ISO 7698:1990
(Main)Cereals, pulses and derived products — Enumeration of bacteria, yeasts and moulds
Cereals, pulses and derived products — Enumeration of bacteria, yeasts and moulds
Céréales, légumineuses et produits dérivés — Dénombrement des bactéries, levures et moisissures
La présente Norme internationale prescrit une méthode de dénombrement des bactéries, levures et moisissures dans les céréales et légumineuses, ainsi que dans leurs produits dérivés immédiats (farines, semoules, sons etc.). Elle prend en compte les normes de directives générales, notamment l'ISO 7954, élaborées par le sous-comité 9, Microbiologie, de l'ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires. Il convient de se référer à l'ISO 7218 pour les bonnes pratiques de laboratoire lors des examens microbiologiques. NOTE 1 : du fait de la nature même des levures et des moisissures, le dénombrement sera sujet à ceraines imprécisions.
Žito, stročnice in proizvodi iz njih - Štetje bakterij, kvasovk in plesni
General Information
Relations
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Standards Content (Sample)
ISO
INTERNATIONAL
STANDARD 7698
First edition
1990-05-0 1
Cereals, pulses and derived products -
Enumeration of bacteria, yeasts and moulds
C&&ales, Iegumineuses et produits d&iv& - Denombrement des
bacteries, levures et moisissures
Reference numher
ISO 7698: 199O(E)
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 7698:1990(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national Standards bodies (ISO member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical cotnmittees. Esch member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has theright to be
represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the
work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an Interna-
tional Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies
casting a vote.
International Standard ISO 7698 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 34, Agriculfural food products.
Annex A of this International Standard is for information only.
0 ISO 1990
All rights reserved. No part of this publication may be reproduced or utilized in any form
or by any means, electronie or mechanical, including photocopying and microfilm, without
Permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case Postale 56 l CH-1211 Geneve 20 * Switzerland
Printed in Switzerland
ii
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 7698:1990(E)
Introduction
The enumeration of bacteria, yeasts and moulds in cereals, pulses and
their derived products enables determination of their micro-organisms
content and/or, depending on the objective, determination of the nature
of the microflora present. The objective may be, for example, to deter-
mine the quality in terms of hygiene of a lot, to study the dynamic
Progression of a microflora in Order to evaluate the efficiency of a par-
ticular type of storage, or to evaluate the impact of a physical or chem-
ical treatment on the microflora.
In this type of analysis, which is usually carried out on ground products,
fragments of thallus are taken into account, but it is the fungal spores
in particular that are enumerated, and more so where the species
present are highly sporulating. This method constitutes an effective
means of following the Progression of micro-organisms (in cereals,
pulses and derived products) of a particular evolutionary series pro-
vided that the identification of those species which allow the evolution
to be followed has been carried out. Under these conditions, which re-
late more to experimentation than to the testing of unknown lots, the
values given by the enumeration correlate quite well with those given
by more technological criteria (e.g. fat acidity and germinative capacity).
. . .
Ill
---------------------- Page: 3 ----------------------
This page intentionally left blank
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ISO 7698:1990(E)
INTERNATIONAL STANDARD
Cereals, pulses and derived products - Enumeration of
bacteria, yeasts and moulds
1 Scope 3 Definitions
For the purposes of this International Standard, the
This International Standard specifies a method for
following definitions apply.
the enumeration of bacteria, yeasts and moulds in
cereals, pulses and their immediate derived pro-
ducts (flour, semolina, bran, etc.).
3.1 bacteria: Mesophilic micro-organisms, either
aerobic or facultatively anaerobic, which at 30 “C
lt takes into account the Standards giving general
develop within and on the surface of an agar me-
guidance, notably ISO 7954[1], prepared by sub-
dium, under the conditions described in this Inter-
committee 9, Microbiology, of ISO/TC 34, Agricul-
national Standard.
tural food products.
Reference should be made to ISO 7218[21 for the
3.2 yeasts: Mesophilic aerobic micr&organisms
good laboratoty practice for microbiological exam-
which, at 25 “C using mycological agar medium un-
inations. der the conditions described in this International
Standard, either
Owing to the nature of yeasts and moulds, the
NOTE 1
enumeration is subject to certain imprecisions.
a) on the surface of the medium, develop matt or
shiny round colonies usually having a regular
outline and a more or less convex surface, or
b) within the medium, develop round, lenticular,
colonies.
3.3 moulds: Mesophilic aerobic filamentous micro-
2 Normative references
organisms which, on the surface of mycological agar
medium under the conditions described in this
The following Standards contain provisions which,
International Standard, usually develop flat or flufv
through reference in this text, constitute provisions
spreading colonies offen with coloured fruiting or
of this International Standard. At the time of publi-
sporing structures.
cation, the editions indicated were valid. All stand-
ards are subject to revision, and Parties to
agreements based on this International Standard
are encouraged to investigate the possibility of ap-
plying the most recent editions of the Standards in-
4 Principle
dicated below. Members of IEC and ISO maintain
registers of currently valid International Standards.
