ISO 10540-1:2003
(Main)Animal and vegetable fats and oils — Determination of phosphorus content — Part 1: Colorimetric method
Animal and vegetable fats and oils — Determination of phosphorus content — Part 1: Colorimetric method
ISO 10540-1:2003 specifies a colorimetric method for the determination of the phosphorus content of animal and vegetable oils and fats. This method is not suitable for determining the phosphorus content of commercial lecithin as this requires an ashing temperature of 800 degrees Celsius.
Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination de la teneur en phosphore — Partie 1: Méthode colorimétrique
L'ISO 10540-1:2003 spécifie une méthode colorimétrique pour la détermination de la teneur en phosphore des corps gras d'origines animale et végétale. Cette méthode ne convient pas pour la détermination de la teneur en phosphore de la lécithine commerciale, étant donné que celle-ci nécessite une température de calcination de 800 °C.
General Information
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 10540-1
First edition
2003-02-01
Animal and vegetable fats and oils —
Determination of phosphorus content —
Part 1:
Colorimetric method
Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination de la teneur
en phosphore —
Partie 1: Méthode colorimétrique
Reference number
©
ISO 2003
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Foreword
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committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards adopted
by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent rights.
ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 10540-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11, Animal and
vegetable fats and oils.
ISO 10540 consists of the following parts, under the general title Animal and vegetable fats and oils —
Determination of phosphorus content:
Part 1: Colorimetric method
Part 2: Method using graphite furnace atomic absorption spectrometry
Part 3: Method using inductively coupled plasma (ICP) optical emission spectroscopy
INTERNATIONAL STANDARD ISO 10540-1:2003(E)
Animal and vegetable fats and oils — Determination of
phosphorus content —
Part 1:
Colorimetric method
1 Scope
This part of ISO 10540 specifies a colorimetric method for the determination of the phosphorus content of
animal and vegetable oils and fats.
This method is not suitable for determining the phosphorus content of commercial lecithin as this requires an
ashing temperature of 800 °C.
2 Principle
The test portion is charred (carbonized) in the presence of magnesium hydroxycarbonate and then ashed.
The ash is dissolved in dilute hydrochloric acid. The phosphorus content is then determined colorimetrically by
the molybdenum blue method.
3 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise stated.
3.1 Magnesium hydroxycarbonate, [(MgCO ) ·Mg(OH) ]·H O, with a magnesium oxide content of
3 n 2 2
between 40 % and 46 % (by mass).
Magnesium carbonate, hydrated, basic, [(MgCO ) ·Mg(OH) ]·5H O, is suitable.
3 4 2 2
3.2 Hydrochloric acid, c(HCl) = 2 mol/l.
3.3 Sodium hydroxide solution, c(NaOH) = 5mol/l.
3.4 Reducing solution.
Weigh out 0,500 g of p-methylaminophenol sulfate [(HOC H NHCH ) ·H SO ], 2,5 g of sodium sulfite
6 4 3 2 2 4
heptahydrate (Na SO ·7H O) and 58,5g of sodium metabisulfite (Na S O ).
2 3 2 2 2 5
Transfer the weighed materials to a 1 litre volumetric flask. Dissolve in water, then dilute to the mark and mix.
Keep the solution in a well-sealed brown bottle.
3.5 Sulfate/molybdate reagent.
Dissolve 25,0 g of ammonium molybdate tetrahydrate [(NH ) Mo O ·4H O] in 250 ml of 5 mol/l sulfuric acid
4 6 7 24 2
[prepared by diluting 278 ml of concentrated (18 mol/l) sulfuric acid to 1 litre with water]. Transfer the solution
to a 1 litre volumetric flask. Dilute to the mark with water, and mix. Store the solution in a brown bottle.
WARNING Care must be taken when diluting concentrated sulfuric acid.
3.6 Sodium acetate solution.
Dissolve 340 g of sodium acetate trihydrate (CH COONa·3H O) in water. Transfer to a 1 litre volumetric flask.
3 2
Dilute to the mark with water, and mix. Store the solution in a brown bottle.
