger and its oleoresins - Determination of the main pungent
components (gingerols and shogaols) - Method using high=
performance liquid chromatography
1 Scope
This international Standard describes a method for the determination of gingerols [61-G, [81-G and
[101-G and the corresponding shogaols [61-S, [81-S and [101-S in dried ginger or in oleoresins of
ginger, by high-performance liquid chromatography (HPLC) in the reverse phase.
NOTE - Chemical structures of gingerols and shogaols are shown in annex A.
2 Normative references
The following standards contain provisions which, through reference in this text, constitute
provisions of this International Standard. At the time of the publication, the editions indicated were
valid. All standards are subject to revision, and parties to agreements based on the International
Standard are encouraged to investigate the possibility of applying the most recent editions of the
standards indicated below. Members of IEC and IS0 maintain registers of currently valid
International Standards.
IS0 939:1980, Spices and condiments - Determination of moisture con tent - En trainmen t
method.
IS0 2825: 1981, Spices and condiments - Preparation of a ground sample for analysis.
3 Principle
From ground and dried ginger, extraction of the pungent components by methanol at atmospheric
temperature and concentration at reduced pressure of part of the extract. The oleoresins are
dissolved in the methanol.
The resulting solutions are analysed directly (without any cleaning) by reverse-phase HPLC on a
column filled with octadecylsilyl silica, with a mixture of acetonitrile and aqueous acetic acid as the
mobile phase and by UV detection at 280 nm.
Quantification is carried out using an external standard, nonanoic acid vanillylamide, which has a
retention time comparable to that of gingerol-[6] (and a similar UV absorption spectrum).
IS0 13685:1997(E) 0 IS0
Reagents and products
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and water of HPLC
grade.
4.1 External standard: Nonanoic acid vanillylamide (NVA), with melting point between 42 OC
and 44 “C and giving primarily a unique peak (at least 98 % of the total area of the peak between
3 min and 8 min) when analysed by HPLC under the conditions described in this International
Standard.
WARNING: Nonanoic acid vanillylamide is a product which can cause irritation.
NOTE - NVA is also known as nonyl vanillylamide or pelargonic acid vanillylamide.
4.2 Solvents
WARNING: Acetonitrile is a toxic product which must be used with caution. Studies are
underway to replace it by another product.
4.2.1 Methanol, HPLC grade, for preparation of the NVA standard.
4.2.2 Methanol, analytical grade, for dilution and extraction of the test samples.
4.2.3 Acetonitrile, HPLC grade.
4.2.4 Glacial acetic acid.
Apparatus
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
5.1 Chromatograph
Apparatus equipped for HPLC analysis:
- an injection system capable of delivering portions of 20 ~1 of the sample solution with
considerable precision;
- an ultraviolet (UV) detector measuring absorbance at a wavelengh of 280 nm;
- a recorder/integrator capable of precisely measuring the area of the peaks with appropriate
baseline corrections, with a sensitivity of 0,25 to 0,5 a.u.f.s.
5.2 Stainless-steel column, of 250 mm length and 4,6 mm diameter (or of comparable
dimensions) filled with type C,, stationary phase with particles of 5 urn?)
I) ODS distributed by Phase Separations Ltd UK, is an example of a suitable product available
commekcially.This information is given for the ’konvenience of users of International Standard and does not
constitute an endorsement by IS0 of this product.
IS0 13685: 1997(E)
@ IS0
5.3 Rotary vacuum evaporator, fitted with a thermostatically controlled water bath.
5.4 Vacuum filtration apparatus
with 0,5 urn pores, for organic solvents.
5.5 FH-type Millipore filters*),
with 0,45 urn pores, for aqueous solvents.
5.6 HA-type Millipore filters*),
5.7 Pipettes, with two marks, class A, of capacity 20 ml.
5.8 Pasteur pipette
5.9 Volumetric flasks, of 5 ml, 25 ml and 100 ml capacities.
5.10 Round-bottom flask, of 100 ml capacity.
5.11 Analytical balance, capable of weighing to the nearest * 0,001 g.
6 Preparation of test sample
6.1 Dried ginger
Unless it is already in fine powder form, the dry ginger shall be ground as described in IS0 2825,
to allow it to pass through a sieve of 1 mm aperture.
The moisture content of the ground product shall be determined in accordance with IS0 939.
6.2 Oleoresins in ginger
Stir well and homogenize the oleoresin before taking test samples.
7 Procedure
7.1 Preparation of standard solutions of NVA
Weigh, to the nearest 0,001 g, 0,l g of NVA (4.1) and dissolve in methanol (4.2.1). Dilute the
solution to 100 ml. Preserve this solution (about 1,O mg/mI) at -10 “C and when required, prepare
the standard solutions (about 0,2 mg/mI and 0,4 mg/mI) by diluting the initial solution (5 ml
and 10 ml, respectively, diluted to 25 ml) with methanol (4.2.1). Note the exact concentrations.
7.2 Preparation of sample solutions of NVA
7.2.1 Dried ginger
In a 100 ml volumetric flask (5.9), weigh to the nearest 0,001 g, 1 g of ground ginger. Dilute to the
mark with methanol (4.2.2). Plug the flask and shake it vigorously. After 2 h, again shake it
vigorously, and then leave it to rest for at least 12 h. With the help of a pipette (5.7) and without
2) Millipore filters are examples of suitable products available commercially.This information is given for the
convenience of users of International Standard and does not constitute an endorsement by IS0 of these
products.
