ISO 8692:1989
(Main)Water quality — Fresh water algal growth inhibition test with Scenedesmus subspicatus and Selenastrum capricornutum
Water quality — Fresh water algal growth inhibition test with Scenedesmus subspicatus and Selenastrum capricornutum
Gives a method for the determination of the toxic effects of chemical compounds on the growth of planktonic freshwater algae. The test can be used for readily water-soluble substances which are not significantly degraded or eliminated from the test system.
Qualité de l'eau — Essai d'inhibition de la croissance des algues d'eau douce avec Scenedesmus subspicatus et Selenastrum capricornutum
La présente Norme internationale prescrit une méthode pour la détermination des effets toxiques de substances chimiques sur la croissance d'algues planctoniques d'eau douce. L'essai peut être effectué avec des substances facilement solubles dans l'eau qui ne sont pas significativement dégradées ou éliminées au cours de l'essai.
Kakovost vode - Preskus zaviranja rasti sladkovodnih alg s Scenedesmus subspicatus in Selenastrum capriocornutum
General Information
Relations
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Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL IS0
8692
STANDARD
First edition
1989-l 1-15
Water quality - Fresh water algal growth
inhibition test with Scenedesrnus subspicatus and
Selenas trum capricornu turn
Qua/it6 de l’eau - Essai d’inhibition de la croissance des algues d’eau deuce avec
Scenedesmus subspicatus et Selenastrum capricornu turn
Reference number
IS0 8692 : 1989 (E)
---------------------- Page: 1 ----------------------
Is0 8692 : 1989 (El
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through IS0 technical committees. Each member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. IS0
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all
matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council. They are approved in accordance with IS0 procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard IS0 8692 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147,
Water quality,
Annex A of this International Standard is for information only.
0 IS0 1989
All rights reserved. No part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any
means, electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in
writing from the publisher.
International Orga nization for Standardization
Case postale 560 CH-121 1 Geneve 20 l Switzerland
Printed in Switzerland
---------------------- Page: 2 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD
IS0 8692 : 1989 (E)
Fresh water algal growth inhibition test
Water quality -
with Scenkdesmus subspia tus and Selenastrum
capricornutum
3.5 control : Mixture of water, nutrients and algal cells
1 Scope
without test substance.
This International Standard specifies a method for the deter-
mination of the toxic effects of chemical compounds on the
36 median effective concentration (E&l : The concen-
growth of planktonic freshwater algae.
tration of test substance which results in a 50 % reduction in
either growth or growth rate relative to the controls.
The test can be used for readily water-soluble substances
which are not significantly degraded or eliminated from the test
3.7 no observed effect concentration (NOEC) : The
system.
highest concentration tested at which there is no statistically
significant reduction of growth or growth rate relative to the
controls.
2 Principle
Monospecific algal strains are cultured for several generations
4 Materials
in a defined medium containing a range of concentrations of
the test substance prepared by mixing appropriate quantities of
4.1 Test organism
nutrient concentrate, water, test substance stock solutions,
and an inoculum of exponentially growing algal cells. The test
Use either of the following planktonic freshwater algae :
solutions are incubated for a minimum period of 72 h, during
a) Scenedesmus subspicatus Chodat (86.81 SAG)
which the cell density in each is measured at least every 24 h.
or
Inhibition is measured as a reduction in growth or growth rate
b) Selenastrum capricornutum Printz (ATCC 22662 or
relative to control cultures grown under identical conditions.
CCAP 278/4). ‘)
NOTE - Both species are planktonic green algae belonging to the
3 Definitions and abbreviations
order of Chlorococcales lchlorophyta, Chlorophyceael, and are usually
unicellular in culture.
For the purposes of this International Standard, the following
The strains recommended are available in unialgal, non-axenic cultures
definitions and abbreviations apply.
from the following collections :
86.81 SAG : Collection of Algal Cultures
3.1 cell density : Number of cells per unit volume.
Inst. Plant Physiology
University of Gijttingen
3.2 growth : Increase in cell density. Nikolausberger Weg 18
D-3400 Gottingen
Germany, F.R.
3.3 growth rate : Expression of rate of increase in cell dens-
ATCC22662 : American Type Culture Collection
ity with respect to time as given in 8.2.2.
12301 Parklane Drive
Rockville
3.4 test solution : Mixture of water, nutrients and test
Maryland 20852
substance in which algal cells are incubated. USA
1) This species is now systematically named Raphidocell’s subcapitata Korsikov nov. comb. [l].
---------------------- Page: 3 ----------------------
Is0 8692 : 1989 (El
CCAP 27814 : Culture Centre of Algae and Protozoa 5 Apparatus
Freshwater Biological Association
The Ferry House All equipment in contact with the test medium shall be made of
Ambleside
glass or chemically inert material.
Cumbria LA22 OLP, UK
Ordinary laboratory apparatus and
Algotheque du laboratoire de Cryptogamie
Museum d’histoire naturelle
5.1 Temperature-controlled cabinet or room with con-
12, rue Buffon
F-75665 Paris, France
tinuous even illumination by white fluorescent light suitable to
meet requirements with respect to lighting conditions during
the test as specified in 6.6.