3.7 Standard phosphate solution for calibration.
3.7.1 Stock solution (phosphorus content ca. 100 µg/ml).
Weigh, to the nearest 0,1 mg, about 440 mg of potassium dihydrogen phosphate (KH PO ). Dissolve it in
2 4
water and transfer quantitatively to a 1 litre volumetric flask. Dilute to the mark with water, and mix. Calculate
the phosphorus content of the solution by the formula:
mM⋅
sP
ρ =
VM⋅
s
where
ρ is the phosphorus content of the stock solution, in micrograms per millilitre;
m is the mass of potassium dihydrogen phosphate, in milligrams;
s
M is the molar mass of phosphorus, in grams (M = 31,03 g);
P P
V is the volume of stock solution in the flask, in litres (V = 1);
M is the molar mass of potassium dihydrogen phosphate, in grams (M = 136,09 g).
s s
3.7.2 Standard phosphate solution 1 (phosphorus content ca. 10 µg/ml).
Pipette 25 ml of stock solution (3.7.1) into a 250 ml volumetric flask. Dilute to the mark with water, and mix.
Calculate the phosphorus content of this solution by the formula:
ρ = 0,1 ρ
s1
where
ρ is the phosphorus content of the standard phosphate solution 1, in micrograms per millilitre;
s1
ρ is the phosphorus content of the stock solution (3.7.1), in micrograms per millilitre.
3.7.3 Standard phosphate solution 2 (phosphorus content ca. 50 µg/ml).
Pipette 50 ml of stock solution (3.7.1) into a 100 ml volumetric flask. Dilute to the mark with water, and mix.
Calculate the phosphorus content of this solution by the formula:
ρ = 0,5 ρ
s2
where
ρ is the phosphorus content of the standard phosphate solution 2, in micrograms per millilitre;
s2
ρ is the phosphorus content of the stock solution (3.7.1), in micrograms per millilitre.
2 © ISO 2003 — All rights reserved
4 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
4.1 Test tubes, of 25 ml capacity, made of borosilicate glass, with stoppers and standard tapered necks,
and graduated at 5 ml intervals or less. The reproducibility of the 15 ml graduation should be checked, as well
as the resistance of the calibration marks to heating at 550 °C.
4.2 Block or muffle furnace, thermostatically controlled for temperatures up to 400 °C.
4.3 Ashing oven or muffle furnace, suitable for temperatures up to 700 °C.
4.4 Tube rack, resistant to high temperatures, preferably of corrosion-resistant steel, for use in the muffle
furnace. The rack should hold the tubes at such an angle that the open ends are about 3 cm above the bottom
of the tubes.
4.5 Spectrophotometer, suitable for measurements at 720 nm, using 1 cm and 4 cm cells.
4.6 Spectrophotometer cells, of path length 1 cm and 4 cm, and suitable for measurements at 720 nm.
5 Sampling
It is important that the laboratory receive a sample which is truly representative and has not been damaged or
changed during transport or storage.
Sampling is not a part of the method specified in this part of ISO 10540. A recommended sampling method is
given in ISO 5555.
Store samples in glass or poly(ethylene terephthalate) (PET) bottles.
6 Preparation of test sample
If the sample is not completely liquid at room temperature, heat it to a maximum of 10 °C above the melting
point. If the sample is not clear when liquid, homogenize it carefully immediately before weighing out the test
portions. It is essential that any sediment, which may be rich in phosphorus, is incorporated homogeneously
into the sample.
7 Procedure
7.1 Determination of the calibration factor
7.1.1 For phosphorus contents of 0 mg/kg to 125 mg/kg (in the oil)
Weigh 30 mg of magnesium hydroxycarbonate (3.1) into each of a series of seven test tubes (4.1). Using a
microburette or pipette, add to the test tubes: 0 ml (blank); 0,25 ml; 0,5 ml; 1,0 ml; 1,5 ml; 2,0 ml; and 2,5 ml of
standard phosphate solution 1 (3.7.2). The test tubes will contain quantities of phosphorus ranging from 0 µg
to ca. 25 µg, equivalent to the amount of phosphorus in 0,2 g of an oil containing between 0 mg/kg to about
125 mg/kg of phosphorus.
NOTE The absorbance of the highest standard, containing 2,5 ml of standard phosphate solution 1 (under these
conditions) should be approximately 0,8.
