Animal feeding stuffs — Guidelines for sample preparation

ISO 6498:2012 specifies guidelines for the preparation of test samples from laboratory samples of animal feeding stuffs, including pet foods. The guidelines are overruled by special instructions and regulations for sample preparation demanded by specific analysis methods.

Aliments des animaux — Lignes directrices pour la préparation des échantillons

L'ISO 6498:2012 spécifie des lignes directrices pour la préparation des échantillons pour essai d'aliments pour animaux, y compris les animaux domestiques, à partir des échantillons pour laboratoire. Les lignes directrices sont annulées par des instructions et des règlements particuliers pour la préparation des échantillons exigés par les méthodes d'analyse spécifiques des aliments pour animaux.

General Information

Status
Published
Publication Date
03-Jun-2012
Current Stage
9093 - International Standard confirmed
Start Date
13-Sep-2017
Completion Date
13-Sep-2017
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ISO 6498:2012 - Animal feeding stuffs -- Guidelines for sample preparation
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ISO 6498:2012 - Aliments des animaux -- Lignes directrices pour la préparation des échantillons
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Standards Content (sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 6498
Third edition
2012-06-01
Corrected version
2012-07-15
Animal feeding stuffs — Guidelines for
sample preparation
Aliments des animaux — Lignes directrices pour la préparation des
échantillons
Reference number
ISO 6498:2012(E)
ISO 2012
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ISO 6498:2012(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2012

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Published in Switzerland
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ISO 6498:2012(E)
Contents Page

Foreword ............................................................................................................................................................................iv

1 Scope ...................................................................................................................................................................... 1

2 Terms and definitions ......................................................................................................................................... 1

2.1 Definitions concerning “sample” .................................................................................................................... 1

2.2 Definitions concerning “parameters” ............................................................................................................ 2

2.3 Examples of animal feeding stuffs characteristics .................................................................................... 3

2.4 Definitions concerning “sample preparation procedure” ........................................................................ 5

3 Principle ................................................................................................................................................................. 6

4 Consideration of sample preparation errors ............................................................................................... 7

4.1 Subsampling and other errors ......................................................................................................................... 7

4.2 Minimum mass ..................................................................................................................................................... 8

4.3 Errors associated with division techniques ................................................................................................. 9

5 Safety precautions ............................................................................................................................................10

6 Apparatus ............................................................................................................................................................10

7 Procedure ............................................................................................................................................................12

7.1 General .................................................................................................................................................................12

7.2 Sample check .....................................................................................................................................................12

7.3 Mass reduction ...................................................................................................................................................14

7.4 Particle size reduction .....................................................................................................................................17

7.5 Partial drying ......................................................................................................................................................20

7.6 Coarse grinding .................................................................................................................................................22

7.7 Special sample preparation procedures .....................................................................................................22

7.8 Storage .................................................................................................................................................................22

8 Performance tests (quality control) ..............................................................................................................22

8.1 General .................................................................................................................................................................22

8.2 Performance test for mass reduction (division) .......................................................................................23

8.3 Performance test for particle size reduction (grinding) ..........................................................................24

8.4 Performance test for mixing ...........................................................................................................................25

9 Categories of feeds — Special remarks and flow charts .......................................................................25

9.1 General .................................................................................................................................................................25

9.2 Birdseed ...............................................................................................................................................................26

9.3 Whole cottonseed .............................................................................................................................................27

9.4 Mineral mix ..........................................................................................................................................................29

9.5 Dry feeds ..............................................................................................................................................................29

9.6 Forages including silage, hay, haylage, TMR and byproducts .............................................................30

9.7 Oilseeds and high-fat feeds ............................................................................................................................32

9.8 Large block and molasses block feeds .......................................................................................................33

9.9 Liquid feeds ........................................................................................................................................................35

9.10 Canned pet food ................................................................................................................................................35

9.11 Semi-moist pet food and dog chews............................................................................................................36

9.12 Premixtures .........................................................................................................................................................37

9.13 Range and alfalfa hay pellets .........................................................................................................................38

9.14 Texturized and sticky feed ..............................................................................................................................39

9.15 Aquatic feeds ......................................................................................................................................................40

Annex A (informative) Calculations, examples and tables for minimum mass ...............................................42

Bibliography .....................................................................................................................................................................46

© ISO 2012 – All rights reserved iii
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ISO 6498:2012(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies

(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO

technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been

established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and

non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International

Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.

International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.

The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards

adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an

International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent

rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.

ISO 6498 was prepared by the European Committee for Standardization (CEN) Technical Committee TC 327,

Animal feeding stuffs — Methods of sampling and analysis, in collaboration with ISO Technical Committee

TC 34, Food products, Subcommittee SC 10, Animal feeding stuffs, in accordance with the Agreement on

technical cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).

This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 6498:1998), which has been technically revised.

This corrected version of ISO 6498:2012 incorporates the following correction: in 7.1, paragraph 4, the phrase

“particle sizes below 4 mm ± 2 mm (4 mm to 6 mm) can be” has been substituted by “particle sizes of 4 mm to

6 mm can be”.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 6498:2012(E)
Animal feeding stuffs — Guidelines for sample preparation
1 Scope

This International Standard specifies guidelines for the preparation of test samples from laboratory samples of

animal feeding stuffs, including pet foods.

NOTE 1 The guidelines mostly derive from those developed by AAFCO (see Reference [7]).

The guidelines are overruled by special instructions and regulations for sample preparation demanded by

specific analysis methods.
NOTE 2 Such analysis methods are developed by ISO and CEN.

NOTE 3 This International Standard does not include special guidelines for sample preparation for microbiological

analysis of microorganisms like yeasts, bacteria and moulds. Nonetheless, for microorganisms which are used as feed

additives (probiotics), some important aspects of sample preparation are addressed.

