ISO/TS 22113:2012

Milk and milk products — Determination of the titratable acidity of milk fat

ISO/TS 22113|IDF/RM 204:2012 specifies a routine method for determining the titratable acidity of milk fat. The method is applicable to milk fat obtained from: a) raw milk; b) heat-treated milk; c) milk reconstituted from milk powder; d) cream with any fat content, provided the product is diluted so as to obtain a mass fraction of between 4 % and 6 % fat. The method is not applicable to fermented milk or milk that has undergone bacterial or enzymatic damage.

Lait et produits laitiers — Détermination de l'acidité titrable de la matière grasse laitière

L'ISO/TS 22113|FIL/MR 204:2012 spécifie une méthode de routine pour déterminer l'acidité titrable de la matière grasse laitière. La méthode s'applique à la matière grasse laitière obtenue à partir de: a) lait cru; b) lait traité thermiquement; c) lait reconstitué à partir de poudre de lait; d) crème à différentes teneurs en matière grasse, à condition que le produit soit dilué de manière à obtenir une fraction massique de matière grasse comprise entre 4 % et 6 %. La méthode n'est pas applicable au lait fermenté ou au lait ayant subi une dégradation bactérienne ou enzymatique.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 02-Jul-2012
• ICS: 67.100.10 - Milk and processed milk products
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 23-Dec-2022

Standards Content (Sample)

TECHNICAL ISO/TS
SPECIFICATION 22113
IDF/RM
204
First edition
2012-07-01

Milk and milk products — Determination
of the titratable acidity of milk fat
Lait et produits laitiers — Détermination de l'acidité titrable de la matière
grasse laitière




Reference numbers
ISO/TS 22113:2012(E)
IDF/RM 204:2012(E)
©
ISO and IDF 2012

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IDF/RM 204:2012(E)

COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT


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All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
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IDF/RM 204:2012(E)
Contents Page
Foreword . iv
1  Scope . 1
2  Principle . 1
3  Reagents . 1
4  Apparatus . 3
5  Sampling . 4
6  Preparation of test samples . 4
6.1  Storage and preservation . 4
6.2  Pretreatment of test sample . 4
7  Procedure . 4
7.1  Separation of fat . 4
7.2  Titration . 5
8  Calculation and expression of results . 5
8.1  Calculation . 5
8.2  Expression of results . 6
9  Precision . 6
9.1  Interlaboratory test . 6
9.2  Repeatability . 6
10  Test report . 6
Annex A (informative) Models for the fat separation tubes . 7
Annex B (informative) Typical titration device for consecutive titration of several samples in one
volume of fat solvent . 8
Annex C (informative) Guidelines for the preparation and implementation of reference fat samples
for the follow-up of the titration procedure . 9
Annex D (informative) Interlaboratory trial . 13
Bibliography . 14

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IDF/RM 204:2012(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
In other circumstances, particularly when there is an urgent market requirement for such documents, a
technical committee may decide to publish other types of document:
— an ISO Publicly Available Specification (ISO/PAS) represents an agreement between technical experts in
an ISO working group and is accepted for publication if it is approved by more than 50 % of the members
of the parent committee casting a vote;
— an ISO Technical Specification (ISO/TS) represents an agreement between the members of a technical
committee and is accepted for publication if it is approved by 2/3 of the members of the committee casting
a vote.
An ISO/PAS or ISO/TS is reviewed after three years in order to decide whether it will be confirmed for a
further three years, revised to become an International Standard, or withdrawn. If the ISO/PAS or ISO/TS is
confirmed, it is reviewed again after a further three years, at which time it must either be transformed into an
International Standard or be withdrawn.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO/TS 22113|IDF/RM 204 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee
SC 5, Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by ISO
and IDF.
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IDF/RM 204:2012(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a non-profit organization representing the dairy sector worldwide.
IDF membership comprises National Committees in every member country as well as regional dairy
associations having signed a formal agreement on cooperation with IDF. All members of IDF have the right to
be represented on the IDF Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO in
the development of standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
The main task of Standing Committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the Standing Committees are circulated to the National Committees for endorsement prior to
publication as an International Standard. Publication as an International Standard requires approval by at least
50 % of IDF National Committees casting a vote.
In other circumstances, particularly when there is an urgent market requirement for such documents, a
Standing Committee may decide to publish an other type of normative document which is called by IDF:
Reviewed method. Such a method represents an agreement between the members of a Standing Committee
and is accepted for publication if it is approved by at least 50 % of the committee members casting a vote.
A Reviewed method is equal to an ISO/PAS or ISO/TS and will, therefore, also be published jointly under ISO
conditions.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO/TS 22113|IDF/RM 204 was prepared by the International Dairy Federation (IDF) and Technical
Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products. It is being published
jointly by IDF and ISO.
All work was carried out by Joint ISO-IDF Project Group (C01) on Determination of titratable acidity of fat (BDI
method) of the Standing Committee on Analytical Methods for Composition (SCAMC) under the aegis of its
project leader, P. Trossat (FR).