ISO 950:1979, Cereals - Sampling (as grain).
4.1 Preparation of duplicated poured plates of
each of the two specified culture media (5.3.1 and
ISO 2170:1980, Cereals and pulses - Sampling of
5.3.2) containing a specified quantity of an initial
milled produc fs.
Suspension.
ISO 6887:1983, Microbiology - General guidance for Preparation, using decimal dilutions of the initial
the preparation of dilutions for microbiological ex- Suspension, of other plates under the Same condi-
tions.
amina tion.
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ISO 7698:1990(E)
4.2 Aerobic incubation of plates containing the
5.3 Culture media
agar medium for enumerating bacteria (5.3.1) at
30 “C for 3 days.
5.3.1 Agar medium for enumerating bacteria
Aerobic incubation of plates containing the agar
Composition
medium for enumerating yeasts and moulds (5.3.2)
at 25 “C for 3 days, 4 days or 5 days.
tryptonel)
50 g
dehydrated yeast extract
2s g
4.3 Calculation of the number of bacteria from the
anhydrous dextrose
150 g
number of colonies present on selected plates of the
agar medium (5.3.1).
agar 9 g to 18 g*)
Calculation of the number of yeasts and/or moulds
water 1000 ml
from the number of colonies present on selected
plates of the agar medium (5.3.2).
NOTE 3 If required, an inhibitor product such as
actidione (cycloheximide) or natamycin (pimaricin) may
be added to the culture medium, in quantities of 0,l gll,
to prevent the development of yeasts.
5 Diluent, culture media and other
Prepara tion
products
Dissolve the components or complete dehydrated
medium in the water by boiling. If necessary, adjust
the pH so that after sterilization it is 7,0 at 25 “C.
5.1 Basic materials
Dispense the medium into the test tubes (6.9) in
In Order to improve the reproducibility of the results, quantities of 15 ml per tube or into flasks or bottles
it is recommended that, for the preparation of the (6.9), of a suitable capacity, to approximately half the
diluent and culture media, dehydrated basic com- volume of the flask or bottle.
ponents or complete dehydrated media be used.
Sterilize the medium in the autoclave (6.1) at
Similarly, commercially prepared reagents may be
121 “C + 1 OC for 20 min.
-
used. The manufacturer’s instructions shall be rig-
orously fol lowed I
lf the medium is to be used immediately, cool it be-
fore use in the water-bath (6.7) set at 45 “C
The Chemical products used shall be of recognized
+ 0,5 “C.
-
analytical grade.
If not, before beginning the microbiological exam-
The water used shall be distilled or deionized, and
ination, in Order to avoid delay when pouring the
shall be free from substances that might inhibit the
agar, completely melt the medium in a boiling
growth of micro-organisms (bacteria, yeasts and
water-bath, then cool it before use in the watet=bath
moulds) under the test conditions.
(6.7) set at 45 “C + 0,5 “C.
-
If the diluent and media are not used immediately,
they shall, unless otherwise stated, be stored in the
5.3.2 Agar medium for enumerating yeasts and
dark at a temperature between 0 “C and -t 5 OC, for
moulds (yeast extract-dextrose-chloramphenicol-
no longer than one month, in conditions that prevent
agar medium)
any Change in their composition.
Composition
yeast extract
59
5.2 Diluent
dextrose (C~HQO~)
20 g
Peptone-sodium chloride solution, see ISO 6887.
chloramphenicol (C11H&12N205)
091 g
NOTE 2 To improve the homogeneity of Spore suspen-
sions, a surface-active agent such as sorbitol oleic ester agar 9 g to 18 g*’
(Tween 80) may be added at a concentration of 0,033 g
per litre of diluent. water 1000 ml
1) This term is only used at present by certain Producers of media. Any other casein digest giving comparable resul ts
may be used.
2) According to the manufacturer’s instructions.
2
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ISO 7698:1990(E)
metal bowls, preferably fitted with lids, resistant
Reparation
to the conditions of sterilization;
Dissolve the components in the water by boiling. If
necessary, adjust the pH so that after sterilization it
b) a peristaltic-type blender (Stomacher), with ster-
is 6,6 at 25 “C.
ile plastic bags.
edium into Containers (6.9) of appro-
Dispense the m
NOTE 6 The bowls or plastic bags should have sufficient
priate capacity.
capacity to allow the Sample to be properly mixed with the
appropriate amount of diluent. In general, the volume of
Sterilize the medium in the autoclave (6.1) at
the Container should be equal to about twice the volume
121 “C + 11 “C for 15 min.
- of the Sample plus diluent.
If the medium is to be used immediately, cool it be-
6.3 Mixer, vortex-type, for mixing the contents of
fore use in the water-bath (6.7) set at 45 “C
the test tubes, flasks or bottles (dilutions of the initial
+ 0,5 “C.
-
Suspension).
If not, befo
...
