ISO 8069:1986
(Main)Dried milk — Determination of lactic acid and lactates content — Enzymatic method
Dried milk — Determination of lactic acid and lactates content — Enzymatic method
Applies to all types of dried milk. The sampling shall be made according to ISO 707. The method specified is mainly based on `Methods of enzymatic food analysis: UV-method for the determination of L-lactic acid and D-lactic acid in foodstuffs' by Boehringer Mannheim GmbH.
Lait sec — Determination de la teneur en acide lactique et en lactates — Méthode enzymatique
General Information
Relations
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Standards Content (Sample)
International Standard
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATlON.MEmYHAPO,qHAR OPrAHM3AlJtlR l-l0 CTAH~APTM3Al@lM~ORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Dried milk - Determination of lactic acid and lactates
content - Enzymatic method
Lait set
- Determination de la teneur en acide lactique et en lactates - Mkthode enzymatique
First edition - 1986-06-01
Corrected and reprinted - 1988-01-15
Ref. No. IS0 80694986 (E)
UDC 637.143: 634.04
Descriptors : agricultural products, dairy products, milk, dried milk, chemical analysis, determination of content, lactic acid, lactates.
Price based on 4 pages
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Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through IS0 technical committees. Each member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council. They are approved in accordance with IS0 procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard IS0 8069 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34,
Agricultural food products. It cancels and replaces IS0 3495-1975.
NOTE - The method specified in this International Standard has been developed jointly with the
International Dairy Federation (IDF) and the Association of Official Analytical Chemists (AOAC)
and will also be published by these organizations.
Users should note that all International Standards undergo revision from time to time
and that any reference made herein to any other International Standard implies its
latest edition, unless otherwise stated.
@ International Organization for Standardization, 1986 l
Printed in Switzerland
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INTERNATIONAL STANDARD IS0 8069-1986 (E)
Dried milk - Determination of lactic acid and lactates
content
- Enzymatic method
5 Reagents
1 Scope and field of application
All reagents shall be of recognized analytical grade. The water
This International Standard specifies an enzymatic method for
used in the preparation of the enzyme solutions shall be of at
the determination of the lactic acid and lactates content of all
least doubly glass-distilled purity and the water used for other
types of dried milk.
purposes shall be glass-distilled or of at least equivalent purity.
5.1 Potassium hexacyanoferrate(lI) solution.
2 Reference
Dissolve 35,9 g of potassium hexacyanoferratel II) trihydrate
(K4[Fe(CN)&3H20) in water, dilute to 1 000 ml and mix.
IS0 707, Milk and milk products - Methods of sampling.
5.2 Zinc sulfate solution.
Dissolve 71,8 g of zinc sulfate heptahydrate (ZnSO,a7H,O) in
3 Definition
water, dilute to 1 000 ml and mix.
lactic acid and lactates content of dried milk : The content
of substances determined by the procedure specified in this
5.3 Sodium hydroxide, 0,l mol/l solution.
International Standard and expressed as milligrams of lactic
acid per 100 g of non-fat solids. Dissolve 4,00 g of sodium hydroxide (NaOH) in water, dilute to
1 000 ml and mix.
5.4 Buffer solution, pH 10.
4 Principle l)
Dissolve 7,92 g of glycylglycine (C4H8N203) and 1,47 g of
Dissolution of the dried milk in warm water. Precipitation of the L-glutamic acid (C5H9N04) in about 80 ml of water. Adjust the
fat and proteins, followed by filtration. Treatment of the filtrate pH to 10,O + 0,l at 20 OC with 10 mol/l sodium hydroxide
solution, dilute to 100 ml with water and mix.
with the following enzymes and biochemical substances,
added simultaneously, but acting in sequence:
This solution can be kept for 3 months if stored in a refrigerator
-
at 0 to +5 OC.
