ISO 16265:2009

Water quality — Determination of the methylene blue active substances (MBAS) index — Method using continuous flow analysis (CFA)

ISO 16265:2009 specifies a procedure for the determination of the methylene blue active substances (MBAS) index, in the ranges 0,05 mg/l to 0,5 mg/l and 0,5 mg/l to 5,0 mg/l, in various water samples (e.g. ground water, drinking water, surface water, waste water and leachates). Anionic surfactants are the most important substances showing methylene blue activity. This method is therefore useful for estimating the anionic surfactant content [including anionic surfactants with carboxylate groups (e.g. soaps)] of water. Other types of substance may also show methylene blue activity and contribute to the result. On a case-by-case basis, the range of the analysis may be changed and the method used for other concentration ranges provided they cover exactly one decade of concentration units.

Qualité de l'eau — Mesurage de l'indice des substances actives au bleu de méthylène (SABM) — Méthode par analyse en flux continu (CFA)

L'ISO 16265:2009 spécifie un mode opératoire pour le mesurage de l'indice des substances actives au bleu de méthylène (SABM), dans les plages de 0,05 mg/l à 0,5 mg/l et de 0,5 mg/l à 5,0 mg/l, dans différents échantillons d'eau (par exemple, eau souterraine, eau potable, eaux de ruissellement, eau résiduaire et percolats). Les agents de surface anioniques sont les substances les plus importantes présentant une activité vis-à-vis du bleu de méthylène. Cette méthode est donc utile pour évaluer la teneur des eaux en agents de surface anioniques [y compris les agents de surface anioniques contenant des groupes carboxylates (par exemple, savons)]. D'autres types de substances peuvent également présenter une activité vis-à-vis du bleu de méthylène et contribuer au résultat. Dans des cas particuliers, l'étendue de l'analyse peut être modifiée et la méthode peut être utilisée pour d'autres plages de concentration à condition qu'elles couvrent exactement une décade d'unités de concentration.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 02-Mar-2009
• ICS: 13.060.50 - Examination of water for chemical substances
• Technical Committee: ISO/TC 147/SC 2 - Physical, chemical and biochemical methods
• Drafting Committee: ISO/TC 147/SC 2 - Physical, chemical and biochemical methods
• Current Stage: 9060 - Close of review
• Start Date: 04-Jun-2030

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 16265
First edition
2009-03-01
Water quality — Determination of the
methylene blue active substances
(MBAS) index — Method using
continuous flow analysis (CFA)
Qualité de l'eau — Mesurage de l'indice des substances actives au bleu
de méthylène (SABM) — Méthode par analyse en flux continu (CFA)

Reference number
©
ISO 2009
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Published in Switzerland
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Contents Page
Foreword. iv
Introduction . v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Interferences . 1
4 Principle. 2
5 Reagents. 2
6 Apparatus . 4
7 Sampling and sample pretreatment. 5
8 Procedure . 5
9 Calculation of the results. 7
10 Expression of results . 8
11 Precision. 8
12 Test report . 8
Annex A (informative) Example of a flow diagram for the determination of MBAS index by
continuous flow analysis (CFA) . 9
Annex B (informative) Precision data. 10
Bibliography . 11

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 16265 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 2, Physical,
chemical and biochemical methods.
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Introduction
Methods using flow analysis automate wet chemical procedures and are particularly suitable for the
processing of many analytes in water in large numbers of samples at a high analysis frequency (up to 100
samples per hour).
[1], [2] [3]
A differentiation is made between flow injection analysis (FIA) and continuous flow analysis (CFA) .
Both methods share the feature of an automatic dosage of the sample into a flow system (manifold) where the
analytes in the sample react with the reagent solutions on their way through the manifold. The sample
preparation may be integrated in the manifold. The reaction product is measured in a flow detector (e.g. a
photometer). The detector produces a signal from which the concentration of the parameter is calculated.
The MBAS (methylene blue active substances) index is an analytical convention (a method-defined
parameter) used for water quality control purposes. It measures surfactants and other substances that react
with methylene blue under specified conditions.
The user should be aware that particular problems could require the specification of additional conditions.

