ISO 6887-2:2003

Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products

ISO 6887-2:2003 specifies rules for the preparation of meat and meat product samples and their suspension for microbiological examination when the samples require a different preparation from the method described in ISO 6887-1. ISO 6887-1 defines the general rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination. ISO 6887-2:2003 only describes methods of preparation that are applicable to several microorganisms simultaneously. It excludes the preparations that only apply to the detection and/or enumeration of a single microorganism where the method of preparation is described in the relevant International Standard concerning that microorganism. ISO 6887-2:2003 is applicable to the following fresh, raw and processed meats and poultry and their products: refrigerated or frozen; cured or fermented; minced or comminuted; delicatessen meats; pre-cooked meals or poultry-based meals; dried and smoked meats at various degrees of dehydration; concentrated meat extracts. ISO 6887-2:2003 is not applicable to the following products whose microbiological examination is described in other International Standards: canned products; other products (see ISO 6887-4).

Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 2: Règles spécifiques pour la préparation des viandes et produits à base de viande

L'ISO 6887-2:2003 spécifie des règles pour la préparation des échantillons de viandes et produits à base de viande et leur mise en suspension en vue de l'examen microbiologique, lorsque ces échantillons nécessitent une préparation différente de la méthode décrite dans l'ISO 6887-1. L'ISO 6887-1 définit des règles générales pour la préparation de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique. L'ISO 6887-2:2003 décrit uniquement les méthodes de préparation applicables à plusieurs micro-organismes simultanément. Elle exclut les préparations ne s'appliquant qu'à la recherche et/ou au dénombrement d'un seul micro-organisme pour lequel la méthode de préparation est décrite dans la norme appropriée correspondante à ce micro-organisme. L'ISO 6887-2:2003 est applicable aux viandes fraîches, crues et transformées et aux volailles et leurs produits suivants: réfrigérées ou congelées; salées ou fermentées; hachées ou hachées menu; aux produits de charcuterie; aux plats cuisinés à base de viande ou aux plats à base de volaille; aux viandes séchées et fumées à divers degrés de déshydratation; aux extraits de viande concentrés. L'ISO 6887-2:2003 n'est pas applicable aux produits suivants dont l'examen microbiologique est décrit dans d'autres Normes internationales: conserves; autres produits (voir l'ISO 6887-4).

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 26-Aug-2003
• Withdrawal Date: 26-Aug-2003
• ICS: 07.100.30 - Food microbiology
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 9 - Microbiology
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 9 - Microbiology
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 15-Mar-2017

Relations

• Revised: ISO 6887-2:2017 - Microbiology of the food chain — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products
• Effective Date: 29-Dec-2012
• Consolidates: ISO/TR 7239:1984 - Development and principles for application of public information symbols
• Effective Date: 06-Jun-2022
• Revises: ISO 3100-2:1988 - Meat and meat products — Sampling and preparation of test samples — Part 2: Preparation of test samples for microbiological examination
• Effective Date: 15-Apr-2008

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 6887-2
First edition
2003-07-15


Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Preparation of test samples,
initial suspension and decimal dilutions
for microbiological examination —
Part 2:
Specific rules for the preparation of meat
and meat products
Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la
suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen
microbiologique —
Partie 2: Règles spécifiques pour la préparation des viandes et produits
à base de viande




Reference number
ISO 6887-2:2003(E)
©
ISO 2003

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ISO 6887-2:2003(E)
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ISO 6887-2:2003(E)
Contents Page
Foreword. iv
1 Scope. 1
2 Normative references . 2
3 Terms and definitions. 2
4 Principle . 3
5 Diluents . 3
5.1 Basic materials. 3
5.2 Diluents for general use . 3
5.3 Diluents for special purposes. 3
5.4 Distribution and sterilization of the diluent. 4
6 Apparatus. 4
7 Preparation of samples . 4
7.1 Frozen products . 4
7.2 Hard and dry products. 5
7.3 Liquid and non-viscous products . 5
7.4 Heterogeneous products. 5
8 General procedures . 5
8.1 General. 5
8.2 Types of samples to be sent to the laboratory . 5
8.3 Purpose of the analysis. 6
8.4 General case for acidic products . 6
8.5 High fat foods (over 20 % of total mass as fat). 6
9 Specific procedures. 6
9.1 Initial preparation of the different types of samples . 6
9.2 Procedure for manufactured products stored under refrigeration. 7
9.3 Procedure for frozen meats . 10
9.4 Procedure for partially dehydrated meat extracts. 11
9.5 Surface samples (swabs and small cloths). 11
10 Further decimal dilutions . 11
Annex A (informative) Frame for the delineation of a surface sample area . 12
Annex B (normative) Means of sampling a frozen or deep-frozen test piece or block. 13
B.1 Non-homogeneous block. 13
B.2 Homogeneous test piece. 13
Bibliography . 15

