SIST ISO 4389:1998

Tobacco -- Determination of organochlorine pesticide residues -- Gas chromatographic method

Tabac -- Dosage des résidus de pesticides organochlorés -- Méthode par chromatographie en phase gazeuse

Tobak - Določevanje ostankov organokloridnih pesticidov - Plinska kromatografska metoda

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 31-Jan-1998
• Withdrawal Date: 31-Aug-2002
• ICS: 65.160 - Tobacco, tobacco products and related equipment
• Technical Committee: TIT - Tobaco and tobaco products
• Current Stage: 9900 - Withdrawal (Adopted Project)
• Start Date: 01-Sep-2002
• Due Date: 01-Sep-2002
• Completion Date: 01-Sep-2002
• Ref Project: ISO 4389:1997 - Tobacco — Determination of organochlorine pesticide residues — Gas chromatographic method

Relations

• Parent: ISO 4389:1997/Cor 1:1998 - Tobacco — Determination of organochlorine pesticide residues — Gas chromatographic method — Technical Corrigendum 1
• Effective Date: 12-May-2008
• Revised: ISO 4389:2000 - Tobacco and tobacco products — Determination of organochlorine pesticide residues — Gas chromatographic method
• Effective Date: 12-May-2008
• Revised: SIST ISO 4389:2002 - Tobacco and tobacco products -- Determination of organochlorine pesticide residues -- Gas chromatographic method
• Effective Date: 12-May-2008
• Revised: SIST ISO 4389:1995 - Tobacco and tobacco products -- Determination of organochlorine pesticide residues (Reference method)
• Effective Date: 12-May-2008
• Revised: ISO 4389:1981 - Tobacco and tobacco products — Determination of organochlorine pesticide residues (Reference method)
• Effective Date: 12-May-2008

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 4389
Second edition
1997-12-15
Tobacco — Determination of
organochlorine pesticide residues — Gas
chromatographic method
Tabac — Dosage des résidus de pesticides organochlorés — Méthode par
chromatographie en phase gazeuse
A
Reference number
ISO 4389:1997(E)

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ISO 4389:1997(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (ISO member bodies). The work of
preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which
a technical committee has been established has the right to be represented
on that committee. International organizations, governmental and non-
governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission
(IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard ISO 4389 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 126, Tobacco and tobacco products.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 4389:1981)
which has been technically revised as a result of extensive examination by
members of the CORESTA Pesticide Task Force.
Advances have been made and procedures changed in order to use toluene
and n-hexane rather than benzene and acetonitrile. Lower detection limits are
obtainable for many of the compounds quoted in table 1. A 12-laboratory
collaborative study has yielded data for repeatability and reproducibility and
spiked standard recovery. Such data were not available in the first edition.
For leaf tobacco, the method has been shown to be free of interfering
chromatogram peaks originating from non-organochlorine pesticide
substances. However, because it cannot be assumed that interference does
not arise in the analysis of tobacco products, it will be seen that the scope
has been limited to leaf tobacco.
The method can be used on tobacco products if the analyst is able to
recognize chromatogram interference and to investigate the chemical
structure of interfering compounds by the use of a mass-spectrometric
method. Appropriate procedures for this type of analysis may not be readily
©  ISO 1997
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced
or utilized in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying and
microfilm, without permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case postale 56 • CH-1211 Genève 20 • Switzerland
Internet [e-mail]
X.400 c=ch; a=400net; p=iso; o=isocs; s=central
Printed in Switzerland
ii

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ISO ISO 4389:1997(E)
available to users of this International Standard and have not, therefore, been
included.
There is clearly a need for a method which is formally applicable to both leaf
tobacco and tobacco products. Research is continuing which may result in a
third edition with such a scope.
Annexes A to C of this International Standard are for information only.
iii