IS0 13685: 1997(E) @ IS0
touching the deposit at the bottom of the flask, take an aliquot of 20,O ml of the solution floating on
the surface. Place it in a 100 ml round-bottom flask (5.10) and reduce the volume of the solvent to
about 2 ml using the rotary vacuum evaporator (5.3). The temperature of the water bath should not
exceed 40 OC.
Using a Pasteur pipette (5.8), transfer the concentrated solution and the rinsing methanol into
a 5 ml volumetric flask (5.9) and dilute to the mark with methanol (4.22). Close the flask and
shake it vigorously. Keep the two extracts (the non-concentrated (original) one and the
concentrated one) aside for HPLC analysis.
For each sample, prepare these extracts in double and note the exact concentrations in milligrams
per millilitre.
7.2.2 Ginger oleoresins
Weigh, to the nearest 0,001 g,
...
NORME
ISO
INTERNATIONALE
13685.
Première édition
1997-08-I 5
Gingembre et oléorésines de gingembre -
Dosage des principaux composés piquants
(gingérols et shogaols) - Méthode par
chromatographie en phase liquide à haute
performance
Ginger and its oleoresins - Determination of the main pungent
components (gingerols and shogaols) - Method using high-performance
liquid chromatography
Numéro de référence
ISO 13685: 1997(F)
ISO 13685: 1997(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux de
normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de II’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour
vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
La Norme internationale ISO 13685 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits agricoles
alimentaires, sous-comité SC 7, Epices.
Les annexes A à E de la présente Norme internationale sont données uniquement à titre d’information.
0 ISO 1997
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque
que ce soit et par aucun procédé, électroniq ue ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
forme
Organisation internationale de normalisation
Case postale 56 l CH-121 1 Genéve 20 l Suisse
‘Internet central @ iso.ch
c=ch; a=400net; p=iso; o=isocs; s=central
x.400
Imprimé en Suisse
ii
0 ISO
ISO 13685: 1997(F)
Introduction
La présente méthode, initialement basée sur les publications de Wood de l’Overseas Development Natural
Resources Institute (ODNRI) lève toute ambiguïté sur l’identité des pics obtenus par CLHP, retenus pour les
contrôles de qualité des extraits de gingembre. Elle se justifie particulièrement dans ce cas où les composés
organoleptiquement intéressants sont très thermosensibles.
La méthode a été validée par deux essais interlaboratoires réalisés sur le plan international par sept laboratoires.
Après examen des résultats, il a été estimé que la méthode pouvait être considérée comme constituant l’état de l’art
actuel, mais qu’elle pourrait certainement être améliorée, notamment en ce qui concerne les données de fidélité.
Page blanche
NORME INTERNATIONALE o ISO ISO 13685: 1997(F)
Gingembre et oléorésines de gingembre - Dosage des principaux
composés piquants (gingérols et shogaols) - Méthode par
chromatographie en phase liquide à haute performance
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale décrit une méthode pour la détermination des gingérols [63-G, [81-G et [101-G et
des shogaols correspondants [63-S, [81-S et [lO]-S dans le gingembre séché ou dans les oléorésines de
gingembre, par chromatographie liquide à haute performance en phase inverse.
NOTE - La structure chimique des gingérols et shogaols sont données en annexe A.
2 Références normatives
Les normes suivantes contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui en est faite, constituent des
dispositions valables pour la présente Norme internationale. Au moment de la publication, les éditions indiquées
étaient en vigueur. Toute norme est sujette à révision et les parties prenantes des accords fondés sur la présente
Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité d’appliquer les éditions les plus récentes des normes
indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de I’ISO possèdent le registre des Normes internationales en vigueur
à un moment donné.
ISO 939:1980, Epices - Détermination de la teneur en eau - Méthode par entralnement.
- Préparation d’un échantillon moulu en vue de Kanalyse.
ISO 2825:1981, Épices
3 Principe
À partir de gingembre pulvérisé et séché, extraction au méthanol des composés piquants, à température ambiante
et concentration sous pression réduite d’une partie de l’extrait. Les oléorésines sont dissoutes dans le méthanol.
Les solutions résultantes sont analysées directement (sans aucune purification préalable) par chromatographie
liquide à haute performance (CLHP) en phase inverse sur une colonne remplie d’octadécylsilyl silice, avec comme
phase mobile un mélange d’acétonitrile et d’acide acétique aqueux et par détection UV à 280 nm.
La quantification est réalisée en utilisant un étalon externe avec l’acide nonanoïque vanillylamide qui a un temps de
rétention comparable à celui du [6]-gingérol (ainsi qu’un spectre d’absorption UV comparable).
0 ISO
4 Réactifs et produits
Sauf indication différente, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l’eau de qualité
CLHP.
4.1 Étalon externe: acide nonanoïque vanillylamide (NVA), dont le point de fusion se situe entre 42 OC et
44 OC, donnant essentiellement un pic unique (au moins 98 % de l’aire totale du pic entre 3 min et 8 min) en analyse
par CLHP dans les conditions décrites dans la présente Norme internationale.
AVERTISSEMENT - Le NVA est un produit qui peut causer des irritations.
NOTE - Le NVA est aussi connu sous l’appellation <> ou <>.
4.2 Solvants
AVERTISSEMENT - L’acétonitrile est un produit toxique qui doit être utilisé avec précaution. Des études
sont en cours pour le remplacer ultérieurement par un autre produit.