4.2 Water
5.2 Apparatus for measuring algal cell density,
All water used in the preparation of the nutrient medium and
preferably a particle counter, or microscope with counting
test substance solutions shall be deionized or of equivalent
chamber. Alternatively determine the state of growth of the
quality. Take special care to avoid contamination of the water
algal cultures by an indirect procedure using a spectro-
by inorganic or organic substances during preparation and
photometer, turbidimeter or fluorimeter when sufficiently sen-
storage. No copper equipment shall be used.
sitive and if shown to be sufficiently well correlated with cell
density. The apparatus used shall be capable of measuring ac-
4.3 Nutrients
curately cell densities as low as lo4 cells per millilitre.
Prepare four stock solutions in water, according to the com-
5.3 Culture flasks, e.g. 250 ml conical flasks with air-
positions given in table 1.
permeable stoppers.
NOTE - These solutions will eventually be diluted (see 6.1 and 6.4) to
5.4 Apparatus for membrane filtration, using filters of
achieve the final nutrient concentrations in the test solutions.
mean pore diameter 0,2 pm.
5.5 Autoclave.
Table 1
5.6 pH meter.
Concentration Final concentration
Nutrient
in stock solution in test solution
Stock solution
1 : macro-nutrients
6 Procedure
NH&I 1,5 g.I-’ 15 mg.l-1
I,2 g.I-’ 12 mg.l-’
MgC12m6H20
6.1 Preparation of nutrient concentrate
mg.l-’
CaCl2.2H20 I,8 g-l-’ 18
MgS04.7H20 1,5 g-I-1 15 mg.l-’
Prepare a nutrient concentrate as follows (for 1 000 ml) :
I,6 mg.l-’
KH2P04 0,16 g-l-’
Add to 100 ml of stock solution 1 (4.3) :
Stock solution 2 : Fe-EDTA
FeCl3.6H20 80 mg.l-’ 80 pg.l-’
10 ml of stock solution 2 (4.3)
Na2EDTAm2H20 100 mg.I-’ 100 ug.I-’ 10 ml of stock solution 3 (4.3)
and 10 ml of stock solution 4 (4.3).
Stock solution 3 : trace elements
H3B03 185 mg.l-’ 185 pg.1 - ’
Make up to 1 000 ml with water.
MnCl2*4H20 415 mg.l-’ 415 l.lg.l-’
Prepare the nutrient concentrate freshly before each test.
ZnCI2 3 mggI - ’ 3 l.lg.l-’
Before use equilibrate it by leaving overnight in contact with
CoCl2.6H2O 1,5 mg.l-’ 1,5 ug.l-’
air, or by bubbling filtered air through it for 30 min. After
CuC12=2H20 0,Ol rng-I-’ 0,Ol pg.l-’
equilibration, adjust the pH if necessary to 8,3 + 0,2, using
Na2Mo04.2H20 7 mg.l- ’ 7 pg.l-’
either 1 mol/l hydrochloric acid or 1 mol/l sodium hydroxide
Stock solution 4 : NaHC03 solution.
NaHC03 50 g*I-’ 50 mg.l-’
6.2 Preparation of inoculum
All the chemicals used shall be of reagent grade quality.
The algal inoculum for the test shall be taken from an exponen-
tially growing pre-culture. Set up the pre-culture 3 days before
Sterilize the stock solutions by membrane filtration (mean pore
the start of the test as described below.
diameter 0,2 pm) or by autoclaving (120 OC, 15 min). Store the
solutions in the dark at 4 OC.
Mix one part by volume of nutrient concentrate (6.1) with eight
parts of water. Add sufficient cells from the algal stock culture
Do not autoclave stock solution 4 (NaHC03) but sterilize it only so that, when made up to 10 parts with water, the cell density
by membrane filtration. is of the order of lo4 cells per millilitre.
2
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IS0 8692 : 1989 (El
Measure the of a sample of the test solutions at each
Maintain the pre-culture under the same conditions as used in PH
concentration and control.
the test (see 6.6) for 3 days, after which time it should be in ex-
ponential growth and of sufficient cell density to be used as an
inoculum for the test.
6.6 Incubation
Measure the cell density in the preculture immediately before
use (see 6.7), in order to calculate the required inoculum
Incubate the stoppered test vessels at 23 OC + 2 OC, under
volume.
continuous white light. The light intensity at the average level of
the test solutions shall be in the range 60 pE/m2/s to 120 pE/m2/s
(35 x 1O1* photons/m2/s to 70 x lOI* photons/m2/s) when
63 . Choice of test concentrations
measured in the photosynthetically effective wavelength range
of 400 nm to 700 nm using an appropriate receptor.
The concentrations of test substance to be tested shall nor-
mally follow a geometric progression, for example 10; 3,2; l,O;
0,32; . . .; 0,Ol mgJ-I.
NOTE - It is important to note that the method of measurement, in
particular the type of receptor (collecter) will affect the measured
If possible the concentrations shall be chosen to obtain several value. Spherical receptors (which respond to light from all angles
above and below the plane of measurement) and “cosine” receptors
(4 to 5) levels of e
...
SLOVENSKI STANDARD
SIST ISO 8692:1997
01-maj-1997
Kakovost vode - Preskus zaviranja rasti sladkovodnih alg s Scenedesmus
subspicatus in Selenastrum capriocornutum
Water quality -- Fresh water algal growth inhibition test with Scenedesmus subspicatus
and Selenastrum capricornutum
Qualité de l'eau -- Essai d'inhibition de la croissance des algues d'eau douce avec
Scenedesmus subspicatus et Selenastrum capricornutum
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 8692:1989
ICS:
13.060.70 Preiskava bioloških lastnosti Examination of biological
vode properties of water
SIST ISO 8692:1997 en
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.