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INTERNATIONAL STANDARD  ISO ISO 4389:1997(E)
Tobacco — Determination of organochlorine pesticide residues —
Gas chromatographic method
1 Scope
This International Standard specifies a method for the gas chromatographic determination of pesticide residues in
tobacco including leaf tobacco.
The method is applicable to the determination in leaf tobacco of the organochlorine pesticides listed in table 1.
The method is particularly recommended for determination of the substances within the detection limits listed in table 1.
NOTE — ISO 1750 contains the systematic chemical names and structures corresponding to the common names in table 1.
2 Normative references
The following standards contain provisions which, through reference in this text, constitute provisions of this
International Standard. At the time of publication, the editions indicated were valid. All standards are subject to revision,
and parties to agreements based on this International Standard are encouraged to investigate the possibility of
applying the most recent editions of the standards indicated below. Members of IEC and ISO maintain registers of
currently valid International Standards.
ISO 648:1977, Laboratory glassware — One-mark pipettes.
ISO 1042:1983, Laboratory glassware — One-mark volumetric flasks.
ISO 3696:1987, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods.
ISO 4874:1981, Tobacco — Sampling of batches of raw material — General principles.
3 Principle
Extraction of the pesticide residues from a dried and milled sample, mixed with Florisil®, by n-hexane in a special
Soxhlet extractor. Determination of pesticide residues by gas chromatography equipped with electron-capture detector
without any further clean-up.
4 Reagents
4.1 General
All the reagents shall be suitable for pesticide residue analysis. All solvents shall be checked for purity before use by
carrying out a blank determination using exactly the same procedure (extraction and gas chromatography) as used for
the test sample. The chromatogram obtained from the solvents shall have a baseline without noticeable peaks that
could interfere with those from the pesticide residues being determined.
Use only degassed water in accordance with at least grade 2 of ISO 3696.
1

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ISO
ISO 4389:1997(E)
Table 1 — List of substances with detection limits
Substance ISO 1750 Detection limit
common name μg/g
aldrin aldrin 0,02
trans-chlordane chlordane 0,02
p,p'-DDE — 0,02
o,p'-DDT — 0,04
p,p'-DDT DDT 0,06
dieldrin dieldrin 0,02
α-endosulfan endosulfan 0,03
HCB hexachlorobenzene 0,02
α-HCH HCH 0,02
or or
α-BHC BHC
β-HCH HCH 0,02
or or
β-BHC BHC
γ-HCH gamma-HCH 0,01
or (Lindane) or
γ-BHC gamma-BHC
δ-HCH HCH 0,02
or or
δ-BHC BHC
heptachlor heptachlor 0,02
heptachlor -0,02
epoxide
o,p'-TDE -0,03
or
o,p'-DDD
p,p'-TDE TDE 0,02
or
p,p'-DDD
o,p'-DDE - 0,03
4.2 n-Hexane
4.3 Reference substances
Certified reference materials of minimum purity 95 % (m/m) of the substances listed in table 1.
NOTE — trans-Chlordane is used as an indicator for chlordane (technical mixture). If α-endosulfan is detected by this method,
it is advisable to determine residues of the sum of α-endosulfan, β-endosulfan and endosulfan sulfate by a method suitable for
such determinations.
2

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ISO
ISO 4389:1997(E)
4.4 Internal standard
1)
Use Mirex, an obsolete pesticide which has been superseded (see reference [2] in annex C).
2,6 3,9 5.8
NOTE — Mirex is a generic name for dodecachloropentacyclo[5.2.1.0 .0 .0 ]decane.
4.5 Toluene
4.6 Internal standard stock solution
Weigh, to the nearest 0,0001 g, 0,02 g of Mirex (4.4) into a 100 ml volumetric flask. Dilute to the mark with n-hexane
(4.2).
4.6.1 Internal standard solution
Pipette 5 ml of the internal standard stock solution (4.6) into a 200 ml volumetric flask and dilute to the mark with
n-hexane to give a solution containing approximately 5 mg/ml of Mirex. Store the internal standard solution at between
0 °C and +4 °C and exclude light. Under these conditions the internal standard solution is stable for at least 6 months.
4.7 Standard pesticide solutions
Store all pesticide solutions at between 0 °C and +4 °C and exclude light. Under these conditions the solutions are
stable for at least 6 months.
4.7.1 Individual standard stock solutions
Weigh, to the nearest 0,0001 g, 0,02 g of each pesticide into individual 100 ml volumetric flasks. Dilute to the mark with
n-hexane to give individual standard stock solutions containing approximately 200 μg/ml of the individual pesticide.
NOTE — In the case of ß-HCH the standard stock solution should be made by dissolving the pesticide in toluene because of
reduced solubility in n-hexane.
4.7.2 Mixed stock solution A
Pipette 5 ml of each individual standard stock solution (4.7.1) into a single 200 ml volumetric flask and dilute to the
mark with n-hexane (or toluene if the conditions of the Note in 4.7.1 are applicable) to give a solution containing
approximately 5 μg/ml of each pesticide.
4.7.3 Mixed stock solution B
Pipette 1 ml of mixed stock solution A (4.7.2) into a 10 ml volumetric flask and dilute to the mark with n-hexane to give
a solution containing approximately 0,5 μg/ml of each pesticide.
4.7.4 Standard calibration solution
Pipette 1 ml of both mixed stock solution A (4.7.2) and the internal standard solution (4.6.1) into a 100 ml volumetric
flask and dilute to the mark with n-hexane to give a solution containing approximately 0,05 μg/ml of each pesticide and
internal standard.