2 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
2.1 Definitions concerning “sample”
2.1.1
lot

quantity of material that is assumed to be of the same production process and represented by specified

sampling rules

NOTE For the purposes of this International Standard, the rules are those of Commission Regulation (EC)

[3]
No. 152/2009.
2.1.2
laboratory sample

sample as prepared (from the lot) for sending to the laboratory and intended for inspection or testing

2.1.3
test sample

subsample or sample prepared from the laboratory sample and from which test portions will be taken

2.1.4
test portion

quantity of material drawn from the test sample (or from the laboratory sample if both are the same)

2.1.5
reserve sample

material left over from the laboratory sample when divided or subsampled test samples have been taken and

on which no further particle size reduction is done

NOTE If, for example, mycotoxin or genetically modified organism analyses are done on the whole laboratory sample,

then the reserve sample is also reduced to the corresponding particle sizes. The reserve sample should be stored under

conditions maintaining integrity.
© ISO 2012 – All rights reserved 1
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ISO 6498:2012(E)
2.2 Definitions concerning “parameters”
2.2.1
parameter

analyte or constituent or microorganism for which the feeding stuff is to be analysed by microscopic,

microbiological, biological or chemical procedures
2.2.1.1
stable parameter

analyte or constituent or microorganism which does not degrade during sample preparation on common

handling or storage at room temperatures of 20 °C to 25 °C
2.2.1.2
unstable parameter

analyte or constituent or microorganism which degrades during sample preparation on common handling

or storage at room temperatures of 20 °C to 25 °C because they are volatile, degradable, or sensitive to

temperature, light, enzymatic degradation or chemical oxidation

NOTE Stability of parameters in this context refers only to the influence of sample preparation, such as intensive

grinding, and not to a minimum shelf-life specified by producers or on the label, e.g. for a feed (additive).

Table 1 — Classification (in general) of stable or unstable parameters
and reasons for degradation with a view to sample preparation
Reason(s) for
Origin Stable parameters Unstable parameters
degradation/change
(Crude) protein, fat, ash, fibre Moisture Temperature (volatile)
Starch, sugar, lactose Ammonia Temperature (volatile)
Gas production and enzyme- Organic acids (e.g. lactic

soluble organic substance acid, acetic acid, butyric acid, Temperature (volatile)

Nutrients
production in in vitro tests fumaric acid, formic acid)
Air oxidation (can result in
Minerals
Unsaturated fatty acids production of short-chain fatty
(e.g. Ca, P, Mg, Na, K, Cl)
acids)
Trace elements Vitamins Temperature, ultraviolet (UV)

(e.g. Cu, Zn, Mn, Fe, Se, Co) (e.g. vitamin A, C, D, E) light, air oxidation (sensitive)

Amino acids (e.g. lysine, 1,2-Propanediol, ethylene
Temperature (volatile)
methionine, tryptophan) glycol
Feed additives
Temperature (freezing),
Microorganisms like probiotics
Enzymes (e.g. phytases, pressure (sensitive to
(e.g. Saccharomyces
non-starch polysaccharide grinding); moisture/dryness
cerevisiae, Enterococcus
enyzmes) (influences growth of
faecium)
microorganisms)
Mycotoxins (e.g. aflatoxin B ,
Mould growth and change
deoxynivalenol, fumonisins,
Heavy metals of mycotoxins possible at
ochratoxin A, T-2 toxin, HT-2
(e.g. As, Pb, Cd, Hg) room temperature; UV light
toxin, zearalenone, ergot
(sensitive – aflatoxin B )
Undesirable
alkaloids)
substances
Dioxins and polychlorinated

biphenyls (PCBs) with similar Drugs, antibiotics, pesticides Temperature (sensitive)

effects to dioxins
Hydrocyanic acid Temperature (volatile)
Banned Banned drugs, banned
Proteins of animal origin Temperature (sensitive)
substances antibiotics
Temperature (sensitive),
(Other)
Yeasts, bacteria, moulds dryness, influx of oxygen
Microorganisms
(anaerobiosis)
2 © ISO 2012 – All rights reserved
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ISO 6498:2012(E)
2.3 Examples of animal feeding stuffs characteristics

Some examples of animal feeding stuffs characteristics are given here to assist with the identification and

grouping of a laboratory sample based on the terms and annexes used in these guidelines.

NOTE Definitions of animal feeding stuffs are given in legislation worldwide. Sample definitions from European

directives and, for straight feeds, in an alphabetical list from a German committee are given in References [4][5][6][8].

2.3.1
birdseed
seeds that are intended to feed birds
EXAMPLES Grains and oilseeds.
2.3.2
whole cottonseed
unprocessed cottonseed product, including the hulls, lint, and meat
2.3.3
mineral mix

supplementary feed that mainly consists of mineral ingredients in either granular, bead or small pellet form and

which is free flowing as an entire mix

NOTE Mineral pellets are an agglomerated mineral mix formed by a mechanical process (in general).

2.3.4
dry feeds

feed ingredient or complete animal feed which typically contains a moisture mass fraction of not more than 15 %

NOTE Dry feed pellets are an agglomerated dry feed produced by a mechanical process (in general).

2.3.5
green fodder

edible parts of plants, other than separated grain, that can provide feed for grazing animals or that can be

harvested for feeding, including browse, herbage, and mast

NOTE Generally, the term refers to more digestible material in contrast to less-digestible plant material, known as roughage.