---------------------- Page: 1 ----------------------
SIST ISO 8692:1997
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SIST ISO 8692:1997
INTERNATIONAL IS0
8692
STANDARD
First edition
1989-l 1-15
Water quality - Fresh water algal growth
inhibition test with Scenedesrnus subspicatus and
Selenas trum capricornu turn
Qua/it6 de l’eau - Essai d’inhibition de la croissance des algues d’eau deuce avec
Scenedesmus subspicatus et Selenastrum capricornu turn
Reference number
IS0 8692 : 1989 (E)
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Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through IS0 technical committees. Each member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. IS0
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all
matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council. They are approved in accordance with IS0 procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard IS0 8692 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147,
Water quality,
Annex A of this International Standard is for information only.
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Printed in Switzerland
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INTERNATIONAL STANDARD
IS0 8692 : 1989 (E)
Fresh water algal growth inhibition test
Water quality -
with Scenkdesmus subspia tus and Selenastrum
capricornutum
3.5 control : Mixture of water, nutrients and algal cells
1 Scope
without test substance.
This International Standard specifies a method for the deter-
mination of the toxic effects of chemical compounds on the
36 median effective concentration (E&l : The concen-
growth of planktonic freshwater algae.
tration of test substance which results in a 50 % reduction in
either growth or growth rate relative to the controls.
The test can be used for readily water-soluble substances
which are not significantly degraded or eliminated from the test
3.7 no observed effect concentration (NOEC) : The
system.
highest concentration tested at which there is no statistically
significant reduction of growth or growth rate relative to the
controls.
2 Principle
Monospecific algal strains are cultured for several generations
4 Materials
in a defined medium containing a range of concentrations of
the test substance prepared by mixing appropriate quantities of
4.1 Test organism
nutrient concentrate, water, test substance stock solutions,
and an inoculum of exponentially growing algal cells. The test
Use either of the following planktonic freshwater algae :
solutions are incubated for a minimum period of 72 h, during
a) Scenedesmus subspicatus Chodat (86.81 SAG)
which the cell density in each is measured at least every 24 h.
or
Inhibition is measured as a reduction in growth or growth rate
b) Selenastrum capricornutum Printz (ATCC 22662 or
relative to control cultures grown under identical conditions.
CCAP 278/4). ‘)
NOTE - Both species are planktonic green algae belonging to the
3 Definitions and abbreviations
order of Chlorococcales lchlorophyta, Chlorophyceael, and are usually
unicellular in culture.
For the purposes of this International Standard, the following
The strains recommended are available in unialgal, non-axenic cultures
definitions and abbreviations apply.
from the following collections :
86.81 SAG : Collection of Algal Cultures
3.1 cell density : Number of cells per unit volume.
Inst. Plant Physiology
University of Gijttingen
3.2 growth : Increase in cell density. Nikolausberger Weg 18
D-3400 Gottingen
Germany, F.R.
3.3 growth rate : Expression of rate of increase in cell dens-
ATCC22662 : American Type Culture Collection
ity with respect to time as given in 8.2.2.
12301 Parklane Drive
Rockville
3.4 test solution : Mixture of water, nutrients and test
Maryland 20852
substance in which algal cells are incubated. USA
1) This species is now systematically named Raphidocell’s subcapitata Korsikov nov. comb. [l].
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Is0 8692 : 1989 (El
CCAP 27814 : Culture Centre of Algae and Protozoa 5 Apparatus
Freshwater Biological Association
The Ferry House All equipment in contact with the test medium shall be made of
Ambleside
glass or chemically inert material.
Cumbria LA22 OLP, UK
Ordinary laboratory apparatus and
Algotheque du laboratoire de Cryptogamie
Museum d’histoire naturelle
5.1 Temperature-controlled cabinet or room with con-
12, rue Buffon
F-75665 Paris, France
tinuous even illumination by white fluorescent light suitable to
meet requirements with respect to lighting conditions during
the test as specified in 6.6.
4.2 Water
5.2 Apparatus for measuring algal cell density,
All water used in the preparation of the nutrient medium and
preferably a particle counter, or microscope with counting
test substance solutions shall be deionized or of equivalent
chamber. Alternatively determine the state of growth of the
quality. Take special care to avoid contamination of the water
algal cultures by an indirect procedure using a spectro-
by inorganic or organic substances during preparation and
photometer, turbidimeter or fluorimeter when sufficiently sen-
storage. No copper equipment shall be used.
sitive and if shown to be sufficiently well correlated with cell
density. The apparatus used shall be capable of measuring ac-
4.3 Nutrients
curately cell densities as low as lo4 cells per millilitre.
Prepare four stock solutions in water, according to the com-
5.3 Culture flasks, e.g. 250 ml conical flasks with air-
positions given in table 1.
permeable stoppers.
NOTE - These solutions will eventually be diluted (see 6.1 and 6.4) to
5.4 Apparatus for membrane filtration, using filters of
achieve the final nutrient concentrations in the test solutions.
mean pore diameter 0,2 pm.
5.5 Autoclave.
Table 1
5.6 pH meter.
