ISO 6888-2:1999
(Main)Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species) — Part 2: Technique using rabbit plasma fibrinogen agar medium
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species) — Part 2: Technique using rabbit plasma fibrinogen agar medium
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le dénombrement des staphylocoques à coagulase positive (Staphylococcus aureus et autres espèces) — Partie 2: Technique utilisant le milieu gélosé au plasma de lapin et au fibrinogène
La présente partie de l'ISO 6888 spécifie une méthode horizontale pour le dénombrement des staphylocoques à coagulase positive dans les produits destinés à la consommation humaine ou à l'alimentation animale, par comptage des colonies obtenues en milieu solide (milieu au plasma de lapin et au fibrinogène) après incubation en aérobiose à 35°C ou 37°C.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 6888-2
First edition
1999-02-15
Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Horizontal method for the
enumeration of coagulase-positive
staphylococci (Staphylococcus aureus
and other species) —
Part 2:
Technique using rabbit plasma fibrinogen agar
medium
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le dénombrement
des staphylocoques à coagulase positive (Staphylococcus aureus et autres
espèces) —
Partie 2: Technique utilisant le milieu gélosé au plasma de lapin et au
fibrinogène
A
Reference number
ISO 6888-2:1999(E)
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ISO 6888-2:1999(E)
Contents
1 Scope .1
2 Normative references .1
3 Terms and definitions .1
4 Principle.2
5 Diluent and culture media.2
6 Apparatus and glassware .3
7 Sampling.4
8 Preparation of test sample.4
9 Procedure .4
10 Expression of results .5
11 Precision.6
12 Test report .6
Bibliography.7
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or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
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Printed in Switzerland
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ISO 6888-2:1999(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO
member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical
committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting.
Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
International Standard ISO 6888-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Agricultural food products,
Subcommittee SC 9, Microbiology.
This first edition of ISO 6888-2, together with ISO 6888-1, cancels and replaces ISO 6888:1983, which has been
technically revised.
ISO 6888 consists of the following parts, under the general title Microbiology of food and animal feeding stuffs —
Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other
species):
Part 1: Technique using Baird-Parker agar medium
Part 2: Technique using rabbit plasma fibrinogen agar medium
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ISO 6888-2:1999(E)
0 Introduction
0.1 Because of the large variety of food and feed products, this horizontal method may not be appropriate in every
detail for certain products. In this case, different methods, which are specific to these products may be used if
absolutely necessary for justified technical reasons. Nevertheless, every attempt should be made to apply this
horizontal method as far as possible.
When this part of ISO 6888 is next reviewed, account will be taken of all information then available regarding the
extent to which this horizontal method has been followed and the reasons for deviations from this method in the
case of particular products.
The harmonization of test methods cannot be immediate, and for certain groups of products International Standards
and/or national standards may already exist that do not comply with this horizontal method. It is hoped that when
such standards are reviewed they will be changed to comply with this part of ISO 6888 so that eventually the only
remaining departures from this horizontal method will be those necessary for well-established technical reasons.
0.2 ISO 6888 describes two horizontal methods (part 1 and part 2) for the enumeration of coagulase-positive
staphylococci among which enterotoxinogenic strains are encountered. It is mainly concerned with Staphylococcus
aureus, but also with S. intermedius and certain strains of S. hyicus.
In the general case, use part 1 of ISO 6888. However, it is preferable to use the procedure described in part 2 only
for foodstuffs (such as cheeses made from raw milk and certain raw meat products) likely to be contaminated by:
staphylococci forming atypical colonies on a Baird-Parker agar medium;
background flora which can obscure the colonies being sought.
0.3 For the purposes of this part of ISO 6888, the characterization of staphylococci is based on a positive-
coagulase reaction, but it is recognized that some strains of Staphylococcus aureus give weakly positive coagulase
reactions. These latter strains may be confused with other bacteria but they may be distinguished from such other
bacteria by the use of additional tests not included in this part of ISO 6888, such as the sensitivity to lysostaphin, the
production of haemolysin, of thermostable nuclease and of acid from mannitol (see reference [1]).
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Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal
method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci
(Staphylococcus aureus and other species) —
Part 2:
Technique using rabbit plasma fibrinogen agar medium
1 Scope
This part of ISO 6888 describes a horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci in
products intended for human consumption or feeding of animals by counting of colonies obtained on a solid medium
(rabbit plasma fibrinogen medium) after aerobic incubation at 35 °C or 37 °C (see reference [2]).