L-lactate dehydrogenase (L-LDH) and D-lactate de-
hydrogenase (D-LDH) in the presence of nicotinamide
adenine dinucleotide (NAD) to oxidize lactate to pyruvate
5.5 NAD solution.
and to convert NAD to its reduced form (NADH);
Dissolve 350 mg of nicotinamide adenine dinucleotide
-
glutamate pyruvate transaminase (GPT) in the pres-
(C22H27N70,4P2) in 10 ml of water.
ence of L-glutamate to transform pyruvate into L-alanine
and to convert L-glutamate to a-ketoglutarate. This solution can be kept for 4 weeks if stored in a refrigerator
atOt +5OC.
Spectrometric measurement at a wavelength of 340 nm to
determine’ the amount of NADH produced, which is pro- When the solution is being used, the vessel should be kept im-
mersed in crushed ice.
portional to the lactic acid and lactates content.
1) This method is mainly based on Methods of Enzymatic Food Analysis: W-method for the determination of L-lactic acid and D-lactic acid in
foodstuffs, Boehringer Mannheim GmbH.
1
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IS0 80694986 E)
5.6 L-LDH from hog muscle, 10 mg/ml solution in 6 Apparatus
50 % (V/V) glycerol, pH about 7.
Usual laboratory equipment, and in particular
The specific activity of the solution of L-lactate dehydrogenase
(L-LDH, EC 1 .l .1.27) ‘1 should be at least 5 500 units/ml 2,
6.1 Analytical balance.
(25 OC).
6.2 Glass beaker, of capacity 50 ml.
The solution can be kept for 12 months if stored in a refriger-
ator at 0 to +5 OC.
6.3 Graduated cylinder, of capacity 50 ml.
When the solution is being used, the vessel should be kept im-
mersed in crushed ice.
6.4 One-mark volumetric flasks, of capacity 100 ml.
6.5 Pipettes, to deliver 0,02; 0,05; 0,2; 1 and 2 ml.
5.7 D-LDH from Lactobadus leichmannii, 5 mg/ml suspen-
sion in 3,2 mol/l ammonium sulfate solution, pH about 6.
6.6 Graduated pipettes, of capacity 5 and 10 ml, graduated
in 0,l ml divisions.
The specific activity of the suspension of D-lactate dehydro-
genase (D-LDH, EC 1 .l .1.28) should be at least 1 500 units/ml
(25 OC).
6.7 Glass filter funnel, of diameter about 7 cm.
The suspension can be kept for 12 months if stored in a refriger-
6.8 Filter paper, medium grade, of diameter about 15 cm,
ator at 0 to +5 OC.
free from lactic acid and lactates.
When the suspension is bei ng used, the be kept
6.9 Glass rod.
immersed in crushed ice.
6. IO Plastic paddles, suitable for mixing
in the spectrometric cell
5.8 GPT from pig heart, 20 mg/ml suspension in 3,2 mol/l enzyme mixture
ammonium sulfate solution, pH about 7.
6.1 I Spectrometer, suitable for making measurements at
The specific activity of the suspension of glutamate pyruvate
cells of optical path length 1 cm.
340 nm, equipped with
transaminase (GPT, EC 2.6.1.2) should be at least
1 600 units/ml (25 OC).
7 Sampling
Centrifuge 2 ml of a suspension containing 10 mg of GPT per
millilitre for 10 min at about 4 OOOg, suck off 1,O ml of the clear
supernatant liquid and discard.
7.1 See IS0 707.
in a ref riger-
The suspension can be kept for 12 months if
such a way that deterioration and
7.2 Store the sample in
ator atOt +5 OC.
change in composition are prevented.
should be kept
When the su spension is used, the
immersed in crushed ice
8 Procedure
5.9 Lithium L-lactate solution. CAUTION -Avoid contamination, especially with sweat.
Dissolve 50 mg of lithium L-lactate (C,H,O,Li) in water, dilute
81 . Test to check the activity of reagents
to 500 ml and mix.
