Determination of the ultimate aerobic biodegradability of plastic materials in an aqueous medium — Method by measuring the oxygen demand in a closed respirometer

This document specifies a method, by measuring the oxygen demand in a closed respirometer, for the determination of the degree of aerobic biodegradability of plastic materials, including those containing formulation additives. The test material is exposed in an aqueous medium under laboratory conditions to an inoculum from activated sludge. If an unadapted activated sludge is used as the inoculum, the test simulates the biodegradation processes which occur in a natural aqueous environment; if a mixed or pre-exposed inoculum is used, the method is used to investigate the potential biodegradability of a test material. The conditions used in this document do not necessarily correspond to the optimum conditions allowing maximum biodegradation to occur, but this document is designed to determine the potential biodegradability of plastic materials or give an indication of their biodegradability in natural environments. The method enables the assessment of the biodegradability to be improved by calculating a carbon balance (optional, see Annex E). The method applies to the following materials. — Natural and/or synthetic polymers, copolymers or mixtures thereof. — Plastic materials which contain additives such as plasticizers, colorants or other compounds. — Water-soluble polymers. — Materials which, under the test conditions, do not inhibit the microorganisms present in the inoculum. Inhibitory effects can be determined using an inhibition control or by another appropriate method (see, for example, ISO 8192[2]). If the test material is inhibitory to the inoculum, a lower test concentration, another inoculum or a pre-exposed inoculum can be used.

Évaluation de la biodégradabilité aérobie ultime des matériaux plastiques en milieu aqueux — Méthode par détermination de la demande en oxygène dans un respiromètre fermé

Le présent document spécifié une méthode d'évaluation du taux de biodégradation aérobie des matériaux plastiques, y compris ceux contenant des additifs, par la détermination de la demande d'oxygène dans un respiromètre fermé. Le matériau d'essai en milieu aqueux est exposé dans des conditions de laboratoire à un inoculum provenant de boues activées. La méthode simule les processus de biodégradation d'un environnement aquatique naturel si l'on utilise, par exemple, des boues activées non adaptées; si on utilise un inoculum mélangé ou pré-exposé, la méthode permet d'étudier la biodégradabilité potentielle du matériau d'essai. Les conditions utilisées dans le présent document ne correspondent pas nécessairement aux conditions optimales permettant d'obtenir le taux maximal de biodégradation; cependant, le présent document est conçu pour déterminer la biodégradabilité potentielle ou pour donner une indication de la biodégradabilité des matériaux plastiques dans le milieu naturel. La méthode permet d'affiner l'évaluation de la biodégradabilité par le calcul d'un bilan de carbone (facultatif, voir l'Annexe E). La présente méthode s'applique aux matériaux suivants: — polymères naturels et/ou synthétiques, copolymères ou mélanges de ceux-ci; — matériaux plastiques contenant des additifs tels que plastifiants, colorants ou tout autre composé; — polymères hydrosolubles; — matériaux n'ayant pas d'effet inhibiteur dans les conditions d'essai sur les micro-organismes présents dans l'inoculum. Les effets inhibiteurs peuvent être déterminés en utilisant un dispositif de contrôle de l'inhibition ou par toute autre méthode appropriée (voir, par exemple, l'ISO 8192[2]). Si le matériau d'essai a un effet inhibiteur vis-à-vis de l'inoculum, il est possible d'utiliser une plus faible concentration, un autre inoculum ou un inoculum pré-exposé.

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Status
Published
Publication Date
06-Mar-2019
Current Stage
6060 - International Standard published
Start Date
07-Mar-2019
Completion Date
07-Mar-2019
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ISO 14851:2019 - Determination of the ultimate aerobic biodegradability of plastic materials in an aqueous medium -- Method by measuring the oxygen demand in a closed respirometer
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ISO 14851:2019 - Évaluation de la biodégradabilité aérobie ultime des matériaux plastiques en milieu aqueux -- Méthode par détermination de la demande en oxygene dans un respirometre fermé
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 14851
Second edition
2019-03
Determination of the ultimate aerobic
biodegradability of plastic materials
in an aqueous medium — Method by
measuring the oxygen demand in a
closed respirometer
Évaluation de la biodégradabilité aérobie ultime des matériaux
plastiques en milieu aqueux — Méthode par détermination de la
demande en oxygène dans un respiromètre fermé
Reference number
ISO 14851:2019(E)
ISO 2019
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ISO 14851:2019(E)
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Published in Switzerland
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ISO 14851:2019(E)
Contents Page

Foreword ........................................................................................................................................................................................................................................iv

Introduction ................................................................................................................................................................................................................................vi

1 Scope ................................................................................................................................................................................................................................. 1

2 Normative references ...................................................................................................................................................................................... 1

3 Terms and definitions ..................................................................................................................................................................................... 1

4 Principle ........................................................................................................................................................................................................................ 3

5 Test environment ................................................................................................................................................................................................. 3

6 Reagents ........................................................................................................................................................................................................................ 3

6.1 Distilled or deionized water ........................................................................................................................................................ 4

6.2 Test medium .............................................................................................................................................................................................. 4

6.2.1 Standard test medium ................................................................................................................................................. 4

6.2.2 Optimized test medium ........................................................................................................................................... ... 4

6.3 Pyrophosphate solution .................................................................................................................................................................. 6

6.4 Carbon dioxide absorber ................................................................................................................................................................ 6

7 Apparatus ..................................................................................................................................................................................................................... 6

8 Procedure..................................................................................................................................................................................................................... 6

8.1 Test material ............................................................................................................................................................................................. 6

8.2 Reference material ............................................................................................................................................................................... 7

8.3 Preparation of the inoculum ....................................................................................................................................................... 7

8.4 Test .................................................................................................................................................................................................................... 8

9 Calculation and expression of results ............................................................................................................................................. 9

9.1 Calculation .................................................................................................................................................................................................. 9

9.2 Expression and interpretation of results ......................................................................................................................10