Concentration Final concentration
Nutrient
in stock solution in test solution
Stock solution
1 : macro-nutrients
6 Procedure
NH&I 1,5 g.I-’ 15 mg.l-1
I,2 g.I-’ 12 mg.l-’
MgC12m6H20
6.1 Preparation of nutrient concentrate
mg.l-’
CaCl2.2H20 I,8 g-l-’ 18
MgS04.7H20 1,5 g-I-1 15 mg.l-’
Prepare a nutrient concentrate as follows (for 1 000 ml) :
I,6 mg.l-’
KH2P04 0,16 g-l-’
Add to 100 ml of stock solution 1 (4.3) :
Stock solution 2 : Fe-EDTA
FeCl3.6H20 80 mg.l-’ 80 pg.l-’
10 ml of stock solution 2 (4.3)
Na2EDTAm2H20 100 mg.I-’ 100 ug.I-’ 10 ml of stock solution 3 (4.3)
and 10 ml of stock solution 4 (4.3).
Stock solution 3 : trace elements
H3B03 185 mg.l-’ 185 pg.1 - ’
Make up to 1 000 ml with water.
MnCl2*4H20 415 mg.l-’ 415 l.lg.l-’
Prepare the nutrient concentrate freshly before each test.
ZnCI2 3 mggI - ’ 3 l.lg.l-’
Before use equilibrate it by leaving overnight in contact with
CoCl2.6H2O 1,5 mg.l-’ 1,5 ug.l-’
air, or by bubbling filtered air through it for 30 min. After
CuC12=2H20 0,Ol rng-I-’ 0,Ol pg.l-’
equilibration, adjust the pH if necessary to 8,3 + 0,2, using
Na2Mo04.2H20 7 mg.l- ’ 7 pg.l-’
either 1 mol/l hydrochloric acid or 1 mol/l sodium hydroxide
Stock solution 4 : NaHC03 solution.
NaHC03 50 g*I-’ 50 mg.l-’
6.2 Preparation of inoculum
All the chemicals used shall be of reagent grade quality.
The algal inoculum for the test shall be taken from an exponen-
tially growing pre-culture. Set up the pre-culture 3 days before
Sterilize the stock solutions by membrane filtration (mean pore
the start of the test as described below.
diameter 0,2 pm) or by autoclaving (120 OC, 15 min). Store the
solutions in the dark at 4 OC.
Mix one part by volume of nutrient concentrate (6.1) with eight
parts of water. Add sufficient cells from the algal stock culture
Do not autoclave stock solution 4 (NaHC03) but sterilize it only so that, when made up to 10 parts with water, the cell density
by membrane filtration. is of the order of lo4 cells per millilitre.
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SIST ISO 8692:1997
IS0 8692 : 1989 (El
Measure the of a sample of the test solutions at each
Maintain the pre-culture under the same conditions as used in PH
concentration and control.
the test (see 6.6) for 3 days, after which time it should be in ex-
ponential growth and of sufficient cell density to be used as an
inoculum for the test.
6.6 Incubation
Measure the cell density in the preculture immediately before
use (see 6.7), in order to calculate the required inoculum
Incubate the stoppered test vessels at 23 OC + 2 OC, under
volume.
continuous white light. The light intensity at the average level of
the test solutions shall be in the range 60 pE/m2/s to 120 pE/m2/s
(35 x 1O1* photons/m2/s to 70 x lOI* photons/m2/s) when
63 . Choice of test concentrations
measured in the photosynthetically effective wavelength range
of 400 nm to 700 nm using an appropriate receptor.
The concentrations of test substance to be tested shall nor-
mally foll
...
NORME
ISO
INTERNATIONALE
8692
Première édition
1989-l 1-15
Qualité de l’eau - Essai d’inhibition de la
croissance des algues d’eau douce avec
Scenedesmus subspicatus et Selenastrum
capricornutum
Watef quality - Ffesh wa ter afgal gfowth inhibition test witb Scenedesmus
subspicatus and Selenastrum capricornutu m
Numéro de référence
ISO 8692 : 1989 (FI
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 8692 : 1989 (FI
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est en général confiée aux comités techniques de I’ISO.
Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO col-
labore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requièrent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 8692 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 147,
Qualité de l’eau.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement à titre d’infor-
mation.
0 ISO 1989
Droits de reproduction réservés. Aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni
utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case postale 56 l CH-1211 Genève 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
---------------------- Page: 2 ----------------------
NORME INTERNATIONALE KO8692 : 1989 (FI <
Qualité de l’eau - Essai d’inhibition de la croissance des
algues d’eau douce avec Scenedesmus subspicatus et
Selenas trum capricornu tum
3.4 solution d’essai : Mélange d’eau, de substances nutriti-
1 Domaine d’application
ves et de substance à expérimenter, dans lequel les cellules
La présente Norme internationale prescrit une méthode pour la algales sont incubées.
détermination des effets toxiques de substances chimiques sur
la croissance d’algues planctoniques d’eau douce.
3.5 solution témoin : Mélange d’eau, de substances nutriti-
ves et de cellules algales sans substance à expérimenter.
L’essai peut être effectué avec des substances facilement solu-
bles dans l’eau qui ne sont pas significativement dégradées ou
3.6 concentration moyenne réelle (CE& : Concentration
éliminées au cours de l’essai.
en substance à expérimenter qui cause une diminution de 50 %
de la croissance ou du taux de croissance par rapport aux solu-
tions témoins.