INTERNATIONAL STANDARD ISO 16265:2009(E)

Water quality — Determination of the methylene blue active
substances (MBAS) index — Method using continuous flow
analysis (CFA)
WARNING — Persons using this International Standard should be familiar with normal laboratory
practice. This standard does not purport to address all of the safety problems, if any, associated with
its use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health practices and to
ensure compliance with any national regulatory conditions.
IMPORTANT — It is absolutely essential that tests conducted in accordance with this International
Standard be carried out by suitably trained staff.
Trichloromethane and methanol waste solutions should be disposed of properly.
1 Scope
This International Standard specifies a procedure for the determination of the methylene blue active
substances (MBAS) index, in the ranges 0,05 mg/l to 0,5 mg/l and 0,5 mg/l to 5,0 mg/l, in various water
samples (e.g. ground water, drinking water, surface water, waste water and leachates). Anionic surfactants
are the most important substances showing methylene blue activity. This method is therefore useful for
estimating the anionic surfactant content [including anionic surfactants with carboxylate groups (e.g. soaps)] of
water. Other types of substance may also show methylene blue activity and contribute to the result. On a
case-by-case basis, the range of the analysis may be changed and the method used for other concentration
ranges provided they cover exactly one decade of concentration units.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the reference document
(including any amendments) applies.
ISO 648, Laboratory glassware — Single-volume pipettes
ISO 1042, Laboratory glassware — One-mark volumetric flasks
ISO 3696, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods
3 Interferences
The following substances can interfere with the analysis:
⎯ Cationic compounds able to form strong ion-pairs with the active substances in methylene blue.
⎯ Humic acids in concentrations > 20 mg/l.
⎯ Chemicals with a high surface activity (e.g. non methylene blue active surfactants in concentrations
> 50 mg/l).
2− 2−
2−
⎯ Chemicals with a strong reductive potential for the oxidation of methylene blue (e.g. S , SO , SO ,
3 23
−
OCl ). These chemicals shall be removed (e.g. with H O ) prior to analysis.
2 2
⎯ High concentrations of inorganic anions (e.g. nitrate, chloride, bromide) may cause positive bias.
⎯ Chemicals which react with any of the reagents used to form a coloured compound soluble in
trichloromethane (CHCl ) (excluded are methylene blue active substances).
Filtration of the sample before analysis is advisable for samples containing particles larger than 100 µm in size.
Otherwise the particles in the sample may clog the transport tubes. If filtration is necessary, significant losses
of anionic surfactants due to adsorbance effects are possible.
The absorbance due to the colour of the sample can be compensated for by a blank analysis which omits the
methylene blue from the reagents. The responses of the sample with and without reagent addition are
determined. The difference between the two responses is used in Equations (3) and (4).
Samples with an MBAS index concentration > 5 mg/l shall be diluted before analysis.
4 Principle
The sample is mixed, in a continuously flowing stream, with an alkaline methylene blue solution, forming
coloured ion-pairs with certain types of organic substance (e.g. anionic surfactants) contained in the sample.
The ion-pairs are extracted with trichloromethane. The organic phase is treated with an acidic methylene blue
solution and its absorbance determined photometrically at a wavelength of 650 nm ± 10 nm.
The result is expressed in terms of sodium dodecyl sulfate concentration.
5 Reagents
Unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade.
Degas reagents if air bubbles appear spontaneously. Unless otherwise specified, degas by passing helium
gas at 20 l/h through the reagent for 15 min. Add detergent after degassing. Avoid using reagents showing
any turbidity, filtering them if necessary.
5.1 Water, complying with grade 1 as defined in ISO 3696.
5.2 Sodium hydroxide, NaOH.
5.3 Sodium tetraborate decahydrate, Na B O ·10H O.
2 4 7 2
5.4 Sodium dihydrogen phosphate monohydrate, NaH PO ·H O.
2 4 2
5.5 Potassium dihydrogen phosphate monohydrate, KH PO ·H O.
2 4 2
5.6 Sulfuric acid, H SO , ρ(H SO ) = 1,84 g/ml.
2 4 2 4
5.7 Hydrochloric acid, HCl, ρ(HCl) = 1,18 g/ml.
5.8 Methylene blue, C H N SCl·2H O.
16 18 3 2
5.9 Methanol, CH OH.
5.10 Ethanol, C H OH, w (C H OH) ≈ 96 %.
2 5 2 5
5.11 Trichloromethane, CHCl .
Trichloromethane is stable for 3 months if stored in a dark place.
2 © ISO 2009 – All rights reserved