10 Validity of results ..............................................................................................................................................................................................10

11 Test report ................................................................................................................................................................................................................11

Annex A (informative) Theoretical oxygen demand (ThOD)....................................................................................................12

Annex B (informative) Correction of BOD values for interference by nitrification ..........................................13

Annex C (informative) Principle of a closed manometric respirometer ......................................................................15

Annex D (informative) Two-phase closed-bottle version of the respirometric test.........................................17

Annex E (informative) Example of the determination of a carbon balance ..............................................................20

Annex F (informative) Example of a determination of the amount of water-insoluble

polymer remaining at the end of a biodegradation test and the molecular mass of

the polymer .............................................................................................................................................................................................................22

Annex G (informative) Example of the determination of the CO absorbed in the absorbent ..............23

Bibliography .............................................................................................................................................................................................................................25

© ISO 2019 – All rights reserved iii
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ISO 14851:2019(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards

bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out

through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical

committee has been established has the right to be represented on that committee. International

organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.

ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of

electrotechnical standardization.

The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are

described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the

different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the

editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of

any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).

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any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute an endorsement.

For an explanation on the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and

expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the

World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see the following

URL: www .iso .org/iso/foreword .html.

The committee responsible for this document is ISO/TC 61, Plastics, Subcommittee SC 14, Environmental

aspects.

This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 14851:1999), which has been technically

revised. It also incorporates the Technical Corrigendum ISO 14851:1999/Cor.1:2005. The main changes

compared to the previous edition are as follows:
— the footnotes have been renumbered;

— in Annex C, errors in the key to Figure C.1 have been corrected and minor improvements made to

the figure itself;

— in scope and Clause 8, soil and compost have been excluded for the inoculums used in this document;

iv © ISO 2019 – All rights reserved
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ISO 14851:2019(E)

— in 8.4, numbers of test flask for the test material and blank control have been changed from two

to three;
— references in this document have been updated for latest active version;
— the Bibliography has been updated.

Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A

complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/members .html.
© ISO 2019 – All rights reserved v
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ISO 14851:2019(E)
Introduction

With the increasing use of plastics, their recovery and disposal have become a major issue. As a first

priority, recovery is promoted. Complete recovery of plastics, however, is difficult. For example, plastic

litter, which comes mainly from consumers, is difficult to recover completely. Additional examples of

plastics which are difficult to recover are fishing tackle, plastic microbeads in personal care products

and water-soluble polymers. These plastic materials tend to leak from closed waste-management

cycles into the environment. Biodegradable plastics are now emerging as one of the options available

to solve such environmental problems. Plastic materials, such as products or packaging, which are sent

to composting facilities are expected to be potentially biodegradable. Therefore, it is very important

to determine the potential biodegradability of such materials and to obtain an indication of their

biodegradability in natural environments.
vi © ISO 2019 – All rights reserved
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 14851:2019(E)
Determination of the ultimate aerobic biodegradability
of plastic materials in an aqueous medium — Method by
measuring the oxygen demand in a closed respirometer

WARNING — Sewage, activated sludge, soil and compost may contain potentially pathogenic

organisms. Therefore, appropriate precautions should be taken when handling them. Toxic test

compounds and those whose properties are unknown should be handled with care.
1 Scope

This document specifies a method, by measuring the oxygen demand in a closed respirometer, for the

determination of the degree of aerobic biodegradability of plastic materials, including those containing

formulation additives. The test material is exposed in an aqueous medium under laboratory conditions

to an inoculum from activated sludge.

If an unadapted activated sludge is used as the inoculum, the test simulates the biodegradation

processes which occur in a natural aqueous environment; if a mixed or pre-exposed inoculum is used,

the method is used to investigate the potential biodegradability of a test material.

The conditions used in this document do not necessarily correspond to the optimum conditions

allowing maximum biodegradation to occur, but this document is designed to determine the potential

biodegradability of plastic materials or give an indication of their biodegradability in natural

environments.

The method enables the assessment of the biodegradability to be improved by calculating a carbon

balance (optional, see Annex E).
The method applies to the following materials.
— Natural and/or synthetic polymers, copolymers or mixtures thereof.

— Plastic materials which contain additives such as plasticizers, colorants or other compounds.

— Water-soluble polymers.

— Materials which, under the test conditions, do not inhibit the microorganisms present in the

inoculum. Inhibitory effects can be determined using an inhibition control or by another appropriate

[2]

method (see, for example, ISO 8192 ). If the test material is inhibitory to the inoculum, a lower test

concentration, another inoculum or a pre-exposed inoculum can be used.
2 Normative references

The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content

constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For

undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.

ISO 8245, Water quality — Guidelines for the determination of total organic carbon (TOC) and dissolved

organic carbon (DOC)
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
© ISO 2019 – All rights reserved 1
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ISO 14851:2019(E)

ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:

— ISO Online browsing platform: available at https: //www .iso .org/obp
— IEC Electropedia: available at http: //www .electropedia .org/
3.1
ultimate aerobic biodegradation

breakdown of an organic compound by microorganisms in the presence of oxygen into carbon dioxide,

water and mineral salts of any other elements present (mineralization) plus new biomass

3.2
activated sludge

biomass produced in the aerobic treatment of waste water by the growth of bacteria and other

microorganisms in the presence of dissolved oxygen
3.3
concentration of suspended solids in an activated sludge

amount of solids obtained by filtration or centrifugation of a known volume of activated sludge (3.2)

and drying at about 105 °C to constant mass
3.4
biochemical oxygen demand
BOD

mass concentration of the dissolved oxygen consumed under specified conditions by the aerobic

biological oxidation of a chemical compound or organic matter in water

Note 1 to entry: It is expressed as milligrams of oxygen uptake per milligram or gram of test compound.

3.5
theoretical oxygen demand
ThOD

theoretical maximum amount of oxygen required to oxidize a chemical compound completely, calculated

from the molecular formula

Note 1 to entry: It is expressed as milligrams of oxygen uptake per milligram or gram of test compound.