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ISO/TS 22113:2012(E)
TECHNICAL SPECIFICATION
IDF/RM 204:2012(E)

Milk and milk products — Determination of the titratable acidity
of milk fat
1 Scope
This Technical Specification specifies a routine method for determining the titratable acidity of milk fat.
The method is applicable to milk fat obtained from:
a) raw milk;
b) heat-treated milk;
c) milk reconstituted from milk powder;
d) cream with any fat content, provided the product is diluted so as to obtain a mass fraction of between 4 %
and 6 % fat.
The method is not applicable to fermented milk or milk that has undergone bacterial or enzymatic damage.
NOTE 1 The titration procedure can also be applied to fat separated from several other dairy products.
NOTE 2 This Technical Specification is designed for batches of test samples of between five and several hundred test
portions per day.
2 Principle
An amount of sample is thoroughly mixed with a solution containing sodium tetraphosphate and a surface-
active agent. The mixture is heated in a boiling water bath to obtain separation of fat. A known quantity of
extracted fat is dissolved in an organic solvent and titrated with alcoholic alkali.
3 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or demineralized
water or water of equivalent purity.
3.1 Phosphoric acid solution, c(H PO ) ≈ 1 mol/l.
3 4
1 )
3.2 BDI reagent. Dissolve 70 g of sodium tetraphosphate in about 700 ml distilled water without
additional warming and mix.

1) The acronym “BDI” stands for Bureaux of Dairy Industries; this organization first developed this method.
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IDF/RM 204:2012(E)
2 )
Add 30 g of octylphenylpoly(ethyleneglycol) and mix again. Adjust the pH to 6,6 with phosphoric acid
solution (3.1), if needed. Dilute to 1 l with water and mix. If necessary, readjust the pH with phosphoric acid
solution (3.1).
If stored in a refrigerator and in the dark, the BDI reagent is stable for 1 month.
NOTE Sodium tetraphosphate is a polyphosphate containing sodium tetraphosphate (NaPO ) as the main
3 4
component besides some other polyphosphates.
3.3 Thymol blue solution, c(C H O S)  0,1 g/l in propan-2-ol.
27 30 5
Dissolve 0,1 g sodium salt of thymol blue in 100 ml of propan-2-ol to prepare a stock solution. Directly before
use, dilute one volume of the stock solution with nine volumes of propan-2-ol.
3.4 Fat solvent solution. Mix one volume of thymol blue solution (3.3) with four volumes light petroleum
with a boiling range between 60 °C and 80 °C.
The fat solvent solution can be stored in the dark for up to 1 month.
3.5 Potassium hydrogen phthalate solution, c(KHC H O )  0,01 mol/l.
8 4 4
Dissolve 1,021 1 g of potassium hydrogen phthalate in a 500 ml one-mark volumetric flask (4.11). Dilute to the
500 ml mark with water and mix.
3.6 Tetra-n-butylammonium hydroxide solution, c(C H NO)  0,01 mol/l in a propan-2-ol and
16 37
methanol mixture.
Dilute one volume of tetra-n-butylammonium hydroxide, c[(C H ) NOH]  0,1 mol/l in a propan-2-ol and
4 9 4
methanol mixture, with nine volumes of propan-2-ol to obtain a final concentration of c(C H NO)  0,01 mol/l.
16 37
The concentration of the tetra-n-butylammonium hydroxide solution may change on storage and when being
transferred to the burette. For these reasons, determine the actual concentration of the solution to four
decimal places before use by titration against a standard solution of potassium hydrogen phthalate (3.5) using
the thymol blue solution (3.3) as indicator.
If the burette is fitted with a facility to exclude the entry of carbon dioxide, the concentration is stable for
1 month.
3.7 Pilot fat and reference fat.
3.7.1 Pilot fat. Melt some anhydrous milk fat (e.g. 1 000 g) having a fat acidity level of between
0,5 mmol/100 g and 1,0 mmol/100 g of fat. Divide the melted anhydrous milk fat sample into subsamples (e.g.
of 5 g each).
If stored in a freezer at 20 °C or below, the pilot fat subsamples can be kept for at least 2 years.
The pilot fat samples can be used for checking the reproducibility of the results obtained by the titration
procedure (7.2), either during a single work session or between work sessions over a long period of time
(several months to years).
3.7.2 Reference fat. Reference fat samples consist of milk fat of low fat acidity (basic fat) spiked with
increasing levels of palmitic acid (C ) within the range 0,5 mmol/100 g to 1,5 mmol/100 g per 100 g fat.
16