Before use, degas the trichloromethane for 30 min by purging with a stream of He or by using an ultrasonic
bath.
5.12 Sodium dodecyl sulfate (sodium lauryl sulfate), CH (CH ) OSO Na.
3 2 11 3
5.13 Petroleum ether.
5.14 Poly(ethylene glycol) dodecyl ether, HO(CH CH O) C H , aqueous solution, w = 30 %.
2 2 n 12 25
5.15 Alkaline borate solution.
Dissolve 15,83 g of sodium tetraborate decahydrate (5.3) and 3,3 g of sodium hydroxide (5.2) in
approximately 800 ml of water (5.1) and make up to 1 000 ml with water (5.1) in a volumetric flask (6.2.1).
This solution is stable for one week if stored at room temperature.
5.16 Stock methylene blue solution.
Dissolve 0,35 g of methylene blue in 500 ml of ethanol (5.10) and make up to 1 000 ml with water (5.1) in a
volumetric flask (6.2.1).
This solution is stable for 6 months if stored at room temperature.
5.17 Alkaline methylene blue solution.
Add 100 ml of stock methylene blue solution (5.16) to 50 ml of alkaline borate solution (5.15) and mix. Wash
this mixture three times with 20 ml of trichloromethane (5.11) until the organic layer is no longer blue,
removing the organic layer each time. Extract the aqueous solution thus obtained with 25 ml of petroleum
ether (5.13) to remove the trichloromethane remaining in the solution. Filter through a paper filter (pore width
0,45 µm) and make up to 500 ml with water (5.1) in a volumetric flask (6.2.1).
Prepare this solution freshly before use.
5.18 Acidified methylene blue solution.
Add 6,8 ml of sulfuric acid (5.6) to 42,5 ml of stock methylene blue solution (5.16). Dissolve in this mixture
50 g of sodium dihydrogen phosphate monohydrate (5.4). Make up to a volume of 1 000 ml with water (5.1) in
a volumetric flask (6.2.1).
This solution is stable for one week if stored at room temperature.
5.19 Trichloromethane extraction solution (CHCl in Figure A.1).
Add 1 ml of poly(ethene glycol) dodecyl ether (5.14) to 1 000 ml of trichloromethane (5.11) and mix.
This solution is stable for one week if stored at room temperature.
5.20 Rinsing solution
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 16265
Première édition
2009-03-01
Qualité de l'eau — Mesurage de l'indice
des substances actives au bleu de
méthylène (SABM) — Méthode par
analyse en flux continu (CFA)
Water quality — Determination of the methylene blue active substances
(MBAS) index — Method using continuous flow analysis (CFA)

Numéro de référence
©
ISO 2009
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Publié en Suisse
ii © ISO 2009 – Tous droits réservés

Sommaire Page
Avant-propos. iv
Introduction . v
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives . 1
3 Interférences . 1
4 Principe. 2
5 Réactifs . 2
6 Appareillage . 5
7 Échantillonnage et prétraitement de l'échantillon. 5
8 Mode opératoire . 6
9 Calcul des résultats. 8
10 Expression des résultats . 8
11 Fidélité . 8
12 Rapport d'essai . 8
Annexe A (informative) Exemple de schéma de procédé pour le mesurage de l'indice SABM par
analyse en flux continu (CFA) . 10
Annexe B (informative) Données relatives à la fidélité. 11
Bibliographie . 12

Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 16265 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 147, Qualité de l'eau, sous-comité SC 2,
Méthodes physiques, chimiques et biochimiques.
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Introduction
Les méthodes d'analyse en flux automatisent les modes opératoires chimiques par voie humide et sont
particulièrement appropriées pour le traitement de nombreuses substances à analyser dans l'eau dans de
grandes séries d'échantillons à une fréquence d'analyse élevée (jusqu'à 100 échantillons par heure).
[1], [2] [3]
On distingue l'analyse avec injection de flux (FIA) , et l'analyse en flux continu (CFA) . Les deux
méthodes ont en commun le dosage automatique de l'échantillon dans un dispositif en flux (manifold) dans
lequel les substances à analyser dans l'échantillon réagissent avec les solutions de réactifs pendant
l'écoulement. La préparation de l'échantillon peut être intégrée dans le manifold. Le produit de réaction est
analysé dans un détecteur à flux (par exemple, un spectromètre). Le détecteur génère un signal à partir
duquel est calculée la concentration du paramètre.
L'indice SABM (substances actives au bleu de méthylène) est une convention d'analyse, un paramètre défini
par la méthode, utilisé à des fins de contrôle de la qualité de l'eau. Il mesure les agents de surface et d'autres
substances qui réagissent avec le bleu de méthylène dans des conditions spécifiées.
Il convient que l'utilisateur soit informé que des problèmes particuliers sont susceptibles de nécessiter la
spécification de conditions supplémentaires.

NORME INTERNATIONALE ISO 16265:2009(F)