2 Principe
3.7 concentration sans effet observée (CSEO) : Concen-
Plusieurs générations de cellules algales appartenant à la même
tration de la substance à expérimenter la plus élevée pour
espèce sont cultivées dans un milieu défini contenant une série
laquelle il n’y a statistiquement aucune diminution significative
de concentrations de la substance à expérimenter préparée en
de la croissance ou du taux de croissance par rapport aux solu-
mélangeant des quantités appropriées de concentrés nutritifs,
tions témoins.
d’eau, de solutions mères de la substance à expérimenter, et un
inoculum de cellules algales en phase exponentielle de crois-
sance. Les solutions d’essai sont incubées pendant une période
4 Réactifs
minimale de 72 h, pendant laquelle la concentration cellulaire
de chacune d’entre elles est mesurée au moins toutes les 24 h.
4.1 Organismes d’essai
L’inhibition est mesurée comme étant la diminution de la crois-
Utiliser comme algue planctonique d’eau douce, soit
sance ou du taux de croissance par rapport aux cultures
témoins réalisées dans des conditions identiques.
a) Scenedesmus subspicatus Chodat (86.81 SAG)
soit
3 Définitions et abréviations
b) Selenastrum capricornutum Printz (ATCC 22662 ou
Pour les besoins de la présente Norme internationale, les défini-
CCAP 278/4). ‘)
tions et abréviations suivantes s’appliquent.
NOTE - Ces deux espèces sont des algues vertes planctoniques
appartenant à l’ordre des Chlorococcales (Chlorophytes, Chlorophy-
3.1 concentration cellulaire : Nombre de cellules par unité
céesl, qui sont généralement cultivées à l’état unicellulaire.
de volume.
On peut se procurer les souches recommandées sous forme de cultures
monospécifiques et non axéniques auprès de :
3.2 croissance : Augmentation de la concentration cellu-
86.81 SAG : Collection of Algal Cultures
laire.
Inst. Plant Physiology
University of Gottingen
3.3 taux de croissance : Expression du taux d’augmenta-
Nikolausberger Weg 18
tion de la concentration cellulaire dans le temps comme indiqué
D-3466 Gottingen
en 8.2.2. République Fédérale d’Allemagne
1) Cette espèce est maintenant systématiquement dénommée RapMoce/is subcapitata nov. comb. [ 11.
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 8692 : 1989 (FI
American Type Culture Collection
ATCC 22662 : 5 Appareillage
12301 Parklane Drive
Rockviile, Maryland 20852, USA
Tout le matériel en contact avec le milieu d’essai doit être en
verre ou en matiére chimiquement inerte.
CCAP 278/4 : Culture Centre of Algae and Protozoa
Freshwater Biological Association
Appareillage courant de laboratoire, et
The Ferry House
Ambleside
Cumbria LA22 OLP, UK
5.1 Armoire ou pièce à température contrMée, pourvue
Algothèque du laboratoire de Cryptogamie
d’une lampe fluorescente blanche assurant un éclairement con-
Muséum d’histoire naturelle
tinu convenant pour satisfaire aux exigences sur les conditions
12, rue Buffon
d’éclairage telles que spécifiées en 6.6.
F-75665 Paris, France
5.2 Appareil, permettant de mesurer la concentration
4.2 Eau
cellulaire algale, de préférence un compte-particules ou un
microscope à chambre de comptage. L’état de la croissance
L’eau utilisée pour la préparation du milieu nutritif et les solu-
des cultures d’algues peut également être déterminé par une
tions de substance à expérimenter doit être désionisée ou d’une
méthode indirecte avec un spectromètre, un turbidimètre ou un
qualité équivalente. Veiller à éviter toute contamination de l’eau
fluorimètre de sensibilité suffisante, et s’il est établi une corréla-
par des substances inorganiques ou organiques pendant la pré-
tion acceptable avec la concentration cellulaire. L’appareil uti-
paration et le stockage. Aucun matériel en cuivre ne doit être
lisé doit pouvoir permettre de mesurer avec précision des con-
utilisé.
centrations cellulaires aussi faibles que 104 cellules par millilitre.
4.3 Substances nutritives
5.3 Flacons de culture, par exemple fioles coniques de
Préparer quatre solutions mer-es dans l’eau, selon les composi-
250 ml avec bouchons perméables à l’air.
tions données dans le tableau 1.
5.4 Appareillage, pour filtration sur membrane, utilisant
NOTE - Ces solutions seront éventuellement diluées (voir 6.1 et 6.4)
des filtres de diamètre moyen de pore 0,2 pm.
pour obtenir les concentrations finales en substances nutritives des
solutions d’essai.
5.5 Autoclave.
Tableau 1
5.6 pH-mètre.
Substances Concentration de la Concentration finale
nutritives solution mère de la solution d’essai
6 Mode opératoire
Solution mère 1 : macrosubstances nutritives
NH&1 ‘,5 g-l-’
15 mg.1 - ’
6.1 Préparation des concentrés nutritifs
MgCI,.GH,O 1,2 g.I-’ 12 mg.l-’
CaCl2-2H20 13 g-l-’ 18 mg.1 - ’
Préparer le concentré nutritif comme suit (pour 1 000 ml) :
MgS04.7H20
1,5 g-l-’ 15 mg+’
Ajouter à 100 ml de solution mère 1 (4.3) :
KH2P04 0,16 g.I-’
1,6 mg.l-’
10 ml de solution mère 2 (4.3)
Solution mère
2 : Fe-EDTA
10 ml de solution mère 3 (4.3)
FeCl3-6H20 80 mg.?’