2)
4.8 Florisil® ,60 mesh to 100 mesh.
NOTE — Florisil® is a special, selected variety of magnesium silicate. The mesh size range designated as 60 mesh to 100 mesh
corresponds to a mesh aperture size range of 250 m to 150 m.
μ μ

1)
  Mirex is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the convenience of users of this
International Standard and does not constitute an endorsement by ISO of this product.
2)
  Florisil® is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the convenience of users of
this International Standard and does not constitute an endorsement by ISO of this product.
3

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ISO
ISO 4389:1997(E)
4.8.1 Requirements
The quality of the Florisil® is one of the most critical features of the test method. The activity of the Florisil® needs to be
sufficient to retain impurities present in the extract from the sample while allowing the pesticide residues to be eluted.
The Florisil® shall first be pre-treated as described in 4.8.2. Only Florisil® that passes the subsequent verification test
described in 4.8.3 shall be used.
4.8.2 Pretreatment
Heat sufficient Florisil® for the verification test for at least 5 h in a quartz crucible in a muffle furnace at 550 °C. Allow
the Florisil® to cool in a desiccator that contains no desiccant and transfer to a round-bottom flask. Add 5 ml of water
for every 100 g of Florisil®. Mix thoroughly in a rotating flask for approximately 1 h. Allow the Florisil® to equilibrate by
storing in a tightly closed glass container for at least 48 h before proceeding as described in 4.8.3.
4.8.3 Verification of activity level
The activity level of the Florisil® is checked by the extraction of dieldrin from n-hexane solution. The solution shall have
a concentration equivalent to that of an extract from tobacco containing 1,0 mg/g of this pesticide. The activity level of
the pretreated Florisil® is correct if the recovery of dieldrin is better than 95 %.
The activity of the Florisil® shall be checked each time a new portion is prepared.
5 Apparatus
It is essential to clean all glassware very thoroughly before use and to avoid the use of plastics containers and
stopcock grease, otherwise impurities may be introduced into the solvents. All volumetric flasks and pipettes shall
comply with class A of ISO 1042 and class A of ISO 648 respectively.
Usual laboratory apparatus and the following items.
5.1 Rotary evaporator.
5.2 Tobacco mill, with 2 mm mesh.
5.3 Oven, with ventilation.
5.4 Muffle furnace.
5.5 Heating mantles.
5.6 Soxhlet extractor, for continuous extraction (see figure 1).
5.7 Reflux condenser.
5.8 Desiccator.
5.9 Quartz crucible.
5.10 Gas chromatograph.
5.10.1 Basic requirements
Operate the gas chromatograph in accordance with the manufacturer's instructions. The injection port, oven and
detector shall each be equipped with a separate heating unit.
The conditions given in 5.10.2 to 5.10.7 have been found to be sati
...

SLOVENSKI STANDARD
SIST ISO 4389:1998
01-februar-1998
7REDN'RORþHYDQMHRVWDQNRYRUJDQRNORULGQLKSHVWLFLGRY3OLQVND
NURPDWRJUDIVNDPHWRGD
Tobacco -- Determination of organochlorine pesticide residues -- Gas chromatographic
method
Tabac -- Dosage des résidus de pesticides organochlorés -- Méthode par
chromatographie en phase gazeuse
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 4389:1997
ICS:
65.160 7REDNWREDþQLL]GHONLLQ Tobacco, tobacco products
RSUHPD and related equipment
SIST ISO 4389:1998 en
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.

