ISO 7543-2:1993

Chillies and chilli oleoresins - Determination of total capsaicinoid content - Part 2: Method using high-performance liquid chromatography

Specifies a method for the determination, by high-performance liquid chromatography, of the total capsaicinoid content of whole or powdered chillies (usually Capsicum frutescens L.) and their extracts (oleoresins). This content is calculated from the total of capsaicin, nordihydrocapsaicin and dihydrocapsaicin, expressed as nonyl acid vanilylamide, which is the chosen reference substance. This method enables the separation of capsaicin and nonyl acid vanilylamide.

Piments et leurs oléorésines — Détermination de la teneur en capsaïcinoïdes totaux — Partie 2: Méthode par chromatographie en phase liquide à haute performance

Čiliji in čili oleorezini - Določanje celotnih kapsaicinoidov - 2. del: Metoda s tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 07-Jul-1993
• ICS: 67.220.10 - Spices and condiments
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 7 - Spices, culinary herbs and condiments
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 7 - Spices, culinary herbs and condiments
• Current Stage: 9092 - International Standard to be revised
• Start Date: 20-Sep-2024
• Completion Date: 13-Dec-2025
• Ref Project: SIST ISO 7543-2:1997 - Chillies and chilli oleoresins -- Determination of total capsaicinoid content -- Part 2: Method using high-performance liquid chromatography

Overview

ISO 7543-2:1993 specifies a high-performance liquid chromatography (HPLC) method for determining the total capsaicinoid content of chillies (typically Capsicum frutescens L.), powdered chillies and chilli oleoresins. Total capsaicinoids are calculated from the sum of capsaicin, nordihydrocapsaicin and dihydrocapsaicin, expressed as nonyl acid vanilylamide (synthetic capsaicin) as the reference substance. The method covers sample preparation, extraction, chromatographic separation and quantification, and enables separation of capsaicin and the chosen reference compound.

Key Topics and Requirements

• Scope: HPLC determination of total capsaicinoids in whole, powdered chillies and oleoresins.
• Reference substance: Nonyl acid vanilylamide, ≥95% purity (handled with caution due to irritation).
• Sample preparation:
  • Powdered chillies: verify particle size (passes 500 µm sieve), Soxhlet extraction with tetrahydrofuran (THF).
  • Whole chillies: grind to pass 500 µm then extract as for powder.
  • Oleoresins: homogenize and dilute in THF/methanol (50/50 V/V).
• Extraction and solvents:
  • Tetrahydrofuran for extraction; tetrahydrofuran/methanol (50/50) for dilution.
  • Elution solvent prepared by mixing methanol and aqueous silver nitrate (70:30 by volume).
  • Note: silver nitrate and some reagents require careful handling.
• HPLC system:
  • C18-type (grafted silica, octadecyl) column, length 10–25 cm, ID 0.4–0.5 cm, particle size ≤5 µm.
  • Detector set at 280 nm; injection loop ~10 µl or equivalent.
• Calibration and calculation:
  • Prepare reference stock (1 g/L) and standards (0.05–0.2 g/L) to build calibration curve.
  • Determine response factor K and calculate total capsaicinoid content using peak areas for capsaicin, nordihydrocapsaicin and dihydrocapsaicin. A default dilution factor of 500 is given (adjustable by analyst).

Applications and Users

This ISO standard is practical for:

• Food and spice testing laboratories performing quality control and potency testing of chillies and chilli oleoresins.
• Spice processors and oleoresin manufacturers verifying product consistency and label claims.
• Regulatory agencies and trade laboratories assessing capsaicinoid levels for safety, authenticity and trade specifications.
• Research labs studying pungency, processing effects or variety comparisons where precise HPLC quantification is required.

Keywords: chillies, chilli oleoresins, capsaicinoid, capsaicin, HPLC, high-performance liquid chromatography, ISO 7543-2:1993, capsaicinoid determination.

Related Standards

• ISO 7543-1 - Chillies and chilli oleoresins: spectrometric method (other part of the same series).
• ISO 2825 - Preparation of a ground sample for analysis.
• ISO 948 - Sampling of spices and condiments.