Add 2 ml of hydrochloric acid (3.2) to each test tube and wait until a clear solution is obtained. Then add
0,5 ml of sodium hydroxide solution (3.3) to each test tube and mix.
Using a pipette or burette, add 5 ml of reducing solution (3.4) to each test tube and mix.
In a similar manner, add 2,5 ml of sulfate/molybdate reagent (3.5) to each test tube, and mix. Stopper the
tubes and let them stand for 20 min in a dark place.
Fill the test tubes to the 15 ml mark with sodium acetate solution (3.6), and mix.
Measure the absorbance of the solutions against the blank, in a 4 cm cell, at 720 nm.
Alternatively, measure the absorbance of all the solutions against water, as a check on the blank, and then,
unless the equation of a regression line is to be computed, correct all the measurements for the blank value.
Calculate the calibration factor in accordance with 7.1.3. Alternatively, compute the equation of the regression
line for the calibration (see 7.1.3.2).
7.1.2 For phosphorus contents of 125 mg/kg to 500 mg/kg (in the oil)
Weigh 30 mg of magnesium hydroxycarbonate (3.1) into each of a series of six test tubes. Using a
microburette or pipette, add to the test tubes: 0 ml (blank); 0,5 ml; 0,8 ml; 1,2 ml; 1,6 ml; and 2,0 ml of
standard phosphate solution 2 (3.7.3). The test tubes will contain quantities of phosphorus ranging from about
25 µg to 100 µg, equivalent to phosphorus contents of about 125 mg/kg to 500 mg/kg in the oil. The
absorbance of the highest standard, in a 1 cm cell, should be approximately 0,8.
Add 2 ml of hydrochloric acid (3.2) to each test tube and wait until a clear solution is obtained. Then add
0,6 ml of sodium hydroxide solution (3.3) to each test tube, and mix.
Using a pipette or burette, add 5 ml of reducing solution (3.4) to each test tube, and mix.
In a similar manner, add 2,5 ml of sulfate/molybdate reagent (3.5) to each test tube, and mix. Stopper the test
tubes and let them stand for 20 min in a dark place.
Fill the test tubes to the 15 ml mark with sodium acetate solution (3.6), and mix.
Measure the absorbance of the solutions against the blank, in a 1 cm cell, at 720 nm.
Alternatively, measure the absorbance of all the solutions against water, as a check on the blank, and then,
unless the equation of a regression line is to be computed, correct all the measurements for the blank value.
Calculate the calibration factor in accordance with 7.1.3. Alternatively, compute the equation of the regression
line for the calibration (see 7.1.3.2).
7.1.3 Calculation of the calibration factor
7.1.3.1 For each solution i of the series measured according to 7.1.1 and 7.1.2, calculate the calibration
factor using the formula:
V ⋅ ρ
i S
f =
i
A
i
where
f is the calibration factor for solution i of the series, in micrograms;
i
V is the volume of standard phosphate solution in solution i, in millilitres;
i
ρ is the phosphorus content of the phosphate solution used, in micrograms per millilitre;
S
A is the absorbance measured for solution i.
i
4 © ISO 2003 — All rights reserved
Use the average of the factors f as the calibration factor f for the calculation in Clause 8.
i
7.1.3.2 Alternatively, compute the equation of a regression line from all the optical density values
measured against water, uncorrected for the blank value. The phosphorus content of the sample solution can
then be calculated from this equation.
7.2 Ashing of oil sample
7.2.1 Weigh approximately 30 mg of magnesium hydroxycarbonate (3.1) into a test tube (4.1) and weigh
the test tube, with the magnesium hydroxycarbonate, to the nearest 0,1 mg.
Using a Pasteur pipette, add approximately 0,2 g (10 to 15 drops) of the oil sample (Clause 6), taking care
that all the sample material falls to the bottom of the tube and mixes with the magnesium hydroxycarbonate.
No drops should be allowed to fall or splash onto the side walls of the test tube.
Reweigh the test tube to the nearest 0,1 mg.
Prepare a blank test tube containing magnesium hydroxycarbonate only.
7.2.2 Place the test tubes in the heating block or in the tube rack (4.4) in the cold muffle furnace (4.2). Heat
the test tubes to 350 °C until the sample is carbonized to a dry black mass (1 h to 2 h).