4.2.1 Méthanol, de qualité CLHP, pour la préparation de l’étalon NVA.
4.2.2 Méthanol, de qualité analytique, pour la dilution et l’extraction des échantillons pour essai.
4.2.3 Acétonitrile, de qualité CLHP.
4.2.4 Acide acétique cristallisable.
5 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
5.1 Chromatographe
Appareil équipé pour l’analyse par CLHP avec:
- un système d’injection capable de délivrer des portions aliquotes de 20 ul de la solution d’échantillon avec une
grande précision;
- un détecteur ultraviolet (UV) réglé pour mesurer I’absorbance à une longueur d’onde de 280 nm;
- un enregistreur/intégrateur capable de mesurer l’aire des pics, avec correction de ligne de base appropriée,
ayant une sensibilité de 0,25 à 0,5 a.u.f.s.
5.2 Colonne en acier inoxydable, de 250 mm de longueur et de 4,6 mm de diamètre (ou de dimensions
comparables) remplie d’une phase stationnaire de type Cl, avec des particules de 5 um l).
5.3 Évaporateur rotatif sous vide, équipé d’un bain d’eau contrôlé thermostatiquement.
5.4 Appareil à filtration sous vide.
5.5 Filtres Millipore type FH 2, , avec pores de 0,5 um, pour solvants organiques.
1) ODS-2, distribué par Phase Separations Ltd., GB, est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette
information est donnée a l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO
approuve ou recommande l’emploi exclusif du produit ainsi désigné.
2) Les filtres Millipore sont des exemples de produits appropriés disponibles sur le marché. Cette information est donnée a
l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande
l’emploi exclusif des produits ainsi désignés.
0 ISO ISO 13685: 1997(F)
5.6 Filtres Millipore type HA 2), avec pores de 0,45 um, pour solvants aqueux.
5.7 Pipettes à deux traits, de classe A, de 20 ml de capacité.
5.8 Pipette Pasteur.
5.9 Fioles jaugées à un trait, de 5 ml, 25 ml et 100 ml de capacités.
5.10 Ballon à fond rond, de 100 ml de capacité.
5.11 Balance analytique, précise à + 0,001 g près.
6 Préparation de l’échantillon pour essai
6.1 Gingembre séché
Sauf s’il est déjà sous forme de poudre fine, le gingembre séché doit être moulu comme décrit dans I’ISO 2825 pour
pouvoir passer au travers d’un tamis de 1 mm d’ouverture de maille.
La teneur en eau du produit moulu doit être déterminée conformément à I’ISO 939.
6.2 Oléorésines de gingembre
Bien agiter et homogénéiser I’oléorésine avant de prélever les échantillons pour essai.
7 Mode opératoire
7.1 Préparation des solutions étalons de NVA
Peser, à 0,001 g près, 0,l g de NVA (4.1), le dissoudre dans du méthanol (4.2.1). Compléter la solution à 100 ml.
Conserver cette solution (à environ 1,O mg/ml) à - 10 OC et, s’il y a lieu, préparer les solutions étalons (à environ
0,2 mg/ml et 0,4 mg/ml) en diluant la solution initiale (5 ml et 10 ml respectivement, dilués à 25 ml) avec du
méthanol (4.2.1). Noter les concentrations exactes.
7.2 Préparation des solutions échantillons de NVA
7.2.1 Gingembre séché
Dans une fiole jaugée de 100 ml (5.9), peser, à 0,001 g près, 1 g de gingembre moulu. Compléter au trait repère
avec du méthanol (4.2.2). Boucher la fiole et l’agiter vigoureusement. Après 2 h, agiter de nouveau vigoureusement,
puis laisser reposer au moins 12 h. À l’aide d’une pipette (5.7) et sans toucher le dépôt au fond de la fiole, prélever
une portion aliquote de 20,O ml de la solution surnageante. La placer dans un ballon à fond rond de 100 ml (5.10) et
réduire le volume de solvant à environ 2 ml à l’aide de l’évaporateur rotatif sous vide (5.3). II convient que la
température du bain d’eau ne dépasse pas 40 OC.
À l’aide d’une pipette Pasteur (5.8), transférer la solution concentrée et le méthanol de rinçage dans une fiole
jaugée de 5 ml (5.9) et compléter au trait repère avec du méthanol (4.2.2). Boucher la fiole et l’agiter
vigoureusement. Mettre de côté les deux extraits [le non concentré (original) et le concentré] pour les analyses en
CLHP.
Pour chaque échantillon, préparer ces extraits en double et noter les concentrations exactes en milligrammes par
millilitre.
7.2.2 Oléorésines de gingembre
Peser, à 0,001 g près, 0,5 g d’oléorésine dans une fiole jaugée de 100 ml (5.9) et noter la masse exacte. Compléter
au tr
...
NORME
ISO
INTERNATIONALE
13685.
Première édition
1997-08-I 5
Gingembre et oléorésines de gingembre -
Dosage des principaux composés piquants
(gingérols et shogaols) - Méthode par
chromatographie en phase liquide à haute
performance
Ginger and its oleoresins - Determination of the main pungent
components (gingerols and shogaols) - Method using high-performance
liquid chromatography
Numéro de référence
ISO 13685: 1997(F)
ISO 13685: 1997(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux de
normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de II’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour
vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
La Norme internationale ISO 13685 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits agricoles
alimentaires, sous-comité SC 7, Epices.
Les annexes A à E de la présente Norme internationale sont données uniquement à titre d’information.