Standards Content (Sample)

SLOVENSKI STANDARD
01-junij-1997
ýLOLMLLQþLOLROHRUH]LQL'RORþDQMHFHORWQLKNDSVDLFLQRLGRYGHO0HWRGDV
WHNRþLQVNRNURPDWRJUDILMRYLVRNHORþOMLYRVWL
Chillies and chilli oleoresins -- Determination of total capsaicinoid content -- Part 2:
Method using high-performance liquid chromatography
Piments et leurs oléorésines -- Détermination de la teneur en capsaïcinoïdes totaux --
Partie 2: Méthode par chromatographie en phase liquide à haute performance
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 7543-2:1993
ICS:
67.220.10 =DþLPEH Spices and condiments
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovolj
...

INTERNATIONAL
ISO
STANDARD
7543-2
First edition
1993-07-15
Chillies and chilli oleoresins -
Determination of total capsaicinoid
content -
Part 2:
Method using high-performance liquid
chromatography
Piments et leurs okor&ines - Determination de Ia teneur en
capsai’cinoides to ta ux -
Partie 2: Methode par chromatographie en Phase liquide 2 haute
Performance
Reference number
ISO 75432:1993(E)
ISO 75432:1993(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national Standards bodies (ISO member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Esch member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has the right to be
represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission
(IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard ISO 7543-2 was prepared by Technical Committee
ISOnC 34, Agricultural food products, Sub-Committee SC 7, Spices and
condiments.
ISO 7543 consists of the following Parts, under the general title Chillies
and chilli oleoresins - Determination o f total capsaicinoid con ten t:
- Part 1: Spectrometric method
- Part 2: Method using high-performance liquid chromatograph y
Annex A of this part of ISO 7543 is for information only.
0 ISO 1993
All rights reserved. No patt of this publication may be reproduced or utilized in any form or
by any means, electronie or mechanical, including photocopying and microfilm, without per-
mission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case Postale 56 l CH-1 211 Geneve 20 l Switzerland
Printed in Switzerland
ii
ISO 7543=2:1993(E)
INTERNATIONAL STANDARD
- Determination of total
Chillies and chilli oleoresins
capsaicinoid content -
Part 2:
Method using high-performance liquid chromatography
3 Principle
1 Scope
This part of ISO 7543 specifies a method for the de-
termination, by high-performance liquid chromatogra-
3.1 Chillies in powder form
phy, of the total capsaicinoid content of whole or
powdered chillies (usually Capsicum frutescens L.)
Extraction with tetrahydrofuran using a Soxhlet-type
and their extracts (oleoresins). This content is calcu-
continuous extraction apparatus, then determination
lated from the total of capsaicin, nordihydrocapsaicin
of the capsaicinoids by high-performance liquid chro-
expressed as nonyl acid
and dihydrocapsaicin,
matography (HPLC), in accordance with the procedure
vanilylamide, which is the Chosen reference sub-
described in this part of ISO 7543.
stance.
This method enables the Separation of capsaicin and
3.2 Whole chillies
nonyl acid vanilylamide.
given in Preparation by grinding the Sample, then extraction
NOTE 1 A spectrometric method is
ISO 7543-1.') of the powder so obtained, followed by determination
of the capsaicinoids by HPLC, in accordance with the
procedure described in this part of ISO 7543.
2 Normative reference
3.3 Oleoresins of chillies
The following Standard contains provisions which,
through reference in this text, constitute provisions
Dilution of the oleoresin in a tetrahydrofuran/methanol
of this part of ISO 7543. At the time of publication, the
Solution, then determination of the capsaicinoids by
edition indicated was valid. All Standards are subject
HPLC, in accordance with the procedure described in
to revision, and Parties to agreements based on this
this patt of ISO 7543.
part of ISO 7543 are encouraged to investigate the
possibility of applying the most recent edition of the
Standard indicated below. Members of IEC and ISO
maintain registers of currently valid International
4 Reagents
Standards.
ISO 282511981, Spices and condiments - Prepa- Use only reagents of recognized analytical grade, and
ration of a ground Sample for analysis. distilled or demineralized water or water of equivalent
purity.
1) To be published.
ISO 7543-2: 1993(E)
41 . Reference substance 5.6 Column
Nonyl acid vanilylamide (synthetic capsaicin) of at
Material: stainless steel
least 95 % purity, determined by chromatography un-
der the test conditions given in this part of ISO 7543.
Length: IO cm to 25 cm
WARNING - This product should be handled
Inside diameter: 0,4 cm to 0,5 cm
carefully as it is strongly irritating.
Stationary Phase: grafted silica with derived
octadecyl functional group, C,a, and particle size
4.2 Solvents
5 Pm max.
4.2.1 Tetrahydrofuran
5.7 Injection System
4.2.2 Methanol
Injection valve with 1 0 pl loop or any other System
giving th e same inject ion accuracy.
4.2.3 Silver nitrate, aqueous Solution, 0,l mol/l.
Soxhlet
5.8 Continuous-extraction apparatus,
WARNING - This product should be handled with
tYPe*
care as skin contact will Cause black spots.
5.9 Test sieve, with aperture size 500 Pm.
4.2.4 Tetrahydrofuran/methanol Solution,
so/50 (Vp).
6 Calibration method
4.3 Elution solvent
6.1 Reference solution
Mix 70 volumes of methanol (4.2.2) and 30 volumes
of silver nitrate (4.2.3).
Prepare a stock Solution of 1 g/l of nonyl acid
vanilylamide (4.1) in the tetrahydrofuran/methano
...