3.6
total organic carbon
TOC
amount of carbon bound in an organic compound
3.7
dissolved organic carbon
DOC

part of the organic carbon in water which cannot be removed by specified phase separation, for example

by centrifugation at 40 000 m·s for 15 min or by membrane filtration using membranes with pores of

0,2 µm to 0,45 µm diameter
3.8
lag phase

time, measured in days, from the start of a test until adaptation and/or selection of the degrading

microorganisms is achieved and the degree of biodegradation of a chemical compound or organic

matter has increased to about 10 % of the maximum level of biodegradation (3.9)
3.9
maximum level of biodegradation

degree of biodegradation, measured in per cent, of a chemical compound or organic matter in a test,

above which no further biodegradation takes place during the test
2 © ISO 2019 – All rights reserved
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ISO 14851:2019(E)
3.10
biodegradation phase

time, measured in days, from the end of the lag phase (3.8) of a test until about 90 % of the maximum

level of biodegradation (3.9) has been reached
3.11
plateau phase

time, measured in days, from the end of the biodegradation phase (3.10) until the end of a test

3.12
pre-exposure

pre-incubation of an inoculum in the presence of the chemical compound or organic matter under test,

with the aim of enhancing the ability of the inoculum to biodegrade the test material by adaptation

and/or selection of the microorganisms
3.13
pre-conditioning

pre-incubation of an inoculum under the conditions of the subsequent test in the absence of the chemical

compound or organic matter under test, with the aim of improving the test by acclimatization of the

microorganisms to the test conditions
4 Principle

The biodegradability of a plastic material is determined using aerobic microorganisms in an aqueous

system. The test mixture contains an inorganic medium, the organic test material (the sole source of

carbon and energy) with a concentration between 100 mg/l and 2 000 mg/l of organic carbon, and

activated sludge as the inoculum. The mixture is stirred in closed flasks in a respirometer for a period

not exceeding 2 months. The carbon dioxide evolved is absorbed in a suitable absorber in the headspace

of the flasks. The consumption of oxygen (BOD) is determined, for example by measuring the amount

of oxygen required to maintain a constant volume of gas in the respirometer flasks, or by measuring

the change in volume or pressure (or a combination of the two) either automatically or manually. An

example of a respirometer is given in Annex C. Alternatively, the two-phase closed-bottle version

[3]
described in ISO 10708 may be used (see Annex D).

The level of biodegradation is determined by comparing the BOD with the theoretical amount (ThOD)

and expressed in per cent. The influence of possible nitrification processes on the BOD has to be

considered. The test result is the maximum level of biodegradation determined from the plateau

phase of the biodegradation curve. Optionally, a carbon balance may be calculated to give additional

information on the biodegradation (see Annex E). Moreover, also the absorbed carbon dioxide in the

adsorber at the end of the test may be determined to give additional information on the biodegradation

(see Annex G).
[6]

Unlike ISO 9408 , which is used for a variety of organic compounds, this document is specially designed

for the determination of the biodegradability of plastic materials. The special requirements necessary

affect the choice of the inoculum and the test medium, and there is the possibility of improving the

evaluation of the biodegradability by calculating a carbon balance.
5 Test environment

Incubation shall take place in the dark or in diffuse light in an enclosure which is free from vapours

inhibitory to microorganisms and which is maintained at a constant temperature, preferably between

20 °C and 25 °C, to an accuracy of ±1 °C, or at any other appropriate temperature depending on the

inoculum used and the environment to be assessed.
6 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade.
© ISO 2019 – All rights reserved 3
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ISO 14851:2019(E)
6.1 Distilled or deionized water

Distilled or deionized water, free of toxic substances (copper in particular) and containing less than

2 mg/l of DOC.
6.2 Test medium

Depending on the purpose of the test, different test media may be used. For example, if simulating

a natural environment use the standard test medium (6.2.1). If a test material is used at higher

concentrations, use the optimized test medium (6.2.2) with higher buffering capacity and nutrient

concentrations.
6.2.1 Standard test medium
6.2.1.1 Solution A
Dissolve the following in water (6.1) and make up to 1 000 ml.
anhydrous potassium dihydrogen phosphate (KH PO ) 8,5 g
2 4
anhydrous dipotassium hydrogen phosphate (K HPO ) 21,75 g
2 4
disodium hydrogen phosphate dihydrate (Na HPO ·2H O) 33,4 g
2 4 2
ammonium chloride (NH Cl) 0,5 g

The correct composition of the solution can be checked by measuring the pH, which should be 7,4.

6.2.1.2 Solution B

Dissolve 22,5 g of magnesium sulfate heptahydrate (MgSO ·7H O) in water (6.1) and make up to

4 2
1 000 ml.
6.2.1.3 Solution C

Dissolve 36,4 g of calcium chloride dihydrate (CaCl ·2H O) in water (6.1) and make up to 1 000 ml.

2 2
6.2.1.4 Solution D

Dissolve 0,25 g of iron(III) chloride hexahydrate (FeCl ·6H O) in water (6.1) and make up to 1 000 ml.

3 2

Prepare this solution freshly before use to avoid precipitation, or add a drop of concentrated

hydrochloric acid (HCl) or a drop of 0,4 g/l aqueous solution of ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA).

6.2.1.5 Preparation
To prepare 1 l of test medium, add the following to about 500 ml of water (6.1),
— 10 ml of solution A;
— 1 ml of each of solutions B to D.

Make up to 1 000 ml with water (6.1). Prepare the test medium freshly before use. The solutions A up to

C may be stored up to 6 months in the dark at room temperature.
6.2.2 Optimized test medium

This optimized medium is highly buffered and contains more inorganic nutrients. This is necessary to

keep the pH constant in the system during the test, even at high concentrations of the test material. The

4 © ISO 2019 – All rights reserved
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ISO 14851:2019(E)

medium contains about 2 400 mg/l of phosphorus and 50 mg/l of nitrogen and is therefore suitable

for concentrations in the test material of up to 2 000 mg/l of organic carbon. If higher test-material

concentrations are used, increase the nitrogen content to keep the C:N ratio at about 40:1.