2) Triton X-100 is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the convenience
of users of this document, and does not constitute an endorsement by ISO and IDF of this product.
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IDF/RM 204:2012(E)
The accuracy of the titration procedure can be checked by using the regression Equation (1):
bb(C )  (1)
16
where
b(C ) is the amount of palmitic acid, expressed in mmol per 100 g fat, added to the basic fat;
16
b is the BDI value of the spiked samples decreased by the BDI value of the basic fat (blank).
The preparation and the guidelines for use of these reference fat samples are described in Annex C.
4 Apparatus
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
4.1 Delivery pipettes or syringes, capacities 10 ml, 25 ml, and 50 ml.
4.2 Fat separation tubes, consisting of a bulk vat surmounted by a narrow stem for collecting the small
quantity of fat extracted from the reagent mixture. The diameter of the stem shall be large enough to allow the
calibrated syringe (4.5) to take a fat sample. Models of fat separation tubes are given in Annex A.
[3]
Butyrometers according to ISO 3432|IDF 221 can also be used.
NOTE The fat separation is enhanced by centrifugation, especially in tubes with narrow stems.
4.3 Water bath, capable of maintaining a temperature of 45 °C  1°C.
4.4 Boiling water bath, capable of maintaining a temperature of > 95 °C.
4.5 Calibrated syringe, adjustable and capable of delivering a known quantity of milk fat of about 0,25 g at
45 °C, being accurate to 2 mg of milk fat.
NOTE From experience, transfer of a quantity of fat can be done accurately and conveniently by using a positive
displacement pipette.
4.6 Titration vessel, capacity of between 10 ml and 100 ml depending on the volumes of test samples to
be titrated in one titration run, provided with a stirring device.
4.7 Microburette, graduated in divisions of at least 0,002 ml.
4.8 Nitrogen supply, free of carbon dioxide.
4.9 Gas washbottle, containing light petroleum with a boiling range of 60 °C to 80 °C, connected to the
nitrogen supply (4.8) and the titration vessel (4.6).
4.10 Colorimeter, with dip-probe, suitable for measuring at a wavelength of between 600 nm and 620 nm,
connectable to the titration vessel (4.6).
[2]
4.11 One-mark volumetric flasks, capacities 100 ml to 500 ml, ISO 1042, class A.
NOTE 1 The titration vessel (4.6), the microburette (4.7) for delivering the non-aqueous titrant tetra-n-butylammonium
hydroxide (3.6), the nitrogen supply (4.8) through a gas washbottle (4.9) and the dip-probe connected to the colorimeter
(4.10) are assembled in a typical device (see Annex B) for consecutive titration of several samples in one and the same
volume of fat solvent.
NOTE 2 A simpler device for manual titration and visual determination of the endpoint of titration can be set up without
a colorimeter with dip-probe.
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5 Sampling
Sampling is not part of the method specified in this Technical Specification. A recommended sampling method
[1]
is given in ISO 707|IDF 50.
It is important the laboratory receive a truly representative sample which has not been damaged or changed
during transport or storage.
6 Preparation of test samples
6.1 Storage and preservation
The milk or cream test samples shall have been stored and transported at 0 °C to 4 °C (milk powder can be
stored at ambient temperature) and be analysed within 36 h.
For prolonged storage or storage in a r
...