After carbonization, increase the temperature to 550 °C and heat the sample at this temperature until the ash
is completely white (about 2 h).
Remove the test tubes (and tube rack) and allow the test tubes to cool.
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 10540-1
Première édition
2003-02-01
Corps gras d'origines animale et
végétale — Détermination de la teneur
en phosphore —
Partie 1:
Méthode colorimétrique
Animal and vegetable fats and oils — Determination of phosphorus
content —
Part 1: Colorimetric method
Numéro de référence
©
ISO 2003
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Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 10540-1 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 11,
Corps gras d'origines animale et végétale.
L'ISO 10540 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Corps gras d'origines animale et
végétale — Détermination de la teneur en phosphore:
Partie 1: Méthode colorimétrique
Partie 2: Méthode par spectrométrie d’absorption atomique avec four en graphite
Partie 3: Méthode par spectrométrie d’émission optique avec plasma induit par haute fréquence
NORME INTERNATIONALE ISO 10540-1:2003(F)
Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination de
la teneur en phosphore —
Partie 1:
Méthode colorimétrique
1 Domaine d'application
La présente partie de l’ISO 10540 spécifie une méthode colorimétrique pour la détermination de la teneur en
phosphore des corps gras d'origines animale et végétale.
Cette méthode ne convient pas pour la détermination de la teneur en phosphore de la lécithine commerciale,
étant donné que celle-ci nécessite une température de calcination de 800 °C.
2 Principe
La prise d'essai est brûlée (carbonisée) en présence d'hydroxycarbonate de magnésium, puis réduite en
cendres. Les cendres sont dissoutes dans de l'acide chlorhydrique dilué, puis la détermination de la teneur en
phosphore s'effectue par colorimétrie selon la méthode au bleu de molybdène.
3 Réactifs
Sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
3.1 Hydroxycarbonate de magnésium [(MgCO ) ·Mg(OH) ],H O, ayant une teneur en MgO comprise
3 n 2 2
entre 40 % et 46 % (en masse).
Du carbonate de magnésium hydraté, basique [(MgCO ) ·Mg(OH) ],5H O convient.
3 4 2 2
3.2 Acide chlorhydrique, c(HCl) = 2 mol/l.
3.3 Solution d'hydroxyde de sodium, c(NaOH) = 5 mol/l.
3.4 Solution réductrice.
Peser 0,500 g de sulfate de p-méthylaminophénol [(HOC H NHCH ) ·H SO ], 2,5 g de sulfite de sodium
6 4 3 2 2 4
heptahydraté (Na SO ,7H O) et 58,5 g de métabisulfite de sodium (Na S O ).
2 3 2 2 2 5
Transvaser les matériaux pesés dans une fiole jaugée de 1 l, dissoudre dans de l'eau, compléter au repère et
homogénéiser. Conserver la solution dans un flacon brun bien fermé.
3.5 Réactif molybdique.
Dissoudre 25,0 g de molybdate d'ammonium tétrahydraté [(NH ) Mo O ,4H O] dans 250 ml de solution
4 6 7 24 2
d'acide sulfurique [préparée en diluant 278 ml d'acide sulfurique concentré (18 mol/l) avec de l'eau pour
obtenir 1 l]. Transvaser la solution dans une fiole jaugée de 1 l, compléter au repère avec de l’eau et
homogénéiser. Conserver la solution dans un flacon brun.
AVERTISSEMENT — Il faut prendre des précautions lors de la dilution d’acide sulfurique concentré.
3.6 Solution d'acétate de sodium.
Dissoudre 340 g d'acétate de sodium trihydraté (CH COONa,3H O) dans de l'eau. Transvaser dans une fiole
3 2
jaugée de 1 l, compléter au repère avec de l'eau et homogénéiser. Conserver la solution dans un flacon brun.