Qualité de l'eau — Mesurage de l'indice des substances actives
au bleu de méthylène (SABM) — Méthode par analyse en flux
continu (CFA)
AVERTISSEMENT — Il convient que l'utilisateur de la présente Norme internationale soit familiarisé
avec les pratiques courantes de laboratoire. La présente Norme internationale n'a pas pour objet de
traiter tous les problèmes de sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son utilisation. Il incombe à
l'utilisateur d'établir des pratiques appropriées en matière d'hygiène et de sécurité, et de s'assurer de
la conformité à la réglementation nationale en vigueur.
IMPORTANT — Il est indispensable que les essais menés conformément à la présente Norme
internationale le soient par du personnel qualifié.
Il convient d'éliminer de manière appropriée les solutions usées de trichlorométhane et de méthanol.
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie un mode opératoire pour le mesurage de l'indice des substances
actives au bleu de méthylène (SABM), dans les plages de 0,05 mg/l à 0,5 mg/l et de 0,5 mg/l à 5,0 mg/l, dans
différents échantillons d'eau (par exemple, eau souterraine, eau potable, eaux de ruissellement, eau
résiduaire et percolats). Les agents de surface anioniques sont les substances les plus importantes
présentant une activité vis-à-vis du bleu de méthylène. Cette méthode est donc utile pour évaluer la teneur
des eaux en agents de surface anioniques [y compris les agents de surface anioniques contenant des
groupes carboxylates (par exemple, savons)]. D'autres types de substances peuvent également présenter
une activité vis-à-vis du bleu de méthylène et contribuer au résultat. Dans des cas particuliers, l'étendue de
l'analyse peut être modifiée et la méthode peut être utilisée pour d'autres plages de concentration à condition
qu'elles couvrent exactement une décade d'unités de concentration.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document normatif en référence (amendements y compris) s'applique.
ISO 648, Verrerie de laboratoire — Pipettes à un volume
ISO 1042, Verrerie de laboratoire — Fioles jaugées à un trait
ISO 3696, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d'essai
3 Interférences
Les substances suivantes peuvent perturber l'analyse:
⎯ Composés cationiques capables de former de fortes paires d'ions avec les substances actives vis-à-vis
du bleu de méthylène.
⎯ Acides humiques à des concentrations supérieures à 20 mg/l.
⎯ Produits chimiques ayant une activité de surface élevée (par exemple, agents de surface non actifs vis-à-
vis du bleu de méthylène, à des concentrations supérieures à 50 mg/l).
⎯ Produits chimiques ayant un fort potentiel réducteur pour l'oxydation du bleu de méthylène (par exemple
2− 2−
2− −
S , SO ; SO ; OCl ). Ces produits chimiques doivent être éliminés (par exemple avec H O ) avant
3 23 2 2
l'analyse.
⎯ Des concentrations élevées d'anions inorganiques (par exemple nitrate, chlorure, bromure) peuvent
induire une erreur positive.
⎯ Des produits chimiques qui réagissent avec l'un des réactifs utilisés pour former un composé coloré
soluble dans le trichlorométhane (CHCl ) (les substances actives vis-à-vis du bleu de méthylène sont
exclues).
Une filtration de l'échantillon avant l'analyse est recommandée pour les échantillons contenant des particules
dont la taille est supérieure à 100 µm. Sinon, les particules contenues dans l'échantillon peuvent obstruer les
tubes de circulation. Si une filtration s'avère nécessaire, des pertes significatives d'agents de surface
anioniques sont possibles par des effets d'adsorption.
L'absorbance due à la couleur de l'échantillon peut être corrigée par une analyse à blanc qui n'utilise pas le
bleu de méthylène dans les réactifs. Les réponses de l'échantillon sont déterminées avec et sans addition du
réactif. La différence entre les deux réponses est utilisée dans les Équations (3) et (4).
Les échantillons ayant une concentration d'indice SABM supérieure à 5 mg/l doivent être dilués avant
l'analyse.
4 Principe
Dans un courant vecteur à flux continu, l'échantillon est mélangé à une solution alcaline de bleu de méthylène
formant des paires d'ions colorées avec certains types de substances organiques (par exemple, agents de
surface anioniques) présentes dans l'échantillon. Les paires d'ions sont extraites au trichlorométhane. La
phase organique est traitée avec une solution acide de bleu de méthylène, puis son absorbance est mesurée
par spectrométrie à une longueur d'onde de 650 nm ± 10 nm.
Le résultat est exprimé en termes de concentration de dodécylsulfate de sodium.
5 Réactifs
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des produits chimiques de qualité analytique reconnue.
Dégazer les réactifs si des bulles d'air apparaissent spontanément. Sauf spécification contraire, dégazer en
circulant de l'hélium gazeux à 20 l/h dans le réactif pendant 15 min. Ajouter le détergent après le dégazage.
Éviter d'utiliser des réactifs présentant une turbidité en les filtrant si nécessaire.
5.1 Eau, de qualité 1 conformément à l'ISO 3696.
5.2 Hydroxyde de sodium, NaOH.
5.3 Tétraborate de sodium décahydraté, Na B O , 10H O.
2 4 7 2
5.4 Dihydrogénophosphate de sodium monohydraté, NaH PO , H O.
2 4 2
5.5 Dihydrogénophosphate de potassium monohydraté, KH PO , H O.
2 4 2
5.6 Acide sulfurique, H SO , ρ(H SO ) = 1,84 g/ml.
2 4 2 4
2 © ISO 2009 – Tous droits réservés

5.7 Acide chlorhydrique, HCl, ρ(HCl) = 1,18 g/ml.
5.8 Bleu de méthylène, C H N SCl, 2H O.
16 18 3 2
5.9 Méthanol, CH OH.
5.10 Éthanol, C H OH, w (C H OH) ≈ 96 %.
2 5 2 5
5.11 Trichlorométhane, CHCl .
Le trichlorométhane reste stable pendant 3 mois à condition d'être conservé à l'abri de la lumière.
Avant utilisation, dégazer le trichlorométhane pendant 30 min par une purge avec un courant de He ou à
l'aide d'un bain à ultrasons.
5.12 Dodécylsulfate de sodium (lauryl sulfate de sodium), CH (CH ) OSO Na.
3 2 11 3
5.13 Éther de pétrole.
5.14 Dodécyle éther de poly(éthylène glycol), HO(CH CH O) C H , solution aqueuse, w = 30 %.
2 2 n 12 25
5.15 Solution alcaline de borate.
Dans une fiole jaugée (6.2.1), dissoudre 15,83 g de tétraborate de sodium décahydraté (5.3) et 3,3 g
d'hydroxyde de sodium (5.2
...