2.3.6
silage

forage preserved in a succulent condition by organic acids produced by anaerobic fermentation of sugars

in the forage
2.3.7
roughage
fibrous, coarsely textured parts of plants
EXAMPLES Stovers, straws, hulls, cobs, and stalks.
2.3.8
hay
aerial portion of grass especially cut and dried for animal feeding
2.3.9
haylage

forage preserved in a succulent condition by organic acids produced by anaerobic fermentation of sugars in

the forage with a moisture mass fraction of about 45 %
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ISO 6498:2012(E)
2.3.10
total mixed ration
TMR

single mixture of all feed ingredients (forages, grains, and supplements) that is supplied to an animal for a 24 h period

NOTE In practice, the 24 h allotment of the mixture may be offered in one or more feedings.

2.3.11
byproduct

product which remains after processes for the production of ingredients from plant material

EXAMPLE Dried distillers grains with solubles (DDGSs) from fermentation.
2.3.12
oilseed
any seed from which oil is extracted
EXAMPLE Sunflower seeds.
2.3.13
large block feed
molasses block feed

agglomerated feed compressed into a solid mass that is cohesive enough to hold its form

NOTE Large block feed weighs over 1 kg, generally about 20 kg. It may be marketed as a mineral block or a

“caramelized” molasses drum, containing various minerals and nutrients. Samples may be received by the laboratory as

large chunks, cores or “sticky clumps”.
2.3.14
liquid feed
feed product not solid and not aeriform

NOTE A liquid feed contains sufficient moisture to flow readily and may contain molasses.

2.3.15
canned pet food

feed product for pets which has been processed, packaged, sealed and sterilized for preservation in cans or

similar containers
2.3.16
semi-moist feed

meat-based feed product for pets or aquatic animals that has been partially dried to prevent microbial

decomposition

NOTE The moisture mass fraction may range from 15 % to 40 %. The product is generally in the form of strips or

cubes and is designed to be stored at room temperature.
2.3.17
dog chew
rawhide bone

meat and skin or peel strip that has been nearly completely dried to a leather-like consistency

2.3.18
premixture
mixture of one or more micro-ingredients with diluent or carrier

NOTE Premixtures are used to facilitate uniform dispersion of the micro-ingredients (e.g. vitamins, probiotics, drugs

or antibiotics) into a final feed.
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ISO 6498:2012(E)
2.3.19
range and alfalfa hay pellet

agglomerated feed formed by compacting and forcing the mix through, for example, square openings by a

mechanical process

NOTE The pellets are mostly about 2 cm in diameter and 5 cm in length (volume about 16 cm ) and may contain

molasses; this definition also applies to alfalfa cubes (chopped alfalfa hay) of larger dimensions.

2.3.20
texturized feed
sticky feed

mix of assorted grains and commercial feed (generally pelleted), all of which has been treated with a coating

of, for example, molasses

NOTE Some of the grains may have been steam heated or rolled prior to incorporation into the texturized feed.

2.3.21
aquatic feed

feed which is fed to aquatic animals and which has been mechanically processed into encapsulated pellets,

flakes, crumble, and as packaged sealed powder
2.4 Definitions concerning “sample preparation procedure”
2.4.1
homogeneity

degree to which a property or a constituent is uniformly distributed throughout a quantity of material

NOTE Homogeneity may be considered to have been achieved in a practical sense when the sampling error of the

processed portion is negligible compared to the total error of the measurement system. Since homogeneity depends

on the size of the units under consideration, a mixture of two materials may be inhomogeneous at the molecular or

atomic level, but sufficiently homogeneous at the particulate level. However, uniform visual appearance does not ensure

compositional homogeneity.
2.4.2
partial drying

part of the sample preparation procedure for feedstuff samples with a high moisture content (dry mass fraction

<85 %), in which the sample is carefully dried to allow subsequent sample preparation procedures to be

applied, such as particle size reduction by grinding with a mill

NOTE 1 The partial drying procedure depends on the feeding stuff [e.g. at temperatures below 55 °C to 60 °C for

silages], and on the heat stability of the parameters (e.g. 70 °C ± 10 °C for drugs and antibiotics).

NOTE 2 Samples for microbiological analysis should not be dried (at temperatures above 40 °C).

NOTE 3 Partial drying can also be achieved by a freeze-drying procedure, which is a careful drying process using a

vacuum to allow moisture to evaporate.
2.4.3
coarse grinding

first grinding step of the whole sample when the laboratory sample contains large lumps or when its particle

size is above about 6 mm before mass reduction

NOTE Coarse grinding is a special kind of particle size reduction that ensures homogeneity of the laboratory sample

for subsampling purposes.
2.4.4
mass reduction

part of the sample preparation procedure to reduce the mass of a laboratory sample by dividing or

subsampling it using (stationary or rotary) dividers or fractional (alternate) shovelling, without changing the

consistency of the sample

NOTE After mass reduction, all subsamples should have the same properties as the original laboratory sample.

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ISO 6498:2012(E)
2.4.5
particle size reduction

part of the sample preparation procedure achieved by chopping, crushing, cutting, blending (homogenizing),

macerating, milling (grinding), pressing, pulverizing to obtain a homogeneous test sample for further analysis

NOTE In general, particle size reduction follows the mass reduction step of the sample preparation procedure with

different sieve size options to ensure integrity of the test sample(s).
sampling: choice from lot
sample preparation:
laboratory sample(s) (≥500 g) with:
dry matter < 15 % mass fraction
lumps or big particles (> 6 mm)
dry matter ≥85% mass fraction
partial (or freeze) drying (optionally) coarse grinding
mass reduction (subsampling/splitting) reserve sample
test sample(s) (100 g) for:
particle size reduction
– microscopy
with different sieve-size options
– analysis of stable parameters
(1,0 mm, 0,5 mm, <0,5 mm, no
– analysis of unstable parameters
grinding)
analysis: test portion(s) (0,05 g to 25 g)
Figure 1 — Illustration of definitions concerning “sample”, “substances”
and “sample preparation procedure”
3 Principle

All sample preparation steps depend on the different properties of the feedstuffs and on the parameters to

be analysed. In each case, any special instructions concerning sample preparation in the analysis methods

require consideration.