SLOVENSKI STANDARD
SIST ISO 7698:1997
01-maj-1997
äLWRVWURþQLFHLQSURL]YRGLL]QMLKâWHWMHEDNWHULMNYDVRYNLQSOHVQL
Cereals, pulses and derived products -- Enumeration of bacteria, yeasts and moulds
Céréales, légumineuses et produits dérivés -- Dénombrement des bactéries, levures et
moisissures
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 7698:1990
ICS:
07.100.30 Mikrobiologija živil Food microbiology
67.060 äLWDVWURþQLFHLQSURL]YRGLL] Cereals, pulses and derived
QMLK products
SIST ISO 7698:1997 en
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.
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SIST ISO 7698:1997
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SIST ISO 7698:1997
ISO
INTERNATIONAL
STANDARD 7698
First edition
1990-05-0 1
Cereals, pulses and derived products -
Enumeration of bacteria, yeasts and moulds
C&&ales, Iegumineuses et produits d&iv& - Denombrement des
bacteries, levures et moisissures
Reference numher
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federation of national Standards bodies (ISO member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical cotnmittees. Esch member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has theright to be
represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the
work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an Interna-
tional Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies
casting a vote.
International Standard ISO 7698 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 34, Agriculfural food products.
Annex A of this International Standard is for information only.
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SIST ISO 7698:1997
ISO 7698:1990(E)
Introduction
The enumeration of bacteria, yeasts and moulds in cereals, pulses and
their derived products enables determination of their micro-organisms
content and/or, depending on the objective, determination of the nature
of the microflora present. The objective may be, for example, to deter-
mine the quality in terms of hygiene of a lot, to study the dynamic
Progression of a microflora in Order to evaluate the efficiency of a par-
ticular type of storage, or to evaluate the impact of a physical or chem-
ical treatment on the microflora.
In this type of analysis, which is usually carried out on ground products,
fragments of thallus are taken into account, but it is the fungal spores
in particular that are enumerated, and more so where the species
present are highly sporulating. This method constitutes an effective
means of following the Progression of micro-organisms (in cereals,
pulses and derived products) of a particular evolutionary series pro-
vided that the identification of those species which allow the evolution
to be followed has been carried out. Under these conditions, which re-
late more to experimentation than to the testing of unknown lots, the
values given by the enumeration correlate quite well with those given
by more technological criteria (e.g. fat acidity and germinative capacity).
. . .
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SIST ISO 7698:1997
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SIST ISO 7698:1997
ISO 7698:1990(E)
INTERNATIONAL STANDARD
Cereals, pulses and derived products - Enumeration of
bacteria, yeasts and moulds
1 Scope 3 Definitions
For the purposes of this International Standard, the
This International Standard specifies a method for
following definitions apply.
the enumeration of bacteria, yeasts and moulds in
cereals, pulses and their immediate derived pro-
ducts (flour, semolina, bran, etc.).
3.1 bacteria: Mesophilic micro-organisms, either
aerobic or facultatively anaerobic, which at 30 “C
lt takes into account the Standards giving general
develop within and on the surface of an agar me-
guidance, notably ISO 7954[1], prepared by sub-
dium, under the conditions described in this Inter-
committee 9, Microbiology, of ISO/TC 34, Agricul-
national Standard.
tural food products.
Reference should be made to ISO 7218[21 for the
3.2 yeasts: Mesophilic aerobic micr&organisms
good laboratoty practice for microbiological exam-
which, at 25 “C using mycological agar medium un-
inations. der the conditions described in this International
Standard, either
Owing to the nature of yeasts and moulds, the
NOTE 1
enumeration is subject to certain imprecisions.
a) on the surface of the medium, develop matt or
shiny round colonies usually having a regular
outline and a more or less convex surface, or
b) within the medium, develop round, lenticular,
colonies.
3.3 moulds: Mesophilic aerobic filamentous micro-
2 Normative references
organisms which, on the surface of mycological agar
medium under the conditions described in this
The following Standards contain provisions which,
International Standard, usually develop flat or flufv
through reference in this text, constitute provisions
spreading colonies offen with coloured fruiting or
of this International Standard. At the time of publi-
sporing structures.
cation, the editions indicated were valid. All stand-
ards are subject to revision, and Parties to
agreements based on this International Standard
are encouraged to investigate the possibility of ap-
plying the most recent editions of the Standards in-
4 Principle
dicated below. Members of IEC and ISO maintain
registers of currently valid International Standards.
ISO 950:1979, Cereals - Sampling (as grain).
4.1 Preparation of duplicated poured plates of
each of the two specified culture media (5.3.1 and
ISO 2170:1980, Cereals and pulses - Sampling of
5.3.2) containing a specified quantity of an initial
milled produc fs.
Suspension.
ISO 6887:1983, Microbiology - General guidance for Preparation, using decimal dilutions of the initial
the preparation of dilutions for microbiological ex- Suspension, of other plates under the Same condi-
tions.
amina tion.
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ISO 7698:1990(E)
4.2 Aerobic incubation of plates containing the
5.3 Culture media
agar medium for enumerating bacteria (5.3.1) at
30 “C for 3 days.