SPÉCIFICATION ISO/TS
TECHNIQUE 22113
FIL/MR
204
Première édition
2012-07-01


Lait et produits laitiers — Détermination
de l'acidité titrable de la matière grasse
laitière
Milk and milk products — Determination of the titratable acidity of milk
fat




Numéros de référence
ISO/TS 22113:2012(F)
FIL/MR 204:2012(F)
©
ISO et FIL 2012

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ISO/TS 22113:2012(F)
FIL/MR 204:2012(F)

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT


©  ISO et FIL 2012
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quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
soit de l'ISO soit de la FIL, à l'une ou l'autre des adresses ci-après.
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Publié en Suisse

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ISO/TS 22113:2012(F)
FIL/MR 204:2012(F)
Sommaire Page
Avant-propos . iv
1  Domaine d'application . 1
2  Principe . 1
3  Réactifs . 1
4  Appareillage . 3
5  Échantillonnage . 4
6  Préparation des échantillons pour essai . 4
6.1  Stockage et conservation . 4
6.2  Prétraitement de l’échantillon pour essai . 4
7  Mode opératoire . 5
7.1  Séparation de la matière grasse . 5
7.2  Titrage . 5
8  Calcul et expression des résultats . 6
8.1  Calcul . 6
8.2  Expression des résultats . 6
9  Fidélité . 6
9.1  Essai interlaboratoires . 6
9.2  Répétabilité . 6
10  Rapport d’essai . 7
Annexe A (informative) Modèles de tubes d'extraction de la matière grasse . 8
Annexe B (informative) Dispositif de titrage type pour le titrage consécutif de plusieurs
échantillons dans un même volume de solvant de matière grasse . 9
Annexe C (informative) Lignes directrices pour la préparation et l'utilisation d'échantillons
de matière grasse de référence en vue du suivi du mode opératoire de titrage . 10
Annexe D (informative) Essai interlaboratoires . 14
Bibliographie . 15

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ISO/TS 22113:2012(F)
FIL/MR 204:2012(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
Dans d'autres circonstances, en particulier lorsqu'il existe une demande urgente du marché, un comité
technique peut décider de publier d'autres types de documents:
— une Spécification publiquement disponible ISO (ISO/PAS) représente un accord entre les experts dans
un groupe de travail ISO et est acceptée pour publication si elle est approuvée par plus de 50 % des
membres votants du comité dont relève le groupe de travail;
— une Spécification technique ISO (ISO/TS) représente un accord entre les membres d'un comité technique
et est acceptée pour publication si elle est approuvée par 2/3 des membres votants du comité.
Une ISO/PAS ou ISO/TS fait l'objet d'un examen après trois ans afin de décider si elle est confirmée pour trois
nouvelles années, révisée pour devenir une Norme internationale, ou annulée. Lorsqu'une ISO/PAS ou
ISO/TS a été confirmée, elle fait l'objet d'un nouvel examen après trois ans qui décidera soit de sa
transformation en Norme internationale soit de son annulation.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO/TS 22113FIL/MR 204 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires,
sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération Internationale du Lait (FIL). Elle est publiée
conjointement par l'ISO et la FIL.