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ISO 6887-2:2003(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 6887-2 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9,
Microbiology.
ISO 6887 consists of the following parts, under the general title Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination:
 Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions
 Part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products
 Part 3: Specific rules for the preparation of fish and fishery products
 Part 4: Specific rules for the preparation of products other than milk and milk products, meat and meat
products, and fish and fishery products
This first edition of ISO 6887-2 cancels and replaces ISO 3100-2:1988, Meat and meat products — Sampling
and preparation of test samples — Part 2: Preparation of test samples for microbiological examination.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 6887-2:2003(E)

Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation
of test samples, initial suspension and decimal dilutions for
microbiological examination —
Part 2:
Specific rules for the preparation of meat and meat products
WARNING — The use of this standard may involve hazardous materials, operations and equipment. It
is the responsibility of the user of this standard to establish appropriate safety and health practices
and to determine the applicability of regulatory limitations prior the use.
1 Scope
This part of ISO 6887 specifies rules for the preparation of meat and meat product samples and their
suspension for microbiological examination when the samples require a different preparation from the method
described in ISO 6887-1. ISO 6887-1 defines the general rules for the preparation of the initial suspension and
decimal dilutions for microbiological examination. This part of ISO 6887 only describes methods of preparation
that are applicable to several microorganisms simultaneously. It excludes the preparations that only apply to
the detection and/or enumeration of a single microorganism where the method of preparation is described in
the relevant International Standard concerning that microorganism.
This part of ISO 6887 is applicable to the following fresh, raw and processed meats and poultry and their
products:
 refrigerated or frozen;
 cured or fermented;
 minced or comminuted;
 delicatessen meats;
 pre-cooked meals or poultry based meals;
 dried and smoked meats at various degrees of dehydration;
 concentrated meat extracts.
This part of ISO 6887 is not applicable to the following products whose microbiological examination is
described in other International Standards:
 canned products;
 other products (see ISO 6887-4).
NOTE 1 Milk and milk products are dealt with in ISO 8261.
NOTE 2 The meat from wild animals (from game slaughtering or game shooting) can be analysed following the
applicable techniques described here for similar products.
© ISO 2003 — All rights reserved 1

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ISO 6887-2:2003(E)
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 6887-1:1999, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial
suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation
of initial suspension and decimal dilutions
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General rules for microbiological examinations
1)
ISO 17604, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Carcass sampling for microbiological analysis
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
laboratory sample
sample prepared for sending to the laboratory and intended for inspection or testing
[ISO 7002]
3.2
test portion
measured (volume or mass) representative sample taken from the laboratory sample for use in the
preparation of the initial suspension
3.3
initial suspension
primary dilution
suspension, solution or emulsion obtained after a weighed or measured quantity of the product under
examination (or of a test sample prepared from the product) has been mixed with, normally, a nine-fold
quantity of diluent, allowing large particles, if present, to settle
NOTE For surface samples, the initial dilution should be stated. For example, from a sample (swab or other) from a
2 2
25 cm surface, and diluted in a total volume of 25 ml of diluent, 1 ml of this initial suspension represents 1 cm .
3.4
further decimal dilutions
suspensions or solutions obtained by mixing a measured volume of the initial suspension (3.3) with a nine-fold
volume of diluent and by repeating this operation with each dilution prepared in this way, until a decimal
dilution series, suitable for the inoculation of culture media, is obtained
3.5
block
piece
sample whose composition and dimensions (surface and thickness, but thickness in particular) allow a sample
at depth to be taken under satisfactory sterile conditions