3.7 Solution étalon de phosphate pour étalonnage.
3.7.1 Solution mère (teneur en phosphore d'environ 100 µg/ml).
Peser, à 0,1 mg près, environ 440 mg de dihydrogénophosphate de potassium (KH PO ). Le dissoudre dans
2 4
de l'eau et le transvaser quantitativement dans une fiole jaugée de 1 l. Compléter au repère avec de l'eau et
homogénéiser. Calculer la teneur en phosphore de la solution à l’aide de la formule suivante:
mM×
sP
ρ =
VM×
s
où
r est la teneur en phosphore de la solution mère, en microgrammes par millilitre;
m est la masse du dihydrogénophosphate de potassium, en milligrammes;
s
M est la masse molaire du phosphore, en grammes (M = 31,03 g);
P P
V est le volume de la solution mère dans la fiole, en litres (V = 1);
M est la masse molaire du dihydrogénophosphate de potassium, en grammes (M = 136,09 g).
s s
3.7.2 Solution étalon 1 de phosphate (teneur en phosphore d'environ 10 µg/ml).
À l'aide d'une pipette, introduire 25 ml de solution mère (3.7.1) dans une fiole jaugée de 250 ml. Compléter au
repère avec de l'eau et homogénéiser. Calculer la teneur en phosphore de cette solution à l’aide de la formule
suivante:
ρ =×0,1 ρ
s1
où
r est la teneur en phosphore de la solution étalon 1 de phosphate, en microgrammes par millilitre;
s1
r est la teneur en phosphore de la solution mère (3.7.1), en microgrammes par millilitre.
3.7.3 Solution étalon 2 de phosphate (teneur en phosphore d'environ 50 µg/ml).
À l'aide d'une pipette, introduire 50 ml de solution mère (3.7.1) dans une fiole jaugée de 100 ml. Compléter au
repère avec de l'eau et homogénéiser. Calculer la teneur en phosphore de cette solution à l’aide de la formule
suivante:
ρ =×0,5 ρ
s2
2 © ISO 2003 — Tous droits réservés
où
r est la teneur en phosphore de la solution étalon 2 de phosphate, en microgrammes par millilitre;
s2
r est la teneur en phosphore de la solution mère (3.7.1), en microgrammes par millilitre.
4 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit:
4.1 Tubes à essais, de 25 ml de capacité, en verre borosilicaté, avec bouchons rodés coniques, gradués
de 5 ml en 5 ml ou moins. Il convient de vérifier la reproductibilité de la graduation de 15 ml ainsi que la
résistance des repères d'étalonnage au chauffage à 550 °C.
4.2 Bloc de chauffage ou four à moufle, contrôlés par thermostat, pour des températures inférieures ou
égales à 400 °C.
4.3 Four de calcination ou four à moufle, convenant pour des températures inférieures ou égales à
700 °C.
4.4 Support pour tubes, résistant aux températures élevées, de préférence en acier résistant à la
corrosion, prévu pour le four à moufle. Il convient que le support maintienne les tubes dans le four à un angle
tel que leurs sommets ouverts se trouvent à environ 3 cm au-dessus de leurs fonds.
4.5 Spectrophotomètre, pouvant effectuer des mesurages à 720 nm, utilisant des cuves de 1 cm et de
4 cm.
4.6 Cuves du spectrophotomètre, de trajet optique de 1 cm et de 4 cm, pouvant être utilisées pour des
mesurages à 720 nm.
5 Échantillonnage
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon réellement représentatif, n'ayant pas été endommagé
ou modifié pendant le transport ou l'entreposage.
L'échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente partie de l’ISO 10540. Une
méthode d'échantillonnage recommandée est donnée dans l'ISO 5555.
Conserver les échantillons dans des récipients en verre ou en téréphtalate de polyéthylène (PET).
6 Préparation de l'échantillon pour essai
Si l'échantillon n'est pas totalement liquide à température ambiante, le chauffer à 10 °C au maximum
au-dessus de son point de fusion. Si l'échantillon liquide n'est pas limpide, l'homogénéiser soigneusement
juste avant de peser les prises d'essai. Il est indispensable que tout résidu susceptible d'être riche en
phosphore soit incorporé de façon homogène à l'échantillon.
7 Mode opératoire
7.1 Détermination du coefficient d'étalonnage
7.1.1 Pour des teneurs en phosphore comprises entre 0 mg/kg et 125 mg/kg (dans l'huile)
Peser 30 mg d'hydroxycarbonate de magnésium (3.1) dans chacun d’une série de sept tubes à essais (4.1). À
l'aide d'une microburette ou d’une pipette, ajouter dans les tubes à essais respectivement 0 ml (blanc),
0,25 ml, 0,5 ml, 1,0 ml, 1,5 ml, 2,0 ml et 2,5 ml de solution étalon 1 de phosphate (3.7.2). Ainsi, les tubes à
essais contiendront des quantités de phosphore allant de 0 µg à environ 25 µg, équivalant à la teneur en
phosphore de 0,2 g d’une huile contenant entre 0 mg/kg et environ 125 mg/kg de phosphore.