6.2.2.1 Solution A
Dissolve the following in water (6.1) and make up to 1 000 ml.
anhydrous potassium dihydrogen phosphate (KH PO ) 37,5 g
2 4
disodium hydrogen phosphate dihydrate (Na HPO ·2H O) 87,3 g
2 4 2
ammonium chloride (NH Cl) 2,0 g
6.2.2.2 Solution B

Dissolve 22,5 g of magnesium sulfate heptahydrate (MgSO ·7H O) in water (6.1) and make up to

4 2
1 000 ml.
6.2.2.3 Solution C

Dissolve 36,4 g of calcium chloride dihydrate (CaCl ·2H O) in water (6.1) and make up to 1 000 ml.

2 2
6.2.2.4 Solution D

Dissolve 0,25 g of iron(III) chloride hexahydrate (FeCl ·6H O) in water (6.1) and make up to 1 000 ml

3 2
(see second paragraph of 6.2.1.4).
6.2.2.5 Solution E (trace-element solution, optional)

Dissolve in 10 ml of aqueous HCl solution (25 %, 7,7 mol/l), in the following sequence:

70 mg of ZnCl , 100 mg of MnCl ·4H O, 6 mg of H BO , 190 mg of CoCl ·6H O, 3 mg of CuCl ·2H O,

2 2 2 3 3 2 2 2 2

240 mg of NiCl ·6H O, 36 mg of Na MoO ·2H O, 33 mg of Na WO ·2H O and 26 mg of Na SeO ·5H O.

2 2 2 4 2 2 4 2 2 3 2
Make up to 1 000 ml with water (6.1).
6.2.2.6 Solution F (vitamin solution, optional)

Dissolve in 100 ml of water (6.1) 0,6 mg of biotine, 2,0 mg of niacinamide, 2,0 mg of p-aminobenzoate,

1,0 mg of panthotenic acid, 10,0 mg of pyridoxal hydrochloride, 5,0 mg of cyanocobalamine, 2,0 mg of

folic acid, 5,0 mg of riboflavin, 5,0 mg of DL-thioctic acid and 1,0 mg of thiamine dichloride or use a

solution of 15 mg of yeast extract in 100 ml of water (6.1). Filter the solution for sterilization using

membrane filters (see 7.4).

Solutions E and F are optional and are not required if a sufficient concentration of the inoculum is used,

for example, activated sludge. It is recommended that 1 ml portions be prepared and kept refrigerated

until use.
6.2.2.7 Preparation
To prepare 1 l of test medium, add, to about 800 ml of water (6.1):
— 100 ml of solution A;
— 1 ml of each of solutions B to D and, optionally, E and F.
Make up to 1 000 ml with water (6.1) and measure the pH.
© ISO 2019 – All rights reserved 5
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ISO 14851:2019(E)

The correct composition of the test medium can be checked by measuring the pH, which should be

7,0 ± 0,2.
6.3 Pyrophosphate solution

Dissolve 2,66 g of anhydrous sodium pyrophosphate (Na P O ) in water (6.1) and make up to 1 000 ml.

4 2 7
6.4 Carbon dioxide absorber
Preferably soda lime pellets or another suitable absorbant.
7 Apparatus

Ensure that all glassware is thoroughly cleaned and, in particular, free from organic or toxic matter.

Required is usual laboratory equipment, plus the following.

7.1 Closed respirometer, including test vessels (glass flasks) fitted with stirrers and all other

necessary equipment, and located in a constant-temperature room or in a thermostated apparatus (e.g.

water-bath). For an example, see Annex C.

NOTE Any respirometer able to determine with sufficient accuracy the biochemical oxygen demand is

suitable, preferably an apparatus which measures and replaces automatically and continuously the oxygen

consumed so that no oxygen deficiency and no inhibition of the microbial activity occurs during the degradation

process. Instead of an ordinary respirometer, the two-phase closed-bottle version can be used (see Annex D).

7.2 Analytical equipment for measuring total organic carbon (TOC) and dissolved organic

carbon (DOC) according to ISO 8245.
7.3 Analytical equipment for measuring nitrate and nitrite concentrations.

A qualitative test is recommended first to decide if any nitrification has occurred. If there is evidence

of nitrate/nitrite in the medium, a quantitative determination using a suitable method (for example ion

chromatography) is required.

7.4 Centrifuge, or filtration device with membrane filters (0,45 µm pore size) which neither adsorb

nor release organic carbon significantly.
7.5 Analytical balance (usual laboratory equipment).
7.6 pH meter (usual laboratory equipment).
8 Procedure
8.1 Test material

The test material shall be of known mass and contain sufficient carbon to yield a BOD that can be

adequately measured by the respirometer used. Calculate from the chemical formula or determine

by elemental analysis the ThOD (see Annex A) and the TOC (using, for example, ISO 8245). Use a test-

material concentration of at least 100 mg/l, corresponding to a ThOD of about 170 mg/l or a TOC of about

60 mg/l. Use lower concentrations only if the sensitivity of the respirometer is adequate. The maximum

amount of test material is limited by the oxygen supply to the respirometer and the test medium used.

When using the optimized test medium (6.2.2), the test-material concentration shall be such that the

TOC does not exceed about 2 000 mg/l, i.e. a C:N ratio of about 40:1. If higher concentrations are to be

tested, increase the amount of nitrogen in the test medium.
6 © ISO 2019 – All rights reserved
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ISO 14851:2019(E)

If biodegradation processes in natural environments are to be simulated, the use of the standard test

medium and a test-material concentration of 100 mg/l are recommended.