1) Revision of ISO 3100-1:1991.
2 © ISO 2003 — All rights reserved

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ISO 6887-2:2003(E)
3.6
fragment
shaving
sample from frozen meat resulting from a deep cut of a surface sample or a sample taken deep inside the test
piece or by electric drill or a hand-drill fitted with a wood drill bit
3.7
slice
cut of meat with approximately parallel sides up to several centimetres thick
3.8
carcasses
cuts
〈poultry products, rabbit meat〉 units similar to units prepared for sale
4 Principle
An initial suspension (3.3) is prepared to obtain as uniform a distribution as possible of the microorganisms
contained in the test sample.
A pre-enrichment or enrichment suspension is prepared in the same way, using the medium recommended by
the method of analysis concerned, except in the special cases mentioned in each product section of this part
of ISO 6887.
If necessary, decimal dilutions (3.4) are prepared in order to reduce the number of microorganisms per unit
volume to allow, after incubation, observation of any growth (in the case of liquid media) or colonies (in the
case of agar plates), as stated in each specific standard.
In order to restrict, if required, the range of enumeration to a given interval, or if high numbers of
microorganisms are foreseen, it is possible to inoculate only the necessary decimal dilutions (at least two
successive dilutions) needed to achieve the enumeration according to the calculation described in ISO 7218.
5 Diluents
5.1 Basic materials
See ISO 6887-1.
5.2 Diluents for general use
5.2.1 Peptone salt solution
See ISO 6887-1:1999, 5.2.1.
5.2.2 Buffered peptone water
See ISO 6887-1:1999, 5.2.2.
5.3 Diluents for special purposes
5.3.1 Peptone-salt solution with Bromocresol purple
5.3.1.1 Composition
Peptone salt solution (see 5.2.1) 1 000 ml
0,1 ml
Bromocresol purple (0,04 % alcohol solution, e.g. ethanol solution)
© ISO 2003 — All rights reserved 3

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ISO 6887-2:2003(E)
5.3.1.2 Preparation
Add 0,1 ml of Bromocresol purple to 1 000 ml of peptone salt solution (5.2.1).
5.3.1.3 Application
This solution may be used in certain acidic products so that adjustment of the pH can be carried out without
the use of a sterile pH probe (see 8.4).
Bromocresol purple is yellow at acidic pH, changing to purple at pH above 6,8.
5.4 Distribution and sterilization of the diluent
See ISO 6887-1:1999, 5.4.
6 Apparatus
Usual microbiological laboratory equipment for general use (see ISO 6887-1 and ISO 7218) and, in particular,
the following.
6.1 Sterile tray, of appropriate dimensions.
6.2 Sterile scissors, forceps or tongs, straight scalpels or knives, and spatulas.
6.3 Mechanical meat mincer, of laboratory size, sterilizable and equipped with a perforated plate, with
holes with a maximum diameter of 4 mm.
6.4 Equipment for cauterization of meat surfaces (e.g. portable gas blowtorch).
6.5 Template for surface sampling, metallic frame of appropriate dimensions enabling the delineation of
the surface to be sampled, sterilized by immersion in alcohol and burning this off.
In Annex A, an example for a frame is shown. Others tools fulfilling the requirements of this subclause can
also be used. Some spores may survive the flame. The use of a sterile metallic frame (after oven sterilization)
is recommended for the specific case of sporulated microorganisms.
6.6 Equipment for collecting a frozen laboratory sample
6.6.1 Variable speed electric drill, with maximum speed in use of 900 r/min, or hand-drill.
6.6.2 Sterile wood bit for electric drill, of 14 mm or 16 mm diameter.
6.6.3 Sterile wood chisel, of 20 mm width.
6.6.4 Hammer or plastic mallet.
6.6.5 Other apparatus that does not cause overheating or contamination of the sample.
7 Preparation of samples
7.1 Frozen products
Products stored frozen should be brought to a consistency that allows sampling; i.e. by storing at 18 °C to
27 °C (laboratory temperature) for a maximum of 3 h, or 2 °C ± 2 °C for a maximum of 24 h. Samples should
be tested as quickly as possible after this. See ISO 6887-1:1999, 9.3.
4 © ISO 2003 — All rights reserved

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...