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SIST ISO 4389:1998
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 4389
Second edition
1997-12-15
Tobacco — Determination of
organochlorine pesticide residues — Gas
chromatographic method
Tabac — Dosage des résidus de pesticides organochlorés — Méthode par
chromatographie en phase gazeuse
A
Reference number
ISO 4389:1997(E)

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SIST ISO 4389:1998
ISO 4389:1997(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (ISO member bodies). The work of
preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which
a technical committee has been established has the right to be represented
on that committee. International organizations, governmental and non-
governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission
(IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard ISO 4389 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 126, Tobacco and tobacco products.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 4389:1981)
which has been technically revised as a result of extensive examination by
members of the CORESTA Pesticide Task Force.
Advances have been made and procedures changed in order to use toluene
and n-hexane rather than benzene and acetonitrile. Lower detection limits are
obtainable for many of the compounds quoted in table 1. A 12-laboratory
collaborative study has yielded data for repeatability and reproducibility and
spiked standard recovery. Such data were not available in the first edition.
For leaf tobacco, the method has been shown to be free of interfering
chromatogram peaks originating from non-organochlorine pesticide
substances. However, because it cannot be assumed that interference does
not arise in the analysis of tobacco products, it will be seen that the scope
has been limited to leaf tobacco.
The method can be used on tobacco products if the analyst is able to
recognize chromatogram interference and to investigate the chemical
structure of interfering compounds by the use of a mass-spectrometric
method. Appropriate procedures for this type of analysis may not be readily
©  ISO 1997
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced
or utilized in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying and
microfilm, without permission in writing from the publisher.
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Case postale 56 • CH-1211 Genève 20 • Switzerland
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ISO ISO 4389:1997(E)
available to users of this International Standard and have not, therefore, been
included.
There is clearly a need for a method which is formally applicable to both leaf
tobacco and tobacco products. Research is continuing which may result in a
third edition with such a scope.
Annexes A to C of this International Standard are for information only.
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INTERNATIONAL STANDARD  ISO ISO 4389:1997(E)
Tobacco — Determination of organochlorine pesticide residues —
Gas chromatographic method
1 Scope
This International Standard specifies a method for the gas chromatographic determination of pesticide residues in
tobacco including leaf tobacco.
The method is applicable to the determination in leaf tobacco of the organochlorine pesticides listed in table 1.
The method is particularly recommended for determination of the substances within the detection limits listed in table 1.
NOTE — ISO 1750 contains the systematic chemical names and structures corresponding to the common names in table 1.
2 Normative references
The following standards contain provisions which, through reference in this text, constitute provisions of this
International Standard. At the time of publication, the editions indicated were valid. All standards are subject to revision,
and parties to agreements based on this International Standard are encouraged to investigate the possibility of
applying the most recent editions of the standards indicated below. Members of IEC and ISO maintain registers of
currently valid International Standards.
ISO 648:1977, Laboratory glassware — One-mark pipettes.
ISO 1042:1983, Laboratory glassware — One-mark volumetric flasks.
ISO 3696:1987, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods.
ISO 4874:1981, Tobacco — Sampling of batches of raw material — General principles.
3 Principle
Extraction of the pesticide residues from a dried and milled sample, mixed with Florisil®, by n-hexane in a special
Soxhlet extractor. Determination of pesticide residues by gas chromatography equipped with electron-capture detector
without any further clean-up.
4 Reagents
4.1 General
All the reagents shall be suitable for pesticide residue analysis. All solvents shall be checked for purity before use by
carrying out a blank determination using exactly the same procedure (extraction and gas chromatography) as used for
the test sample. The chromatogram obtained from the solvents shall have a baseline without noticeable peaks that
could interfere with those from the pesticide residues being determined.
Use only degassed water in accordance with at least grade 2 of ISO 3696.
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ISO
ISO 4389:1997(E)
Table 1 — List of substances with detection limits
Substance ISO 1750 Detection limit
common name μg/g
aldrin aldrin 0,02
trans-chlordane chlordane 0,02
p,p'-DDE — 0,02
o,p'-DDT — 0,04
p,p'-DDT DDT 0,06
dieldrin dieldrin 0,02
α-endosulfan endosulfan 0,03
HCB hexachlorobenzene 0,02
α-HCH HCH 0,02
or or
α-BHC BHC
β-HCH HCH 0,02
or or
β-BHC BHC
γ-HCH gamma-HCH 0,01
or (Lindane) or
γ-BHC gamma-BHC
δ-HCH HCH 0,02
or or
δ-BHC BHC
heptachlor heptachlor 0,02
heptachlor -0,02
epoxide
o,p'-TDE -0,03
or
o,p'-DDD
p,p'-TDE TDE 0,02
or
p,p'-DDD
o,p'-DDE - 0,03
4.2 n-Hexane
4.3 Reference substances
Certified reference materials of minimum purity 95 % (m/m) of the substances listed in table 1.
NOTE — trans-Chlordane is used as an indicator for chlordane (technical mixture). If α-endosulfan is detected by this method,
it is advisable to determine residues of the sum of α-endosulfan, β-endosulfan and endosulfan sulfate by a method suitable for
such determinations.
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ISO
ISO 4389:1997(E)
4.4 Internal standard
1)
Use Mirex, an obsolete pesticide which has been superseded (see reference [2] in annex C).
2,6 3,9 5.8
NOTE — Mirex is a generic name for dodecachloropentacyclo[5.2.1.0 .0 .0 ]decane.
4.5 Toluene
4.6 Internal standard stock solution
Weigh, to the nearest 0,0001 g, 0,02 g of Mirex (4.4) into a 100 ml volumetric flask. Dilute to the mark with n-hexane
(4.2).
4.6.1 Internal standard solution
Pipette 5 ml of the internal standard stock solution (4.6) into a 200 ml volumetric flask and dilute to the mark with
n-hexane to give a solution containing approximately 5 mg/ml of Mirex. Store the internal standard solution at between
0 °C and +4 °C and exclude light. Under these conditions the internal standard solution is stable for at least 6 months.
4.7 Standard pesticide solutions
Store all pesticide solutions at between 0 °C and +4 °C and exclude light. Under these conditions the solutions are
stable for at least 6 months.
4.7.1 Individual standard stock solutions
Weigh, to the nearest 0,0001 g, 0,02 g of each pesticide into individual 100 ml volumetric flasks. Dilute to the mark with
n-hexane to give individual standard stock solutions containing approximately 200 μg/ml of the individual pesticide.
NOTE — In the case of ß-HCH the standard stock solution should be made by dissolving the pesticide in toluene because of
reduced solubility in n-hexane.
4.7.2 Mixed stock solution A
Pipette 5 ml of each individual standard stock solution (4.7.1) into a single 200 ml volumetric flask and dilute to the
mark with n-hexane (or toluene if the conditions of the Note in 4.7.1 are applicable) to give a solution containing
approximately 5 μg/ml of each pesticide.
4.7.3 Mixed stock solution B
Pipette 1 ml of mixed stock solution A (4.7.2) into a 10 ml volumetric flask and dilute to the mark with n-hexane to give
a solution containing approximately 0,5 μg/ml of each pesticide.
4.7.4 Standard calibration solution
Pipette 1 ml of both mixed stock solution A (4.7.2) and the internal standard solution (4.6.1) into a 100 ml volumetric
flask and dilute to the mark with n-hexane to give a solution containing approximately 0,05 μg/ml of each pesticide and
internal standard.