5.3.1 Agar medium for enumerating bacteria
Aerobic incubation of plates containing the agar
Composition
medium for enumerating yeasts and moulds (5.3.2)
at 25 “C for 3 days, 4 days or 5 days.
tryptonel)
50 g
dehydrated yeast extract
2s g
4.3 Calculation of the number of bacteria from the
anhydrous dextrose
150 g
number of colonies present on selected plates of the
agar medium (5.3.1).
agar 9 g to 18 g*)
Calculation of the number of yeasts and/or moulds
water 1000 ml
from the number of colonies present on selected
plates of the agar medium (5.3.2).
NOTE 3 If required, an inhibitor product such as
actidione (cycloheximide) or natamycin (pimaricin) may
be added to the culture medium, in quantities of 0,l gll,
to prevent the development of yeasts.
5 Diluent, culture media and other
Prepara tion
products
Dissolve the components or complete dehydrated
medium in the water by boiling. If necessary, adjust
the pH so that after sterilization it is 7,0 at 25 “C.
5.1 Basic materials
Dispense the medium into the test tubes (6.9) in
In Order to improve the reproducibility of the results, quantities of 15 ml per tube or into flasks or bottles
it is recommended that, for the preparation of the (6.9), of a suitable capacity, to approximately half the
diluent and culture media, dehydrated basic com- volume of the flask or bottle.
ponents or complete dehydrated media be used.
Sterilize the medium in the autoclave (6.1) at
Similarly, commercially prepared reagents may be
121 “C + 1 OC for 20 min.
-
used. The manufacturer’s instructions shall be rig-
orously fol lowed I
lf the medium is to be used immediately, cool it be-
fore use in the water-bath (6.7) set at 45 “C
The Chemical products used shall be of recognized
+ 0,5 “C.
-
analytical grade.
If not, before beginning the microbiological exam-
The water used shall be distilled or deionized, and
ination, in Order to avoid delay when pouring the
shall be free from substances that might inhibit the
agar, completely melt the medium in a boiling
growth of micro-organisms (bacteria, yeasts and
water-bath, then cool it before use in the watet=bath
moulds) under the test conditions.
(6.7) set at 45 “C + 0,5 “C.
-
If the diluent and media are not used immediately,
they shall, unless otherwise stated, be stored in the
5.3.2 Agar medium for enumerating yeasts and
dark at a temperature between 0 “C and -t 5 OC, for
moulds (yeast extract-dextrose-chloramphenicol-
no longer than one month, in conditions that prevent
agar medium)
any Change in their composition.
Composition
yeast extract
59
5.2 Diluent
dextrose (C~HQO~)
20 g
Peptone-sodium chloride solution, see ISO 6887.
chloramphenicol (C11H&12N205)
091 g
NOTE 2 To improve the homogeneity of Spore suspen-
sions, a surface-active agent such as sorbitol oleic ester agar 9 g to 18 g*’
(Tween 80) may be added at a concentration of 0,033 g
per litre of diluent. water 1000 ml
1) This term is only used at present by certain Producers of media. Any other casein digest giving comparable resul ts
may be used.
2) According to the manufacturer’s instructions.
2
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SIST ISO 7698:1997
ISO 7698:1990(E)
metal bowls, preferably fitted with lids, resistant
Reparation
to the conditions of sterilization;
Dissolve the components in the water by boiling. If
necessary, adjust the pH so that after sterilization it
b) a peristaltic-type blender (Stomacher), with ster-
is 6,6 at 25 “C.
ile plastic bags.
edium into Containers (6.9) of appro-
Dispens
...
NORME
INTERNATIONALE
Première édition
1990-05-O 1
Céréales, légumineuses et produits dérivés -
Dénombrement des bgctéries, levures et
moisissures
Cereals, puis es and derived products - Enumeration of bacteria, yeasts
and moulds
Numéro de référence
ISO 7698: 1990(F)
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 7698:1990(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres
de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre inté-
ressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique crée
à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux tra-
vaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique
internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotech-
nique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techni-
ques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins
des comités membres votants.
La Norme internationale ISO 7698 a été élaborée par le comité techni-
que ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement
à titre d’information.
8 ISO 1990
Droits de reproduction réservés. Aucune partie de cette publication ne peut être repro-
duite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou
mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
Organisation inter ‘nationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-1211 Genève 20 * Suis se
Imprimé en Suisse
ii
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 7698:1990(F)
Introduction
Le dénombrement des bactéries, levures et moisissures des céréales,
legumineuses et produits dérivés, permet d’évaluer leur richesse en
micro-organismes et/ou suivant l’objectif poursuivi, de déterminer la
nature de cette microflore dans le but: soit de juger de la qualité hygié-
nique d’un lot, soit de suivre l’évolution dynamique d’une flore pour
apprécier l’efficacité de tel ou tel type de stockage ou pour évaluer
l’impact d’un traitement physique ou chimique sur la microflore.
