ISO 14729:2001
(Main)Ophthalmic optics — Contact lens care products — Microbiological requirements and test methods for products and regimens for hygienic management of contact lenses
Ophthalmic optics — Contact lens care products — Microbiological requirements and test methods for products and regimens for hygienic management of contact lenses
Optique ophtalmique — Produits d'entretien des lentilles de contact — Exigences microbiologiques et méthodes d'essai des produits et protocoles d'entretien des lentilles de contact
La présente Norme internationale décrit deux méthodes d'essai et les exigences devant être utilisées pour l'évaluation de l'activité antimicrobienne des produits destinés à être commercialisés pour la décontamination des lentilles de contact par des moyens chimiques, ainsi que des produits faisant partie d'un protocole d'entretien des lentilles de contact. La présente Norme internationale ne concerne pas l'entretien des lentilles expérimentales. NOTE Les normes générales relatives aux produits de décontamination (par exemple l'EN 1040:1997 et l'EN 1275:1997) ne sont pas applicables aux produits d'entretien des lentilles de contact
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 14729
First edition
2001-04-15
Ophthalmic optics — Contact lens care
products — Microbiological requirements
and test methods for products and
regimens for hygienic management of
contact lenses
Optique ophtalmique — Produits d'entretien des lentilles de contact —
Exigences microbiologiques et méthodes d'essai des produits et protocoles
d'entretien des lentilles de contact
Reference number
ISO 14729:2001(E)
©
ISO 2001
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ISO 14729:2001(E)
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ISO 14729:2001(E)
Contents Page
Foreword.iv
Introduction.v
1 Scope .1
2 Normative references .1
3 Terms and definitions .1
4 Principle.2
4.1 General.2
4.2 Stand-alone test (Inoculum challenge test) .2
4.3 Regimen test .3
5 Performance requirements.3
5.1 Stand-alone test: Primary criteria (see also Table 1) .3
5.2 Stand-alone test: Secondary criteria (see also Table 1) .4
5.3 Regimen test: Regimen criteria (see also Table 1).4
6 Test methods.5
6.1 Materials and reagents.5
6.2 Preparation of microbial challenge (Inoculum) .6
6.3 Stand-alone procedure.7
6.4 Regimen procedure .10
Annex A (informative) Test organisms from other culture collections .13
Annex B (informative) Example of a membrane filtration procedure .14
Annex C (informative) Technical report: Virus testing.16
Annex D (informative) Technical report: Acanthamoeba testing .17
Annex E (informative) Technical report: Artificial tears (organic soil) in laboratory testing .18
Bibliography.19
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ISO 14729:2001(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO
member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical
committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting.
Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this International Standard may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
International Standard ISO 14729 was prepared by Technical Committee ISO/TC 172, Optics and optical
instruments, Subcommittee SC 7, Ophthalmic optics and instruments.
Annexes A to E of this International Standard are for information only.
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ISO 14729:2001(E)
Introduction
Products for contact lens disinfection by chemical means are intended to reduce microbial contamination
introduced during lens wear and removal, cleaning and storage and are required to contain antimicrobial agents
capable of achieving this.
It is essential that all liquid contact lens care products are sterile until opened. Dry products (tablets, granules, etc.)
should be subject to control of microbial contamination and should be dissolved in a suitable diluent immediately
prior to use. Multidose contact lens care products must be adequately preserved or be packaged in a container
designed and labelled to minimize the risk of injury resulting from in-use contamination.
Contact lenses are normally subject to a regimen of cleaning and contact lens disinfection between periods of
wear. Aqueous solutions containing cleaning and/or disinfecting agents are commonly used for this purpose. These
products may be marketed as solutions or as tablets for dissolution immediately prior to use in a suitable diluent
such as saline.
The past 20 years of experience in the use and regulation of contact lens disinfecting products has shown distinct
disinfecting antimicrobial criteria for this class of medical devices. Ocular toxicology concerns, process convenience
and product comfort on the eye, have meant an evolution of products which maintain a low incidence of contact
lens associated ocular infection when used as instructed by the manufacturer. This International Standard gives
these distinct contact lens disinfecting antimicrobial criteria along with annexes to explain why viruses (annex C)
and Acanthamoeba (annex D) are not included as challenges. Organic soil is not required for evaluation of contact
lens care disinfecting products but may be used; an informative annex (annex E) is included to discuss organic soil
in the context of contact lenses and contact lens care products.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 14729:2001(E)
Ophthalmic optics — Contact lens care products —
Microbiological requirements and test methods for products and
regimens for hygienic management of contact lenses
1 Scope
This International Standard specifies two test methods for evaluating the antimicrobial activity of products to be
marketed for contact lens disinfection by chemical means and for products that are part of a contact lens care
regimen.
This International Standard is not applicable to the hygienic management of trial lenses.
NOTE General disinfection product standards are not applicable to contact lens care products, e.g. EN 1040:1997 and
EN 1275:1997.
2 Normative references
The following normative documents contain provisions which, through reference in this text, constitute provisions of
this International Standard. For dated references, subsequent amendments to, or revisions of, any of these
publications do not apply. However, parties to agreements based on this International Standard are encouraged to
investigate the possibility of applying the most recent editions of the normative documents indicated below. For
undated references, the latest edition of the normative document referred to applies. Members of ISO and IEC
maintain registers of currently valid International Standards.
1)
ISO 8320-1:— , Contact lenses and contact lens care products — Vocabulary — Part 1: Contact lenses.
1)
ISO 8320-2:— , Contact lenses and contact lens care products — Vocabulary — Part 2: Contact lens care
products.
3 Terms and definitions
For the purposes of this International Standard, the definitions given in ISO 8320 apply together with the following.