NORME ISO
INTERNATIONALE 6887-2
Première édition
2003-07-15


Microbiologie des aliments —
Préparation des échantillons, de la
suspension mère et des dilutions
décimales en vue de l'examen
microbiologique —
Partie 2:
Règles spécifiques pour la préparation
des viandes et produits à base de viande
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test
samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological
examination —
Part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products




Numéro de référence
ISO 6887-2:2003(F)
©
ISO 2003

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ISO 6887-2:2003(F)
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Publié en Suisse

ii © ISO 2003 — Tous droits réservés

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ISO 6887-2:2003(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives. 2
3 Termes et définitions . 2
4 Principe . 3
5 Diluants . 3
5.1 Composants de base . 3
5.2 Diluants d'emploi général . 3
5.3 Diluants pour des besoins particuliers. 4
5.4 Répartition et stérilisation du diluant . 4
6 Appareillage. 4
7 Préparation des échantillons. 5
7.1 Produits congelés . 5
7.2 Produits durs et secs. 5
7.3 Produits liquides et non visqueux . 5
7.4 Produits hétérogènes . 5
8 Modes opératoires généraux . 5
8.1 Généralités. 5
8.2 Types d'échantillons à envoyer au laboratoire. 6
8.3 Objet de l'analyse. 6
8.4 Cas général des produits acides. 6
8.5 Aliments à haute teneur en matière grasse (plus de 20 % de matière grasse sur la masse
totale). 7
9 Modes opératoires spécifiques . 7
9.1 Préparation initiale des différents types d'échantillons . 7
9.2 Mode opératoire pour les produits manufacturés stockés réfrigérés. 8
9.3 Mode opératoire pour les viandes congelées. 10
9.4 Mode opératoire pour les extraits de viande partiellement déshydratés. 11
9.5 Prélèvements de surface (écouvillons et petits chiffons) . 12
10 Dilutions décimales suivantes. 12
Annexe A (informative) Cadre de délimitation d'une zone de prélèvement superficiel . 13
Annexe B (normative) Modalités du prélèvement sur une pièce ou un pain d'essai congelé(e)s ou
surgelé(e)s . 14
B.1 Cas d'un pain non homogène. 14
B.2 Cas d'une pièce d'essai homogène. 14
Bibliographie . 16

© ISO 2003 — Tous droits réservés iii

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ISO 6887-2:2003(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 6887-2 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie.
L'ISO 6887 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Microbiologie des aliments —
Préparation des échantillons, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen
microbiologique:
 Partie 1: Règles générales pour la préparation de la suspension mère et des dilutions décimales
 Partie 2: Règles spécifiques pour la préparation des viandes et produits à base de viande
 Partie 3: Règles spécifiques pour la préparation des produits de la pêche
 Partie 4: Règles spécifiques pour la préparation de produits autres que les produits laitiers, les produits
carnés et les produits de la pêche
Cette première édition de l'ISO 6887-2 annule et remplace l'ISO 3100-2:1988, Viandes et produits à base de
viande — Échantillonnage et préparation des échantillons pour essai — Partie 2 : Préparation des
échantillons pour essai en vue de l’examen microbiologique.

iv © ISO 2003 — Tous droits réservés

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NORME INTERNATIONALE ISO 6887-2:2003(F)

Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de
la suspension mère et des dilutions décimales en vue de
l'examen microbiologique —
Partie 2:
Règles spécifiques pour la préparation des viandes et produits
à base de viande
ATTENTION — L'usage de la présente norme peut impliquer l'emploi de matériels, équipements ou
manipulations dangereux. Il est de la responsabilité de l'utilisateur de la présente norme d'établir les
pratiques de sécurité et règles sanitaires et de déterminer l'application prioritaire de limites
réglementaires avant usage de la norme.
1 Domaine d'application
La présente partie de l'ISO 6887 spécifie des règles pour la préparation des échantillons de viandes et
produits à base de viande et leur mise en suspension en vue de l'examen microbiologique, lorsque ces
échantillons nécessitent une préparation différente de la méthode décrite dans l'ISO 6887-1. L'ISO 6887-1
définit des règles générales pour la préparation de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de
l'examen microbiologique.
La présente partie de l'ISO 6887 décrit uniquement les méthodes de préparation applicables à plusieurs
micro-organismes simultanément. Elle exclut les préparations ne s'appliquant qu'à la recherche et/ou au
dénombrement d'un seul micro-organisme pour lequel la méthode de préparation est décrite dans la norme
appropriée correspondante à ce micro-organisme.
La présente partie de l'ISO 6887 est applicable aux viandes fraîches, crues et transformées et aux volailles et
leurs produits suivants:
 réfrigérés ou congelés;
 salés ou fermentés;
 hachés ou hachés menu;
 aux produits de charcuterie;
 aux plats cuisinés à base de viande ou aux plats à base de volaille;
 aux viandes séchées et fumées à divers degrés de déshydratation;
 aux extraits de viande concentrés.
La présente partie de l'ISO 6887 n'est pas applicable aux produits suivants dont l'examen microbiologique est
décrit dans d'autres Normes internationales:
 conserves;
 autres produits (voir l'ISO 6887-4).
© ISO 2003 — Tous droits réservés 1