Whenever a new batch of reagents” (5.5 to 5.8 inclusive) is
brought into use, or when such reagents have been kept in a
5.10 Lithium D-lactate solution.
refrigerator without being used for more than 2 weeks, or when
restarting analytical work after a period of analytical inactivity
Dissolve 50 mg of lithium D-lactate (C3Hs03Li
in water, dilute or whenever other conditions may justify it, the following test
to 500 ml and mix. for the recovery of lactates should be performed.
sification number as given by the Nomenclature Committee of the international Union of
1) The EC number refers to the Enzymatic Cla
Biochemistry in Enzyme Nomenclature Recommendation (7978). New York, Academic Press, 1979.
the transformation
2) This unit (often called the ternational Unit or Standard amount of enzyme
per minute nder standard conditions.
1 pmol of substra
...
Norme internationale
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION*MElK~YHAPOC(HAR OPTAHM3AUMR Il0 CTAH~APTH3AlWWl*ORGANISATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Lait sec - Détermination de la teneur en acide lactique.et
- Méthode enzymatique
en lactates
Dried milk -
Determination of lactic acid and lactates content - Enfymatic method
Première édition - 1986-06-01
Corrigée et réimprimée - 1988-01-15
Mf. no : ISO8069-1986 (FI
CDU 637.143: 634.04
Y
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m
lait, lait en poudre, analyse chimique, dosage, acide lactique, lactate.
Descripteurs : produit agricole, produit laitier,
P
0
v) Prix bas6 sur 4 pages
---------------------- Page: 1 ----------------------
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comite membre interessé par une étude a le droit de faire partie du comite technique
cree à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mement aux procédures de I’ISO qui requiérent l’approbation de 75 % au moins des
comites membres votants.
La Norme internationale ISO 8069 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires. Elle annule et remplace la Norme internationale
ISO 3495-1975.
- --.-- -
--
NOTE -
La méthode spécifiée dans la présente Norme internationale a été élaborée conjointe-
ment avec la Fédération internationale de laiterie (FIL) et l’Association des chimistes analytiques
officiels (AOAC) et sera également publiée par ces organisations.
L’attention des utilisateurs est attiree sur le fait que toutes les Normes internationales
.
sont de temps en temps soumises à révision et que toute référence faite à une autre
Norme internationale dans le présent document implique qu’il s’agit, sauf indication
contraire, de la derniere édition.
0 Organisation internationale de normalisation, 1986
Imprimé en Suisse
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ISO 8069-1986 (FI
NORME INTERNATIONALE
Lait sec - Détermination de la teneur en acide lactique et
- Méthode enzymatique
en lactates
1 Objet et domaine d’application
doublement dans du verre et l’eau utilisée pour les autres
usages doit être de l’eau distillée dans du verre ou d’une pureté
La présente Norme internationale spécifie une méthode enzy-
au moins équivalente.
matique de détermination de la teneur en acide lactique et en
lactates, applicable a tous les types de laits secs.
5.1 HexacyanoferrateW de potassium, solution.
2 Référence
Dissoudre 35,9 g d’hexacyanoferrate(II) de potassium trihy-
draté (K,[Fe(CN)&3H20) dans l’eau, diluer à 1 000 ml et
ISO 707, Lait et produits laitiers - Méthodes d’échantillonnage.
mélanger.
3 Définition
5.2 Sulfate de zinc, solution.
teneur en acide lactique et en lactates du lait sec: Teneur
Dissoudre 71,8 g de sulfate de zinc heptahydraté (ZnS04m7H,0)
des substances déterminees par le mode opératoire spécifie
dans l’eau, diluer à 1 000 ml et melanger.
dans la présente Norme internationale et exprimée en milli-
grammes d’acide lactique pour 100 g de solides non gras.