iv © ISO et FIL 2012 – Tous droits réservés

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ISO/TS 22113:2012(F)
FIL/MR 204:2012(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération Internationale du Lait) est une organisation sans but lucratif représentant le secteur
laitier mondial. Les membres de la FIL se composent des Comités Nationaux dans chaque pays membre et
des associations laitières régionales avec lesquelles la FIL a signé des accords de coopération. Tout membre
de la FIL a le droit de faire partie des Comités permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux
techniques. La FIL collabore avec l'ISO pour l'élaboration de méthodes normalisées d'analyse et
d'échantillonnage pour le lait et les produits laitiers.
La tâche principale des Comités permanents est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de
Normes internationales adoptés par les Comités permanents sont soumis aux Comités Nationaux pour
approbation avant publication en tant que Norme internationale. La publication comme Norme internationale
requiert l'approbation de 50 % au moins des Comités Nationaux de la FIL votants.
Dans d'autres circonstances, particulièrement quand une demande urgente du marché survient pour de tels
documents, un Comité permanent peut décider de publier un autre type de document à valeur de norme que
la FIL appelle Méthode révisée. Une telle méthode illustre un consensus entre les membres d'un Comité
permanent et est acceptée pour publication si elle est approuvée par au moins 50 % des Comités Nationaux
émettant un vote. Une Méthode révisée est équivalente à une ISO/PAS ou à une ISO/TS et sera donc aussi
publiée conjointement selon les conditions ISO.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO/TS 22113FIL/MR 204 a été élaborée par la Fédération Internationale du Lait (FIL) et le comité
technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers. Elle est publiée
conjointement par la FIL et l'ISO.
L'ensemble des travaux a été confié au Groupe de projet mixte ISO-FIL (C01) sur la Détermination de l'acidité
titrable de la matière grasse (méthode BDI) du Comité permanent chargé des Méthodes d'analyse de la
composition (SCAMC), sous la conduite de son chef de projet, P. Trossat (FR).

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SPÉCIFICATION TECHNIQUE
FIL/MR 204:2012(F)

Lait et produits laitiers — Détermination de l'acidité titrable de
la matière grasse laitière
1 Domaine d'application
La présente Spécification technique spécifie une méthode de routine pour déterminer l'acidité titrable de la
matière grasse laitière.
La méthode s'applique à la matière grasse laitière obtenue à partir de:
a) lait cru;
b) lait traité thermiquement;
c) lait reconstitué à partir de poudre de lait;
d) crème à différentes teneurs en matière grasse, à condition que le produit soit dilué de manière à obtenir
une fraction massique de matière grasse comprise entre 4 % et 6 %.
La méthode n'est pas applicable au lait fermenté ou au lait ayant subi une dégradation bactérienne ou
enzymatique.
NOTE 1 Le mode opératoire de titrage peut également être appliqué à de la matière grasse séparée provenant de
plusieurs autres produits laitiers.
NOTE 2 La présente Spécification technique est conçue pour des lots d'échantillons pour essai allant de cinq à
plusieurs centaines de prises d’essai par jour.
2 Principe
Une quantité d'échantillon est mélangée soigneusement avec une solution contenant du tétraphosphate de
sodium et un agent tensioactif. Le mélange est chauffé dans un bain d'eau bouillante pour obtenir la
séparation de la matière grasse. Une quantité connue de matière grasse extraite est dissoute dans un solvant
organique et titrée avec un alcali alcoolique.
3 Réactifs
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l'eau distillée
ou déminéralisée ou de l'eau de pureté équivalente.
3.1 Solution d'acide phosphorique, c(H PO ) ≈ 1 mol/l.
3 4
1)
3.2 Réactif BDI . Dissoudre 70 g de tétraphosphate de sodium dans environ 700 ml d'eau distillée sans
chauffage supplémentaire et mélanger.