The guidelines describe the procedure for preparing — from a sample arriving at a laboratory (in general with

a minimum mass of 0,5 kg) — a homogeneous test sample (having a minimum mass of 100 g) with the same

constitution and composition and free from contamination.
6 © ISO 2012 – All rights reserved
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ISO 6498:2012(E)

In some cases, the laboratory sample size can be less than 500 g (i.e. in standards for feed additives), but it

is necessary to follow statutory regulations and, in every case, the sample size should be large enough to be

representative.

In general, the whole laboratory sample is reduced in mass and in particle size to obtain one or more test

samples for the analysis of stable and unstable parameters, for microscopy analysis and for reserve. If the

analysis protocol and the intended proceeding of the reserve sample permit it, the laboratory sample should

preferably be pre-ground completely to an adequate coarse particle size before being reduced further, in order

to ensure homogeneity of the test samples.

From a test portion (0,05 g to 25 g and above) prepared for weighing in the feedstuff analysis, representative

results should be achieved on the laboratory sample and finally on the whole lot from which the sample was drawn.

Consequently, all steps for sample preparation should be performed quickly, under convenient and very clean

conditions, so that there can be no degradation of sensitive analytes, no contamination and no oxidation due

to the influence of excessive temperature, daylight, air or residues on the apparatus used or from the samples

prepared previously or simultaneously. In particular, contamination from sample to sample should be prevented.

A loss or a change of moisture mass fraction (“content”) during sample preparation should be avoided. In

any case, it is necessary to take into account that, in order to be suitable for official control, results require

correction (to origin moisture content, dry mass fraction 88 % or 100 %).

For feedstuffs with a higher moisture content (dry matter <85 % mass fraction), partial drying or freeze-drying

before mass reduction can be necessary.

For feedstuffs with lumps or particle sizes >6 mm, coarser grinding of the whole laboratory sample to a particle

size of <6 mm before mass reduction or subsampling is absolutely necessary.

The samples have to be stored at every stage of the sample preparation under adequate conditions (e.g. at

room temperature, refrigerated, frozen, in an airtight container, protected from light or in the dark) to maintain

their integrity.

For microbiological analyses, all sample preparation steps need to be done under aseptic conditions. Laboratory

samples should be neither frozen nor heated (>40 °C), nor subjected to vacuum or oxygen levels higher than

those present in atmospheric air.
4 Consideration of sample preparation errors

Sample preparation steps have been shown to be some of the largest sources of laboratory error, a fact

which is generally overlooked. This type of error can prove much larger than that arising from subsequent

analytical procedures.
4.1 Subsampling and other errors
4.1.1 General

Errors deriving from sample heterogeneity may add to the total subsampling error (TSE) on two levels

(Reference [12]).
4.1.2 Constitutional heterogeneity

On a first level, constitutional heterogeneity is a measure of the fact that not all the particles of the laboratory

sample have the same composition (shape, size, density, etc.). If a large overall difference between the individual

fragments exists, the constitutional heterogeneity is large, but if the fragments are more homogeneous,

constitutional heterogeneity is lower. The total contribution to heterogeneity is never zero, however, as that

would imply that all fragments are strictly identical. Mixing and blending does not change constitutional

heterogeneity. The only ways to alter the constitutional heterogeneity of any given material are by comminution

(crushing or cutting) or other methods which alter the physical properties of a sample. The reduction of the

average grain size is the dominant factor in reducing constitutional heterogeneity by such means.

© ISO 2012 – All rights reserved 7
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ISO 6498:2012(E)

Therefore, an initial coarse grinding (pre-grinding) of the whole laboratory sample is necessary before

subsampling or division to reduce constitutional heterogeneity.

This fundamental subsampling error (FSE) can be controlled by selecting the test sample mass (see 4.2)

appropriately. Therefore, collect enough mass to ensure that particles of all different compositions are contained

in the subsample or division. The larger the particle size of a material, the larger the subsample mass has to

be to minimize error.
4.1.3 Distributional heterogeneity

On a second level, distributional heterogeneity is a measure of the non-random distribution of particles in

the sample, as a result mainly of the action of gravitational force on particles of different densities, sizes and

shapes, which leads to a grouping and segregation of all particles. Particles with large differences in size or

density tend to segregate or stratify heavily, with the smallest or densest particles sinking to the bottom of the

sample. For the sake of illustration, imagine a laboratory sample consisting of black and white spheres and with

significantly different grain size distributions. If all the black spheres are found at the bottom of the sample and

the white spheres are more to the top, the system displays a very high distributional heterogeneity. If, on the

other hand, the spheres were well mixed (homogenized), the distributional heterogeneity of the system would

be significantly red
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 6498
Troisième édition
2012-06-01
Aliments des animaux — Lignes directrices
pour la préparation des échantillons
Animal feeding stuffs — Guidelines for sample preparation
Numéro de référence
ISO 6498:2012(F)
ISO 2012
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ISO 6498:2012(F)
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ISO 6498:2012(F)
Sommaire Page

Avant-propos .....................................................................................................................................................................iv

1 Domaine d’application ....................................................................................................................................... 1

2 Termes et définitions .......................................................................................................................................... 1

2.1 Définitions relatives à l’échantillon ................................................................................................................ 1

2.2 Définitions relatives aux paramètres ............................................................................................................. 2

2.3 Exemples de caractéristiques d’aliments pour animaux ......................................................................... 3

2.4 Définitions relatives au mode opératoire de préparation des échantillons ........................................ 5

3 Principe .................................................................................................................................................................. 7