80 pg.l- 1
10 ml de solution mère 4 (4.3).
Na2EDTAm2H20 100 mg.l-’ 100 pg*l-1
Compléter à 1 000 ml avec de l’eau.
Solution mhe 3 : éléments traces
H3B03 185 mg-l-’
185 pg*l-1
Préparer le concentré nutritif juste avant chaque essai. Avant
MnCl2*4H20 415 mg.l-’ 415 pg*l- ’
l’utilisation, ce concentré doit atteindre l’état d’équilibre en res-
ZnCI2 tant à l’air pendant une nuit ou par un barbotage d’air filtré de
3 mg-l-’ 3 pg.l-1
30 min. Après obtention de l’état d’équilibre, ajuster le pH à
COCI~~~H~O 1,5 rng.W
1,5 pg*l-’
8,3 + 0,2, si nécessaire en utilisant des solutions diluées
CuC12m2H20 0,Ol mg-l-1 0,Ol pg.l-1
d’acide chlorhydrique ou d’hydroxyde de sodium (1 mol/l).
Na2M004g2H20 7 mg-l-’
7 pg.l-1
Solution mère
4 : NaHC03
6.2 Préparation de I’inoculum
NaHC03
50 g.l-1 50 mg-l-’
L’inoculum d’algues pour l’essai doit être prélevé sur une pré-
culture en phase exponentielle de croissance. Préparer la pré-
Tous les réactifs utilisés doivent être de qualité analytique.
culture, 3 jours avant le début de l’essai, comme suit.
Stériliser les solutions meres par filtration sur membrane (dia-
Mélanger un volume de concentré nutritif (6.1) avec huit volu-
metre moyen des pores 02 prn) ou en autoclave (120 OC,
mes d’eau. Ajouter suffisamment de cellules provenant de la
15 min). Conserver les solutions à l’obscurité à 4 OC.
culture algale mére, afin qu’après avoir complété à dix volu-
La solution mère 4 (NaHC03) ne doit pas être stérilisée en auto-
mes avec de l’eau, la concentration cellulaire soit de l’ordre
clave, mais uniquement par filtration sur membrane. de 104 cellules par millilitre.
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 8692 : 1989 (FI
Maintenir la pré-culture dans les mêmes conditions que celles La quantité d’inoculum (6.2) ajoutée à chaque récipient doit
de l’essai (voir 6.6) pendant 3 jours, après lesquels elle devrait être suffisante pour que la concentration cellulaire initiale dans
être en phase exponentielle de croissance et la concentration les solutions d’essai soit 104 cellules par millilitre.
cellulaire devrait être suffisante pour que la pré-culture soit utili-
sée comme inoculum.
Dans certains récipients, n’ajouter que l’eau, le concentré nutri-
tif et I’inoculum, sans substance à expérimenter. Ces récipients
Mesurer la concentration cellulaire de la pré-culture immédiate-
servent de récipients témoins.
ment avant l’essai (voir 6.7) afin de calculer le volume d’inocu-
lum nécessaire.
Préparer trois récipients par concentration de substance à expé-
rimenter, et six récipients témoins.
6.3 Choix des concentrations à expérimenter
d’un échantillon
Mesurer le pH des solutions d’essai à chaque
concentration et témoin.
Les concentrations de la substance à expérimenter doivent nor-
malement suivre une progression géométrique, par exemple,
10; 3,2; l,O; 0,32; . . .; 0,Ol mg.l-l.
6.6 Incubation
Si possible, les concentrations doivent être choisies pour per-
mettre l’obtention de plusieurs (4 à 5) effets permettant une
Laisser incuber les récipients d’essai bouchés à 23 OC r.t 2 OC
inhibition de la croissance comprise entre 10 % et 90 %.
sous lumière blanche continue. L’intensité lumineuse au ni-
veau moyen des solutions d’essai doit être dans l’intervalle
NOTE - La gamme de concentrations acceptables est déterminée en
de 60 pE/m2/s à 120 I;IE/m2/s (35 x 101* photons/m2/s à
réalisant un essai préliminaire de «recherche de la gamme)) couvrant
70x 101* photons/m2/s) quand elle est mesurée dans le
plusieurs ordres de grandeur de d
...
NORME
ISO
INTERNATIONALE
8692
Première édition
1989-l 1-15
Qualité de l’eau - Essai d’inhibition de la
croissance des algues d’eau douce avec
Scenedesmus subspicatus et Selenastrum
capricornutum
Watef quality - Ffesh wa ter afgal gfowth inhibition test witb Scenedesmus
subspicatus and Selenastrum capricornutu m
Numéro de référence
ISO 8692 : 1989 (FI
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 8692 : 1989 (FI
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est en général confiée aux comités techniques de I’ISO.
Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO col-
labore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requièrent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 8692 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 147,
Qualité de l’eau.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement à titre d’infor-
mation.