Avec ce type d’analyse, souvent effectuée après broyage, on prend en
compte des fragments de thalle, mais ce sont surtout les spores
fongiques qui sont dénombréès et ce d’autant plus que les espèces
présentes sont particuliérement sporulantes. Cette méthode rend bien
compte de la progression des micro-organismes (dans les céréales, Ié-
gumineuses et dérivés) dans des séries évolutives déterminées, à la
condition que soient effectuées les identifications d’espèces qui seules
permettent de suivre l’évolution des populations en présence. Dans de
telles conditions, qui relèvent plus de l’expérimentation que du contrôle
de lots inconnus, les valeurs données par les dénombrements sont as-
sez bien corrélées avec celles d’autres critères plus technologiques
(acidité grasse, faculté germinative).
. . .
III
---------------------- Page: 3 ----------------------
Page blanche
---------------------- Page: 4 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 7698:1990(F)
Céréales, légumineuses et produits dérivés - Dénombrement
des bactéries, levures et moisissures
1 Domaine d’application 3 Définitions
Pour les besoins de la présente Norme internatio-
La présente Norme internationale prescrit une mé-
nale, les définitions suivantes s’appliquent.
thode de dénombrement des bactéries, levures et
moisissures dans les céréales et légumineuses,
ainsi que dans leurs produits dérivés immédiats
3.1 bactéries: Micro-organismes mésophiles, aéro-
(farines, semoules, sons etc.).
bies ou anaérobies facultatifs qui, à 30 “C, se déve-
loppent à l’intérieur et à la surface d’un milieu
Elle prend en compte les normes de directives gé-
gélosé, dans les conditions décrites dans la pré-
nérales, notamment I’ISO 7954f11, élaborées par le
sente Norme internationale.
sous-comité 9, Microbiologie, de I’ISO /TC 34, Pro-
duits agricoles alimentaires.
3.2 levures: Micro-organismes aérobies, méso-
philes qui, à 25 “C et, en utilisant un milieu gélosé,
II convient de se référer à I’ISO 7218 121 pour les
dans les conditions décrites dans la présente Norme
bonnes pratiques de laboratoire lors des examens
internationale,
microbiologiques.
- ou bien, se développent à la surface du milieu,
NOTE 1 Du fait de la nature même des levures et des
moisissures, le dénombrement sera sujet à certaines im- en formant des colonies mates ou brillantes,
précisions.
présentant le plus souvent un contour régulier
et une surface plus au moins convexe,
2 Références normatives -
ou bien, se développent en profondeur en for-
mant des colonies rondes et Ienticulaires.
Les normes suivantes contiennent des dispositions
qui, par suite de la référence qui en est faite,
3.3 moisissures: Micro-organismes mésophiles,
constituent des dispositions valables pour la pré-
aérobioses filamenteux qui, à la surface d’un milieu
sente Norme internationale. Au moment de la pu-
gélosé et dans les conditions décrites dans la pré-
blication, les éditions indiquées étaient en vigueur.
sente Norme internationale, développent habi-
Toute norme est sujette à révision et les parties
tuellement des colonies étendues, plates ou
prenantes des accords fondés sur la présente
duveteuses, présentant souvent des fructifications
Norme internationale sont invitées à rechercher la
colorées et des formes de sporulation.
possibilite d’appliquer les éditions les plus récentes
des normes indiquées ci-après. Les membres de la
CEI et de I’ISO possèdent le registre des Normes
internationales en vigueur à un moment donné.
4 Principe
ISO 950: 1979, Céréales - Échantillonnage (des
grains).
4.1 Ensemencement en profondeur des deux mi-
lieux de culture (5.3.1 et 5.3.2) coulés dans deux
ISO 2170:1980, Céréales et légumineuses - Échan-
boîtes de Petri, avec une quantité déterminée de la
tillonnage des produits de mouture.
suspension mère.
ISO 6887:1983, Microbiologie - Directives générales Dans les mêmes conditions, ensemencement des
pour la préparation des dilutions en vue de l’examen dilutions décimales des autres boîtes, obtenues à
microbiologique. partir de la suspension mère.
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ISO 7698:1990(F)
4.2 Incubation en aérobiose des boîtes contenant
5.3 Milieux de culture
le milieu gélosé (5.3.1) pour le dénombrement des
bactéries à 30 “C, pendant 3 jours.
Glose pour dénombrer les bactéries
53.1
Incubation en aérobiose des boîtes contenant le mi-
Composition
lieu gélosé (5.3.2), pour le dénombrement des levu-
res et des moisissures à 25 “C, pendant 3 jours
Tryptonel)
590 g
4 jours ou 5 jours.
Extrait de levure déshydraté
295 g
4.3 Calcul du nombre de bactéries, à partir du
Dextrose anhydre
190 g
nombre de colonies obtenues dans les boîtes rete-
nues de milieu gélosé (5.3.1).