4 Considérations sur les erreurs de préparation des échantillons ........................................................... 8

4.1 Sous-échantillonnage et autres erreurs ........................................................................................................ 8

4.2 Masse minimale ................................................................................................................................................... 9

4.3 Erreurs associées aux techniques de division ........................................................................................... 9

5 Mesures de sécurité ......................................................................................................................................... 11

6 Équipement ......................................................................................................................................................... 11

7 Mode opératoire .................................................................................................................................................12

7.1 Généralités ..........................................................................................................................................................12

7.2 Contrôle des échantillons ...............................................................................................................................13

7.3 Réduction massique .........................................................................................................................................15

7.4 Réduction de la taille des particules ............................................................................................................18

7.5 Dessiccation partielle .......................................................................................................................................22

7.6 Broyage grossier ...............................................................................................................................................24

7.7 Modes opératoires particuliers de préparation des échantillons ........................................................24

7.8 Conservation ......................................................................................................................................................24

8 Essais de performance (contrôle qualité) ...................................................................................................25

8.1 Généralités ..........................................................................................................................................................25

8.2 Essai de performance de la réduction massique (division) ..................................................................25

8.3 Essai de performance de la réduction de la taille des particules (broyage) .....................................26

8.4 Essai de performance de mélange ...............................................................................................................27

9 Catégories d’aliments — Remarques particulières et diagrammes ....................................................28

9.1 Généralités ..........................................................................................................................................................28

9.2 Graines pour oiseaux .......................................................................................................................................29

9.3 Graines de coton entières ...............................................................................................................................30

9.4 Mélange minéral .................................................................................................................................................32

9.5 Aliments secs .....................................................................................................................................................33

9.6 Fourrages, y compris produits ensilés, foin, ensilage mi-fané, rations totales mélangées

et sous-produits .................................................................................................................................................34

9.7 Graines oléagineuses et aliments riches en matière grasse .................................................................36

9.8 Grands blocs alimentaires et blocs alimentaires mélassés ..................................................................37

9.9 Aliments liquides ...............................................................................................................................................38

9.10 Aliments en conserve pour animaux domestiques .................................................................................39

9.11 Aliments semi-humides pour animaux domestiques et os à mâcher pour chiens .........................40

9.12 Prémélanges .......................................................................................................................................................41

9.13 Gros granulés et bouchons de luzerne .......................................................................................................42

9.14 Aliments texturés et collants .........................................................................................................................43

9.15 Aliments pour animaux aquatiques .............................................................................................................43

Annexe A (informative) Calculs, exemples et tableaux de masse minimale ....................................................45

Bibliographie ....................................................................................................................................................................49

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ISO 6498:2012(F)
Avant-propos

L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux de

normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux

comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité

technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales,

en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission

électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.

Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI, Partie 2.

La tâche principale des comités techniques est d’élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes

internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication

comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des comités membres votants.

L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de droits

de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir

identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.

L’ISO 6498 a été élaborée par le comité technique CEN/TC 327, Aliments des animaux ─ Méthodes

d’échantillonnage et d’analyse, du Comité européen de normalisation (CEN) en collaboration avec le comité

technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 10, Aliments des animaux, conformément à

l’Accord de coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).

Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 6498:1998), qui a fait l’objet d’une

révision technique.
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NORME INTERNATIONALE ISO 6498:2012(F)
Aliments des animaux — Lignes directrices pour la préparation
des échantillons
1 Domaine d’application

La présente Norme internationale spécifie des lignes directrices pour la préparation des échantillons pour

essai d’aliments pour animaux, y compris les animaux domestiques, à partir des échantillons pour laboratoire.

NOTE 1 Les lignes directrices sont principalement tirées de celles développées de l’AAFCO (voir Référence [8]).

Les lignes directrices sont annulées par des instructions et des règlements particuliers pour la préparation des

échantillons exigés par les méthodes d’analyse spécifiques des aliments pour animaux.

NOTE 2 De telles méthodes d’analyse sont développées par l’ISO et le CEN.

NOTE 3 La présente Norme internationale n’inclut pas des lignes directrices particulières pour la préparation des

échantillons en vue de l’analyse microbiologique des micro-organismes tels que levures, bactéries et moisissures.

Cependant, pour les micro-organismes utilisés comme additifs alimentaires (probiotiques), certains aspects importants

de la préparation des échantillons sont abordés.
2 Termes et définitions

Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.

2.1 Définitions relatives à l’échantillon
2.1.1
lot

quantité de matière supposée provenir du même procédé de production et être représentée par des règles

d’échantillonnage spécifiées
[3]

NOTE Pour les besoins de la présente Norme internationale, les règles sont celles du règlement (CE) n° 152/2009

de la commission.
2.1.2
échantillon pour laboratoire

échantillon tel que préparé (du lot) pour envoi au laboratoire et destiné à l’inspection ou à l’essai

2.1.3
échantillon pour essai

sous-échantillon ou échantillon préparé à partir de l’échantillon pour laboratoire et duquel sont prélevées les

prises d’essai
2.1.4
prise d’essai

quantité de matière prélevée de l’échantillon pour essai (ou de l’échantillon pour laboratoire s’ils sont identiques)

2.1.5
échantillon de réserve

reste de l’échantillon pour laboratoire dont ont été prélevés les échantillons pour essai par division ou sous-

échantillonnage et qui ne subit aucune réduction supplémentaire de la taille des particules

NOTE Si, par exemple, des analyses de mycotoxines ou d’organismes génétiquement modifiés sont effectuées à

partir de la totalité de l’échantillon pour laboratoire, l’échantillon de réserve subit lui aussi une réduction de la taille des

particules. Il est recommandé de conserver l’échantillon de réserve dans des conditions maintenant son intégrité.