2)
4.8 Florisil® ,60 mesh to 100 mesh.
NOTE — Florisil® is a special, selected variety of magnesium silicate. The mesh size range designated as 60 mesh to 100 mesh
corresponds to a mesh aperture size range of 250 m to 150 m.
μ μ

1)
  Mirex is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the convenience of users of this
International Standard and does not constitute an endorsement by ISO of this product.
2)
  Florisil® is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the convenience of users of
this International Standard and does not constitute an endorsement by ISO of this product.
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©
ISO
ISO 4389:1997(E)
4.8.1 Requirements
The quality of the Florisil® is one of the most critical features of the test method. The activity of the Florisil® needs to be
sufficient to retain impurities present in the extract from the sample while allowing the pesticide residues to be eluted.
The Florisil® shall first be pre-treated as described in 4.8.2. Only Florisil® that passes the subsequent verification test
described in 4.8.3 shall be used.
4.8.2 Pretreatment
Heat sufficient Florisil® for the verification test for at least 5 h in a quartz crucible in a muffle furnace at 550 °C. Allow
the Florisil® to cool in a desiccator that contains no desiccant and transfer to a round-bottom flask. Add 5 ml of water
for every 100 g of Florisil®. Mix thoroughly in a rotating flask for approximately 1 h. Allow the Florisil® to equilibrate by
storing in a tightly closed glass container for at least 48 h before proceeding as described in 4.8.3.
4.8.3 Verification of activity level
The activity level of the Florisil® is checked by the extraction of dieldrin from n-hexane solution. The solution shall have
a concentration equivalent to that of an extract from tobacco containing 1,0 mg/g of this pesticide. The activity level of
the pretreated Florisil® is correct if the recovery of dieldrin is better than 95 %.
The activity of the Florisil® shall be checked each time a new portion is prepared.
5 Apparatus
It is essential to clean all glassware very thoroughly before use and to avoid the use of plastics containers and
stopcock grease, otherwise impurities may be introduced into the solvents. All volumetric flasks and pipettes shall
comply with class A of ISO 1042 and class A of ISO 648 respectively.
Usual laboratory apparatus and the following items.
5.1 Rotary evaporator.
5.2 Tobacco mill, wi
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 4389
Deuxième édition
1997-12-15
Tabac — Dosage des résidus de pesticides
organochlorés — Méthode par
chromatographie en phase gazeuse
Tobacco — Determination of organochlorine pesticide residues — Gas
chromatographic method
A
Numéro de référence
ISO 4389:1997(F)