3.1
contact lens disinfecting product
product that possesses cidal activity (kills, destroys and/or inactivates) meeting the primary criteria of the stand-
alone test specified in this International Standard
3.2
contact lens disinfecting regimen
contact lens care regimen designed to meet both the secondary criteria of the stand-alone test and the regimen test
as specified in this International Standard
1) To be published. (Revision of ISO 8320:1986)
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ISO 14729:2001(E)
3.3
contact lens disinfection
chemical or physical process to reduce the number of viable microorganisms as specified in the performance
requirement sections of this International Standard
4Principle
4.1 General
The stand-alone test is designed to qualify individual solutions with a suitable level of antimicrobial activity as
contact lens disinfection products. The regimen test is designed to qualify individual solutions as part of a contact
lens disinfecting regimen. Products meeting the regimen test criteria shall also meet the minimum performance
requirements of the stand-alone test. It is fundamental that such products (unopened containers) are capable of
meeting the requirements of the test throughout their labelled shelf life.
As described in Figure 1, contact lens care solutions which are designed to possess disinfecting properties shall be
tested in the stand-alone test first. If the respective primary criteria are met (see 5.1), the product may be labelled
as a contact lens disinfecting product. If the product fails the primary criteria of the stand-alone test, the product
must exhibit sufficient antimicrobial activity to meet the secondary criteria of the stand-alone test as listed in 5.2. If
these secondary criteria are met, the regimen test shall be performed in order to qualify the product as part of a
contact lens disinfecting regimen by meeting the regimen criteria (see 5.3). If the product meets both the secondary
criteria of the stand-alone test and the regimen test but fails the primary criteria of the stand-alone test, it shall be
labelled as part of a contact lens disinfecting regimen.
The design of contact lens care products for cleaning and contact lens disinfection shall take into consideration the
needs of patient compliance and the probability of non-compliance. For example, disinfecting time must be
appropriate for contact lens wear.
NOTE Use of multiple or mixed microbial challenges can influence the apparent disinfecting activity of a particular product.
The evaluation of these variables together with testing against a larger panel of microorganisms and testing of samples from
partially used containers may be of value in developing a contact lens care product but are excluded from the scope of this
International Standard. (See annexes C and D).
4.2 Stand-alone test (Inoculum challenge test)
The stand-alone test challenges a disinfecting product with a standard inoculum of a representative range of
microorganisms and establishes the extent of their viability loss at pre-determined time intervals comparable with
those during which the product may be used. The size of the microbial challenge chosen in this test is not intended
to be representative of the likely challenge in practice but to provide countable numbers from which estimation of
the rate and extent of viability loss can be determined.
In carrying out the test for antimicrobial activity the qualitative and quantitative compositions of the product have to
be known at the time of testing by either analytical testing or extrapolation.
Appropriate measures shall be taken to inactivate or remove residual antimicrobial agents during culturing and
counting of challenge organism survivors, and the effectiveness of these measures shall be validated. The action of
this process during the test shall be demonstrated by the construction of suitable controls.
NOTE For information about virus testing, see annex C, and for Acanthamoeba testing, see annex D.
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a
Product may be labelled as a contact lens disinfecting product.
b
Product shall be labelled as part of a contact lens disinfecting regimen.
Figure 1 — Flow chart for stand-alone test and regimen test
4.3 Regimen test
This is a test which challenges a multifunctional disinfecting regimen with a standard inoculum of a representative
range of micro-organisms and which measures the viability loss after a predetermined time interval; the inoculum is
carried through the regimen by being applied to a contact lens.
This procedure is applicable to multifunctional disinfecting regimens which may include the steps of cleaning,
rinsing and soaking. In carrying out the regimen test procedure, the products are used in the manner and quantity
recommended in product labelling and/or patient instructions.
The disinfecting stage of any proposed contact lens disinfecting regimen evaluated by this test shall satisfy the
minimum requirements of the stand-alone test as described in Figure 1. Only those products that satisfy the
minimum performance requirements for the stand-alone test may be incorporated into a disinfecting regimen.
In carrying out the test, qualitative and quantitative composition of all products used in the test regimen have to be
known at the time of testing, either by analytical testing or extrapolation.
Appropriate measures shall be taken to inactivate or remove residual antimicrobial activity during culturing and
counting of challenge organism survivors, and the effectiveness of these measures shall be validated. The action of
this process during the test shall be demonstrated by the construction of suitable controls.
NOTE For problems associated with the use of human-worn lenses, see annex E.
5 Performance requirements
5.1 Stand-alone test: Primary criteria (see also Table 1)
5.1.1 Bacteria
The number of each challenge organism recovered per millilitre shall be reduced by an average value of not less
than 99,9 % (3,0 logs) within the minimum recommended soaking period.
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ISO 14729:2001(E)
NOTE The value is determined by taking the average of the log reductions for each challenge organism for the individual
lots tested.
5.1.2 Moulds and yeasts
The number of each challenge organism recovered per millilitre shall be reduced by an average value of not less
than 90 % (1,0 log) within the minimum recommended soaking period with no increase at not less than four times
the minimum recommended soaking period within an experimental error of � 0,5 logs.
NOTE The value is determined by taking the average of the log reductions for each challenge organism for the individual
lots tested.
5.2 Stand-alone test: Secondary criteria (see also Table 1)
Products failing to meet the criteria in 5.1.1 or 5.1.2 shall be evaluated by the regimen test procedure described in
6.4, provided the sum of the averages is a minimum of 5,0 log units reduction for the three species of bacteria
within the recommended soaking period with a minimum average of 1,0 log unit reduction for any single bacteria.
Stasis for the yeast and mould shall be observed for the recommended soaking period within an experimental error
of � 0,5 logs.
5.3 Regimen test: Regimen criteria (see also Table 1)
For each microbial species, the average regimen recovery count (for all lots tested) shall be no more than 10 cfu for
each lens type/storage solution combination.
Data from more than one lens type should not be combined to calculate the average.