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ISO 6498:2012(F)
2.2 Définitions relatives aux paramètres
2.2.1
paramètre

analyte ou constituant ou micro-organisme des aliments qui fait l’objet de l’analyse par un mode opératoire

microscopique, microbiologique ou chimique
2.2.1.1
paramètre stable

analyte ou constituant ou micro-organisme qui ne se dégrade pas lors de la manipulation au cours de la

préparation des échantillons ni au cours de la conservation à température ambiante (20 °C à 25 °C)

2.2.1.2
paramètre instable

analyte ou constituant ou microorganisme qui se dégrade lors de la manipulation au cours de la préparation des

échantillons ou de la conservation à température ambiante (20 °C à 25 °C) parce qu’il est volatil, dégradable,

sensible à la chaleur, à la lumière, à la dégradation enzymatique ou à l’oxydation chimique

NOTE Dans ce contexte, la stabilité des paramètres fait référence uniquement à l’influence de la préparation des

échantillons sur ces paramètres, comme un broyage intensif, et non pas à la durée de conservation spécifiée par un

producteur ou par l’étiquetage, par exemple pour un aliment (additif).

Tableau 1 — Classification (en général) des paramètres stables et instables et causes

de la dégradation relative à la préparation des échantillons
Cause(s) de la dégradation
Origine Paramètres stables Paramètres instables
ou de la modification
Protéines, matière grasse,
Eau Température (volatilité)
cendres, fibres (brutes)
Amidon, sucre, lactose Ammoniac Température (volatilité)
Acides organiques (par
Production de gaz et de
exemple acide lactique, acide
Substances
substances organiques
acétique, acide butyrique, Température (volatilité)
nutritives
solubles par les enzymes
acide fumarique, acide
dans les essais in vitro
formique)
Oxydation à l’air (production
Minéraux (par exemple Ca, P,
Acides gras insaturés possible d’acides gras
Mg, Na, K, Cl)
à chaînes courtes)
Oligoéléments (par exemple Vitamines (par exemple, Température, rayons UV,
Cu, Zn, Mn, Fe, Se, Co) vitamines A, C, D, E) oxydation à l’air (sensibilité)
Acides aminés (par
1,2-Propanediol,
exemple lysine, méthionine, Température (volatilité)
éthylène glycol
Additifs tryptophane)
alimentaires
Enzymes (par exemple Température (congélation),
Micro-organismes tels que
phytases, enzymes pression (sensibilité au
les probiotiques (par exemple
de transformation broyage), humidité/sécheresse
Saccharomyces cerevisiae,
des polysaccharides (influence la croissance de
Enterococcus faecium)
autres que l’amidon) micro-organismes)
Mycotoxines (par exemple
Prolifération des moisissures
aflatoxine B , désoxynivalénol,
et modification des
Métaux lourds fumonisines, ochratoxine A,
mycotoxines possibles à
(par exemple As, Pb, Cd, Hg) toxines T-2 et HT-2,
température ambiante, rayons
zéaralénone, alcaloïdes
UV (sensibilité, aflatoxine B )
Substances
de l’ergot)
indésirables
Dioxines et
polychlorobiphényles (PCB) Médicaments, antibiotiques,
Température (sensibilité)
ayant des effets semblables pesticides
aux dioxines
Acide cyanhydrique Température (volatilité)
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ISO 6498:2012(F)
Tableau 1 (suite)
Cause(s) de la dégradation
Origine Paramètres stables Paramètres instables
ou de la modification
Substances Médicaments et antibiotiques
Protéines d’origine animale Température (sensibilité)
interdites interdits
Température (sensibilité),
(Autres) Micro- Levures, bactéries,
sécheresse, présence
organismes moisissures
d’oxygène (anaérobiose)
2.3 Exemples de caractéristiques d’aliments pour animaux

Des exemples de caractéristiques d’aliments pour animaux sont donnés ici afin d’aider à identifier et à relier un

échantillon pour laboratoire aux termes et annexes utilisés dans ces lignes directrices.

NOTE Les définitions relatives aux aliments pour animaux sont données par la législation à travers le monde.

Les définitions relatives aux échantillons des Directives européennes et, dans le cas des aliments simples, d’une liste

alphabétique établie par un comité allemand sont données dans les Références [4][5][6][8].

2.3.1
graines pour oiseaux
graines destinées à l’alimentation des oiseaux
EXEMPLES Céréales et graines oléagineuses.
2.3.2
graine de coton entière

produit non transformé de la graine de coton, y compris la coque, le duvet et la chair

2.3.3
mélange minéral

aliment de complément constitué principalement d’ingrédients minéraux sous forme de granulés, de billes ou

petits granulés et dont l’ensemble du mélange est fluide

NOTE Les granulés minéraux sont un mélange minéral condensé formé selon un procédé mécanique (en général).

2.3.4
aliments secs

ingrédients ou aliments complets pour animaux ne contenant pas plus de 15 % (fraction massique) d’humidité

NOTE Les granulés d’aliments secs sont des aliments secs condensés produits par un procédé mécanique (en général).