5.3 Hydroxyde de sodium, solution à 0,l mol/l.
4 Principe l)
Dissoudre 4,00 g d’hydroxyde de sodium (NaOH), diluer à
Dissolution du lait sec dans l’eau chaude. Précipitation de la
1 000 ml et mélanger.
matière grasse et des protéines, suivie d’une filtration. Traite-
ment du filtrat avec les enzymes et substances biochimiques
suivantes, ajoutées simultanément, mais agissant successive-
5.4 Solution tampon, de pH 10.
ment :
Dissoudre 7,92 g de glycylglycine (C4HeNzO3) et 1,47 g d’acide
L-lactate déshydrogénase (L-LDH) et D-lactate déshy-
-
L-glutamique (C5H9N04) dans environ 80 ml d’eau. Ajuster le
drogénase (D-LDH) en présence de nicotinamide adénine
pH à 10,O k 0,l à 20 OC avec une solution d’hydroxyde de
dinucleotide (NAD) pour oxyder le lactate en pyruvate et
sodium à 10 mol/l, diluer à 100 ml avec de l’eau et mélanger.
transformer le NAD en sa forme réduite (NADH);
Cette solution peut se garder pendant 3 mois si elle est conser-
- glutamate pyruvate transaminase (GPT) en présence de
vée au réfrigerateur entre 0 et + 5 OC.’
L-glutamate pour transformer le pyruvate en L-alanine et
transformer le L-glutamate en cr-cétoglutarate.
5.5 NAD, solution.
Mesure spectrométrique, a une longueur d’onde de 340 nm,
pour déterminer la quantité de NADH produite, qui est propor-
tionnelle à la teneur en acide lactique et en lactates. Dissoudre 350 mg de nicotinamide adénine dinucléotide
(CzHnN7014P2) dans 10 ml d’eau.
Cette solution peut se garder pendant 4 semaines si elle est
5 Réactifs
conservée au réfrigérateur entre 0 et +5 OC.
Tous les reactifs doivent être de qualité analytique reconnue.
L’eau utilisée dans la préparation des solutions d’enzymes doit
Lors de l’utilisation de la solution, le récipient doit 6tre conserve
être d’une pureté au moins équivalente à celle de l’eau distillée
dans la glace pilee.
1) Cette méthode est principalement basée sur Mhthodes d’analyse enzymatique des produits alimentaires - M&ode UV de ddtermination de
l’acide L-lactique et de l’acide D-lactique dans les aliments, Boehringer Mannheim GmbH.
1
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ISO 80694986 (F)
5.6 L-LDH, extrait du muscle du porc, solution à 10 mg/ml 6 Appareillage
dans le glycérol à 50 % (V/ VI, de pH 7 environ.
Matériel courant de laboratoire, et notamment
L’activité spécifique de la solution de L-lactate déshydrogénase
(L-LDH, EC 1 .l .1.27) ‘) doit être d’au moins 5 500 unités/ml *)
6.1 Balance analytique.
(à 25 OC).
6.2 Becher, en verre, de 50 ml de capacité.
La solution peut se garder pendant 12 mois si elle est conservée
au refrigérateur entre 0 et +5 OC.
6.3 Éprouvette graduee, de 50 ml de capacité.
doit être conserve
Lors de l’utilisation de la solution, le récipient
dans la glace pilée.
Fioles jaugées à un trait, de 100 ml de capacité.
64 .
5.7 D-LDH, provenant du LactobacIlus leichmannii, suspen- 6.5 Pipettes, permettant de délivrer 0,021 0,05; 0,2; 1 et
2 ml.
sion à 5 mg/ml dans une solution de sulfate d’ammonium à
3,2 mol/l, de pH 6 environ.
6.6 Pipettes graduees, de 5 et 10 ml de capacité, graduées
L’activité spécifique de la suspension de D-lactate déshydro-
en 0,l ml.
génase (D-LDH, EC 1 .l .1.28) doit être d’au moins
1 500 unités/ml RI 25 OC).
Entonnoir en verre, d’environ 7 cm de diamètre.
67 .
La suspension peut se garder pendant 12 mois, si elle est
conservée au réfrigérateur entre 0 et +5 OC. 6.8 Papier filtre, à filtration moyenne, d’environ 15 cm de
diamétre, exempt d’acide lactique et de lactates.