0 ISO 1997
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque
que ce soit et par aucun procédé, électroniq ue ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
forme
Organisation internationale de normalisation
Case postale 56 l CH-121 1 Genéve 20 l Suisse
‘Internet central @ iso.ch
c=ch; a=400net; p=iso; o=isocs; s=central
x.400
Imprimé en Suisse
ii
0 ISO
ISO 13685: 1997(F)
Introduction
La présente méthode, initialement basée sur les publications de Wood de l’Overseas Development Natural
Resources Institute (ODNRI) lève toute ambiguïté sur l’identité des pics obtenus par CLHP, retenus pour les
contrôles de qualité des extraits de gingembre. Elle se justifie particulièrement dans ce cas où les composés
organoleptiquement intéressants sont très thermosensibles.
La méthode a été validée par deux essais interlaboratoires réalisés sur le plan international par sept laboratoires.
Après examen des résultats, il a été estimé que la méthode pouvait être considérée comme constituant l’état de l’art
actuel, mais qu’elle pourrait certainement être améliorée, notamment en ce qui concerne les données de fidélité.
Page blanche
NORME INTERNATIONALE o ISO ISO 13685: 1997(F)
Gingembre et oléorésines de gingembre - Dosage des principaux
composés piquants (gingérols et shogaols) - Méthode par
chromatographie en phase liquide à haute performance
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale décrit une méthode pour la détermination des gingérols [63-G, [81-G et [101-G et
des shogaols correspondants [63-S, [81-S et [lO]-S dans le gingembre séché ou dans les oléorésines de
gingembre, par chromatographie liquide à haute performance en phase inverse.
NOTE - La structure chimique des gingérols et shogaols sont données en annexe A.
2 Références normatives
Les normes suivantes contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui en est faite, constituent des
dispositions valables pour la présente Norme internationale. Au moment de la publication, les éditions indiquées
étaient en vigueur. Toute norme est sujette à révision et les parties prenantes des accords fondés sur la présente
Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité d’appliquer les éditions les plus récentes des normes
indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de I’ISO possèdent le registre des Normes internationales en vigueur
à un moment donné.
ISO 939:1980, Epices - Détermination de la teneur en eau - Méthode par entralnement.
- Préparation d’un échantillon moulu en vue de Kanalyse.
ISO 2825:1981, Épices
3 Principe
À partir de gingembre pulvérisé et séché, extraction au méthanol des composés piquants, à température ambiante
et concentration sous pression réduite d’une partie de l’extrait. Les oléorésines sont dissoutes dans le méthanol.
Les solutions résultantes sont analysées directement (sans aucune purification préalable) par chromatographie
liquide à haute performance (CLHP) en phase inverse sur une colonne remplie d’octadécylsilyl silice, avec comme
phase mobile un mélange d’acétonitrile et d’acide acétique aqueux et par détection UV à 280 nm.
La quantification est réalisée en utilisant un étalon externe avec l’acide nonanoïque vanillylamide qui a un temps de
rétention comparable à celui du [6]-gingérol (ainsi qu’un spectre d’absorption UV comparable).
0 ISO
4 Réactifs et produits
Sauf indication différente, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l’eau de qualité
CLHP.
4.1 Étalon externe: acide nonanoïque vanillylamide (NVA), dont le point de fusion se situe entre 42 OC et
44 OC, donnant essentiellement un pic unique (au moins 98 % de l’aire totale du pic entre 3 min et 8 min) en analyse
par CLHP dans les conditions décrites dans la présente Norme internationale.
AVERTISSEMENT - Le NVA est un produit qui peut causer des irritations.
NOTE - Le NVA est aussi connu sous l’appellation <> ou <>.
4.2 Solvants
AVERTISSEMENT - L’acétonitrile est un produit toxique qui doit être utilisé avec précaution. Des études
sont en cours pour le remplacer ultérieurement par un autre produit.
4.2.1 Méthanol, de qualité CLHP, pour la préparation de l’étalon NVA.
4.2.2 Méthanol, de qualité analytique, pour la dilution et l’extraction des échantillons pour essai.
4.2.3 Acétonitrile, de qualité CLHP.
4.2.4 Acide acétique cristallisable.
5 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
5.1 Chromatographe
Appareil équipé pour l’analyse par CLHP avec:
- un système d’injection capable de délivrer des portions aliquotes de 20 ul de la solution d’échantillon avec une
grande précision;
- un détecteur ultraviolet (UV) réglé pour mesurer I’absorbance à une longueur d’onde de 280 nm;
- un enregistreur/intégrateur capable de mesurer l’aire des pics, avec correction de ligne de base appropriée,
ayant une sensibilité de 0,25 à 0,5 a.u.f.s.
5.2 Colonne en acier inoxydable, de 250 mm de longueur et de 4,6 mm de diamètre (ou de dimensions
comparables) remplie d’une phase stationnaire de type Cl, avec des particules de 5 um l).
5.3 Évaporateur rotatif sous vide, équipé d’un bain d’eau contrôlé thermostatiquement.
5.4 Appareil à filtration sous vide.
5.5 Filtres Millipore type FH 2, , avec pores de 0,5 um, pour solvants organiques.
1) ODS-2, distribué par Phase Separations Ltd., GB, est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette
information est donnée a l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO
approuve ou recommande l’emploi exclusif du produit ainsi désigné.
2) Les filtres Millipore sont des exemples de produits appropriés disponibles sur le marché. Cette information est donnée a
l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande
l’emploi exclusif des produits ainsi désignés.