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ISO 6887-2:2003(F)
NOTE 1 Le lait et les produits laitiers font l'objet de l'ISO 8261.
NOTE 2 La viande d'animaux sauvages (de gibier chassé ou de gibier d'élevage) peut être analysée en suivant les
techniques applicables décrites ici pour des produits similaires.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 6887-1:1999, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 1: Règles générales pour la préparation de
la suspension mère et des dilutions décimales
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Règles générales pour les examens microbiologiques
ISO 17604, Microbiologie des aliments — Prélèvements d'échantillons sur des carcasses en vue de leur
1)
analyse microbiologique
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
échantillon pour laboratoire
échantillon dans l'état de préparation où il est envoyé au laboratoire et destiné à être utilisé pour un contrôle
ou pour des essais
[ISO 7002]
3.2
prise d'essai
échantillon représentatif mesuré (volume ou masse) prélevé sur l'échantillon pour laboratoire pour servir à la
préparation de la suspension mère
3.3
suspension mère
première dilution
suspension, solution ou émulsion obtenues après qu'une quantité pesée ou mesurée du produit à analyser
(ou de l'échantillon pour essai préparé à partir de ce produit) a été mélangée avec une quantité de diluant
égale le plus souvent à neuf fois cette quantité de produit, en laissant se déposer les particules grossières, s'il
y en a
NOTE Dans le cas de prélèvements de surface, il convient d'indiquer la dilution initiale. Par exemple, à partir d'un
2
échantillon (écouvillonnage ou autre) de 25 cm de surface, dilué dans un volume total de 25 ml de diluant, 1 ml de cette
2
suspension mère représente 1 cm .
3.4
dilutions décimales suivantes
suspensions ou solutions obtenues en mélangeant un volume mesuré de la suspension mère (3.3) avec un
volume de diluant égal à neuf fois le volume prélevé de la suspension mère et en répétant cette opération sur