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ISO 4389:1997(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d'organismes nationaux de normalisation (comités membres de
l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales,
en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore
étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en
ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 4389 a été élaborée par le comité technique
ISO/TC 126, Tabac et produits du tabac.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO
4389:1981) et constitue une révision technique à la suite d'un examen
approfondi réalisé par les membres du sous-groupe «Pesticides» du
CORESTA.
Des progrès ont été réalisés et les modes opératoires ont été modifiées
afin d'utiliser le toluène et le n-hexane au lieu du benzène et de
l'acétonitrile. Des limites de détection plus basses peuvent être atteintes
pour la plupart des composés dont la liste figure dans le tableau 1. Un
essai circulaire impliquant 12 laboratoires a permis d'obtenir des données
relatives à la répétabilité et la reproductibilité ainsi que sur la récupération
des étalons ajoutés. Ces informations ne figuraient pas dans la première
édition.
La méthode a prouvé qu'il n'y avait pas de pics chromatographiques
interférants provenant de pesticides non organochlorés, pour le tabac en
feuilles. Par contre, comme ceci ne peut être affirmé en ce qui concerne
l'analyse des produits du tabac, le domaine d'application a été limité au
tabac en feuilles.
©  ISO 1997
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord
écrit de l'éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case postale 56 • CH-1211 Genève 20 • Suisse
Internet [e-mail]
X.400 c=ch; a=400net; p=iso; o=isocs; s=central
Imprimé en Suisse
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ISO ISO 4389:1997(F)
La méthode peut être utilisée sur les produits du tabac à la condition que
l'analyste soit capable de reconnaître les interférences possibles sur le
chromatogramme, et qu'il sache les identifier par une méthode de
spectrométrie de masse. De telles méthodes appropriées ne pouvant
actuellement être mises à la disposition de l'utilisateur, elles ne sont pas
incluses dans la présente Norme internationale.
Il y a un besoin clairement identifié d'élaborer une méthode qui soit à la fois
applicable au tabac en feuilles et aux produits du tabac. Les recherches se
poursuivent actuellement, et il est possible que le domaine d'application de
la troisième édition de la présente Norme internationale puisse, dans le
futur, couvrir cet ensemble.
Les annexes A à C de la présente Norme internationale sont données
uniquement à titre d’information.
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NORME INTERNATIONALE  ISO ISO 4389:1997(F)
Tabac — Dosage des résidus de pesticides organochlorés —
Méthode par chromatographie en phase gazeuse
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode de dosage par chromatographie en phase gazeuse des
résidus de pesticides dans le tabac y compris les feuilles de tabac.
La méthode s'applique au dosage dans les feuilles de tabac, des pesticides organochlorés dont la liste figure dans
le tableau 1.
La méthode est particulièrement recommandée pour le dosage de ces substances dans les limites de détection
données dans le tableau 1.
NOTE Les noms chimiques et les structures correspondant aux noms communs sont indiqués dans le tableau 1.
2 Références normatives
Les normes suivantes contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui en est faite, constituent des
dispositions valables pour la présente Norme internationale. Au moment de la publication, les éditions indiquées
étaient en vigueur. Toute norme est sujette à révision et les parties prenantes des accords fondés sur la présente
Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer les éditions les plus récentes des normes
indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de l'ISO possèdent le registre des Normes internationales en vigueur
à un moment donné.
ISO 648:1977, Verrerie de laboratoire — Pipette à un trait.
ISO 1042:1983, Verrerie de laboratoire — Fioles jaugées à un trait.
ISO 3696:1987, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d'essai.
ISO 4874:1981, Tabac — Echantillonnage des lots de matière première — Principes généraux.
3 Principe
Dans un extracteur type Soxhlet spécial, extraction par le n-hexane des résidus de pesticides d'un échantillon de
tabac séché et broyé, mélangé avec du Florisil. Dosage des résidus de pesticides par chromatographie en phase
gazeuse sur un appareil équipé d'un détecteur à capture d'électrons sans autre purification.
1