0 ISO ISO 13685: 1997(F)
5.6 Filtres Millipore type HA 2), avec pores de 0,45 um, pour solvants aqueux.
5.7 Pipettes à deux traits, de classe A, de 20 ml de capacité.
5.8 Pipette Pasteur.
5.9 Fioles jaugées à un trait, de 5 ml, 25 ml et 100 ml de capacités.
5.10 Ballon à fond rond, de 100 ml de capacité.
5.11 Balance analytique, précise à + 0,001 g près.
6 Préparation de l’échantillon pour essai
6.1 Gingembre séché
Sauf s’il est déjà sous forme de poudre fine, le gingembre séché doit être moulu comme décrit dans I’ISO 2825 pour
pouvoir passer au travers d’un tamis de 1 mm d’ouverture de maille.
La teneur en eau du produit moulu doit être déterminée conformément à I’ISO 939.
6.2 Oléorésines de gingembre
Bien agiter et homogénéiser I’oléorésine avant de prélever les échantillons pour essai.
7 Mode opératoire
7.1 Préparation des solutions étalons de NVA
Peser, à 0,001 g près, 0,l g de NVA (4.1), le dissoudre dans du méthanol (4.2.1). Compléter la solution à 100 ml.
Conserver cette solution (à environ 1,O mg/ml) à - 10 OC et, s’il y a lieu, préparer les solutions étalons (à environ
0,2 mg/ml et 0,4 mg/ml) en diluant la solution initiale (5 ml et 10 ml respectivement, dilués à 25 ml) avec du
méthanol (4.2.1). Noter les concentrations exactes.
7.2 Préparation des solutions échantillons de NVA
7.2.1 Gingembre séché
Dans une fiole jaugée de 100 ml (5.9), peser, à 0,001 g près, 1 g de gingembre moulu. Compléter au trait repère
avec du méthanol (4.2.2). Boucher la fiole et l’agiter vigoureusement. Après 2 h, agiter de nouveau vigoureusement,
puis laisser reposer au moins 12 h. À l’aide d’une pipette (5.7) et sans toucher le dépôt au fond de la fiole, prélever
une portion aliquote de 20,O ml de la solution surnageante. La placer dans un ballon à fond rond de 100 ml (5.10) et
réduire le volume de solvant à environ 2 ml à l’aide de l’évaporateur rotatif sous vide (5.3). II convient que la
température du bain d’eau ne dépasse pas 40 OC.
À l’aide d’une pipette Pasteur (5.8), transférer la solution concentrée et le méthanol de rinçage dans une fiole
jaugée de 5 ml (5.9) et compléter au trait repère avec du méthanol (4.2.2). Boucher la fiole et l’agiter
vigoureusement. Mettre de côté les deux extraits [le non concentré (original) et le concentré] pour les analyses en
CLHP.
Pour chaque échantillon, préparer ces extraits en double et noter les concentrations exactes en milligrammes par
millilitre.
7.2.2 Oléorésines de gingembre
Peser, à 0,001 g près, 0,5 g d’oléorésine dans une fiole jaugée de 100 ml (5.9) et noter la masse exacte. Compléter
au tr
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NORME
ISO
INTERNATIONALE
13685.
Première édition
1997-08-I 5
Gingembre et oléorésines de gingembre -
Dosage des principaux composés piquants
(gingérols et shogaols) - Méthode par
chromatographie en phase liquide à haute
performance
Ginger and its oleoresins - Determination of the main pungent
components (gingerols and shogaols) - Method using high-performance
liquid chromatography
Numéro de référence
ISO 13685: 1997(F)
ISO 13685: 1997(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux de
normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de II’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour
vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
La Norme internationale ISO 13685 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits agricoles
alimentaires, sous-comité SC 7, Epices.
Les annexes A à E de la présente Norme internationale sont données uniquement à titre d’information.
0 ISO 1997
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque
que ce soit et par aucun procédé, électroniq ue ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
forme
Organisation internationale de normalisation
Case postale 56 l CH-121 1 Genéve 20 l Suisse
‘Internet central @ iso.ch
c=ch; a=400net; p=iso; o=isocs; s=central
x.400
Imprimé en Suisse
ii
0 ISO
ISO 13685: 1997(F)
Introduction
La présente méthode, initialement basée sur les publications de Wood de l’Overseas Development Natural
Resources Institute (ODNRI) lève toute ambiguïté sur l’identité des pics obtenus par CLHP, retenus pour les
contrôles de qualité des extraits de gingembre. Elle se justifie particulièrement dans ce cas où les composés
organoleptiquement intéressants sont très thermosensibles.
La méthode a été validée par deux essais interlaboratoires réalisés sur le plan international par sept laboratoires.
Après examen des résultats, il a été estimé que la méthode pouvait être considérée comme constituant l’état de l’art
actuel, mais qu’elle pourrait certainement être améliorée, notamment en ce qui concerne les données de fidélité.
Page blanche
NORME INTERNATIONALE o ISO ISO 13685: 1997(F)
Gingembre et oléorésines de gingembre - Dosage des principaux
composés piquants (gingérols et shogaols) - Méthode par
chromatographie en phase liquide à haute performance
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale décrit une méthode pour la détermination des gingérols [63-G, [81-G et [101-G et
des shogaols correspondants [63-S, [81-S et [lO]-S dans le gingembre séché ou dans les oléorésines de
gingembre, par chromatographie liquide à haute performance en phase inverse.