NOTE When qualifying a lens care product regimen for use with one lens type, the average count for each species
requires averaging the data from the 24 inoculated and treated lenses of the one lens type. When qualifying a lens care product
regimen for use with more than one lens type, the average count for each species by lens type would require averaging the data
from the 12 inoculated and treated lenses for each lens type. See Table 4 for numbers of lenses to be used.
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Table 1 — Summary of performance requirements criteria for contact lens disinfection procedures
Average log reduction at soaking time
Fungi Bacteria
Test
a a a a a
FS CA SM PA SA
Stand-alone test: 11 3 3 3
Primary Criteria
Stand-alone test: bb c c c
Secondary Criteria
Regimen test: �4to5 �4to5 �4to5 �4to5 �4to5
d
Regimen criteria
a
PA = P. aeruginosa ATCC 9027;
SA = S. aureus ATCC 6538;
SM = S. marcescens ATCC 13880;
CA = C. albicans ATCC 10231;
FS = F. solani ATCC 36031.
b
Stasis at the soaking time.
c
The minimum acceptable log reduction for all three bacteria combined is 5. The
minimum acceptable log reduction for any single bacterial type is 1.
d
Equivalent to an average of not more than 10 cfu per lens type/storage solution
combination.
6 Test methods
6.1 Materials and reagents
The materials and reagents (i.e. the test organisms, media and reagents, equipment and samples) are common to
both the stand-alone procedure for disinfecting products and the regimen procedure for contact lens disinfection.
6.1.1 Test organisms
The strains listed in Table 2 shall be used.
NOTE Test organisms from other culture collections that may be used are listed in annex A.
Table 2 — Test organisms
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Staphylococcus aureus ATCC 6538
Serratia marcescens ATCC 13880
Candida albicans
ATCC 10231
Fusarium solani ATCC 36031
6.1.2 Culture media and reagents
6.1.2.1 Potato dextrose agar (PDA).
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6.1.2.2 Tryptone soya agar (TSA).
6.1.2.3 Sabouraud Dextrose Agar (SDA).
6.1.2.4 Dulbecco's Phosphate Buffered Saline, without calcium chloride and magnesium chloride
(DPBS): 200 mg/l KCl, 200 mg/l KH PO , 8 000 mg/l NaCl, and 2 160 mg/l Na HPO �7H O or suitable diluent.
2 4 2 4 2
6.1.2.5 Dulbecco's Phosphate Buffered Saline, plus 0,05 % (mass/volume) polysorbate 80 (DPBST) or
suitable diluent.
6.1.2.6 Validated neutralizing agents/media as required, for example, Dey-Engley Neutralising Broth (DEB)
2)
and Letheen Broth .
6.1.3 Test equipment
The following common laboratory equipment is required.
6.1.3.1 Sterile pipettes.
6.1.3.2 Swabs.
6.1.3.3 Tubes.
6.1.3.4 Petri dishes (90 mm to 100 mm � 20 mm).
6.1.3.5 Incubator.
6.1.3.6 Spectrometer, for determination of cell density.
6.1.3.7 Instrument for colony counting.
6.1.3.8 Centrifuge.
6.1.4 Test samples
The product to be tested shall be representative of the product to be marketed. Aliquots should be taken directly
from the final product container immediately prior to testing.
Three lots of product shall be tested. Each lot of product shall be tested with a separate inoculum preparation for
each challenge organism.
6.1.5 Culture maintenance
Maintain the test cultures as recommended by the curator of the appropriate culture collection.
Cultures should be no greater than 5 passes removed from the depository stock (ATCC, NCIB, NCTC, NCPF or
other recognized culture depository; see annex A). Each pass is a subculture of the previous pass.
6.2 Preparation of microbial challenge (Inoculum)
The preparation of the microbial challenge organisms (inoculum) is common to both the stand-alone procedure for
disinfecting products and the regimen procedure for contact lens disinfection.
2) Dey-Engley Neutralising Broth (DEB) and Letheen Broth are examples of suitable products available commercially. This
information is given for the convenience of users of this International Standard and does not constitute an endorsement by ISO
of this product.
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ISO 14729:2001(E)
For the regimen procedure for contact lens disinfection, organic soil may be included as part of the inoculum. See
annex E for an example.
Culture each test organism on agar slopes under the conditions given in Table 3.
Table 3 — Media and incubation conditions for growth of challenge organisms
Organism Medium Temperature Incubation time
°C
P. aeruginosa TSA 30to35 18hto24h
S. aureus TSA 30to35 18hto24h
S. marcescens TSA 30to35 18hto24h
C. albicanx SDA 20to25 42hto48h
or C. albicans SDA 30to35 18hto24h
F. solani PDA 20to25 10dto14d
Use sterile DPBST or suitable diluent to harvest each culture; wash the surface growth, transfer it to a suitable
vessel and vortex. Filter the F. solani suspensions through sterile glass wool, cheese cloth or gauze to remove
hyphal fragments.
After harvesting, the cultured organisms may be washed using centrifugation. The bacterial suspensions may be
filtered (e.g. 3µm to 5µm pore size) to produce a single cell dispersion. Then adjust all challenge cell suspensions
7 8
with DPBST or other suitable diluent to a concentration of between 1 � 10 cfu/ml and 1 � 10 cfu/ml. Estimate the
approximate cell concentration of each suspension by measuring the turbidity of the suspension or a dilution of the
suspension using a spectrophotometer. The actual concentration of colony forming units per millilitre shall be
determined for each suspension, e.g. by the plate count method, at the time of the test.
If a centrifuge is used, each centrifugation should be conducted at 20 °Cto 25 °C for no longer than the equivalent
of 10 min at 4 000 � g or less. Longer centrifugation times may be required at lower speeds.
Use bacterial and yeast cell suspensions on the day of preparation. Spore suspensions may be used up to seven
days following preparation if stored under refrigeration (2 °Cto8 °C).