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ISO
ISO 4389:1997(F)
4 Réactifs
4.1 Généralités
Tous les réactifs doivent être de qualité appropriée pour l'analyse des résidus de pesticides. Vérifier la pureté de
tous les solvants avant l'analyse en réalisant un essai à blanc dans les mêmes conditions opératoires que celles
utilisées pour l'échantillon pour essai (extraction et chromatographie en phase gazeuse) et s'assurer que sur le
chromatogramme obtenu, la ligne de base ne présente pas de pics notables susceptibles d'interférer avec ceux des
résidus de pesticides à doser.
Utiliser uniquement de l'eau dégazée répondant au minimum au grade 2 de l'ISO 3696.
Tableau 1 — Liste des substances de référence et limites de détection
Substance Nom commun Limite de détection
donné dans l'ISO 1750 μg/g
aldrine aldrine 0,02
trans-chlordane chlordane 0,02
p,p'-DDE - 0,02
o,p'-DDT - 0,04
p,p'-DDT DDT 0,06
dieldrine dieldrine 0,02
endosulfan 0,03
α-endosulfan
HCB hexachlorobenzene 0,02
α-HCH HCH 0,02
ou
ou
BHC
α-BHC
HCH 0,02
β-HCH
ou
ou
BHC
β-BHC
γ-HCH gamma-HCH 0,01
(lindane) ou
ou
gamma-BHC
γ-BHC
δ-HCH HCH 0,02
ou
ou
BHC
δ-BHC
heptachlore heptachlore 0,02
heptachlore époxyde - 0,02
o,p'-TDE
ou - 0,03
o,p'-DDD
p,p'-TDE
ou TDE 0,02
p,p'-DDD
o,p'-DDE - 0,03
4.2 n-Hexane.
4.3 Substances de référence
Étalons certifiés, d'une pureté minimale de 95 % (m/m) des substances énumérées dans le tableau 1.
NOTE Le trans-chlordane est utilisé comme indicateur pour le chlordane (mélange technique). Si de l'α-endosulfan est détecté
par cette méthode il est conseillé de réaliser le dosage de la somme de l'α-endosulfan, du β-endosulfan et du sulfate
d'endosulfan par une méthode appropriée.
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ISO
ISO 4389:1997(F)
4.4 Étalon interne
1)
Utiliser Mirex , un pesticide qui n'est plus en usage actuellement (voir référence [2] en annexe C).
2,6 3,9 5,8
NOTE Mirex est le nom générique du dodécachloropentacyclo [5.2.1.0 .0 .0 ] décane.
4.5 Toluène.
4.6 Solution mère d'étalon interne
Peser, à 0,000 1 g près, 0,02 g de Mirex (4.4) dans une fiole jaugée de 100 ml. Ajuster au trait repère avec du n-
hexane (4.2).
4.6.1 Solution d'étalon interne
À l'aide d'une pipette, prélever 5 ml de la solution mère d'étalon interne (4.6) et les placer dans une fiole jaugée de
200 ml. Ajuster au trait avec du n-hexane, pour obtenir une solution contenant environ 5 μg/ml de Mirex. Conserver
cette solution entre 0 °C et + 4 °C et à l'abri de la lumière. Dans ces conditions, la solution d'étalon interne est
stable pour une durée d'au moins 6 mois.
4.7 Solutions étalons de pesticides
Conserver toutes les solutions de pesticides entre 0 °C et + 4 °C à l'abri de la lumière. Dans ces conditions, ces
solutions sont stables pour une durée d'au moins 6 mois.
4.7.1 Solutions mères de chacun des étalons de pesticides
Peser à 0,000 1 g près, 0,02 g de chacun des pesticides dans des fioles jaugées individuelles de 100 ml. Ajuster
chacune des fioles au trait avec du n-hexane afin d'obtenir des solutions mères étalons ayant une concentration
approximative en pesticide de 200 μg/ml.
NOTE Dans le cas d’utilisation de β-HCH, préparer la solution mère correspondante en diluant le pesticide dans du toluène en
raison de la solubilité réduite du n-hexane.
4.7.2 Solution mère mélangée A
Prélever à la pipette, 5 ml de chacune des solutions mères de chacun des étalons de pesticides (4.7.1) et les
introduire dans une fiole jaugée de 200 ml. Ajuster au trait avec du n-hexane (ou du toluène si les conditions
précisées dans la note de 4.7.1 s’appliquent) pour obtenir une solution contenant approximativement 5 μg/ml de
chacun des pesticides.
4.7.3 Solution mère mélangée B
Prélever à la pipette 1 ml de la solution mère mélangée A (4.7.2) et l'introduire dans une fiole jaugée de 10 ml.
Ajuster au trait repère avec du n-hexane pour obtenir une solution contenant approximativement 0,5 μg/ml de
chacun des pesticides.
4.7.4 Solution d'étalonnage
Prélever à la pipette 1 ml de la solution-mère mélangée A (4.7.2) et 1 ml de solution d'étalon interne (4.6.1) et les
placer dans une fiole jaugée de 100 ml. Ajuster au trait repère avec du n-hexane pour obtenir une solution
contenant approximativement 0,05 μg/ml de chacun des pesticides et d'étalon interne.