NOTE - La structure chimique des gingérols et shogaols sont données en annexe A.
2 Références normatives
Les normes suivantes contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui en est faite, constituent des
dispositions valables pour la présente Norme internationale. Au moment de la publication, les éditions indiquées
étaient en vigueur. Toute norme est sujette à révision et les parties prenantes des accords fondés sur la présente
Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité d’appliquer les éditions les plus récentes des normes
indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de I’ISO possèdent le registre des Normes internationales en vigueur
à un moment donné.
ISO 939:1980, Epices - Détermination de la teneur en eau - Méthode par entralnement.
- Préparation d’un échantillon moulu en vue de Kanalyse.
ISO 2825:1981, Épices
3 Principe
À partir de gingembre pulvérisé et séché, extraction au méthanol des composés piquants, à température ambiante
et concentration sous pression réduite d’une partie de l’extrait. Les oléorésines sont dissoutes dans le méthanol.
Les solutions résultantes sont analysées directement (sans aucune purification préalable) par chromatographie
liquide à haute performance (CLHP) en phase inverse sur une colonne remplie d’octadécylsilyl silice, avec comme
phase mobile un mélange d’acétonitrile et d’acide acétique aqueux et par détection UV à 280 nm.
La quantification est réalisée en utilisant un étalon externe avec l’acide nonanoïque vanillylamide qui a un temps de
rétention comparable à celui du [6]-gingérol (ainsi qu’un spectre d’absorption UV comparable).
0 ISO
4 Réactifs et produits
Sauf indication différente, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l’eau de qualité
CLHP.
4.1 Étalon externe: acide nonanoïque vanillylamide (NVA), dont le point de fusion se situe entre 42 OC et
44 OC, donnant essentiellement un pic unique (au moins 98 % de l’aire totale du pic entre 3 min et 8 min) en analyse
par CLHP dans les conditions décrites dans la présente Norme internationale.
AVERTISSEMENT - Le NVA est un produit qui peut causer des irritations.
NOTE - Le NVA est aussi connu sous l’appellation <> ou <>.
4.2 Solvants
AVERTISSEMENT - L’acétonitrile est un produit toxique qui doit être utilisé avec précaution. Des études
sont en cours pour le remplacer ultérieurement par un autre produit.
4.2.1 Méthanol, de qualité CLHP, pour la préparation de l’étalon NVA.
4.2.2 Méthanol, de qualité analytique, pour la dilution et l’extraction des échantillons pour essai.
4.2.3 Acétonitrile, de qualité CLHP.
4.2.4 Acide acétique cristallisable.
5 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
5.1 Chromatographe
Appareil équipé pour l’analyse par CLHP avec:
- un système d’injection capable de délivrer des portions aliquotes de 20 ul de la solution d’échantillon avec une
grande précision;
- un détecteur ultraviolet (UV) réglé pour mesurer I’absorbance à une longueur d’onde de 280 nm;
- un enregistreur/intégrateur capable de mesurer l’aire des pics, avec correction de ligne de base appropriée,
ayant une sensibilité de 0,25 à 0,5 a.u.f.s.
5.2 Colonne en acier inoxydable, de 250 mm de longueur et de 4,6 mm de diamètre (ou de dimensions
comparables) remplie d’une phase stationnaire de type Cl, avec des particules de 5 um l).
5.3 Évaporateur rotatif sous vide, équipé d’un bain d’eau contrôlé thermostatiquement.
5.4 Appareil à filtration sous vide.
5.5 Filtres Millipore type FH 2, , avec pores de 0,5 um, pour solvants organiques.
1) ODS-2, distribué par Phase Separations Ltd., GB, est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette
information est donnée a l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO
approuve ou recommande l’emploi exclusif du produit ainsi désigné.
2) Les filtres Millipore sont des exemples de produits appropriés disponibles sur le marché. Cette information est donnée a
l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande
l’emploi exclusif des produits ainsi désignés.
0 ISO ISO 13685: 1997(F)
5.6 Filtres Millipore type HA 2), avec pores de 0,45 um, pour solvants aqueux.
5.7 Pipettes à deux traits, de classe A, de 20 ml de capacité.
5.8 Pipette Pasteur.
5.9 Fioles jaugées à un trait, de 5 ml, 25 ml et 100 ml de capacités.
5.10 Ballon à fond rond, de 100 ml de capacité.
5.11 Balance analytique, précise à + 0,001 g près.
6 Préparation de l’échantillon pour essai
6.1 Gingembre séché
Sauf s’il est déjà sous forme de poudre fine, le gingembre séché doit être moulu comme décrit dans I’ISO 2825 pour
pouvoir passer au travers d’un tamis de 1 mm d’ouverture de maille.
La teneur en eau du produit moulu doit être déterminée conformément à I’ISO 939.
6.2 Oléorésines de gingembre
Bien agiter et homogénéiser I’oléorésine avant de prélever les échantillons pour essai.
7 Mode opératoire
7.1 Préparation des solutions étalons de NVA
Peser, à 0,001 g près, 0,l g de NVA (4.1), le dissoudre dans du méthanol (4.2.1). Compléter la solution à 100 ml.
Conserver cette solution (à environ 1,O mg/ml) à - 10 OC et, s’il y a lieu, préparer les solutions étalons (à environ
0,2 mg/ml et 0,4 mg/ml) en diluant la solution initiale (5 ml et 10 ml respectivement, dilués à 25 ml) avec du
méthanol (4.2.1). Noter les concentrations exactes.