Lors de l’utilisation de la suspensi on, le récipient doit être
conservé dans la glace pilée.
6.9 Baguette de verre.
6.10 Palettes en plastique, permettant de mélanger le
5.8 GPT, extrait du cœur du porc, suspension à 20 mg/mI,
mélange enzyme- echantillon dans la cuve du spectrométre.
dans une solution de sulfate d’ammonium à 3,2 mol/1 de pH 7
environ.
6.11 Spectrometre, permettant d’opérer à 340 nm, équipé
L’activité spécifique de la suspension de glutamate pyruvate
de cuves de 1 cm d’épaisseur.
transaminase (GPT, EC 2.6.1.2) doit être d’au moins
1 600 unités/ml (a 25 OC).
7 Échantillonnage
Centrifuger 2 ml d’une suspension contenant 10 mg/ml de
GPT pendant 10 min, à environ 4 OOOg, aspirer 1,O ml de surna-
7.1 Voir ISO 707.
geant clair et l’éliminer.
7.2 Conserver l’échantillon de facon à éviter toute détériora-
garder pendant 12 mois si elle est
La suspension peut se
tion et toute modification de composition.
conservee au réfrigérateu r entre Oet +5O c.
Lors de l’utilisation de la suspension, le récipient doit être
8 Mode opératoire
conservé dans la glace pilée.
ATTENTION - Éviter les contaminations, specialement
celles dues & la sueur.
5.9 L-lactate de lithium, solution.
Dissoudre 50 mg de L-lactate de lithium (C3H503Li) dans l’eau, 8.1 Vérification de l’activité des rbactifs
diluer à 500 ml et mélanger.
Si un nouveau lot de réactifs (5.5 à 5.8 inclus) est utilisé, si de
tels reactifs ont été conserves au réfrigérateur sans avoir ete uti-
5.10 D-lactate de lithium, solution. lisés pendant plus de deux semaines, si le travail analytique
recommence aprés une période d’inactivité ou si les conditions
Dissoudre 50 mg de D-lactate de lithium &H,O,Li) dans l’eau, peuvent le justifier, l’essai suivant de récupération des lactates
diluer à 500 ml et mélanger. doit être effectué.
1) Le nombre EC se référe au nombre de classification des enzymes, tel qu’il a été donné par le comité de nomenclature de l
...
Norme internationale
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION*MElK~YHAPOC(HAR OPTAHM3AUMR Il0 CTAH~APTH3AlWWl*ORGANISATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Lait sec - Détermination de la teneur en acide lactique.et
- Méthode enzymatique
en lactates
Dried milk -
Determination of lactic acid and lactates content - Enfymatic method
Première édition - 1986-06-01
Corrigée et réimprimée - 1988-01-15
Mf. no : ISO8069-1986 (FI
CDU 637.143: 634.04
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lait, lait en poudre, analyse chimique, dosage, acide lactique, lactate.
Descripteurs : produit agricole, produit laitier,
P
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v) Prix bas6 sur 4 pages
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Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comite membre interessé par une étude a le droit de faire partie du comite technique
cree à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mement aux procédures de I’ISO qui requiérent l’approbation de 75 % au moins des
comites membres votants.
La Norme internationale ISO 8069 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires. Elle annule et remplace la Norme internationale
ISO 3495-1975.
- --.-- -
--
NOTE -
La méthode spécifiée dans la présente Norme internationale a été élaborée conjointe-
ment avec la Fédération internationale de laiterie (FIL) et l’Association des chimistes analytiques
officiels (AOAC) et sera également publiée par ces organisations.
L’attention des utilisateurs est attiree sur le fait que toutes les Normes internationales
.
sont de temps en temps soumises à révision et que toute référence faite à une autre
Norme internationale dans le présent document implique qu’il s’agit, sauf indication
contraire, de la derniere édition.