Agar-agar 9 g à 18 g*)
Calcul du nombre de levures et/ou de moisissures,
Eau 1000 ml
à partir du nombre de colonies obtem jes dans les
.
boîtes retenues de milieu gélosé (5.3.2) NOTE 3 Pour éviter le développement de levures,
ajouter 6ventuellement un produit inhibiteur tel que
I’actidione (cycloheximide) ou la natamycine (pimaricine)
autres
5 Diluant, milieux de culture et au milieu de culture, à raison de 0,l g/l.
produits
Préparation
5.1 Composants de base Dissoudre dans l’eau en portant à ébullition, les
composants ou le milieu complet déshydraté. Si né-
Pour améliorer la reproductibilité des résultats, il cessaire, ajuster le pH de sorte qu’après stérili-
sation, il soit de 7,0 à 25 “C.
est recommandé d’utiliser, pour la préparation du
diluant et des milieux de culture, des composants
Répartir le milieu dans des tubes à essais (6.9) à
de base déshydratés ou des milieux complets dés-
raison de 15 ml par tube ou dans des ballons (6.9)
hydratés. De la même facon, des préparations com-
de capacité appropriée, à raison d’environ la moitié
merciales de réactifs peuvent être utilisées. Les
du volume du ballon.
instructions du fabricant doivent être suivies scru-
puleusement.
Stériliser le milieu dans l’autoclave (6.1), à
121 OC + 1 OC pendant 20 min.
-
utilisés doivent être de qua-
Les produits chimiques
lité analytique reconnue
Si le milieu est utilisé extemporanément, le refroidir
avant emploi au bain d’eau (6.7) réglé à
L’eau utilisée doit être de l’eau distillée ou
45 “C + 0,5 “C.
-
déionisée, exempte de substances susceptibles
d’inhiber la croissance des micro-organismes (bac-
Dans le cas contraire, avant de commencer I’exa-
téries, levures et moisissures) dans les conditions
men microbiologique et afin d’éviter toute attente
de l’essai.
au moment de couler la gélose, faire fondre com-
plètement le milieu au bain d’eau bouillante, puis le
Si le diluant et les milieux ne sont pas utilisés
refroidir avant emploi au bain d’eau (6.7) réglé à
extemporanément, ils doivent, sauf spécifications
45 “C + 0,5 “C.
-
contraires, être conservés à l’obscurité entre 0 “C
et -t- 5 “C pendant un mois maximum, dans les
conditions évitant toute modification de leur compo- 5.3.2 Gélose pour dénombrer les levures et
sition. moisissures (Gélose à l’extrait de levure au dextrose
et au chloramphénicol)
5.2 Diluant
Composition
Solution de peptone-chlorure de sodium, voir
Extrait de levure
QI
ISO 6887.
Dextrose (C6Hq2Os)
20 g
NOTE 2 Afin d’améliorer l’homogénéisation des sus-
Chloramphénicol (CllH&12N205) 0,l g
pensions de spores, il est possible d’ajouter un agent de
surface tel que l’ester oléique de sorbitol (Tween 80) à
raison de 0,033 g par litre de diluant. Agar-agar 9 g à 18 g*)
1) Ce terme n’est actuellement utilisé que par certains producteurs de milieu. Toute autre disgestat de caséine donnant
des résultats comparables peut être utilisé.
2) Selon les prescriptions du fabricant.
2
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ISO 7698:1990(F)
1000 ml 6.2 Appareillage pour l’homogénéisation.
Eau
Préparation Conformément à I’ISO 6887, l’un des appareils sui-
vants doit être utilisk
Dissoudre les composants dans l’eau, en portant à
ébullition. Si nécessaire, ajuster le pH de sorte
a) un homogénéisateur rotatif, de préférence à en-
qu’après stérilisation, il soit de 6,6 à 25 OC.
traînement par le haut, dont la fréquence de ro-
tation est comprise entre 8 000 min-1 et
Répartir le milieu dans des récipients (6.9) de capa-
45 000 min-l, avec des bols en verre ou en mé-
cité appropriée.
tal, munis de préférence de couvercles, et résis-
tant aux conditions de stérilisation;
Stériliser le milieu dans l’autoclave (6.1), à
121 OC & 1 “C pendant 15 min.
b) un homogénéisateur, de péristaltique
type
(St0 macher), avec des sacs stériles en plastique.
Si le milieu est utilisé extemporanément, le refroidir
avant emploi au bain d’eau (6.7) réglé à 45 “C
NOTE 6 Les bols et les sacs en plastique
...
NORME
INTERNATIONALE
Première édition
1990-05-O 1
Céréales, légumineuses et produits dérivés -
Dénombrement des bgctéries, levures et
moisissures
Cereals, puis es and derived products - Enumeration of bacteria, yeasts
and moulds
Numéro de référence
ISO 7698: 1990(F)
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 7698:1990(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres
de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre inté-
ressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique crée
à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux tra-
vaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique
internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotech-
nique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techni-
ques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins
des comités membres votants.
La Norme internationale ISO 7698 a été élaborée par le comité techni-
que ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement
à titre d’information.