NORME Iso
INTERNATIONALE 7543-2
Première édition
1993-07-l 5
Piments et leurs oléorésines -
Détermination de la teneur en
capsaïcinoïdes totaux -
Partie 2:
Méthode par chromatographie en phase
liquide à haute performance
Chillies and chilli oleoresins - Determina tion of total capsaicinoid
content -
Part 2: Method using high-performance liquid chroma tography
Numéro de référence
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fedération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comite membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comite technique cree a cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen-
tales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO colla-
bore Atroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI)
en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptes par les comités techniques
sont soumis aux comites membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des co-
mites membres votants.
La Norme internationale ISO 7543-2 a été elaboree par le comité techni-
que lSO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comite SC 7,
Epices.
L’ISO 7543 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre gé-
neral Piments et leurs olGor&ines - Détermination de la teneur en
capsai’cinoides totaux:
- Partie 1: Méthode spectrométrique
- Partie 2: M&hode par chromatographie en phase liquide à haute
performance
L’annexe A de la présente partie de I’ISO 7543 est donnée uniquement a
titre d’information.
\
0 60 1993
Droits de reproduction reservés. Aucune partie de cette publication ne peut être reproduite
ni utilisee sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord ecrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-l 211 Genéve 20 l Suisse
Imprime en Suisse
ii
:
NORME INTERNATIONALE
ISO 7543:2:1993(F)
Piments et leurs oléorésines - Détermination de la
teneur en capsaïcinoïdes totaux -
Partie 2:
Méthode par chromatographie en phase liquide à haute
performance
ISO 2825: 1981, Epices - Préparation d’un échantillon
1 Domaine d’application
moulu en vue de l’analyse.
La présente partie de I’ISO 7543 prescrit une me-
thode permettant de déterminer, par chromatographie
3 Principe
en phase liquide a haute performance, la teneur en
capsai’cino’ides totaux des piments entiers ou en pou-
3.1 Cas des piments en poudre
dre (en général Capsicum frutescens L.) et de leurs
extraits (oléorésines). Cette teneur est calculee en se
Extraction à l’aide d’un extracteur continu, type
basant sur la somme de la capsai’cine, de la
Soxhlet, par le tétrahydrofuranne, puis determination
nordihydrocapsaïcine et de la dihydrocapsaïcine, ex-
des capsaïcinoi’des par chromatographie en phase li-
primée en nonyl acide vanilylamide, choisi comme
quide à haute performance (CLHP), selon le mode
substance de reférence.
opératoire decrit dans la présente partie de
I’ISO 7543.
La methode permet la séparation de la capsaïcine du
nonyl acide vanilylamide.
3.2 Cas des piments entiers
NOTE 1 Une méthode spectrométrique est donnée dans
ns0 7543-l 1).
Préparation par broyage de l’échantillon, puis extrac-
tion de la poudre ainsi obtenue, suivie d’une determi-
nation des capsai’cinoïdes par CLHP, selon le mode
opératoire decrit dans la présente partie de
I’ISO 7543.
2 Référence normative
3.3 Cas des oléorésines de piments
La norme suivante contient des dispositions qui, par
Dilution de I’oléoresine dans une solution de
suite de la réference qui en est faite, constituent des
tétrahydrofuranne et de méthanol, puis determination
dispositions valables pour la présente partie de I’ISO
des capsaïcinoi’des par CLHP, seion le mode opé-
7543. Au moment de la publication, l’édition indiquée
ratoire decrit dans la présente partie de I’ISO 7543.
était en vigueur. Toute norme est sujette à revision
et les parties prenantes des accords fondes sur la
présente partie de I’ISO 7543 sont invitees à recher- 4 Réactifs
cher la possibilité d’appliquer I’edition la plus recente