0 Organisation internationale de normalisation, 1986
Imprimé en Suisse
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ISO 8069-1986 (FI
NORME INTERNATIONALE
Lait sec - Détermination de la teneur en acide lactique et
- Méthode enzymatique
en lactates
1 Objet et domaine d’application
doublement dans du verre et l’eau utilisée pour les autres
usages doit être de l’eau distillée dans du verre ou d’une pureté
La présente Norme internationale spécifie une méthode enzy-
au moins équivalente.
matique de détermination de la teneur en acide lactique et en
lactates, applicable a tous les types de laits secs.
5.1 HexacyanoferrateW de potassium, solution.
2 Référence
Dissoudre 35,9 g d’hexacyanoferrate(II) de potassium trihy-
draté (K,[Fe(CN)&3H20) dans l’eau, diluer à 1 000 ml et
ISO 707, Lait et produits laitiers - Méthodes d’échantillonnage.
mélanger.
3 Définition
5.2 Sulfate de zinc, solution.
teneur en acide lactique et en lactates du lait sec: Teneur
Dissoudre 71,8 g de sulfate de zinc heptahydraté (ZnS04m7H,0)
des substances déterminees par le mode opératoire spécifie
dans l’eau, diluer à 1 000 ml et melanger.
dans la présente Norme internationale et exprimée en milli-
grammes d’acide lactique pour 100 g de solides non gras.
5.3 Hydroxyde de sodium, solution à 0,l mol/l.
4 Principe l)
Dissoudre 4,00 g d’hydroxyde de sodium (NaOH), diluer à
Dissolution du lait sec dans l’eau chaude. Précipitation de la
1 000 ml et mélanger.
matière grasse et des protéines, suivie d’une filtration. Traite-
ment du filtrat avec les enzymes et substances biochimiques
suivantes, ajoutées simultanément, mais agissant successive-
5.4 Solution tampon, de pH 10.
ment :
Dissoudre 7,92 g de glycylglycine (C4HeNzO3) et 1,47 g d’acide
L-lactate déshydrogénase (L-LDH) et D-lactate déshy-
-
L-glutamique (C5H9N04) dans environ 80 ml d’eau. Ajuster le
drogénase (D-LDH) en présence de nicotinamide adénine
pH à 10,O k 0,l à 20 OC avec une solution d’hydroxyde de
dinucleotide (NAD) pour oxyder le lactate en pyruvate et
sodium à 10 mol/l, diluer à 100 ml avec de l’eau et mélanger.
transformer le NAD en sa forme réduite (NADH);
Cette solution peut se garder pendant 3 mois si elle est conser-
- glutamate pyruvate transaminase (GPT) en présence de
vée au réfrigerateur entre 0 et + 5 OC.’
L-glutamate pour transformer le pyruvate en L-alanine et
transformer le L-glutamate en cr-cétoglutarate.
5.5 NAD, solution.
Mesure spectrométrique, a une longueur d’onde de 340 nm,
pour déterminer la quantité de NADH produite, qui est propor-
tionnelle à la teneur en acide lactique et en lactates. Dissoudre 350 mg de nicotinamide adénine dinucléotide
(CzHnN7014P2) dans 10 ml d’eau.
Cette solution peut se garder pendant 4 semaines si elle est
5 Réactifs
conservée au réfrigérateur entre 0 et +5 OC.
Tous les reactifs doivent être de qualité analytique reconnue.
L’eau utilisée dans la préparation des solutions d’enzymes doit
Lors de l’utilisation de la solution, le récipient doit 6tre conserve
être d’une pureté au moins équivalente à celle de l’eau distillée
dans la glace pilee.
1) Cette méthode est principalement basée sur Mhthodes d’analyse enzymatique des produits alimentaires - M&ode UV de ddtermination de
l’acide L-lactique et de l’acide D-lactique dans les aliments, Boehringer Mannheim GmbH.
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ISO 80694986 (F)
5.6 L-LDH, extrait du muscle du porc, solution à 10 mg/ml 6 Appareillage
dans le glycérol à 50 % (V/ VI, de pH 7 environ.