8 ISO 1990
Droits de reproduction réservés. Aucune partie de cette publication ne peut être repro-
duite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou
mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
Organisation inter ‘nationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-1211 Genève 20 * Suis se
Imprimé en Suisse
ii
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ISO 7698:1990(F)
Introduction
Le dénombrement des bactéries, levures et moisissures des céréales,
legumineuses et produits dérivés, permet d’évaluer leur richesse en
micro-organismes et/ou suivant l’objectif poursuivi, de déterminer la
nature de cette microflore dans le but: soit de juger de la qualité hygié-
nique d’un lot, soit de suivre l’évolution dynamique d’une flore pour
apprécier l’efficacité de tel ou tel type de stockage ou pour évaluer
l’impact d’un traitement physique ou chimique sur la microflore.
Avec ce type d’analyse, souvent effectuée après broyage, on prend en
compte des fragments de thalle, mais ce sont surtout les spores
fongiques qui sont dénombréès et ce d’autant plus que les espèces
présentes sont particuliérement sporulantes. Cette méthode rend bien
compte de la progression des micro-organismes (dans les céréales, Ié-
gumineuses et dérivés) dans des séries évolutives déterminées, à la
condition que soient effectuées les identifications d’espèces qui seules
permettent de suivre l’évolution des populations en présence. Dans de
telles conditions, qui relèvent plus de l’expérimentation que du contrôle
de lots inconnus, les valeurs données par les dénombrements sont as-
sez bien corrélées avec celles d’autres critères plus technologiques
(acidité grasse, faculté germinative).
. . .
III
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Page blanche
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NORME INTERNATIONALE ISO 7698:1990(F)
Céréales, légumineuses et produits dérivés - Dénombrement
des bactéries, levures et moisissures
1 Domaine d’application 3 Définitions
Pour les besoins de la présente Norme internatio-
La présente Norme internationale prescrit une mé-
nale, les définitions suivantes s’appliquent.
thode de dénombrement des bactéries, levures et
moisissures dans les céréales et légumineuses,
ainsi que dans leurs produits dérivés immédiats
3.1 bactéries: Micro-organismes mésophiles, aéro-
(farines, semoules, sons etc.).
bies ou anaérobies facultatifs qui, à 30 “C, se déve-
loppent à l’intérieur et à la surface d’un milieu
Elle prend en compte les normes de directives gé-
gélosé, dans les conditions décrites dans la pré-
nérales, notamment I’ISO 7954f11, élaborées par le
sente Norme internationale.
sous-comité 9, Microbiologie, de I’ISO /TC 34, Pro-
duits agricoles alimentaires.
3.2 levures: Micro-organismes aérobies, méso-
philes qui, à 25 “C et, en utilisant un milieu gélosé,
II convient de se référer à I’ISO 7218 121 pour les
dans les conditions décrites dans la présente Norme
bonnes pratiques de laboratoire lors des examens
internationale,
microbiologiques.
- ou bien, se développent à la surface du milieu,
NOTE 1 Du fait de la nature même des levures et des
moisissures, le dénombrement sera sujet à certaines im- en formant des colonies mates ou brillantes,
précisions.
présentant le plus souvent un contour régulier
et une surface plus au moins convexe,
2 Références normatives -
ou bien, se développent en profondeur en for-
mant des colonies rondes et Ienticulaires.
Les normes suivantes contiennent des dispositions
qui, par suite de la référence qui en est faite,
3.3 moisissures: Micro-organismes mésophiles,
constituent des dispositions valables pour la pré-
aérobioses filamenteux qui, à la surface d’un milieu
sente Norme internationale. Au moment de la pu-
gélosé et dans les conditions décrites dans la pré-
blication, les éditions indiquées étaient en vigueur.
sente Norme internationale, développent habi-
Toute norme est sujette à révision et les parties
tuellement des colonies étendues, plates ou
prenantes des accords fondés sur la présente
duveteuses, présentant souvent des fructifications
Norme internationale sont invitées à rechercher la
colorées et des formes de sporulation.
possibilite d’appliquer les éditions les plus récentes
des normes indiquées ci-après. Les membres de la
CEI et de I’ISO possèdent le registre des Normes
internationales en vigueur à un moment donné.
4 Principe
ISO 950: 1979, Céréales - Échantillonnage (des
grains).
4.1 Ensemencement en profondeur des deux mi-
lieux de culture (5.3.1 et 5.3.2) coulés dans deux
ISO 2170:1980, Céréales et légumineuses - Échan-
boîtes de Petri, avec une quantité déterminée de la
tillonnage des produits de mouture.
suspension mère.
ISO 6887:1983, Microbiologie - Directives générales Dans les mêmes conditions, ensemencement des
pour la préparation des dilutions en vue de l’examen dilutions décimales des autres boîtes, obtenues à
microbiologique. partir de la suspension mère.
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ISO 7698:1990(F)
4.2 Incubation en aérobiose des boîtes contenant
5.3 Milieux de culture
le milieu gélosé (5.3.1) pour le dénombrement des
bactéries à 30 “C, pendant 3 jours.