7.2 Préparation des solutions échantillons de NVA
7.2.1 Gingembre séché
Dans une fiole jaugée de 100 ml (5.9), peser, à 0,001 g près, 1 g de gingembre moulu. Compléter au trait repère
avec du méthanol (4.2.2). Boucher la fiole et l’agiter vigoureusement. Après 2 h, agiter de nouveau vigoureusement,
puis laisser reposer au moins 12 h. À l’aide d’une pipette (5.7) et sans toucher le dépôt au fond de la fiole, prélever
une portion aliquote de 20,O ml de la solution surnageante. La placer dans un ballon à fond rond de 100 ml (5.10) et
réduire le volume de solvant à environ 2 ml à l’aide de l’évaporateur rotatif sous vide (5.3). II convient que la
température du bain d’eau ne dépasse pas 40 OC.
À l’aide d’une pipette Pasteur (5.8), transférer la solution concentrée et le méthanol de rinçage dans une fiole
jaugée de 5 ml (5.9) et compléter au trait repère avec du méthanol (4.2.2). Boucher la fiole et l’agiter
vigoureusement. Mettre de côté les deux extraits [le non concentré (original) et le concentré] pour les analyses en
CLHP.
Pour chaque échantillon, préparer ces extraits en double et noter les concentrations exactes en milligrammes par
millilitre.
7.2.2 Oléorésines de gingembre
Peser, à 0,001 g près, 0,5 g d’oléorésine dans une fiole jaugée de 100 ml (5.9) et noter la masse exacte. Compléter
au tr
...
NORME
ISO
INTERNATIONALE
13685.
Première édition
1997-08-I 5
Gingembre et oléorésines de gingembre -
Dosage des principaux composés piquants
(gingérols et shogaols) - Méthode par
chromatographie en phase liquide à haute
performance
Ginger and its oleoresins - Determination of the main pungent
components (gingerols and shogaols) - Method using high-performance
liquid chromatography
Numéro de référence
ISO 13685: 1997(F)
ISO 13685: 1997(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux de
normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de II’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour
vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
La Norme internationale ISO 13685 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits agricoles
alimentaires, sous-comité SC 7, Epices.
Les annexes A à E de la présente Norme internationale sont données uniquement à titre d’information.
0 ISO 1997
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque
que ce soit et par aucun procédé, électroniq ue ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
forme
Organisation internationale de normalisation
Case postale 56 l CH-121 1 Genéve 20 l Suisse
‘Internet central @ iso.ch
c=ch; a=400net; p=iso; o=isocs; s=central
x.400
Imprimé en Suisse
ii
0 ISO
ISO 13685: 1997(F)
Introduction
La présente méthode, initialement basée sur les publications de Wood de l’Overseas Development Natural
Resources Institute (ODNRI) lève toute ambiguïté sur l’identité des pics obtenus par CLHP, retenus pour les
contrôles de qualité des extraits de gingembre. Elle se justifie particulièrement dans ce cas où les composés
organoleptiquement intéressants sont très thermosensibles.
La méthode a été validée par deux essais interlaboratoires réalisés sur le plan international par sept laboratoires.
Après examen des résultats, il a été estimé que la méthode pouvait être considérée comme constituant l’état de l’art
actuel, mais qu’elle pourrait certainement être améliorée, notamment en ce qui concerne les données de fidélité.
Page blanche
NORME INTERNATIONALE o ISO ISO 13685: 1997(F)
Gingembre et oléorésines de gingembre - Dosage des principaux
composés piquants (gingérols et shogaols) - Méthode par
chromatographie en phase liquide à haute performance
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale décrit une méthode pour la détermination des gingérols [63-G, [81-G et [101-G et
des shogaols correspondants [63-S, [81-S et [lO]-S dans le gingembre séché ou dans les oléorésines de
gingembre, par chromatographie liquide à haute performance en phase inverse.
NOTE - La structure chimique des gingérols et shogaols sont données en annexe A.
2 Références normatives
Les normes suivantes contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui en est faite, constituent des
dispositions valables pour la présente Norme internationale. Au moment de la publication, les éditions indiquées
étaient en vigueur. Toute norme est sujette à révision et les parties prenantes des accords fondés sur la présente
Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité d’appliquer les éditions les plus récentes des normes
indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de I’ISO possèdent le registre des Normes internationales en vigueur
à un moment donné.
ISO 939:1980, Epices - Détermination de la teneur en eau - Méthode par entralnement.
- Préparation d’un échantillon moulu en vue de Kanalyse.
ISO 2825:1981, Épices
3 Principe
À partir de gingembre pulvérisé et séché, extraction au méthanol des composés piquants, à température ambiante
et concentration sous pression réduite d’une partie de l’extrait. Les oléorésines sont dissoutes dans le méthanol.
Les solutions résultantes sont analysées directement (sans aucune purification préalable) par chromatographie
liquide à haute performance (CLHP) en phase inverse sur une colonne remplie d’octadécylsilyl silice, avec comme
phase mobile un mélange d’acétonitrile et d’acide acétique aqueux et par détection UV à 280 nm.
La quantification est réalisée en utilisant un étalon externe avec l’acide nonanoïque vanillylamide qui a un temps de
rétention comparable à celui du [6]-gingérol (ainsi qu’un spectre d’absorption UV comparable).
0 ISO
4 Réactifs et produits
Sauf indication différente, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l’eau de qualité
CLHP.