6.3 Stand-alone procedure
6.3.1 Inoculum challenge test procedure
6.3.1.1 Prepare one or more tubes (for each lot tested) containing a minimum of 10 ml of test product solution
per challenge organism.
NOTE Sample tubes are used rather than lens cases to allow effective technical execution of the test. Since
incompatibilities can exist between solution ingredients and tube materials, tubes of an appropriate material, which are
compatible with the ingredients, should be used.
Inoculate the sample tube of the product to be tested with a suspension of test organisms sufficient to provide a
5 6
final count of between 1,0 � 10 and 1,0 � 10 cfu/ml. Ensure that the volume of inoculum does not exceed 1 % of
the sample volume. Ensure complete dispersion of the inoculum by adequate mixing.
6.3.1.2 Store the inoculated product at 20 °Cto25 °C. The temperature shall be monitored using a calibrated
device and the temperature documented.
If the product is sensitive to light it should be protected during the period of the test.
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ISO 14729:2001(E)
6.3.1.3 Take 1,0 ml aliquots of the inoculated product for determination of viable count at 25 %, 50 %, 75 %
and 100 % of the minimum recommended disinfecting time for all organisms, and, in addition, not less than 400 %
of the minimum recommended disinfecting time for yeast and mould. If overnight contact lens disinfection is
recommended, use a soaking time of 8 h.
6.3.1.4 Subject each of the 1,0 ml aliquots, removed at the specified time intervals, to a suitable series of
decimal dilutions in validated neutralizing media. Mix the suspension well by vortexing vigorously and let stand to
allow neutralization to be completed. Neutralization conditions shall be based on recovery medium control testing
(see 6.3.2.2).
If an antimicrobial agent in the formulation cannot be adequately inactivated or neutralized, eliminate it using a
validated membrane filtration procedure (see annex B).
6.3.1.5 Determine the viable count of organisms in appropriate dilutions by preparation of triplicate plates
(unless otherwise justified) of a suitable recovery medium (e.g. TSA for bacteria and SDA for mould and yeast).
If membrane filtration has been employed to remove or neutralize antimicrobial agents, culture the membranes on
these media as appropriate.
If the pour plate method is utilized, keep the agar for pour plates below 50 �C prior to pouring.
The agar media used for determination of viable counts may also contain antimicrobial inactivators or neutralizers,
if required.
6.3.1.6 Incubate bacterial recovery plates at 30 �Cto 35 �C. Incubate yeast recovery plates at 20 �Cto 25 �C
or 30 �Cto35 �C. Incubate mould recovery plates at 20 �Cto 25 �C. Incubation times for optimal recovery of
bacteria, yeast and moulds shall be determined. Minimum incubation times shall be based on recovery medium
control testing (see 6.3.2). Record the number of cfu observed on countable plates.
NOTE Plates should be observed periodically during incubation to prevent the occurrence of uncountable plates due to
overgrowth.
6.3.1.7 Determine the average number of colony forming units on countable plates. Calculate the microbial
reduction at the specified time points.
NOTE Countable plates refer to 30 cfu/plate to 300 cfu/plate for bacteria and yeast, and 8 cfu/plate to 80 cfu/plate for
0 -1
moulds, except when colonies are observed only for the 10 or 10 dilution plates.
6.3.1.8 The absence of microorganisms shall be documented, e.g. by recording an "0” or "NR” (no recovery),
when plates for all dilutions of a sample at a single time point have zero colonies.
6.3.2 Controls
6.3.2.1 Inoculum Control
Prepare an inoculum count by dispersing an identical aliquot of the inoculum into the same volume as used in
5 6
6.3.1.1 of a suitable diluent (e.g. DPBST) to achieve a final concentration of 1,0 � 10 cfu/ml to 1,0 � 10 cfu/ml.
Ensure that the volume of inoculum does not exceed 1 % of the sample volume. Ensure dispersion of the inoculum
by adequate mixing. Evaluate this control sample for cfu/ml at the beginning of the test in order to demonstrate the
suitability of the medium used for growth of the test organism and provide an estimate of the initial inoculum
concentration. Plate the appropriate aliquot from each tube onto the recovery agar plates in triplicate (unless
otherwise justified).
6.3.2.2 Recovery medium control
Vortex a 1/10 dilution of the disinfecting product in the validated neutralizing broth (1 ml into 9 ml). Let it stand to
allow neutralization to be completed. Prepare a second control tube with 10 ml of a suitable diluent (e.g. DPBST).
Inoculate the tubes with sufficient inoculum to result in 10 cfu/ml to 100 cfu of challenge organism per plate.
Incubate for an appropriate period of time at ambient temperature but not long enough to allow multiplication of the
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ISO 14729:2001(E)
inoculated organisms. Plate the appropriate aliquot from each tube onto the recovery agar plates in triplicate
(unl
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NORME ISO
INTERNATIONALE 14729
Première édition
2001-04-15
Optique ophtalmique — Produits
d'entretien des lentilles de contact —
Exigences microbiologiques et méthodes
d'essai des produits et protocoles
d'entretien des lentilles de contact
Ophthalmic optics — Contact lens care products — Microbiological
requirements and test methods for products and regimens for hygienic
management of contact lenses
Numéro de référence
ISO 14729:2001(F)
©
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Sommaire Page
Avant-propos.iv
Introduction.v
1 Domaine d'application.1
2Références normatives .1
3Termesetdéfinitions.1
4 Principe.2
5 Exigences de performance .4
6Méthodes d'essai .5
Annexe A (informative) Organismes contaminants provenant d'autres collections de culture .13
Annexe B (informative) Exempledemodeopératoire de filtration sur membrane .14
Annexe C (informative) Rapport technique: Essai sur les virus .16
Annexe D (informative) Rapport technique: Essai sur les Acanthamoeba.17
Annexe E (informative) Rapport technique: Larmes artificielles (souillures organiques) lors d'essais en
laboratoire .18
Bibliographie .20
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ISO 14729:2001(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiéeaux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude aledroit de fairepartie ducomité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI, Partie 3.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour
vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments delaprésente Norme internationale peuvent faire
l’objet de droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de
ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
La Norme internationale ISO 14729 a étéélaboréepar le comité technique ISO/TC 172, Optique et instruments
d'optique, sous-comité SC 7, Optique et instruments ophtalmiques.