2 Normative references
The following normative documents contain provisions which, through reference in this text, constitute provisions of
this part of ISO 6888. For dated references, subsequent amendments to, or revisions of, any of these publications
do not apply. However, parties to agreements based on this part of ISO 6888 are encouraged to investigate the
possibility of applying the most recent editions of the normative documents indicated below. For undated
references, the latest edition of the normative document referred to applies. Members of ISO and IEC maintain
registers of currently valid International Standards.
ISO 6887-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Rules for the preparation of the test samples, of initial
suspension and of decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of
the initial suspension and of decimal dilutions.
ISO 6888-1:1999, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of
coagulase positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species) — Part 1: Technique using
Baird-Parker agar medium.
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General rules for microbiological examinations.
3 Terms and definitions
For the purposes of this part of ISO 6888, the following terms and definitions apply.
3.1
coagulase-positive staphylococci
bacteria which form typical colonies in a rabbit plasma fibrinogen selective agar medium when the test is carried out
according to the method specified in this part of ISO 6888
3.2
enumeration of the coagulase-positive staphylococci
determination of the number of coagulase-positive staphylococci found per millilitre or per gram of sample when the
test is carried out according to the method specified in this part of ISO 6888
1
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ISO 6888-2:1999(E)
4 Principle
4.1 Preparation of duplicate poured plates of the rabbit plasma fibrinogen agar medium, with a specified quantity of
the test sample if the product is liquid or with a specified quantity of the initial suspension in the case of other
products.
Inoculation, under the same conditions, using decimal dilutions of the test sample or of the initial suspension, with
two plates per dilution.
1)
4.2 Incubation of the plates at 35 °C or 37 °C for 18 h to 24 h, and a further 24 h if necessary.
4.3 From the number of typical c
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 6888-2
Première édition
1999-02-15
Microbiologie des aliments — Méthode
horizontale pour le dénombrement des
staphylocoques à coagulase positive
(Staphylococcus aureus et autres
espèces) —
Partie 2:
Technique utilisant le milieu gélosé au plasma
de lapin et au fibrinogène
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the
enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus
and other species) —
Part 2: Technique using rabbit plasma fibrinogen agar medium
A
Numéro de référence
ISO 6888-2:1999(F)
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ISO 6888-2:1999(F)
Sommaire
1 Domaine d’application .1
2 Références normatives .1
3 Termes et définitions.1
4 Principe.2
5 Diluant et milieux de culture.2
6 Appareillage et verrerie.3
7 Échantillonnage .4
8 Préparation de l'échantillon pour essai.4
9 Mode opératoire.4
10 Expression des résultats .5
11 Fidélité .6
12 Rapport d'essai .6
Bibliographie.7
© ISO 1999
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque
forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit de l'éditeur.
Organisation internationale de normalisation
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Internet iso@iso.ch
Imprimé en Suisse
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© ISO
ISO 6888-2:1999(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI, Partie 3.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour
vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
La Norme internationale ISO 6888-2 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits agricoles
alimentaires, sous-comité SC 9, Microbiologie.
Cette première édition de l’ISO 6888-2, ensemble avec l’ISO 6888-1, annule et remplace l’ISO 6888:1983 qui a fait
l’objet d’une révision technique.
L’ISO 6888 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Microbiologie des aliments — Méthode
horizontale pour le dénombrement des staphylocoques à coagulase positive (Staphylococcus aureus et autres
espèces):
Partie 1: Technique utilisant le milieu gélosé de Baird-Parker
Partie 2: Technique utilisant le milieu gélosé au plasma de lapin et au fibrinogène
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ISO 6888-2:1999(F)
0 Introduction
0.1 En raison de la grande diversité des produits alimentaires, il est possible que cette méthode horizontale ne soit
pas applicable dans tous ses détails à certains d'entre eux. Dans ce cas, des méthodes différentes, spécifiques à
ces produits, pourront être utilisées si cela s'avère absolument nécessaire pour des raisons techniques justifiées.
Néanmoins, il convient que tous les efforts soient faits pour appliquer cette méthode horizontale chaque fois que
possible.
Lors du prochain réexamen périodique de la présente partie de l'ISO 6888, il sera tenu compte de toutes les
évolutions intervenues depuis sa publication et, notamment, dans quelle mesure cette méthode horizontale aura été
suivie ainsi que les raisons des dérogations dans le cas de produits particuliers.
L'harmonisation de toutes les méthodes d'essai ne peut être réalisée de façon immédiate; de ce fait, il peut déjà
exister des Normes internationales et/ou nationales pour certains groupes de produits, qui ne concordent pas avec
la présente méthode horizontale. Lorsque de telles normes viendront en révision, il serait souhaitable de les aligner
avec les prescriptions de la présente partie de l'ISO 6888 et de ne conserver que les seules divergences justifiées
indispensables pour des raisons techniques.