4.1 Étalon externe: acide nonanoïque vanillylamide (NVA), dont le point de fusion se situe entre 42 OC et
44 OC, donnant essentiellement un pic unique (au moins 98 % de l’aire totale du pic entre 3 min et 8 min) en analyse
par CLHP dans les conditions décrites dans la présente Norme internationale.
AVERTISSEMENT - Le NVA est un produit qui peut causer des irritations.
NOTE - Le NVA est aussi connu sous l’appellation <> ou <>.
4.2 Solvants
AVERTISSEMENT - L’acétonitrile est un produit toxique qui doit être utilisé avec précaution. Des études
sont en cours pour le remplacer ultérieurement par un autre produit.
4.2.1 Méthanol, de qualité CLHP, pour la préparation de l’étalon NVA.
4.2.2 Méthanol, de qualité analytique, pour la dilution et l’extraction des échantillons pour essai.
4.2.3 Acétonitrile, de qualité CLHP.
4.2.4 Acide acétique cristallisable.
5 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
5.1 Chromatographe
Appareil équipé pour l’analyse par CLHP avec:
- un système d’injection capable de délivrer des portions aliquotes de 20 ul de la solution d’échantillon avec une
grande précision;
- un détecteur ultraviolet (UV) réglé pour mesurer I’absorbance à une longueur d’onde de 280 nm;
- un enregistreur/intégrateur capable de mesurer l’aire des pics, avec correction de ligne de base appropriée,
ayant une sensibilité de 0,25 à 0,5 a.u.f.s.
5.2 Colonne en acier inoxydable, de 250 mm de longueur et de 4,6 mm de diamètre (ou de dimensions
comparables) remplie d’une phase stationnaire de type Cl, avec des particules de 5 um l).
5.3 Évaporateur rotatif sous vide, équipé d’un bain d’eau contrôlé thermostatiquement.
5.4 Appareil à filtration sous vide.
5.5 Filtres Millipore type FH 2, , avec pores de 0,5 um, pour solvants organiques.
1) ODS-2, distribué par Phase Separations Ltd., GB, est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette
information est donnée a l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO
approuve ou recommande l’emploi exclusif du produit ainsi désigné.
2) Les filtres Millipore sont des exemples de produits appropriés disponibles sur le marché. Cette information est donnée a
l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande
l’emploi exclusif des produits ainsi désignés.
0 ISO ISO 13685: 1997(F)
5.6 Filtres Millipore type HA 2), avec pores de 0,45 um, pour solvants aqueux.
5.7 Pipettes à deux traits, de classe A, de 20 ml de capacité.
5.8 Pipette Pasteur.
5.9 Fioles jaugées à un trait, de 5 ml, 25 ml et 100 ml de capacités.
5.10 Ballon à fond rond, de 100 ml de capacité.
5.11 Balance analytique, précise à + 0,001 g près.
6 Préparation de l’échantillon pour essai
6.1 Gingembre séché
Sauf s’il est déjà sous forme de poudre fine, le gingembre séché doit être moulu comme décrit dans I’ISO 2825 pour
pouvoir passer au travers d’un tamis de 1 mm d’ouverture de maille.
La teneur en eau du produit moulu doit être déterminée conformément à I’ISO 939.
6.2 Oléorésines de gingembre
Bien agiter et homogénéiser I’oléorésine avant de prélever les échantillons pour essai.
7 Mode opératoire
7.1 Préparation des solutions étalons de NVA
Peser, à 0,001 g près, 0,l g de NVA (4.1), le dissoudre dans du méthanol (4.2.1). Compléter la solution à 100 ml.
Conserver cette solution (à environ 1,O mg/ml) à - 10 OC et, s’il y a lieu, préparer les solutions étalons (à environ
0,2 mg/ml et 0,4 mg/ml) en diluant la solution initiale (5 ml et 10 ml respectivement, dilués à 25 ml) avec du
méthanol (4.2.1). Noter les concentrations exactes.
7.2 Préparation des solutions échantillons de NVA
7.2.1 Gingembre séché
Dans une fiole jaugée de 100 ml (5.9), peser, à 0,001 g près, 1 g de gingembre moulu. Compléter au trait repère
avec du méthanol (4.2.2). Boucher la fiole et l’agiter vigoureusement. Après 2 h, agiter de nouveau vigoureusement,
puis laisser reposer au moins 12 h. À l’aide d’une pipette (5.7) et sans toucher le dépôt au fond de la fiole, prélever
une portion aliquote de 20,O ml de la solution surnageante. La placer dans un ballon à fond rond de 100 ml (5.10) et
réduire le volume de solvant à environ 2 ml à l’aide de l’évaporateur rotatif sous vide (5.3). II convient que la
température du bain d’eau ne dépasse pas 40 OC.
À l’aide d’une pipette Pasteur (5.8), transférer la solution concentrée et le méthanol de rinçage dans une fiole
jaugée de 5 ml (5.9) et compléter au trait repère avec du méthanol (4.2.2). Boucher la fiole et l’agiter
vigoureusement. Mettre de côté les deux extraits [le non concentré (original) et le concentré] pour les analyses en
CLHP.
Pour chaque échantillon, préparer ces extraits en double et noter les concentrations exactes en milligrammes par
millilitre.
7.2.2 Oléorésines de gingembre
Peser, à 0,001 g près, 0,5 g d’oléorésine dans une fiole jaugée de 100 ml (5.9) et noter la masse exacte. Compléter
au tr
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Questions, Comments and Discussion
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