NOTE Dans ces conditions, il convient que l'absorbance de la solution étalon de plus forte valeur, contenant 2,5 ml
de solution étalon 1 de phosphore, soit de 0,8 environ.
Ajouter 2 ml d'acide chlorhydrique (3.2) dans chaque tube à essais et attendre jusqu'à obtention d'une
solution limpide. Ajouter ensuite 0,5 ml de solution d'hydroxyde de sodium (3.3) dans chaque tube et
homogénéiser.
À l'aide d'une pipette ou d'une burette, ajouter 5 ml de solution réductrice (3.4) dans chaque tube à essais et
homogénéiser.
De même, ajouter 2,5 ml de réactif molybdique (3.5) dans chaque tube à essais et homogénéiser. Boucher
les tubes à essais et les laisser reposer 20 min à l'abri de la lumière.
Remplir les tubes à essais au repère de 15 ml avec une solution d'acétate de sodium (3.6) et homogénéiser.
Mesurer l'absorbance des solutions par rapport au blanc, dans une cuve de 4 cm, à 720 nm.
En alternative, mesurer l'absorbance de toutes les solutions par rapport à l'eau, à titre de contrôle de l'essai à
blanc, puis corriger tous les mesurages en fonction de la valeur du blanc sauf s'il faut calculer l'équation d'une
droite de régression.
Calculer le coefficient d'étalonnage conformément à 7.1.3. En alternative, calculer l'équation de la droite de
régression pour l'étalonnage (voir 7.1.3.2).
7.1.2 Pour des teneurs en phosphore comprises entre 125 mg/kg et 500 mg/kg (dans l'huile)
Peser 30 mg d'hydroxycarbonate de magnésium (3.1) dans chacun d’une série de six tubes à essais (4.1). À
l'aide d'une microburette ou d’une pipette, ajouter dans les tubes à essais respectivement 0 ml (blanc), 0,5 ml,
0,8 ml, 1,2 ml, 1,6 ml et 2,0 ml de solution étalon 2 de phosphate (3.7.3). Ainsi, les tubes à essais
contiendront des quantités de phosphore allant de 25 µg à 100 µg, équivalant à des teneurs en phosphore
comprises entre 125 mg/kg et 500 mg/kg environ, dans de l'huile. Il convient que l'absorbance de la solution
étalon de plus forte valeur soit de 0,8 environ dans une cuve de 1 cm.
Ajouter 2 ml d'acide chlorhydrique (3.2) dans chaque tube à essais et attendre jusqu'à obtention d'une
solution limpide. Ajouter ensuite 0,6 ml de solution d'hydroxyde de sodium (3.3) dans chaque tube à essais et
homogénéiser.
À l'aide d'une pipette ou d'une burette, ajouter 5 ml de solution réductrice (3.4) dans chaque tube à essais et
homogénéiser.
De même, ajouter 2,5 ml de réactif molybdique (3.5) dans chaque tube à essais et homogénéiser. Boucher
les tubes à essais et les laisser reposer 20 min à l'abri de la lumière.
Remplir les tubes à essais au repère de 15 ml avec une solution d'acétate de sodium (3.6) et homogénéiser.
Mesurer l'absorbance des solutions par rapport au blanc, dans une cuve de 1 cm, à 720 nm.
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En alternative, mesurer l'absorbance de toutes les solutions par rapport à l'eau, à titre de contrôle de l'essai à
blanc, puis corriger tous les mesurages en fonction de la valeur du blanc sauf s'il faut calculer l'équation d'une
droite de régression.
Calculer le coefficient d'étalonnage conformément à 7.1.3. En alternative, calculer l'équation de la droite de
régression pour l'étalonnage (voir 7.1.3.2).
7.1.3 Calcul du coefficient d'étalonnage
7.1.3.1 Pour chaque solution i de la série mesurée sel
...
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