0 ISO 1989
Droits de reproduction réservés. Aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni
utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case postale 56 l CH-1211 Genève 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
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NORME INTERNATIONALE KO8692 : 1989 (FI <
Qualité de l’eau - Essai d’inhibition de la croissance des
algues d’eau douce avec Scenedesmus subspicatus et
Selenas trum capricornu tum
3.4 solution d’essai : Mélange d’eau, de substances nutriti-
1 Domaine d’application
ves et de substance à expérimenter, dans lequel les cellules
La présente Norme internationale prescrit une méthode pour la algales sont incubées.
détermination des effets toxiques de substances chimiques sur
la croissance d’algues planctoniques d’eau douce.
3.5 solution témoin : Mélange d’eau, de substances nutriti-
ves et de cellules algales sans substance à expérimenter.
L’essai peut être effectué avec des substances facilement solu-
bles dans l’eau qui ne sont pas significativement dégradées ou
3.6 concentration moyenne réelle (CE& : Concentration
éliminées au cours de l’essai.
en substance à expérimenter qui cause une diminution de 50 %
de la croissance ou du taux de croissance par rapport aux solu-
tions témoins.
2 Principe
3.7 concentration sans effet observée (CSEO) : Concen-
Plusieurs générations de cellules algales appartenant à la même
tration de la substance à expérimenter la plus élevée pour
espèce sont cultivées dans un milieu défini contenant une série
laquelle il n’y a statistiquement aucune diminution significative
de concentrations de la substance à expérimenter préparée en
de la croissance ou du taux de croissance par rapport aux solu-
mélangeant des quantités appropriées de concentrés nutritifs,
tions témoins.
d’eau, de solutions mères de la substance à expérimenter, et un
inoculum de cellules algales en phase exponentielle de crois-
sance. Les solutions d’essai sont incubées pendant une période
4 Réactifs
minimale de 72 h, pendant laquelle la concentration cellulaire
de chacune d’entre elles est mesurée au moins toutes les 24 h.
4.1 Organismes d’essai
L’inhibition est mesurée comme étant la diminution de la crois-
Utiliser comme algue planctonique d’eau douce, soit
sance ou du taux de croissance par rapport aux cultures
témoins réalisées dans des conditions identiques.
a) Scenedesmus subspicatus Chodat (86.81 SAG)
soit
3 Définitions et abréviations
b) Selenastrum capricornutum Printz (ATCC 22662 ou
Pour les besoins de la présente Norme internationale, les défini-
CCAP 278/4). ‘)
tions et abréviations suivantes s’appliquent.
NOTE - Ces deux espèces sont des algues vertes planctoniques
appartenant à l’ordre des Chlorococcales (Chlorophytes, Chlorophy-
3.1 concentration cellulaire : Nombre de cellules par unité
céesl, qui sont généralement cultivées à l’état unicellulaire.
de volume.
On peut se procurer les souches recommandées sous forme de cultures
monospécifiques et non axéniques auprès de :
3.2 croissance : Augmentation de la concentration cellu-
86.81 SAG : Collection of Algal Cultures
laire.
Inst. Plant Physiology
University of Gottingen
3.3 taux de croissance : Expression du taux d’augmenta-
Nikolausberger Weg 18
tion de la concentration cellulaire dans le temps comme indiqué
D-3466 Gottingen
en 8.2.2. République Fédérale d’Allemagne
1) Cette espèce est maintenant systématiquement dénommée RapMoce/is subcapitata nov. comb. [ 11.
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 8692 : 1989 (FI
American Type Culture Collection
ATCC 22662 : 5 Appareillage
12301 Parklane Drive
Rockviile, Maryland 20852, USA
Tout le matériel en contact avec le milieu d’essai doit être en
verre ou en matiére chimiquement inerte.
CCAP 278/4 : Culture Centre of Algae and Protozoa
Freshwater Biological Association
Appareillage courant de laboratoire, et
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5.1 Armoire ou pièce à température contrMée, pourvue
Algothèque du laboratoire de Cryptogamie
d’une lampe fluorescente blanche assurant un éclairement con-
Muséum d’histoire naturelle
tinu convenant pour satisfaire aux exigences sur les conditions
12, rue Buffon
d’éclairage telles que spécifiées en 6.6.
F-75665 Paris, France
5.2 Appareil, permettant de mesurer la concentration
4.2 Eau
cellulaire algale, de préférence un compte-particules ou un
microscope à chambre de comptage. L’état de la croissance
L’eau utilisée pour la préparation du milieu nutritif et les solu-
des cultures d’algues peut également être déterminé par une
tions de substance à expérimenter doit être désionisée ou d’une
méthode indirecte avec un spectromètre, un turbidimètre ou un
qualité équivalente. Veiller à éviter toute contamination de l’eau
fluorimètre de sensibilité suffisante, et s’il est établi une corréla-
par des substances inorganiques ou organiques pendant la pré-
tion acceptable avec la concentration cellulaire. L’appareil uti-
paration et le stockage. Aucun matériel en cuivre ne doit être
lisé doit pouvoir permettre de mesurer avec précision des con-
utilisé.
centrations cellulaires aussi faibles que 104 cellules par millilitre.
4.3 Substances nutritives
5.3 Flacons de culture, par exemple fioles coniques de
Préparer quatre solutions mer-es dans l’eau, selon les composi-
250 ml avec bouchons perméables à l’air.
tions données dans le tableau 1.