1) Révision de l'ISO 3100-1:1991.
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chaque dilution préparée de la sorte, jusqu'à obtention d'une gamme de dilutions décimales, appropriée pour
l'ensemencement des milieux de culture
3.5
pièce
pain
échantillon dont la constitution et les dimensions (surface et épaisseur, mais plus particulièrement épaisseur)
permettent de prélever en profondeur un échantillon dans des conditions aseptiques satisfaisantes
3.6
fragment
copeau
échantillon de viande congelée résultant d'une découpe poussée d'un prélèvement de surface ou d'un
prélèvement effectué soit au cœur de la pièce d'essai, soit à la perceuse électrique ou au vilebrequin équipé
d'une mèche à bois
3.7
tranche
découpe de viande dont les deux faces sont à peu près parallèles de quelques centimètres d'épaisseur
3.8
carcasses
pièces de découpe
〈produits dérivés de volaille, viande de lapin〉 unités telles que préparées en vue de la vente
4 Principe
Préparation de la suspension mère (3.3), de façon à obtenir une répartition aussi uniforme que possible des
micro-organismes contenus dans l'échantillon pour essai.
Préparation d'une suspension de préenrichissement ou d'enrichissement de la même façon, avec utilisation
du milieu préconisé par la méthode d'analyse concernée, sauf cas particuliers mentionnés dans chaque
chapitre relatif à un produit de la présente partie de l'ISO 6887.
Préparation, si nécessaire, de dilutions décimales (3.4) en vue de réduire le nombre de micro-organismes par
unité de volume pour permettre, après incubation, d'observer leur éventuel développement (cas des milieux
liquides) ou d'observer les colonies (cas des boîtes de gélose), comme précisé dans chaque norme
spécifique.
Pour restreindre, si nécessaire, le domaine de dénombrement à un intervalle donné, ou si des nombres
élevés de micro-organismes sont attendus, il est possible d'ensemencer uniquement les dilutions décimales
nécessaires (au moins deux dilutions successives) pour pouvoir effectuer le dénombrement selon le mode de
calcul décrit dans l'ISO 7218.
5 Diluants
5.1 Composants de base
Voir l'ISO 6887-1.
5.2 Diluants d'emploi général
5.2.1 Solution de peptone-sel
Voir l'ISO 6887-1:1999, 5.2.1.
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5.2.2 Eau peptonée tamponnée
Voir l'ISO 6887-1:1999, 5.2.2.
5.3 Diluants pour des besoins particuliers
5.3.1 Solution de peptone-sel avec pourpre de bromocrésol
5.3.1.1 Composition
Solution de peptone-sel (voir 5.2.1) 1 000 ml
Pourpre de bromocrésol (solution alcoolisée à 0,04 %, par exemple 0,1 ml
solution dans l'éthanol)
5.3.1.2 Préparation
Diluer 0,1 ml de pourpre de bromocrésol dans 1 000 ml de solution de peptone-sel (5.2.1).
5.3.1.3 Utilisation
Cette solution peut être utilisée pour l'analyse de certains produits acides, ce qui permet d'ajuster le pH sans
utiliser de sonde de pH stérile (voir 8.4).
Le pourpre de bromocrésol est jaune à un pH acide et vire au pourpre à un pH au-dessus de 6,8.
5.4 Répartition et stérilisation du diluant
Voir l'ISO 6887-1:1999, 5.4.
6 Appareillage
Matériel courant de laboratoire de microbiologie pour usage général (voir l'ISO 6887-1 et l'ISO 7218) et, en
particulier, ce qui suit.
6.1 Plateau stérile, de dimensions appropriées.
6.2 Ciseaux, pinces, scalpels droits ou couteaux, et spatules stériles.
6.3 Hachoir à viande mécanique, de taille appropriée au laboratoire, stérilisable, muni d'une plaque
perforée, dont les trous ont un diamètre maximal de 4 mm.
6.4 Équipement de cautérisation en surface des viandes (par exemple lampe à souder à gaz portative).
6.5 Gabarit pour échantillonnage de surface, cadre métallique de dimensions appropriées permettant la
délimitation de la surface à prélever, stérilisé par immersion dans l'alcool et flambage.
L'Annexe A montre un exemple de cadre. D'autres outils satisfaisant aux exigences du présent paragraphe
peuvent également être utilisés. Certains spores peuvent survivre à la stérilisation à la flamme. Dans le cas
particulier des bactéries sporulées, il est recommandé d'utiliser un cadre métallique stérile (après stérilisation
au four).
6.6 Équipement permettant de recueillir un échantillon pour laboratoire congelé
6.6.1 Perceuse électrique à vitesse variable, de vitesse d'utilisation maximale de 900 tr/min, ou
vilebrequin.
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6.6.2 Mèche à bois stérile pour perceuse électrique, de 14 mm ou 16 mm de diamètre.
6.6.3 Ciseaux à bois stériles, de 20 mm de largeur.
6.6.4 Marteau ou maillet en plastique.
6.6.5 Tout autre appareil n'entraînant ni échauffement ni contamination de l'échantillon.
7 Préparation des échantillons
7.1 Produits congelés
Il convient de ramener les produits stockés congelés à une consistance permettant l'échantillonnage: c'est-à-
dire en les stockant entre 18 °C et 27 °C (température du laboratoire) pendant 3 h au maximum, ou à
2 °C ± 2 °C pendant 24 h au maximum. Il convient de soumettre les échantillons à l'essai dès que possible.
Voir l'ISO 6887-1:1999, 9.3.
Si le produit est encore congelé au moment du découpage, du diluant à température ambiante peut être
ajouté, pour faciliter la décongélation.
7.2 Produits durs et secs
Pour les produits durs ou secs, ne pas homogénéiser dans un homogénéisateur rotatif plus de 2,5 min
d'affilée.
Pour les produits secs et durs ou hétérogènes, il peut être nécessaire de hacher l'échantillon pour laboratoire.
Dans ce cas, pour éviter un échauffement excessif, l'opération de h
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