1) L'acronyme «BDI» désigne le Bureau des industries laitières, l'organisation qui a mis au point cette méthode.
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FIL/MR 204:2012(F)
2)
Ajouter 30 g de d’éther de polyéthylèneglycol et d'octylphénol et mélanger de nouveau. Ajuster le pH à 6,6
avec la solution d'acide phosphorique (3.1), si nécessaire. Compléter à 1 l avec de l’eau et homogénéiser. Si
nécessaire, réajuster le pH avec la solution d'acide phosphorique (3.1).
Si le réactif BDI est conservé au réfrigérateur et à l'abri de la lumière, il reste stable pendant 1 mois.
NOTE Le tétraphosphate de sodium est un polyphosphate contenant du tétraphosphate de sodium (NaPO ) comme
3 4
constituant principal parmi plusieurs autres polyphosphates.
3.3 Solution de bleu de thymol, c(C H O S)  0,1 g/l dans du propanol-2.
27 30 5
Dissoudre 0,1 g de sel de sodium de bleu de thymol dans 100 ml de propanol-2 pour préparer une solution
mère. Juste avant utilisation, diluer un volume de cette solution mère avec neuf volumes de propanol-2.
3.4 Solution de solvant de matière grasse. Mélanger un volume de la solution de bleu de thymol (3.3)
avec quatre volumes d'éther de pétrole ayant une température d'ébullition comprise entre 60 °C et 80 °C.
La solution de solvant de matière grasse peut être conservée à l'abri de la lumière, pendant 1 mois au
maximum.
3.5 Solution d'hydrogénophtalate de potassium, c(KHC H O )  0,01 mol/l.
8 4 4
Dissoudre 1,021 1 g d'hydrogénophtalate de potassium dans une fiole jaugée à un trait de 500 ml (4.11).
Compléter à 500 ml avec de l’eau et mélanger.
3.6 Solution d’hydroxyde de tétra-n-butylammonium, c(C H NO)  0,01 mol/l dans un mélange de
16 37
propanol-2 et de méthanol.
Diluer un volume d'hydroxyde de tétra-n-butylammonium, c[(C H ) NOH]  0,1 mol/l dans un mélange de
4 9 4
propanol-2 et de méthanol avec neuf volumes de propanol-2 pour obtenir une concentration finale de
c(C H NO)  0,01 mol/l.
16 37
La concentration de la solution d'hydroxyde de tétra-n-butylammonium peut changer en cours de stockage et
lors du transfert dans la burette. Pour ces raisons, déterminer la concentration réelle de la solution avec
quatre décimales avant utilisation, par titrage par rapport à une solution étalon d'hydrogénophtalate de
potassium (3.5), en utilisant la solution de bleu de thymol (3.3) comme indicateur.
Si la burette est munie d'un dispositif permettant d'exclure toute pénétration de dioxyde de carbone, la
concentration reste stable pendant 1 mois.
3.7 Matière grasse témoin et matière grasse de référence.
3.7.1 Matière grasse témoin. Faire fondre de la matière grasse laitière anhydre (par exemple 1 000 g),
ayant un niveau d'acidité compris entre 0,5 mmol/100 g et 1,0 mmol/100 g de matière grasse. Diviser
l'échantillon de matière grasse laitière anhydre fondu en sous-échantillons (par exemple de 5 g chacun).
Si les sous-échantillons de matière grasse témoin sont conservés au congélateur à 20 °C ou moins, ils
peuvent être conservés pendant au moins 2 ans.
Les échantillons de matière grasse témoin peuvent être utilisés pour vérifier la reproductibilité des résultats
obtenus par le mode opératoire de titrage (7.2), soit pendant une seule séance de travail, soit lors de
plusieurs séances de travail sur une longue durée (de plusieurs mois à plusieurs années).