2.3.5
fourrage vert

parties comestibles des plantes, autres que la graine séparée et y compris l’herbe et les faînes, qui peuvent

servir d’aliments aux animaux de pâturage ou qui peuvent être récoltées pour l’alimentation animale

NOTE Généralement, le terme désigne les matières végétales les plus digestes par opposition aux matières végétales

moins digestes, appelées fourrage grossier.
2.3.6
produit ensilé

fourrage conservé dans un état appétissant par les acides organiques produits par la fermentation anaérobie

des sucres qu’’il contient
2.3.7
fourrage grossier
parties fibreuses et de texture grossière des plantes
EXEMPLES Épis, pailles, coques, rafles et tiges.
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2.3.8
foin

partie aérienne des graminées coupée et séchée spécialement pour l’alimentation animale

2.3.9
ensilage mi-fané

fourrage conservé dans un état appétissant par les acides organiques produits par la fermentation anaérobie

des sucres qu’il contient et dont la teneur en eau est d’environ 45 % (fraction massique)

2.3.10
ration totale mélangée
RTM

mélange simple de tous les ingrédients de l’aliment (fourrages, céréales et compléments) mis à disposition d’un

animal pendant une période de 24 h

NOTE En pratique, pendant la période de 24 h, le mélange peut être distribué en une ou plusieurs fois.

2.3.11
sous-produit

produit résiduel des procédés de transformation pour la production d’ingrédients à partir de matières végétales

EXEMPLE Solubles de distillerie issus de la fermentation (DDGS).
2.3.12
graine oléagineuse
toute graine dont est extraite de l’huile
EXEMPLE Graines de tournesol.
2.3.13
grand bloc alimentaire
bloc alimentaire mélassé
aliment condensé en une masse solide suffisamment cohésive pour garder sa forme

NOTE Un grand bloc alimentaire pèse plus de 1 kg, généralement environ 20 kg. Il peut être commercialisé en tant

que bloc minéral ou bloc de mélasse «caramélisé» contenant divers minéraux et substances nutritives. Les échantillons

reçus par le laboratoire peuvent être sous forme de gros morceaux, de carottes ou de mottes collantes.

2.3.14
aliment liquide
aliment non solide et non gazeux

NOTE Un aliment liquide a une teneur en eau suffisante pour le rendre fluide et peut contenir de la mélasse.

2.3.15
aliment en conserve pour animaux domestiques

aliment pour animaux domestiques qui a été transformé, conditionné hermétiquement et stérilisé pour la

conservation en boîtes ou dans des récipients similaires
2.3.16
aliment semi-humide

aliment à base de viande pour animaux domestiques ou aquatiques qui a été partiellement séché afin d’éviter

la décomposition microbienne

NOTE La fraction massique d’eau peut varier de 15 % à 40 %. Le produit se trouve généralement sous forme de

rubans ou de cubes et il est conçu pour être conservé à température ambiante.
2.3.17
os à mâcher pour chiens
os en cuir

bande de viande et de peau presque complétement séchée jusqu’à obtention d’une texture proche du cuir

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ISO 6498:2012(F)
2.3.18
prémélange
mélange d’un ou plusieurs micro-ingrédients avec un diluant ou un excipient

NOTE Les prémélanges servent à faciliter la dispersion homogène des micro-ingrédients (par exemple vitamines,

probiotiques, médicaments, antibiotiques) dans un aliment final.
2.3.19
granulés et bouchons de luzerne

aliment condensé formé par compactage et passage forcé à travers, par exemple, des ouvertures carrées,

selon un procédé mécanique

NOTE Les granulés ont pour la plupart un diamètre d’environ 2 cm et une longueur d’environ 5 cm (volume d’environ

16 cm ) et contiennent parfois de la mélasse. Cette définition s’applique également aux bouchons de luzerne (foin de

luzerne haché) de dimensions supérieures.
2.3.20
aliment texturé
aliment collant

mélange de céréales assorties et d’aliment commercial (généralement sous forme de granulés) qui ont été

enrobés, par exemple, d’une couche de mélasse

NOTE Avant introduction dans l’aliment texturé, certaines des céréales ont été chauffées à la vapeur ou écrasées.

2.3.21
aliment pour animaux aquatiques

aliment transformé mécaniquement en granulés, flocons, miettes, capsules ou poudre, conditionné

hermétiquement et donné aux animaux aquatiques
2.4 Définitions relatives au mode opératoire de préparation des échantillons
2.4.1
homogénéité

degré d’uniformité affectant la répartition d’une propriété ou d’un constituant dans une quantité définie de matière

NOTE L’homogénéité peut être considérée comme atteinte, au sens pratique du terme, lorsque l’erreur

d’échantillonnage de la fraction traitée est négligeable par rapport à l’erreur totale du système de mesure. Dans la mesure

où l’homogénéité dépend de la taille des unités considérées, un mélange de deux matières peut être hétérogène à

l’échelle moléculaire ou atomique mais suffisamment homogène à l’échelle particulaire. Toutefois, un aspect uniforme ne

garantit pas l’homogénéité de la composition.
2.4.2
dessiccation partielle

étape du mode opératoire de préparation des échantillons applicable aux aliments à teneur en eau élevée

(fraction massique sèche < 85 %) au cours de laquelle l’échantillon est soigneusement séché pour permettre de

poursuivre la préparation, par exemple la réduction de la taille des particules par broyage à l’aide d’un broyeur

NOTE 1 Le procédé de dessiccation partielle dépend de l’aliment (par exemple à des températures inférieures à 55 °C

à 60 °C pour les produits ensilés) et de la stabilité à la chaleur des paramètres (par exemple 70 °C ± 10 °C pour les

médicaments et les antibiotiques).

NOTE 2 Il est recommandé de ne pas sécher les échantillons destinés à l’analyse microbiologique (à des températures

supérieures à 40 °C).