The test material should preferably be used in powder form, but it may also be introduced as films,

pieces, fragments or shaped articles. The
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 14851
Deuxième édition
2019-03
Évaluation de la biodégradabilité
aérobie ultime des matériaux
plastiques en milieu aqueux —
Méthode par détermination de
la demande en oxygène dans un
respiromètre fermé
Determination of the ultimate aerobic biodegradability of plastic
materials in an aqueous medium — Method by measuring the oxygen
demand in a closed respirometer
Numéro de référence
ISO 14851:2019(F)
ISO 2019
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ISO 14851:2019(F)
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ISO 14851:2019(F)
Sommaire Page

Avant-propos ..............................................................................................................................................................................................................................iv

Introduction ..................................................................................................................................................................................................................................v

1 Domaine d'application ................................................................................................................................................................................... 1

2 Références normatives ................................................................................................................................................................................... 1

3 Termes et définitions ....................................................................................................................................................................................... 2

4 Principe .......................................................................................................................................................................................................................... 3

5 Environnement d'essai................................................................................................................................................................................... 4

6 Réactifs ........................................................................................................................................................................................................................... 4

6.1 Eau distillée ou déminéralisée .................................................................................................................................................. 4

6.2 Milieu d'essai ............................................................................................................................................................................................ 4

6.2.1 Milieu d'essai normal ................................................................................................................................................... 4

6.2.2 Milieu d'essai optimisé ............................................................................................................................................... 5

6.3 Solution de pyrophosphate .......................................................................................................................................................... 6

6.4 Absorbant du dioxyde de carbone ......................................................................................................................................... 6

7 Appareillage .............................................................................................................................................................................................................. 6

8 Mode opératoire.................................................................................................................................................................................................... 7

8.1 Matériau d'essai ..................................................................................................................................................................................... 7

8.2 Matériau de référence ....................................................................................................................................................................... 7

8.3 Préparation de l'inoculum ............................................................................................................................................................. 7

8.4 Essai .................................................................................................................................................................................................................. 8

9 Calcul et expression des résultats ...................................................................................................................................................10

9.1 Calcul ............................................................................................................................................................................................................10

9.2 Expression et interprétation des résultats ..................................................................................................................10

10 Validité des résultats .....................................................................................................................................................................................11

11 Rapport d'essai ...................................................................................................................................................................................................11

Annexe A (informative) Demande théorique en oxygène (DThO) ......................................................................................13

Annexe B (informative) Correction des valeurs de DBO pour éliminer l'interférence avec la

nitrification .............................................................................................................................................................................................................14

Annexe C (informative) Principe de fonctionnement d'un respiromètre manométrique fermé .......16

Annexe D (informative) Version de l'essai respirométrique au moyen d'un flacon fermé .......................18

Annexe E (informative) Exemple de détermination d'un bilan de carbone ..............................................................21

Annexe F (informative) Exemple de dosage des polymères restant insolubles dans l'eau et

de détermination de leur masse moléculaire à la fin de l'essai de biodégradation ....................23

Annexe G (informative) Exemple de détermination du CO absorbé par l'absorbeur ..................................24

Bibliographie ...........................................................................................................................................................................................................................26

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ISO 14851:2019(F)
Avant-propos

L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes

nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est

en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude

a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,

gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.

L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui

concerne la normalisation électrotechnique.

Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont

décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents

critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été

rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www

.iso .org/directives).

L'attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable

de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant

les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de

l'élaboration du document sont indiqués dans l'Introduction et/ou dans la liste des déclarations de

brevets reçues par l'ISO (voir www .iso .org/brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données

pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un

engagement.

Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions

spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion

de l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles

techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/iso/fr/avant -propos.

Le comité chargé de l'élaboration du présent document est l'ISO/TC 61, Plastiques, sous-comité SC 5,

Propriétés physicochimiques.

Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 14851:1999), qui a fait l'objet d'une

révision technique. Elle incorpore également le Corrigendum technique ISO 14851:1999/Cor.1:2005.

Les principales modifications par rapport à l’édition précédente sont les suivantes:

— les notes de bas de page restantes ont été renumérotées;

— dans l'Annexe C, des erreurs dans la légende de la Figure C.1 ont été corrigées et des améliorations

mineures ont été faites dans la figure elle-même;

— dans le domaine d’application et à l’Article 8, le sol et le compost ont été exclus pour les inoculums

utilisés dans ce document;

— en 8.4, le nombre de fioles d’essai pour le matériau d’essai et le blanc de contrôle est passé de deux

à trois;

— dans ce document, les références ont été mises à jour avec leur dernière version en vigueur;

— la Bibliographie été mise à jour.

Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent

document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes

se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.
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ISO 14851:2019(F)
Introduction

Les plastiques étant de plus en plus utilisés, leur recyclage et leur mise au rebut sont devenus un problème

majeur. Il faut favoriser en priorité le recyclage. Cependant, le recyclage complet des plastiques est

difficile. Par exemple, les déchets en matériau plastique rejetés principalement par les consommateurs,

sont difficiles à recycler complètement. Autres exemples de produits difficiles à recycler: le matériel de

pêche, les films pour paillis en agriculture et les polymères hydrosolubles. Ces matériaux plastiques

tendent à migrer des infrastructures fermées de management des déchets vers le milieu naturel.

Désormais, les plastiques biodégradables apparaissent comme l'une des possibilités qui permettent de

résoudre ce genre de problème environnemental. Il convient que les matériaux plastiques sous forme de

produits ou d'emballages, qui sont envoyés dans les installations de compostage, soient potentiellement

biodégradables. Il est donc très important de déterminer leur biodégradabilité potentielle et d'obtenir

des indications sur la biodégradabilité de ce type de matériaux plastiques dans le milieu naturel.