0.2 L’ISO 6888 décrit deux méthodes horizontales (partie 1 et partie 2) pour le dénombrement des staphylocoques
à coagulase positive, parmi lesquels se rencontrent les souches entérotoxinogènes. Il s'agit principalement de
Staphylococcus aureus, mais également de S. intermedius et de certaines souches de S. hyicus.
Dans le cas général, utiliser la partie 1 de l'ISO 6888. Cependant, il est préférable d'utiliser le mode opératoire décrit
dans la partie 2 uniquement pour les denrées alimentaires (telles que les fromages au lait cru et certains produits
carnés crus) susceptibles d'être contaminées par
des staphylocoques formant des colonies non caractéristiques sur milieu gélosé de Baird-Parker;
une flore annexe pouvant masquer les colonies recherchées.
0.3 Pour les besoins de la présente partie de l'ISO 6888, la caractérisation des staphylocoques repose sur une
réaction positive à la coagulase, mais il est reconnu que certaines souches des Staphylococcus aureus donnent
une réaction faiblement positive à la coagulase. Ces dernières souches peuvent être confondues avec d'autres
bactéries; il est possible d'en faire la distinction par des essais complémentaires non inclus dans la présente partie
de l'ISO 6888, telles la sensibilité à la lysostaphine, la production d’hémolysine, de nucléase thermostable et d’acide
à partir de mannitol (voir la référence [1]).
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NORME INTERNATIONALE © ISO ISO 6888-2:1999(F)
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour
le dénombrement des staphylocoques à coagulase positive
(Staphylococcus aureus et autres espèces) —
Partie 2:
Technique utilisant le milieu gélosé au plasma de lapin et au
fibrinogène
1 Domaine d’application
La présente partie de l'ISO 6888 spécifie une méthode horizontale pour le dénombrement des staphylocoques à
coagulase positive dans les produits destinés à la consommation humaine ou à l'alimentation animale, par
comptage des colonies obtenues en milieu solide (milieu au plasma de lapin et au fibrinogène) après incubation en
aérobiose à 35 °C ou 37 °C (voir la référence [2]).
2 Références normatives
Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui par suite de la référence qui y est faite,
constituent des dispositions valables pour la présente partie de l'ISO 6888. Pour les références datées, les
amendements ultérieurs ou les révisions de ces publications ne s’appliquent pas. Toutefois, les parties prenantes
aux accords fondés sur la présente partie de l'ISO 6888 sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer les
éditions les plus récentes des documents normatifs indiqués ci-après. Pour les références non datées, la dernière
édition du document normatif en référence s’applique. Les membres de la CEI et de l'ISO possèdent le registre des
Normes internationales en vigueur à un moment donné.
ISO 6887-1, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des dilutions
décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 1: Règles générales pour la préparation de la suspension
mère et des dilutions décimales.
ISO 6888-1:1999, Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le dénombrement des staphylocoques à
coagulase positive (Staphylococcus aureus et autres espèces) — Partie 1: Technique utilisant le milieu gélosé de
Baird-Parker.
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Règles générales pour les examens microbiologiques.
3 Termes et définitions
Pour les besoins de la présente partie de l’ISO 6888, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
staphylocoques à coagulase positive
bactéries formant des colonies caractéristiques en milieu sélectif gélosé au plasma de lapin et au fibrinogène,
lorsque l'essai est effectué selon la méthode spécifiée dans la présente partie de l'ISO 6888
1
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© ISO
ISO 6888-2:1999(F)
3.2
dénombrement des staphylocoques à coagulase positive
détermination du nombre de staphylocoques à coagulase positive trouvé par millilitre ou par gramme d'échantillon,
lorsque l'essai est effectué selon la méthode spécifiée dans la présente partie de l'ISO 6888
4 Principe
Ensemencement en profondeur du milieu gélosé au plasma de lapin et au fibrinogène, coulé dans deux boîtes
4.1
de Petri, avec une quantité déterminée de l'échantillon pour essai si le produit est liquide, ou avec une quantité
déterminée de la suspension mère dans le cas d'autres produits.
Dans les mêmes conditions, ensemencement des dilutions décimales obtenues à partir de l'échantillon pour essai
ou de la suspension mère, à raison de deux boîtes par dilution.
1)
4.2 Incubation de ces boîtes à 35 °C ou 37 °C pendant 18 h à 24 h et, si nécessaire, 24 h supplémentaires.
4.3 À partir du nombre de colonies caractéristiques par boîte de Petri, calcul du nombre de staphylocoques à
coagulase positive par mil
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.