NOTE 3 La dessiccation partielle peut également être réalisée par lyophilisation, un procédé de séchage sous vide peu

destructeur qui permet à l’humidité de s’évaporer.
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ISO 6498:2012(F)
Échantillonnage Sélection à partir du lot
Préparation des échantillons Échantillon(s) pour laboratoire (≥ 500 g) avec :

Matière sèche < 15 % (fraction massique) Matière sèche ≥ 85 % (fraction massique) Morceaux ou grosses particules > 6 mm

(facultatif) Broyage grossier
Dessiccation partielle (ou lyophilisation)
Réduction massique (sous-échantillonnage/division) Échantillon de réserve
Échantillon(s) pour essai (100 g) pour :
Réduction de la taille des particules – Microscopie
avec différentes tailles de tamis
– Analyse des paramètres stables
(1,0 mm, 0,5 mm, < 0,5 mm, pas de broyage)
– Analyse des paramètres instables
Prise(s) d'essai (de 0,05 g à 25 g)
Analyse

Figure 1 — Illustration des définitions relatives à l’échantillon, aux substances

et au mode opératoire de préparation des échantillons
2.4.3
broyage grossier

première étape de broyage de la totalité de l’échantillon lorsque l’échantillon pour laboratoire contient de gros

morceaux ou lorsque la taille des particules est supérieure à 6 mm avant la réduction massique

NOTE Le broyage grossier est une forme spéciale de réduction de la taille des particules qui permet d’assurer

l’homogénéité de l’échantillon pour laboratoire à des fins de sous-échantillonnage.

2.4.4
réduction massique

étape du mode opératoire de préparation des échantillons qui consiste à réduire la masse d’un échantillon

pour laboratoire par division ou sous-échantillonnage à l’aide d’échantillonneurs (statiques ou rotatifs) ou par

pelletage fractionné (alterné) sans modifier la qualité de l’échantillon

NOTE Après réduction massique, il est recommandé que l’ensemble des sous-échantillons aient les mêmes

propriétés que l’échantillon pour laboratoire d’origine.
6 © ISO 2012 – Tous droits réservés
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ISO 6498:2012(F)
2.4.5
réduction de la taille des particules

étape du mode opératoire de préparation des échantillons qui consiste à hacher, concasser, couper,

homogénéiser, déchiqueter, broyer, presser, pulvériser afin d’obtenir un échantillon pour essai homogène pour

la suite de l’analyse

NOTE En général, la réduction de la taille des particules suit l’étape de réduction massique dans le mode opératoire

de préparation des échantillons et différentes tailles de tamis sont disponibles pour garantir l’intégrité de l’échantillon ou

des échantillons pour essai.
3 Principe

Toutes les étapes de préparation des échantillons dépendent des différentes propriétés des aliments et des

paramètres à analyser. Dans tous les cas, il est impératif de tenir compte des instructions particulières des

méthodes d’analyse en ce qui concerne la préparation des échantillons.

Les lignes directrices décrivent le mode opératoire de préparation d’un échantillon arrivant au laboratoire (en

général d’une masse minimale de 0,5 kg) afin d’obtenir un échantillon pour essai homogène (d’une masse

minimale de 100 g) de constitution et de composition identiques et exempt de contamination.

Dans certains cas, la masse de l’échantillon pour laboratoire peut être inférieure à 500 g (par exemple dans les

normes pour additifs alimentaires), mais il est impératif de suivre la réglementation légale et, dans tous les cas,

il convient que la taille de l’échantillon soit suffisamment importante pour être représentative.

En général, la totalité de l’échantillon pour laboratoire subit une réduction massique et une réduction de la

taille des particules afin d’obtenir un ou plusieurs échantillons pour essai destinés à l’analyse des paramètres

stables et instables, à l’analyse microscopique et à la réserve. Si le protocole d’analyse et l’utilisation prévue de

l’échantillon de réserve le permettent, il est recommandé que l’échantillon pour laboratoire soit de préférence

prébroyé entièrement jusqu’à obtention de particules grossières de taille adaptée avant de subir une réduction

massique, cela pour garantir l’homogénéité des échantillons pour essai.

À partir d’une prise d’essai (de 0,05 g à 25 g ou plus) à peser pour l’analyse des aliments, il est recommandé

d’obtenir des résultats représentatifs de l’échantillon pour laboratoire et, finalement, de l’ensemble du lot duquel

l’échantillon a été prélevé.

Par conséquent, il est recommandé de réaliser toutes les étapes de la préparation des échantillons assez

rapidement, dans des conditions adéquates et de propreté satisfaisantes afin d’empêcher la dégradation des

analytes sensibles, la contamination ainsi que l’oxydation dues aux effets d’une température excessive, à

la lumière du jour, à l’air ou à la présence de résidus sur l’appareillage utilisé ou d’échantillons préparés

précédemment ou simultanément. Il est recommandé en particulier d’éviter la contamination croisée entre

échantillons.

Lors de la préparation des échantillons, il est recommandé d’éviter la perte ou la modification de la fraction

massique d’eau («teneur» en eau). Dans tous les cas, il est nécessaire de tenir compte du fait que, lors des

contrôles officiels, les résultats nécessitent une correction (par rapport à la teneur en eau initiale ou par rapport

à 88 % ou 100 % de la fraction massique sèche).

Dans le cas d’aliments de teneur en eau plus élevée (matière sèche < 85 % en fraction massique), une

dessiccation partielle ou une lyophilisation avant réduction massique peuvent s’avérer nécessaires.

Dans le cas d’aliments avec des morceaux ou dont la taille des particules est supérieure à 6 mm, un broyage

grossier de la totalité de l’échantillon pour laboratoire jusqu’à obtention d’une taille des particules inférieure à

6 mm avant réduction massique ou sous-échantillonnage est impératif.

À tous les stades de la préparation, il faut conserver les échantillons dans des conditions adaptées (par

exemple à température ambiante, au réfrigérateur, au congélateur, dans un récipient étanche à l’air, à l’abri de

la lumière ou dans l’obscurité) afin de maintenir leur intégrité.
Toutes les étapes de la préparation des échantillons en vue de l’analyse microbi
...

Questions, Comments and Discussion

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