5.4 Appareillage, pour filtration sur membrane, utilisant
NOTE - Ces solutions seront éventuellement diluées (voir 6.1 et 6.4)
des filtres de diamètre moyen de pore 0,2 pm.
pour obtenir les concentrations finales en substances nutritives des
solutions d’essai.
5.5 Autoclave.
Tableau 1
5.6 pH-mètre.
Substances Concentration de la Concentration finale
nutritives solution mère de la solution d’essai
6 Mode opératoire
Solution mère 1 : macrosubstances nutritives
NH&1 ‘,5 g-l-’
15 mg.1 - ’
6.1 Préparation des concentrés nutritifs
MgCI,.GH,O 1,2 g.I-’ 12 mg.l-’
CaCl2-2H20 13 g-l-’ 18 mg.1 - ’
Préparer le concentré nutritif comme suit (pour 1 000 ml) :
MgS04.7H20
1,5 g-l-’ 15 mg+’
Ajouter à 100 ml de solution mère 1 (4.3) :
KH2P04 0,16 g.I-’
1,6 mg.l-’
10 ml de solution mère 2 (4.3)
Solution mère
2 : Fe-EDTA
10 ml de solution mère 3 (4.3)
FeCl3-6H20 80 mg.?’
80 pg.l- 1
10 ml de solution mère 4 (4.3).
Na2EDTAm2H20 100 mg.l-’ 100 pg*l-1
Compléter à 1 000 ml avec de l’eau.
Solution mhe 3 : éléments traces
H3B03 185 mg-l-’
185 pg*l-1
Préparer le concentré nutritif juste avant chaque essai. Avant
MnCl2*4H20 415 mg.l-’ 415 pg*l- ’
l’utilisation, ce concentré doit atteindre l’état d’équilibre en res-
ZnCI2 tant à l’air pendant une nuit ou par un barbotage d’air filtré de
3 mg-l-’ 3 pg.l-1
30 min. Après obtention de l’état d’équilibre, ajuster le pH à
COCI~~~H~O 1,5 rng.W
1,5 pg*l-’
8,3 + 0,2, si nécessaire en utilisant des solutions diluées
CuC12m2H20 0,Ol mg-l-1 0,Ol pg.l-1
d’acide chlorhydrique ou d’hydroxyde de sodium (1 mol/l).
Na2M004g2H20 7 mg-l-’
7 pg.l-1
Solution mère
4 : NaHC03
6.2 Préparation de I’inoculum
NaHC03
50 g.l-1 50 mg-l-’
L’inoculum d’algues pour l’essai doit être prélevé sur une pré-
culture en phase exponentielle de croissance. Préparer la pré-
Tous les réactifs utilisés doivent être de qualité analytique.
culture, 3 jours avant le début de l’essai, comme suit.
Stériliser les solutions meres par filtration sur membrane (dia-
Mélanger un volume de concentré nutritif (6.1) avec huit volu-
metre moyen des pores 02 prn) ou en autoclave (120 OC,
mes d’eau. Ajouter suffisamment de cellules provenant de la
15 min). Conserver les solutions à l’obscurité à 4 OC.
culture algale mére, afin qu’après avoir complété à dix volu-
La solution mère 4 (NaHC03) ne doit pas être stérilisée en auto-
mes avec de l’eau, la concentration cellulaire soit de l’ordre
clave, mais uniquement par filtration sur membrane. de 104 cellules par millilitre.
2
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ISO 8692 : 1989 (FI
Maintenir la pré-culture dans les mêmes conditions que celles La quantité d’inoculum (6.2) ajoutée à chaque récipient doit
de l’essai (voir 6.6) pendant 3 jours, après lesquels elle devrait être suffisante pour que la concentration cellulaire initiale dans
être en phase exponentielle de croissance et la concentration les solutions d’essai soit 104 cellules par millilitre.
cellulaire devrait être suffisante pour que la pré-culture soit utili-
sée comme inoculum.
Dans certains récipients, n’ajouter que l’eau, le concentré nutri-
tif et I’inoculum, sans substance à expérimenter. Ces récipients
Mesurer la concentration cellulaire de la pré-culture immédiate-
servent de récipients témoins.
ment avant l’essai (voir 6.7) afin de calculer le volume d’inocu-
lum nécessaire.
Préparer trois récipients par concentration de substance à expé-
rimenter, et six récipients témoins.
6.3 Choix des concentrations à expérimenter
d’un échantillon
Mesurer le pH des solutions d’essai à chaque
concentration et témoin.
Les concentrations de la substance à expérimenter doivent nor-
malement suivre une progression géométrique, par exemple,
10; 3,2; l,O; 0,32; . . .; 0,Ol mg.l-l.
6.6 Incubation
Si possible, les concentrations doivent être choisies pour per-
mettre l’obtention de plusieurs (4 à 5) effets permettant une
Laisser incuber les récipients d’essai bouchés à 23 OC r.t 2 OC
inhibition de la croissance comprise entre 10 % et 90 %.
sous lumière blanche continue. L’intensité lumineuse au ni-
veau moyen des solutions d’essai doit être dans l’intervalle
NOTE - La gamme de concentrations acceptables est déterminée en
de 60 pE/m2/s à 120 I;IE/m2/s (35 x 101* photons/m2/s à
réalisant un essai préliminaire de «recherche de la gamme)) couvrant
70x 101* photons/m2/s) quand elle est mesurée dans le
plusieurs ordres de grandeur de d
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.