Glose pour dénombrer les bactéries
53.1
Incubation en aérobiose des boîtes contenant le mi-
Composition
lieu gélosé (5.3.2), pour le dénombrement des levu-
res et des moisissures à 25 “C, pendant 3 jours
Tryptonel)
590 g
4 jours ou 5 jours.
Extrait de levure déshydraté
295 g
4.3 Calcul du nombre de bactéries, à partir du
Dextrose anhydre
190 g
nombre de colonies obtenues dans les boîtes rete-
nues de milieu gélosé (5.3.1).
Agar-agar 9 g à 18 g*)
Calcul du nombre de levures et/ou de moisissures,
Eau 1000 ml
à partir du nombre de colonies obtem jes dans les
.
boîtes retenues de milieu gélosé (5.3.2) NOTE 3 Pour éviter le développement de levures,
ajouter 6ventuellement un produit inhibiteur tel que
I’actidione (cycloheximide) ou la natamycine (pimaricine)
autres
5 Diluant, milieux de culture et au milieu de culture, à raison de 0,l g/l.
produits
Préparation
5.1 Composants de base Dissoudre dans l’eau en portant à ébullition, les
composants ou le milieu complet déshydraté. Si né-
Pour améliorer la reproductibilité des résultats, il cessaire, ajuster le pH de sorte qu’après stérili-
sation, il soit de 7,0 à 25 “C.
est recommandé d’utiliser, pour la préparation du
diluant et des milieux de culture, des composants
Répartir le milieu dans des tubes à essais (6.9) à
de base déshydratés ou des milieux complets dés-
raison de 15 ml par tube ou dans des ballons (6.9)
hydratés. De la même facon, des préparations com-
de capacité appropriée, à raison d’environ la moitié
merciales de réactifs peuvent être utilisées. Les
du volume du ballon.
instructions du fabricant doivent être suivies scru-
puleusement.
Stériliser le milieu dans l’autoclave (6.1), à
121 OC + 1 OC pendant 20 min.
-
utilisés doivent être de qua-
Les produits chimiques
lité analytique reconnue
Si le milieu est utilisé extemporanément, le refroidir
avant emploi au bain d’eau (6.7) réglé à
L’eau utilisée doit être de l’eau distillée ou
45 “C + 0,5 “C.
-
déionisée, exempte de substances susceptibles
d’inhiber la croissance des micro-organismes (bac-
Dans le cas contraire, avant de commencer I’exa-
téries, levures et moisissures) dans les conditions
men microbiologique et afin d’éviter toute attente
de l’essai.
au moment de couler la gélose, faire fondre com-
plètement le milieu au bain d’eau bouillante, puis le
Si le diluant et les milieux ne sont pas utilisés
refroidir avant emploi au bain d’eau (6.7) réglé à
extemporanément, ils doivent, sauf spécifications
45 “C + 0,5 “C.
-
contraires, être conservés à l’obscurité entre 0 “C
et -t- 5 “C pendant un mois maximum, dans les
conditions évitant toute modification de leur compo- 5.3.2 Gélose pour dénombrer les levures et
sition. moisissures (Gélose à l’extrait de levure au dextrose
et au chloramphénicol)
5.2 Diluant
Composition
Solution de peptone-chlorure de sodium, voir
Extrait de levure
QI
ISO 6887.
Dextrose (C6Hq2Os)
20 g
NOTE 2 Afin d’améliorer l’homogénéisation des sus-
Chloramphénicol (CllH&12N205) 0,l g
pensions de spores, il est possible d’ajouter un agent de
surface tel que l’ester oléique de sorbitol (Tween 80) à
raison de 0,033 g par litre de diluant. Agar-agar 9 g à 18 g*)
1) Ce terme n’est actuellement utilisé que par certains producteurs de milieu. Toute autre disgestat de caséine donnant
des résultats comparables peut être utilisé.
2) Selon les prescriptions du fabricant.
2
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 7698:1990(F)
1000 ml 6.2 Appareillage pour l’homogénéisation.
Eau
Préparation Conformément à I’ISO 6887, l’un des appareils sui-
vants doit être utilisk
Dissoudre les composants dans l’eau, en portant à
ébullition. Si nécessaire, ajuster le pH de sorte
a) un homogénéisateur rotatif, de préférence à en-
qu’après stérilisation, il soit de 6,6 à 25 OC.
traînement par le haut, dont la fréquence de ro-
tation est comprise entre 8 000 min-1 et
Répartir le milieu dans des récipients (6.9) de capa-
45 000 min-l, avec des bols en verre ou en mé-
cité appropriée.
tal, munis de préférence de couvercles, et résis-
tant aux conditions de stérilisation;
Stériliser le milieu dans l’autoclave (6.1), à
121 OC & 1 “C pendant 15 min.
b) un homogénéisateur, de péristaltique
type
(St0 macher), avec des sacs stériles en plastique.
Si le milieu est utilisé extemporanément, le refroidir
avant emploi au bain d’eau (6.7) réglé à 45 “C
NOTE 6 Les bols et les sacs en plastique
...
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