Les annexes A àEdelaprésente Norme internationale sont données uniquement à titre d'information.
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ISO 14729:2001(F)
Introduction
Les produits pour la décontamination des lentilles de contact par des moyens chimiques sont destinés à réduire la
contamination microbienne occasionnée par le port, le retrait, le nettoyage et le stockage des lentilles et il est
nécessaire qu'ils contiennent des agents antimicrobiens leur permettant d'atteindre cet objectif.
Il est essentiel que tous les produits liquides d’entretien des lentilles de contact soient stériles jusqu'à leur
ouverture. Il convient que les produits solides (pastilles, granules, etc.) soient soumis à un contrôle de la
contamination microbienne et qu'ils soient dissous dans un diluant approprié immédiatement avant l'utilisation. Les
produits d’entretien des lentilles de contact multidoses doivent être conservés de manière adéquate ou être
emballésdansun récipient conçuet étiqueté pour réduire au minimum le risque d’infection consécutif à une
contamination aprèslapremière ouverture.
Les lentilles de contact sont habituellement soumises à un protocole de nettoyage et de décontamination entre les
périodes de port. Des solutions aqueuses contenant des agents nettoyants et/ou décontaminants sont couramment
utilisées dans ce but. Ces produits peuvent être commercialisés sous forme de solutions ou de comprimés à
dissoudre immédiatement avant l'utilisation dans un diluant approprié comme une solution saline.
L'expérience de ces 20 dernières années concernant l'utilisation et la réglementation des produits de décon-
tamination des lentilles de contact a permis d'établir des critères de décontamination antimicrobienne distincts pour
cette catégorie de dispositifs médicaux. Les préoccupations relatives à la toxicologie oculaire, à la facilité de
manipulation et au confort du produit sur l'œil ont eu pour conséquence une évolution des produits assurant une
faible incidence entre les infections oculaires et le port de lentilles de contact utilisées conformément aux
instructions du fabricant. La présente Norme internationale présente ces critères distincts de décontamination
antimicrobienne des lentilles de contact avec, en annexe, les raisons pour lesquelles les virus (annexe C) et les
Acanthamoeba (annexe D) ne font pas l’objet d’essais. L’utilisation de souillures organiques n’est pas exigéemais
est possible pour l'évaluation des produits de décontamination des lentilles de contact. Une annexe informative
(annexe E) est également fournie afin de traiter des souillures organiques dans le contexte des lentilles de contact
et des produits d’entretien des lentilles de contact.
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NORME INTERNATIONALE ISO 14729:2001(F)
Optique ophtalmique — Produits d'entretien des lentilles de
contact — Exigences microbiologiques et méthodes d'essai des
produits et protocoles d'entretien des lentilles de contact
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale décrit deux méthodes d'essai et les exigences devant être utilisées pour
l'évaluation de l'activité antimicrobienne des produits destinés àêtre commercialisés pour la décontamination des
lentilles de contact par des moyens chimiques, ainsi que des produits faisant partie d’un protocole d’entretien des
lentilles de contact.
La présente Norme internationale ne concerne pas l’entretien des lentilles expérimentales.
NOTE Les normes générales relatives aux produits de décontamination (par exemple l’EN 1040:1997 et l’EN 1275:1997)
ne sont pas applicables aux produits d’entretien des lentilles de contact
2Références normatives
Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui y est faite,
constituent des dispositions valables pour la présente Norme internationale. Pour les références datées, les
amendements ultérieurs ou les révisions de ces publications ne s’appliquent pas. Toutefois, les parties prenantes
aux accords fondés sur la présente Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer les
éditions les plus récentes des documents normatifs indiqués ci-après. Pour les références non datées, la dernière
édition du document normatif en référence s’applique. Les membres de l'ISO et de la CEI possèdent le registre des
Normes internationales en vigueur.
1)
ISO 8320-1: — , Lentilles de contact et produits d'entretien des lentilles de contact — Vocabulaire — Partie 1:
Lentilles de contact.
1)
ISO 8320-2: — , Lentilles de contact et produits d'entretien des lentilles de contact — Vocabulaire — Partie 2:
Produits d'entretien des lentilles de contact.
3 Termes et définitions
Pour les besoins de la présente Norme internationale, les termes et définitions donnésdans l’ISO 8320 ainsi les
suivants s'appliquent.
3.1
produit de décontamination des lentilles de contact
produit présentant une activité inhibitrice (élimination et/ou inactivation) remplissant les critères primaires de l’essai
produit seul spécifié dans la présente Norme internationale
1) À publier. (Révision de l'ISO 8320:1986)
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ISO 14729:2001(F)
3.2
protocole de décontamination des lentilles de contact
protocole d’entretien des lentilles de contact élaboré afin de satisfaire aux critères secondaires de l’essai produit
seul ainsi qu’à ceux de l’essai de protocole spécifiés dans la présente Norme internationale
3.3
décontamination des lentilles de contact
processus physique ou chimique visant à réduire le nombre de micro-organismes viables spécifié dans les articles
relatifs aux exigences de performance de la présente Norme internationale
4Principe
4.1 Généralités
L'objectif de l'essai produit seul est de qualifier les solutions individuelles ayant un niveau approprié d'activité
antimicrobienne en tant que produits d'entretien des lentilles de contact. L'objectif de l'essai du protocole est de
qualifier les solutions individuelles en tant qu'éléments du protocole de décontamination des lentilles de contact.