de la norme indiquée ci-aprés. Les membres de la CEI Utiliser uniquement des reactifs de qualité analytique
et de I’ISO possédent le registre des Normes inter-
reconnue et de I’eaudistillee ou deminéralisee ou de
nationales en vigueur à un moment donne.
pureté équivalente.
1) A publier.
5.5 Enregistreur ou intégrateur, dont les perfor-
41 . Substance de référence
mances sont compatibles avec l’ensemble de I’appa-
Nonyl acide vanilylamide (capsaïcine de synthése) de
reillage.
pureté au moins égale à 95 %, déterminée par chro-
matographie dans les conditions de l’essai donnees
5.6 Colonne
dans la présente partie de NS0 7543.
Materiau: acier inoxydable
AVERTISSEMENT - Ce produit doit être manipulé
avec précaution car il est très irritant.
Longueur: 10 cm à 25 cm
4.2 Solvants
Diamètre interieur: 0,4 cm à 0,5 cm
Phase stationnaire: silice greffée avec groupe
4.2.1 Tétrahydrofuranne.
fonctionnel dérivé octadécyle C,,, granulométrie
5 prn max.
4.2.2 Méthanol.
solution 5.7 Systeme d’injection
4.2.3 Nitrate d’argent, aqueuse a
0,l mol/l.
Vanne d’injection avec boucle de 10 ~1, ou tout autre
systéme présentant la même précision au niveau de
AVERTISSEMENT - Ce produit doit être manipulé
l’injection.
avec precaution. Un contact avec la peau risque
de provoquer une réaction cutanée.
5.8 Appareil à extraction continue, type Soxhlet.
4.2.4 Tétrahydrofuranne/m&hanol, mélange
SO/50 (Vp).
5.9 Tamis pour essai, de 500 prn d’ouverture de
maille.
4.3 Solvant d’élution
Mélanger 70 volumes de méthanol (4.22) et 30 volu-
6 Méthode par calibration
mes de nitrate d’argent (4.2.3).
6.1 Solution de référence
5 Appareillage
Préparer une solution mère à 1 g/l de nonyl acide
vanilylamide dans la solution de
(4.1)
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce
tétrahydrofuranne/méthanol (4.2.4).
qui suit.
5.1 Pipettes, de 5 ml de capacité. 6.2 Droit d’étalonnage
À partir de la solution de référence (6.1) préparer au
5.2 Fioles jaugées, de 25 ml et 100 ml d
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NORME Iso
INTERNATIONALE 7543-2
Première édition
1993-07-l 5
Piments et leurs oléorésines -
Détermination de la teneur en
capsaïcinoïdes totaux -
Partie 2:
Méthode par chromatographie en phase
liquide à haute performance
Chillies and chilli oleoresins - Determina tion of total capsaicinoid
content -
Part 2: Method using high-performance liquid chroma tography
Numéro de référence
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fedération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comite membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comite technique cree a cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen-
tales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO colla-
bore Atroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI)
en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptes par les comités techniques
sont soumis aux comites membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des co-
mites membres votants.
La Norme internationale ISO 7543-2 a été elaboree par le comité techni-
que lSO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comite SC 7,
Epices.
L’ISO 7543 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre gé-
neral Piments et leurs olGor&ines - Détermination de la teneur en
capsai’cinoides totaux:
- Partie 1: Méthode spectrométrique
- Partie 2: M&hode par chromatographie en phase liquide à haute
performance
L’annexe A de la présente partie de I’ISO 7543 est donnée uniquement a
titre d’information.
\
0 60 1993
Droits de reproduction reservés. Aucune partie de cette publication ne peut être reproduite
ni utilisee sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord ecrit de l’éditeur.
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Imprime en Suisse
ii
:
NORME INTERNATIONALE
ISO 7543:2:1993(F)
Piments et leurs oléorésines - Détermination de la
teneur en capsaïcinoïdes totaux -
Partie 2:
Méthode par chromatographie en phase liquide à haute