© ISO 2019 – Tous droits réservés v
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NORME INTERNATIONALE ISO 14851:2019(F)
Évaluation de la biodégradabilité aérobie ultime des
matériaux plastiques en milieu aqueux — Méthode
par détermination de la demande en oxygène dans un
respiromètre fermé

AVERTISSEMENT — Les eaux usées, les boues activées et les matières en suspension dans le sol

et le compost peuvent contenir des organismes potentiellement pathogènes. Il convient donc de

les manipuler avec les précautions appropriées, de même que les composés à analyser toxiques

ou dont les propriétés ne sont pas connues.
1 Domaine d'application

Le présent document spécifié une méthode d'évaluation du taux de biodégradation aérobie des

matériaux plastiques, y compris ceux contenant des additifs, par la détermination de la demande

d'oxygène dans un respiromètre fermé. Le matériau d'essai en milieu aqueux est exposé dans des

conditions de laboratoire à un inoculum provenant de boues activées.

La méthode simule les processus de biodégradation d'un environnement aquatique naturel si l'on

utilise, par exemple, des boues activées non adaptées; si on utilise un inoculum mélangé ou pré-exposé,

la méthode permet d'étudier la biodégradabilité potentielle du matériau d'essai.

Les conditions utilisées dans le présent document ne correspondent pas nécessairement aux conditions

optimales permettant d'obtenir le taux maximal de biodégradation; cependant, le présent document

est conçu pour déterminer la biodégradabilité potentielle ou pour donner une indication de la

biodégradabilité des matériaux plastiques dans le milieu naturel.

La méthode permet d'affiner l'évaluation de la biodégradabilité par le calcul d'un bilan de carbone

(facultatif, voir l’Annexe E).
La présente méthode s'applique aux matériaux suivants:
— polymères naturels et/ou synthétiques, copolymères ou mélanges de ceux-ci;

— matériaux plastiques contenant des additifs tels que plastifiants, colorants ou tout autre composé;

— polymères hydrosolubles;

— matériaux n'ayant pas d'effet inhibiteur dans les conditions d'essai sur les micro-organismes

présents dans l'inoculum. Les effets inhibiteurs peuvent être déterminés en utilisant un dispositif

[2]

de contrôle de l'inhibition ou par toute autre méthode appropriée (voir, par exemple, l'ISO 8192 ).

Si le matériau d'essai a un effet inhibiteur vis-à-vis de l'inoculum, il est possible d'utiliser une plus

faible concentration, un autre inoculum ou un inoculum pré-exposé.
2 Références normatives

Les documents suivants cités dans le texte constituent, pour tout ou partie de leur contenu, des

exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les

références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels

amendements).

ISO 8245, Qualité de l'eau — Lignes directrices pour le dosage du carbone organique total (COT) et du

carbone organique dissous (COD)
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ISO 14851:2019(F)
3 Termes et définitions

Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.

L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en

normalisation, consultables aux adresses suivantes:

— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https: //www .iso .org/obp

— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http: //www .electropedia .org/
3.1
biodégradation aérobie ultime

décomposition d'un composé chimique organique par des micro-organismes en présence d'oxygène, en

dioxyde de carbone, eau et sels minéraux de tous les autres éléments présents (minéralisation) et en

une nouvelle biomasse
3.2
boue activée

biomasse formée lors du traitement aérobie de l'eau résiduaire par croissance de bactéries et d'autres

microorganismes en présence d'oxygène dissous
3.3
concentration de la boue activée en matières solides en suspension

quantité de matières solides obtenue par filtration ou centrifugation d'un volume connu de boue activée

(3.2) et séchage à environ 105 °C jusqu'à l'obtention d'une masse constante
3.4
demande biochimique en oxygène
DBO

concentration en masse de l'oxygène dissous consommé, dans des conditions définies, lors de l'oxydation

biologique aérobie d'un composé chimique ou de matières organiques contenues dans l'eau

Note 1 à l'article: Elle est exprimée en milligrammes d'oxygène absorbé par milligramme ou gramme de composé

à analyser.
3.5
demande théorique en oxygène
DThO

quantité théorique maximale d'oxygène nécessaire pour oxyder complètement un composé chimique,

calculée d'après la formule moléculaire

Note 1 à l'article: Elle est exprimée en milligrammes d'oxygène nécessaire par milligramme ou gramme de

composé à analyser
3.6
carbone organique total
COT
quantité de carbone incluse dans un composé organique
3.7
carbone organique dissous
COD

proportion du carbone organique contenu dans l'eau qui ne peut pas être éliminée par une séparation

de phase spécifique, telle qu'une centrifugation à 40 000 m·s pendant 15 min, ou par une filtration sur

membrane au moyen de membranes ayant des pores de 0,2 µm à 0,45 µm de diamètre
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ISO 14851:2019(F)
3.8
phase de latence

durée, mesurée en jours, écoulée à partir du début de l'essai jusqu'à l'obtention de l'adaptation et/

ou de la sélection des micro-organismes qui provoquent la dégradation, et jusqu'à ce que le taux de

biodégradation du composé chimique ou de la matière organique ait atteint environ 10 % du niveau

maximal de biodégradation (3.9)
3.9
niveau maximal de biodégradation

degré de biodégradation, mesurée en pourcentage, d'un composé chimique ou d'un matériau organique

lors d'un essai, au-dessus duquel la biodégradation ne se poursuit pas
3.10
phase de biodégradation

durée, mesurée en jours, depuis la fin de la phase de latence (3.8) de l'essai jusqu'à ce que l'on ait obtenu

environ 90 % du niveau maximal de biodégradation (3.9)
3.11
phase stationnaire

durée, mesurée en jours, écoulée entre la fin de la phase de biodégradation (3.10) et la fin de l'essai

3.12
pré-exposition

pré-incubation d'un inoculum en présence de la matière organique ou du composé chimique à analyser,

dans le but de renforcer la capacité de l'inoculum à biodégrader le matériau d'essai par adaptation et/ou

sélection des microorganismes
3.13
préconditionnement

pré-incubation d'un inoculum dans les conditions de l'essai effectué ultérieurement, en l'absence de la

matière organique ou du composé chimique à analyser, dans le but d'améliorer l'essai par acclimatation

des microorganismes aux conditions d'essai
4 Principe

La biodégradabilité d'un matériau plastique est déterminée en utilisant des micro-organismes aérobies

en système aqueux. Le mélange d'essai contient un milieu inorganique, le matériau d'essai organique

(comme seule source de carbone et d'énergie) à une concentration comprise entre 100 mg/l et

2 000 mg/l de carbone organique, et un inoculum, sous forme de boue activée. Ce mélange est agité

dans les fioles fermées d'un respiromètre pendant une durée ne dépassant pas 2 mois. Le dioxyde de

carbone dégagé est absorbé dans un absorbant approprié placé dans l'espace de tête des fioles d'essai.