Les produits qui remplissent les critères d'essai doivent également satisfaire aux exigences minimales de l'essai
produit seul. Il est essentiel que de tels produits (conteneurs non ouverts) soient capables de satisfaire aux
exigences de l'essai tout au long de leur duréedevie étiquetée.
Comme décrit à la Figure 1, les solutions d’entretien des lentilles de contact devant présenter des propriétésde
décontamination doivent être soumises à essai en commençant par l'essai produit seul. Si les critères primaires
correspondants sont remplis (voir 5.1), le produit peut être étiqueté comme produit de décontamination des lentilles
de contact. Si le produit ne remplit pas les critères primaires de l'essai produit seul, il doit présenter une activité
antimicrobienne suffisante pour remplir les critères secondaires de l'essai produit seul comme énoncé en 5.2. Si
ces critères secondaires sont remplis, l'essai du protocole doit être réalisé afin d’évaluer le produit en tant
qu’élément du protocole de décontamination des lentilles de contact remplissant les critères du protocole (voir 5.3).
Si le produit remplit à la fois les critères secondaires de l'essai produit seul et ceux de l'essai du protocole mais ne
remplit pas les critères primaires de l'essai produit seul, il doit être étiqueté en tant qu’élément d'un protocole de
décontamination des lentilles de contact.
L’élaboration de produits d'entretien pour le nettoyage et la décontamination des lentilles de contact doit prendre
en considération les besoins de l’utilisateur. Par exemple, la duréede ladécontamination doit être adaptée à la
durée de port des lentilles de contact.
NOTE L'utilisation d’organismes contaminants microbiens multiples ou mélangés peut influer sur l'activité apparente de
décontamination d'un produit spécifique. L'évaluation de ces variables et la réalisation d’essais sur une large gamme de micro-
organismes ainsi que sur des échantillons provenant de récipients partiellement utilisés peuvent être très utiles pour la mise au
point d'un produit d'entretien des lentilles de contact mais sont exclues du domaine d'application de la présente Norme
internationale. (Voir annexes C et D.)
4.2 Essai produit seul (essai avec l'inoculum)
L'essai produit seul détermine l'efficacité d'un produit de décontamination avec un inoculum étalon d'une gamme
représentative de micro-organismes et établit l'étendue de leur décroissance à des intervalles de temps
prédéterminés comparables à ceux pendant lesquels le produit peut être utilisé. Le titre de l'inoculum choisi pour
cet essai n'est pas destinéà être représentatif de l'inoculum probable en pratique mais permet de fournir des
valeurs de dénombrement à partir desquelles peut être déterminée une estimation du taux et de l’importance de la
perte de viabilité.
La réalisation de l'essai de mesure de l'activité antimicrobienne implique la connaissance des compositions
qualitatives et quantitatives du produit au moment de l'essai soit par essai analytique soit par extrapolation.
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Des mesures appropriées doivent être prises pour éliminer ou rendre inactifs les agents antimicrobiens résiduels
pendant la mise en culture et le dénombrement des organismes contaminants survivants et l'efficacité de ces
mesures doit être validée. L’exécution de ce procédé pendant l'essai doit être démontrée par la mise en place de
contrôles adaptés.
NOTE Voir l'annexe C pour obtenir des informations concernant l'essai sur les virus et l'annexe D pour des informations
concernant l'essai sur les Acanthamoeba.
a
Le produit peut être étiqueté comme étant un produit de décontamination des lentilles de contact.
b
Le produit doit être étiqueté en tant qu’élément d'un protocole de décontamination des lentilles de contact.
Figure 1 — Diagramme de l'essai produit seul et de l'essai du protocole
4.3 Essai du protocole
Il s'agit d'un essai qui détermine l'efficacité d'un protocole de décontamination multifonctions avec un inoculum
étalon d'une gamme représentative de micro-organismes qui mesure leur décroissance après un intervalle de
temps prédéterminé. Tout au long du protocole, l’inoculum est appliqué sur une lentille de contact.
Ce mode opératoire est applicable à des protocoles de décontamination multifonctions pouvant comprendre les
étapes de nettoyage, de rinçage et de trempage. Lors de la réalisation du mode opératoire d’essai du protocole,
les produits sont utilisés delamanière et dans la quantité recommandées sur l'étiquette du produit et/ou la notice
destinée au patient.
La phase de décontamination de tout protocole proposé de décontamination des lentilles de contact évalué par cet
essai doit satisfaire aux exigences minimales de l’essai produit seul décrit à la Figure 1. Seuls les produits ayant
satisfait aux exigences minimales de performance de l’essai produit seul peuvent être intégrésdansunprotocole
de décontamination.
La réalisation de l'essai de mesure de l'activité antimicrobienne implique la connaissance des compositions
qualitatives et quantitatives du produit au moment de l'essai soit par essai analytique soit par extrapolation.
Des mesures appropriées doivent être prises pour éliminer ou rendre inactifs les agents antimicrobiens résiduels
pendant la mise en culture et le dénombrement des organismes contaminants survivants et l'efficacité de ces
mesures doit être validée. L’exécution de ce procédé pendant l'essai doit être démontrée par la mise en place de
contrôles adaptés.
NOTE Voir l'annexe E pour connaître les problèmes associés au port des lentilles de contact.
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5 Exigences de performance
5.1 Essai produit seul: Critères primaires (voir également Tableau 1)
5.1.1 Bactéries
Le nombre de chaque organisme contaminant récupéré par millilitre doit être ramenéà une valeur moyenne
supérieure ou égale à 99,9 % (3,0 log) pendant la période de trempage minimale recommandée.
NOTE Cette valeur est déterminée en faisant la moyenne des réductions logarithmiques de chaque organisme
contaminant pour les lots individuels soumis à essai.