performance
ISO 2825: 1981, Epices - Préparation d’un échantillon
1 Domaine d’application
moulu en vue de l’analyse.
La présente partie de I’ISO 7543 prescrit une me-
thode permettant de déterminer, par chromatographie
3 Principe
en phase liquide a haute performance, la teneur en
capsai’cino’ides totaux des piments entiers ou en pou-
3.1 Cas des piments en poudre
dre (en général Capsicum frutescens L.) et de leurs
extraits (oléorésines). Cette teneur est calculee en se
Extraction à l’aide d’un extracteur continu, type
basant sur la somme de la capsai’cine, de la
Soxhlet, par le tétrahydrofuranne, puis determination
nordihydrocapsaïcine et de la dihydrocapsaïcine, ex-
des capsaïcinoi’des par chromatographie en phase li-
primée en nonyl acide vanilylamide, choisi comme
quide à haute performance (CLHP), selon le mode
substance de reférence.
opératoire decrit dans la présente partie de
I’ISO 7543.
La methode permet la séparation de la capsaïcine du
nonyl acide vanilylamide.
3.2 Cas des piments entiers
NOTE 1 Une méthode spectrométrique est donnée dans
ns0 7543-l 1).
Préparation par broyage de l’échantillon, puis extrac-
tion de la poudre ainsi obtenue, suivie d’une determi-
nation des capsai’cinoïdes par CLHP, selon le mode
opératoire decrit dans la présente partie de
I’ISO 7543.
2 Référence normative
3.3 Cas des oléorésines de piments
La norme suivante contient des dispositions qui, par
Dilution de I’oléoresine dans une solution de
suite de la réference qui en est faite, constituent des
tétrahydrofuranne et de méthanol, puis determination
dispositions valables pour la présente partie de I’ISO
des capsaïcinoi’des par CLHP, seion le mode opé-
7543. Au moment de la publication, l’édition indiquée
ratoire decrit dans la présente partie de I’ISO 7543.
était en vigueur. Toute norme est sujette à revision
et les parties prenantes des accords fondes sur la
présente partie de I’ISO 7543 sont invitees à recher- 4 Réactifs
cher la possibilité d’appliquer I’edition la plus recente
de la norme indiquée ci-aprés. Les membres de la CEI Utiliser uniquement des reactifs de qualité analytique
et de I’ISO possédent le registre des Normes inter-
reconnue et de I’eaudistillee ou deminéralisee ou de
nationales en vigueur à un moment donne.
pureté équivalente.
1) A publier.
5.5 Enregistreur ou intégrateur, dont les perfor-
41 . Substance de référence
mances sont compatibles avec l’ensemble de I’appa-
Nonyl acide vanilylamide (capsaïcine de synthése) de
reillage.
pureté au moins égale à 95 %, déterminée par chro-
matographie dans les conditions de l’essai donnees
5.6 Colonne
dans la présente partie de NS0 7543.
Materiau: acier inoxydable
AVERTISSEMENT - Ce produit doit être manipulé
avec précaution car il est très irritant.
Longueur: 10 cm à 25 cm
4.2 Solvants
Diamètre interieur: 0,4 cm à 0,5 cm
Phase stationnaire: silice greffée avec groupe
4.2.1 Tétrahydrofuranne.
fonctionnel dérivé octadécyle C,,, granulométrie
5 prn max.
4.2.2 Méthanol.
solution 5.7 Systeme d’injection
4.2.3 Nitrate d’argent, aqueuse a
0,l mol/l.
Vanne d’injection avec boucle de 10 ~1, ou tout autre
systéme présentant la même précision au niveau de
AVERTISSEMENT - Ce produit doit être manipulé
l’injection.
avec precaution. Un contact avec la peau risque
de provoquer une réaction cutanée.
5.8 Appareil à extraction continue, type Soxhlet.
4.2.4 Tétrahydrofuranne/m&hanol, mélange
SO/50 (Vp).
5.9 Tamis pour essai, de 500 prn d’ouverture de
maille.
4.3 Solvant d’élution
Mélanger 70 volumes de méthanol (4.22) et 30 volu-
6 Méthode par calibration
mes de nitrate d’argent (4.2.3).
6.1 Solution de référence
5 Appareillage
Préparer une solution mère à 1 g/l de nonyl acide
vanilylamide dans la solution de
(4.1)
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce
tétrahydrofuranne/méthanol (4.2.4).
qui suit.
5.1 Pipettes, de 5 ml de capacité. 6.2 Droit d’étalonnage
À partir de la solution de référence (6.1) préparer au
5.2 Fioles jaugées, de 25 ml et 100 ml d
...