La consommation d'oxygène (DBO) est déterminée, par exemple, en mesurant la quantité d'oxygène

nécessaire pour maintenir un volume de gaz constant dans les stocks du respiromètre, ou en mesurant

la variation de volume ou pression (ou une combinaison des deux), automatiquement ou manuellement.

Un exemple de respiromètre est donné dans l'Annexe C. Une autre solution consiste à utiliser la version

[3]
du flacon fermé à deux phases, conforme à l'ISO 10708 (voir l’Annexe D).

Le niveau de biodégradation est déterminé en comparant la DBO avec la quantité théorique (DThO)

et en l'exprimant en pourcentage. L'influence des processus de nitrification éventuelle sur la DBO doit

être prise en compte. Le résultat d'essai est le niveau maximal de biodégradation déterminé à partir

du plateau de la courbe de biodégradation. Il est également possible de calculer le bilan de carbone

pour obtenir des informations supplémentaires sur la biodégradation (voir l’Annexe E). De plus, le

dioxyde de carbone absorbé par l'absorbeur à la fin de l'essai peut être aussi déterminé pour donner

une information complémentaire sur la biodégradation (voir l'Annexe G).
[6]

En comparaison avec l'ISO 9408 qui est utilisée pour un large éventail de composés organiques, le

présent document est spécifiquement consacré à la détermination de la biodégradabilité des matériaux

plastiques. Les exigences particulières concernent le choix de l'inoculum et du milieu d'essai, il est

possible d'affiner l'évaluation de la biodégradabilité par le calcul du bilan de carbone.

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ISO 14851:2019(F)
5 Environnement d'essai

L'incubation doit avoir lieu dans l'obscurité ou sous une lumière diffuse dans une enceinte exempte de

vapeurs inhibitives pour les micro-organismes, qui doit être maintenue à une température constante,

de préférence entre 20 °C et 25 °C avec une précision de ±1 °C, ou à toute autre température appropriée

en fonction de l'inoculum utilisé et de l'environnement d'essai retenu.
6 Réactifs
Utiliser exclusivement des réactifs de qualité analytique reconnue.
6.1 Eau distillée ou déminéralisée

Eau distillée ou déminéralisée, exempte de matières toxiques (en particulier, le cuivre) et contenant

moins de 2 m g/l de COD.
6.2 Milieu d'essai

Il est possible d'utiliser différents milieux d'essai selon le but de l'essai. Par exemple, si l'on simule un

environnement naturel, utiliser le milieu d'essai normal (6.2.1). Si le matériau d'essai est utilisé à des

concentrations plus élevées, utiliser le milieu d'essai optimisé (6.2.2) avec de plus fortes concentrations

en nutriments et un pouvoir tampon plus élevé.
6.2.1 Milieu d'essai normal
6.2.1.1 Solution A
Dissoudre dans de l’eau (6.1), et compléter à 1 000 ml:
dihydrogénophosphate de potassium anhydre (KH PO ) 8,5 g
2 4
hydrogénophosphate dipotassique anhydre (K HPO ) 21,75 g
2 4
hydrogénophosphate disodique dihydraté (Na HPO ·2H O) 33,4 g
2 4 2
chlorure d'ammonium (NH Cl) 0,5 g

La composition adéquate de la solution peut être vérifiée par un mesurage du pH qui devrait être de 7,4.

6.2.1.2 Solution B

Dissoudre 22,5 g de sulfate de magnésium heptahydraté (MgSO ·7H O) dans de l'eau (6.1), et compléter

4 2
à 1 000 ml.
6.2.1.3 Solution C

Dissoudre 36,4 g de chlorure de calcium dihydraté (CaCl ·2H O) dans de l'eau (6.1), et compléter à

2 2
1 000 ml.
6.2.1.4 Solution D

Dissoudre 0,25 g de chlorure de fer (III) hexahydraté (FeCl ·6H O) dans de l'eau (6.1), et compléter à

3 2
1 000 ml.

Préparer cette solution juste avant utilisation pour éviter qu'il n'y ait précipitation, ou ajouter une

goutte d'acide chlorhydrique concentré (HCl) ou d'une solution aqueuse d'acide éthylène diamine

tétraacétique (EDTA) à 0,4 g/l.
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ISO 14851:2019(F)
6.2.1.5 Préparation
Pour 1 l de milieu d'essai, ajouter à environ 500 ml d'eau (6.1),
— 10 ml de solution A;
— 1 ml de chacune des solutions B à D.

Compléter à 1 000 ml avec de l'eau (6.1). Préparer le milieu d'essai pour chaque usage. Les solutions A à

C peuvent être stockés jusqu'à 6 mois dans l'obscurité à la température ambiante.

6.2.2 Milieu d'essai optimisé

Le présent milieu optimisé est fortement tamponné et contient davantage de nutriments inorganiques.

Cela est nécessaire pour maintenir le pH constant dans le système pendant l'essai même lorsque le

matériau d'essai est présent à des concentrations élevées. Ce milieu contient environ 2 400 mg/l de

phosphore et 50 mg/l d'azote et convient pour des concentrations de matériaux d'essai allant jusqu'à

2 000 mg/l de carbone organique. Si l'on doit utiliser des concentrations de matériaux d'essai plus

élevées, augmenter la teneur en azote pour maintenir un rapport C:N d'environ 40:1.