5.1.2 Moisissures et levures
Le nombre de chaque organisme contaminant récupéré par millilitre doit être ramenéà une valeur moyenne
supérieure ou égale à 90 % (1,0 log) pendant la période de trempage minimale recommandéeetcesans
augmentation pendant une duréeauminimum égale à 4fois ladurée de trempage minimale recommandée dans
les limites d'une erreur expérimentale de� 0,5 log.
NOTE Cette valeur est déterminée en faisant la moyenne des réductions logarithmiques de chaque organisme
contaminant pour les lots individuels soumis à essai.
5.2 Essai produit seul: Critères secondaires (voir également Tableau 1)
Les produits ne remplissant pas les critères de 5.1.1 ou de 5.1.2 doivent être évalués par le mode opératoire du
protocole décrit en 6.4 à condition que la somme des moyennes soit égale à une réduction minimale de 5,0 log
pour les trois espèces de bactéries pendant la durée de trempage recommandéeavec une réduction moyenne
minimale de 1,0 log par bactérie. La stase des levures et des moisissures doit être observée pendant la duréede
trempage recommandée dans les limites d'une erreur expérimentale de� 0,5 log.
5.3 Essai du protocole: Critères du protocole (voir également Tableau 1)
Pour chaque espèce microbienne, le dénombrement moyen d’organismes récupérés lors du protocole (pour tous
les lots soumis à l'essai) ne doit pas être supérieur à 10 ufc par combinaison type de lentille/solution de stockage.
Les données provenant de plus d'un type de lentille peuvent ne pas être combinées pour calculer la moyenne.
NOTE Lors de l'évaluation d'un protocole de produits d'entretien utilisable avec un seul type de lentille, le dénombrement
moyen par espèce nécessite une intégration des données des 24 lentilles inoculées et traitées par type de lentille. Lors de
l'évaluation d'un protocole de produit d'entretien de lentille utilisable avec plusieurs types de lentille, le dénombrement moyen
par espèce et par type de lentille nécessiterait une intégration des données des 12 lentilles inoculées ou traitées par type de
lentille. Voir le Tableau 4 pour connaître le nombre de lentilles devant être utilisé.
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Tableau 1 — Résumé des critères d’exigences de performance pour les modes opératoires de
décontamination des lentilles de contact
Essai Réduction logarithmique moyenne aprèstrempagepréconisé
Champignons Bactéries
a a a a a
FS CA SM PA SA
Essai produit seul: 11 3 3 3
critères primaires
Essai produit seul: bb c c c
critères secondaires
Essai du protocole: critères ≈ 4-5 ≈ 4-5 ≈ 4-5 ≈ 4-5 ≈ 4-5
d
du protocole
a
PA = P. aeruginosa ATCC 9027;
SA = S. aureus ATCC 6538;
SM = S. marcescens ATCC 13880;
CA = C. albicans ATCC 10231;
FS = F. solani ATCC 36031.
b
Stase après trempage préconisé.
c
La réduction logarithmique minimale admissible pour l'ensemble des trois types de bactéries combinés est de 5. La réduction
logarithmique minimale admissible pour un type de bactérie est de 1.
d
Équivalent à une moyenne de 10 ufc au maximum par combinaison type de lentille/solution de stockage.
6Méthodes d'essai
6.1 Matériaux et réactifs
Les matériaux et réactifs (par exemple les organismes contaminants, les milieux et les réactifs, l'équipement et les
échantillons) sont communs à la fois au mode opératoire de l'essai produit seul des produits de décontamination et
au mode opératoiredel'essaiduprotocolede décontamination des lentilles de contact.
6.1.1 Organismes contaminants
Les souches énumérées au Tableau 2 doivent être utilisées.
NOTE Les organismes contaminants provenant d'autres collections de culture pouvant être utilisés sont indiqués à
l'annexe A.
Tableau 2 — Organismes contaminants
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Staphylococcus aureus ATCC 6538
Serratia marcescens ATCC 13880
Candida albicans
ATCC 10231
Fusarium solani ATCC 36031
6.1.2 Milieux de culture et réactifs
6.1.2.1 Agar glucosé de pomme de terre (PDA).
6.1.2.2 Agar de tryptone soja (TSA).
6.1.2.3 Agar glucosé de Sabouraud (SDA).
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6.1.2.4 Solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco sans chlorure de calcium ni chlorure de
magnésium (DPBS): 200 mg/l KCI, 200 mg/l KH PO , 8 000 mg/l NaCl et 2 160 mg/l Na HPO ,7H O ou tout
2 4 2 4 2
autre diluant approprié.
6.1.2.5 Solution saline tampon de phosphate de Dulbecco plus 0,05 % m/v de polysorbate 80 (DPBST)
ou tout autre diluant approprié.
6.1.2.6 Agents/milieux de neutralisation validés si nécessaire, par exemple, le bouillon de neutralisation
2)
Dey-Engley (DEB) et le bouillon Letheen .
6.1.3 Équipement d'essai
L'équipement de laboratoire courant suivant est nécessaire.
6.1.3.1 Pipettes stériles.
6.1.3.2 Compresses.
6.1.3.3 Tubes.
6.1.3.4 Boîtes de Pétri (90 mm à 100 mm � 20 mm).
6.1.3.5 Incubateur.
6.1.3.6 Spectromètre,pourladétermination de la masse volumique cellulaire.
6.1.3.7 Instrument pour le dénombrement des colonies.
6.1.3.8 Centrifugeuse.
6.1.4 Échantillons pour essai
Le produit devant être soumis à essai doit être représentatif du produit à commercialiser. Il est recommandé de
prélever les aliquotes immédiatement avant l'essai directement dans le récipient contenant le produit final.
Trois lots de produits doivent être soumis à essai. Chaque lot de produits doit être soumis à essai avec une
préparation d'inoculum distincte pour chaque organisme contaminant.
6.1.5 Conservation de la culture
Maintenir les cultures d'essai selon les recommandations du centre de collection dont elles sont issues.