1)
Mirex est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l'intention des
utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que l'ISO approuve ou recommande l'emploi exclusif
du produit ainsi désigné.
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ISO
ISO 4389:1997(F)
2)
4.8 Florisil , de 60 mesh à 100 mesh.
NOTE Florisil est le nom commercial d'une variété particulière de silicate de magnésium. La granulométrie indiquée de 60
mesh à 100 mesh correspond à une gamme d'ouvertures de maille allant de 250 μm à 150 μm.
4.8.1 Exigences
La qualité du Florisil est un des points les plus critiques de la méthode d'essai. L'activité du Florisil doit être
suffisante pour retenir les impuretés présentes dans l'extrait de l'échantillon tout en permettant l'élution des résidus
de pesticides. Il est donc nécessaire de procéder à un traitement préalable du Florisil comme indiqué en 4.8.2 et
de n'utiliser que du Florisil ayant satisfait à l'essai de vérification décrit en 4.8.3.
4.8.2 Traitement préalable
Placer une quantité suffisante de Florisil pour l'essai de vérification dans une coupelle en quartz et chauffer dans
un four à moufle à 550 °C pendant au moins 5 h. Laisser le Florisil refroidir dans un dessiccateur ne contenant pas
de déshydratant, et transférer dans un ballon à fond rond. Ajouter 5 ml d'eau par 100 g de Florisil. Mélanger
soigneusement dans une fiole placée en rotation pendant environ 1 h. Laisser le Florisil atteindre l'équilibre en le
conservant dans un récipient en verre fermé étanche pendant au moins 48 h avant de procéder comme décrit en
4.8.3.
4.8.3 Vérification du niveau d'activité
Vérifier l'activité du Florisil par l'extraction de la dieldrine à partir de la solution de n-hexane. La solution doit avoir
une concentration équivalente à celle d'un extrait de tabac contenant 1,0 μg/g de ce pesticide. Le niveau d'activité
du Florisil prétraité est correct lorsque le taux de récupération de la dieldrine est supérieur à 95 %.
L'activité du Florisil doit être vérifiée chaque fois qu'une nouvelle portion est préparée.
5 Appareillage
Il est essentiel de nettoyer parfaitement toute la verrerie avant utilisation et d'éviter d'utiliser des récipients en
plastique et de la graisse sur les robinets d'arrêt, faute de quoi des impuretés pourraient s'introduire dans les
solvants. Toutes les fioles jaugées et les pipettes doivent satisfaire aux spécifications de la classe A de l'ISO 1042
et de la classe A de l'ISO 648 respectivement.
Matériel courant de laboratoire et en particulier ce qui suit.
5.1 Évaporateur rotatif.
5.2 Broyeur à tabac, avec maille de 2 mm.
5.3 Four, avec ventilation.
5.4 Four à moufle.
5.5 Chauffe-ballons.
5.6 Extracteur Soxhlet, pour extraction en continu (voir figure 1).
5.7 Réfrigérant à reflux.

2)
Florisil est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l'intention des
utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que l'ISO approuve ou recommande l'emploi exclusif
du produit ainsi désigné.
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©
ISO
ISO 4389:1997(F)
Débit de distillation
200 ml/h
Légende
1 Tabac + Flor
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