6.2.2.1 Solution A
Dissoudre dans de l’eau (6.1), et compléter à 1 000 ml:
dihydrogénophosphate de potassium anhydre (KH PO ) 37,5 g
2 4
hydrogénophosphate disodique dihydraté (Na HPO ·2H O) 87,3 g
2 4 2
chlorure d'ammonium (NH Cl) 2,0 g
6.2.2.2 Solution B

Dissoudre 22,5 g de sulfate de magnésium heptahydraté (MgSO ·7H O) dans de l'eau (6.1), et compléter

4 2
à 1 000 ml.
6.2.2.3 Solution C

Dissoudre 36,4 g de chlorure de calcium dihydraté (CaCl ·2H O) dans de l'eau (6.1), et compléter à

2 2
1 000 ml.
6.2.2.4 Solution D

Dissoudre 0,25 g de chlorure de fer (III) hexahydraté (FeCl ·6H O) dans de l'eau (6.1), et compléter à

3 2
1 000 ml (voir 6.2.1.4, deuxième alinéa).
6.2.2.5 Solution E (solution d'oligo-éléments, facultative)

Dissoudre dans 10 ml de solution aqueuse de HCl (25 %, 7,7 mol/l), dans l'ordre suivant:

70 mg de ZnCl , 100 mg de MnCl ·4H O, 6 mg de H BO 190 mg de CoCl ·6H O, 3 mg de CuCl ·2H O,

2 2 2 3 3, 2 2 2 2

240 mg de NiCl ·6H O, 36 mg de Na MoO ·2H O, 33 mg de Na WO ,2H O, 26 mg de Na SeO ·5H O.

2 2 2 4 2 2 4 2 2 3 2
Compléter à 1 000 ml avec de l'eau (6.1).
6.2.2.6 Solution F (solution de vitamines, facultative)

Dissoudre dans 100 ml d'eau (6.1) 0,6 mg de biotine, 2,0 mg de niacinamide, 2,0 mg de p- aminobenzoate,

1,0 mg d'acide panthoténique, 10,0 mg de chlorhydrate de pyridoxal, 5,0 mg de cyanocobalamine, 2,0 mg

d'acide folique, 5,0 mg de riboflavine, 5,0 mg de DL- acide thioctique et 1,0 mg de dichlorure de thiamine

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ou utiliser une solution de 15 mg d'extrait de levure dans 100 ml d'eau (6.1). Filtrer la solution en vue de

la stérilisation en utilisant les filtres à membranes (voir 7.4).

Les solutions E et F sont facultatives et non requises si l'on utilise un inoculum en concentration

suffisante, comme par exemple des boues activées. Il est recommandé de préparer et de réfrigérer des

prises de 1 ml jusqu'à utilisation.
6.2.2.7 Préparation
Pour 1 l de milieu d'essai, ajouter à environ 800 ml d'eau (6.1)
— 100 ml de solution A;
— 1 ml de chacune des solutions B à D et facultativement E et F.
Compléter à 1 000 ml avec de l'eau (6.1) et mesurer le pH.

La composition adéquate du milieu peut être vérifiée par un mesurage du pH qui devrait être de

7,0 ± 0,2.
6.3 Solution de pyrophosphate

Dissoudre 2,66 g de pyrophosphate de sodium anhydre (Na P O ) dans de l'eau (6.1), et compléter à

4 2 7
1 000 ml.
6.4 Absorbant du dioxyde de carbone
De préférence, des pastilles de chaux sodée ou tout autre absorbant approprié.
7 Appareillage

S'assurer que la verrerie de laboratoire a été soigneusement nettoyée et, en particulier, qu'elle est

exempte de toute trace de substances organiques ou toxiques.
Matériel courant de laboratoire, et

7.1 Respiromètre fermé, comprenant tous les récipients d'essai (fioles en verre) avec agitateurs

incorporés et tout autre équipement nécessaire, placé dans une salle à température constante ou dans un

appareil thermostaté (par exemple, bain-marie). Voir l'exemple donné dans l'Annexe C.

NOTE Tout respiromètre permettant de déterminer avec une précision suffisante la demande biochimique

en oxygène est approprié: utiliser, de préférence, un appareil qui mesure et remplace automatiquement et en

continu l'oxygène consommé de sorte qu'il ne manque pas d'oxygène et qu'il ne se produise pas d'inhibition de

l'activité microbienne pendant les processus de dégradation. Au lieu d'un respiromètre ordinaire, il est possible

d'utiliser un flacon fermé à deux phases (voir l’Annexe D).

7.2 Appareillage analytique pour le mesurage du carbone organique total (COT) et du carbone

organique dissous (COD) conformément à l’ISO 8245.

7.3 Appareillage analytique pour le mesurage des concentrations en nitrate et nitrite.

Il est tout d'abord recommandé d'effectuer un essai qualitatif pour décider s'il s'est produit une

nitrification. Si l'on a la preuve qu'il existe du nitrate/nitrite dans le milieu, il est nécessaire de

procéder à une détermination quantitative à l'aide d'une méthode d'essai appropriée (par exemple, par

chromatographie par échange d'ions).

7.4 Centrifugeuse, ou dispositif de filtration équipé de filtres à membranes (grosseur de pore

0,45 µm) n'absorbant, ni ne relargant le carbone organique de manière significative.

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ISO 14851:2019(F)
7.5 Balance analytique (matériel courant de laboratoire).
7.6 pH-mètre (matériel courant de laboratoire).
8 Mode opératoire
8.1 Matériau d'essai

Le matériau d'essai doit avoir une masse connue et contenir suffisamment de carbone pour donner

une DBO susceptible d'être adéquatement mesurée par le respiromètre utilisé. Calculer d'après la

formule chimique ou déterminer par des analyses élémentaires la DThO (voir l’Annexe A) et le COT (en

utilisant, par exemple,
...

Questions, Comments and Discussion

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