2) Triton X-100 est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l'intention
des utilisateurs du présent document et ne signifie nullement que l'ISO ou la FIL approuvent ou recommandent l'emploi
exclusif du produit ainsi désigné.
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ISO/TS 22113:2012(F)
FIL/MR 204:2012(F)
3.7.2 Matière grasse de référence. Les échantillons de matière grasse de référence sont composés de
matière grasse laitière de faible acidité (matière grasse de base) supplémentée avec des quantités
croissantes d'acide palmitique (C ), à une concentration comprise entre 0,5 mmol/100 g et 1,5 mmol/100 g
16
de matière grasse.
L'exactitude du mode opératoire de titrage peut être vérifiée à l'aide de l'Équation (1) de régression:
bb(C )  (1)
16
où
b(C ) est la quantité d'acide palmitique, exprimée en mmol par 100 g de matière grasse, ajoutée à la
16
matière grasse de base;
b est la valeur BDI des échantillons supplémentés diminuée de la valeur BDI de la matière grasse
de base (témoin).
L'Annexe C décrit la préparation de ces échantillons de matière grasse de référence et donne des lignes
directrices concernant leur utilisation.
4 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
4.1 Pipettes graduées ou seringues, ayant une capacité de 10 ml, 25 ml et 50 ml.
4.2 Tubes d'extraction de la matière grasse, constitués d'une chambre surmontée par une tige étroite
visant à recueillir la petite quantité de matière grasse extraite du mélange réactif. Le diamètre de la tige doit
être suffisant pour permettre l'utilisation de la seringue calibrée (4.5) en vue de prélever un échantillon de
matière grasse. Des modèles de tubes d'extraction de la matière grasse sont représentés à l'Annexe A. Il est
[3]
également possible d'utiliser des butyromètres conformes à l'ISO 3432|FIL 221 .
NOTE La séparation de la matière grasse est améliorée par une centrifugation, notamment dans les tubes à tige
étroite.
4.3 Bain d'eau, permettant de maintenir une température de 45 °C ± 1 °C.
4.4 Bain d’eau bouillante, permettant de maintenir une température supérieure ou égale à 95 °C.
4.5 Seringue calibrée, ajustable et pouvant délivrer une quantité connue de matière grasse laitière
d'environ 0,25 g à 45 °C, avec une précision de 2 mg.
NOTE L'expérience montre que le transfert d'une quantité de matière grasse peut se faire avec exactitude et
facilement à l'aide d'une pipette à déplacement positif.
4.6 Récipient de titrage, de capacité comprise entre 10 ml et 100 ml selon le volume des échantillons pour
essai à titrer pendant une opération de titrage, pourvu d'un dispositif d'agitation.
4.7 Microburette, graduée en divisions d'au moins 0,002 ml.
4.8 Alimentation en azote, exempte de dioxyde de carbone.
4.9 Flacon laveur, contenant de l'éther de pétrole ayant un intervalle d'ébullition compris entre 60 °C et
80 °C, relié à l'alimentation en azote (4.8) et au récipient de titrage (4.6).
4.10 Colorimètre, équipé d'une sonde optique permettant d'effectuer des mesurages à une longueur d'onde
comprise entre 600 nm et 620 nm, pouvant être raccordé au récipient de titrage (4.6).
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[2]
4.11 Fioles jaugées à un trait, de 100 ml à 500 ml de capacité, ISO 1042 , classe A.
NOTE 1 Le récipient de titrage (4.6), la microburette (4.7) destinée à délivrer la solution titrante non aqueuse
d'hydroxyde de tétra-n-butylammonium (3.6), l'alimentation en azote (4.8) passant à travers un flacon laveur (4.9) et la
sonde optique reliée au colorimètre (4.10) sont assemblés de façon à former un dispositif type (voir l'Annexe B) pour
réaliser le titrage consécutif de plusieurs échantillons, dans un même volume de solvant de matière grasse.
NOTE 2 Un dispositif plus simple permettant d'effectuer un titrage manuel et de déterminer visuellement le point final
de titrage peut être assemblé sans sonde optique.
5 Échantillonnage
L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente Spécification technique. Une
[1]
méthode d’échantillonnage recommandée est indiquée dans l’ISO 707|FIL 50 .
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon représentatif, n’ayant été ni endommagé, ni modifié
pendant le transport ou le stockage.
6 Préparation des échantillons pour essai
6.1 Stockage et conservation
Les échantillons pour essai de lait ou de crème doivent avoir été stockés et transportés entre 0 °C et 4 °C (la
poudre de lait peut être stockée à température ambiante) et ils doivent être analysés dans les 36 h.
Pour un stockage prolongé ou un stockage au réfrigérateur à environ 5 °C, il est recommandé de conserver
les échantillons pour essai au moyen de peroxyde d'hydrogène à une concentration finale de 0,2 g/l de H O .
2 2
Dans ce cas, les échantillons peuvent être stockés pendant 4 jours.
6.2 Prétraitement de l’échantillon pour essai
6.2.1 Échantillon de lait
Mélanger doucement en retournant plusieurs fois le récipient contenant l'échantillon pour essai sans
augmenter la température
...