Il convient que les cultures ne soient pas repiquées plus de 5 fois à partir de la souche de base (ATCC, NCIB,
NCTC, NCPF ou autres souches de culture reconnues; voir l'annexe A). Chaque repiquage constitue une
sous-culture du repiquage précédent.
6.2 Préparation de l’ensemencement bactérien (inoculum)
La préparation des organismes contaminants bactériens (inoculum) est commune à la fois au mode opératoire de
l'essai produit seul des produits de décontamination et au mode opératoiredel'essaiduprotocole de
décontamination des lentilles de contact.
2) Le bouillon de neutralisation Dey-Engley (DEB) et le bouillon Letheen sont des exemples de produits appropriés
disponibles sur le marché. Cette information est donnée à l'intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne
signifie nullement que l'ISO approuve ou recommande l'emploi exclusif des produits ainsi désignés.
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Dans le cas du mode opératoiredel'essaiduprotocole de décontamination des lentilles de contact, il est possible
d’incorporer à l'inoculum des souillures organiques. Voir l'exemple en annexe E.
Cultiver chaque organisme contaminant sur des géloses en pente dans les conditions indiquées au Tableau 3.
Tableau 3 — Milieux et conditions d'incubation pour la croissance des organismes contaminants
Organisme Milieu Température Durée d'incubation
°C
P. aeruginosa TSA 30 à 35 18 h à 24 h
S. aureus TSA 30 à 35 18 h à 24 h
S. marcescens TSA 30 à 35 18 h à 24 h
C. albicanx SDA 20 à 25 42 h à 48 h
ou C. albicans SDA 30 à 35 18 h à 24 h
F. solani PDA 20 à 25 10 j à 14 j
Utiliser du DPBST stérile ou tout autre diluant adapté pour le prélèvement de chaque culture. Récupérer les
colonies formées à la surface, les transférer dans un récipient adapté et mélanger vigoureusement. Filtrer les
suspensions de F. solani au travers de laine de verre, de mousseline ou de gaze stérile afin d'éliminer les
fragments hyphaux.
Aprèsle prélèvement, les organismes cultivés peuvent être éliminés par centrifugation. Les suspensions
bactériennes peuvent être filtrées (par exemple avec une taille de pore comprise entre 3µm et 5µm) pour produire
une dispersion des cellules individuelles. Ajuster ensuite toutes les suspensions de cellule d’ensemencement avec
7
du DPBST ou tout autre diluant adapté jusqu'à l'obtention d'une concentration comprise entre 1� 10 ufc/ml et
8
1� 10 ufc/ml. Évaluer la concentration cellulaire approximative de chaque suspension en mesurant la turbidité de
la suspension ou la dilution de la suspension à l'aide d'un spectrophotomètre. La concentration effective des unités
formant colonie par millilitre doit être déterminée au moment de l'essai pour chaque suspension, par exemple à
l’aide de la méthode de comptage des boîtes.
Si la centrifugation est utilisée, il convient que chaque opération de centrifugation soit réalisée à une température
comprise entre 20 °Cet 25 °C pendant une duréeinférieure ou égale à 10 min, à 4000� g ou moins. Des durées
de centrifugation plus longues peuvent être requises à des vitesses inférieures.
Utiliser les suspensions cellulaires de bactéries et de levures le jour de leur préparation. Les suspensions de
spores peuvent être utilisées jusqu'à 7 jours aprèsleurpréparation si elles ont été stockées au frais (2 °C à 8 °C).
6.3 Mode opératoire de l’essai produit seul
6.3.1 Méthode d’essai pour l’ensemencement de l’inoculum
6.3.1.1 Préparer un ou plusieurs tubes (pour chaque lot soumis à essai) contenant au moins 10 ml de solution
de produit d'essai par organisme contaminant.
NOTE Des tubes échantillons sont utilisésde préférence aux étuis à lentilles afin de permettre une exécution technique
efficace de l'essai. Des incompatibilités pouvant exister entre les composants de la solution et les matériaux des tubes, il
convient d’utiliser des tubes fabriqués dans un matériau approprié, compatible avec les composants de la solution.
Inoculer le tube échantillon du produit devant être soumis à l'essai avec une suspension d'organismes
5 6
contaminants suffisante pour fournir un dénombrement final compris entre 1,0� 10 et 1,0� 10 ufc/ml. S'assurer
que le volume de l'inoculum n’est pas supérieur à 1 % du volume de l'échantillon. Réaliser une dispersion complète
de l'inoculum par un mélange adéquat.
6.3.1.2 Stocker le produit à une température comprise entre 20 °Cet 25 °C. La température doit être contrôlée
à l'aide d'un dispositif étalonné et notée.
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Si le produit est sensible à la lumière, il convient de le protéger pendant la duréedel'essai.
6.3.1.3 Prélever des aliquotes de 1,0 ml du produit inoculé pour dénombrer les organismes viables à 25 %,
50 %, 75 % et 100 % de la duréede décontamination minimale recommandée pour tous les organismes et,
également, à au moins 400 % de la duréededécontamination minimale recommandé pour les levures et les
moisissures. Si une décontamination des lentilles de contact pendant la nuit est recommandée, utiliser une durée
de trempage de 8 h.
6.3.1.4 Soumettre chaque aliquote de 1,0 ml, prélevée à des intervalles de temps spécifiés, à une série de
dilutions décimales appropriées dans un milieu de neutralisation validé.Bien mélanger la suspension en agitant
vigoureusement puis laisser reposer pour permettre à la neutralisation de s'achever. Les conditions de
neutralisation doivent être basées sur l’essai de contrôle du milieu de développement (voir 6.3.2.2).
Si un agent antimicrobien de la formulation ne peut pas être rendu inactif ou neutralisé de façon adéquate,
l'éliminer à l'aide d'une méthode validée de filtration sur membrane (voir l'annexe B).
6.3.1.5 Déterminer le nombre d'organisme
...
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