Matériel courant de laboratoire, et notamment
L’activité spécifique de la solution de L-lactate déshydrogénase
(L-LDH, EC 1 .l .1.27) ‘) doit être d’au moins 5 500 unités/ml *)
6.1 Balance analytique.
(à 25 OC).
6.2 Becher, en verre, de 50 ml de capacité.
La solution peut se garder pendant 12 mois si elle est conservée
au refrigérateur entre 0 et +5 OC.
6.3 Éprouvette graduee, de 50 ml de capacité.
doit être conserve
Lors de l’utilisation de la solution, le récipient
dans la glace pilée.
Fioles jaugées à un trait, de 100 ml de capacité.
64 .
5.7 D-LDH, provenant du LactobacIlus leichmannii, suspen- 6.5 Pipettes, permettant de délivrer 0,021 0,05; 0,2; 1 et
2 ml.
sion à 5 mg/ml dans une solution de sulfate d’ammonium à
3,2 mol/l, de pH 6 environ.
6.6 Pipettes graduees, de 5 et 10 ml de capacité, graduées
L’activité spécifique de la suspension de D-lactate déshydro-
en 0,l ml.
génase (D-LDH, EC 1 .l .1.28) doit être d’au moins
1 500 unités/ml RI 25 OC).
Entonnoir en verre, d’environ 7 cm de diamètre.
67 .
La suspension peut se garder pendant 12 mois, si elle est
conservée au réfrigérateur entre 0 et +5 OC. 6.8 Papier filtre, à filtration moyenne, d’environ 15 cm de
diamétre, exempt d’acide lactique et de lactates.
Lors de l’utilisation de la suspensi on, le récipient doit être
conservé dans la glace pilée.
6.9 Baguette de verre.
6.10 Palettes en plastique, permettant de mélanger le
5.8 GPT, extrait du cœur du porc, suspension à 20 mg/mI,
mélange enzyme- echantillon dans la cuve du spectrométre.
dans une solution de sulfate d’ammonium à 3,2 mol/1 de pH 7
environ.
6.11 Spectrometre, permettant d’opérer à 340 nm, équipé
L’activité spécifique de la suspension de glutamate pyruvate
de cuves de 1 cm d’épaisseur.
transaminase (GPT, EC 2.6.1.2) doit être d’au moins
1 600 unités/ml (a 25 OC).
7 Échantillonnage
Centrifuger 2 ml d’une suspension contenant 10 mg/ml de
GPT pendant 10 min, à environ 4 OOOg, aspirer 1,O ml de surna-
7.1 Voir ISO 707.
geant clair et l’éliminer.
7.2 Conserver l’échantillon de facon à éviter toute détériora-
garder pendant 12 mois si elle est
La suspension peut se
tion et toute modification de composition.
conservee au réfrigérateu r entre Oet +5O c.
Lors de l’utilisation de la suspension, le récipient doit être
8 Mode opératoire
conservé dans la glace pilée.
ATTENTION - Éviter les contaminations, specialement
celles dues & la sueur.
5.9 L-lactate de lithium, solution.
Dissoudre 50 mg de L-lactate de lithium (C3H503Li) dans l’eau, 8.1 Vérification de l’activité des rbactifs
diluer à 500 ml et mélanger.
Si un nouveau lot de réactifs (5.5 à 5.8 inclus) est utilisé, si de
tels reactifs ont été conserves au réfrigérateur sans avoir ete uti-
5.10 D-lactate de lithium, solution. lisés pendant plus de deux semaines, si le travail analytique
recommence aprés une période d’inactivité ou si les conditions
Dissoudre 50 mg de D-lactate de lithium &H,O,Li) dans l’eau, peuvent le justifier, l’essai suivant de récupération des lactates
diluer à 500 ml et mélanger. doit être effectué.
1) Le nombre EC se référe au nombre de classification des enzymes, tel qu’il a été donné par le comité de nomenclature de l
...
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