ISO 5510:1984
(Main)Animal feeding stuffs — Determination of available lysine
Animal feeding stuffs — Determination of available lysine
The method consists in hydrolysing with hydrochloric acid of a ground test portion, dollowed by separation of the total lysine by column chromatography and determination by spectrometry at 570 nm. Reaction of a second ground test portion with an ethanolic solution of 2,4-dinitrofluorobenzene in an alkaline medium, purification, then hydrolysis with hydrochloric acid, separation of the non-available lysine by column chromatography, and determination by spectrometry at 570 nm.
Aliments des animaux — Dosage de la lysine disponible
La présente Norme internationale spécifie une méthode de dosage de la lysine disponible dans les aliments des animaux contenant des protéines d'origine animale ou végétale. Cependant, cette méthode comparée à une détermination biologique surestime souvent la quantité de lysine disponible et il est nécessaire d'en tenir compte dans l'interprétation des résultats.
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
International Standard
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDlZATIONWUlE~YHAPO~HAR OPTAHM3ALWl fl0 CTAH~APTbl3AL&lbl@ORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALlSATlON
Determination of available lysine
Animal feeding stuffs -
Dosage de la lysine disponible
Aliments des animaux -
First edition - 1984~11-15
Ref. No. IS0 5510-1984 (E)
UDC 636.087.1: 543.544: 547.466.46
iii
-
Descriptors : animal feeding products, tests, determination of content, lysine.
Price based on 5 pages
---------------------- Page: 1 ----------------------
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through IS0 technical committees. Each member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance aslnternational Standards by
the IS0 Council. They are approved in accordance with IS0 procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard IS0 5510 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34,
Agricultural food products.
0 International Organization for Standardization, 1984
Printed in Switzerland
---------------------- Page: 2 ----------------------
IS0 55104984 (E)
INTERNATIONAL STANDARD
Determination of available lysine
Animal feeding stuffs -
purification, then hydrolysis with hydrochloric acid, separation
0 Introduction
of the non-available lysine by column chromatography, and
determination by spectrometry at 570 nm.
Lysine in food products is generally considered to be
assimilable when its terminal amino group (amino E) is not com-
bined. This fraction of lysine can be determined because these
5 Reagents
groups combine with 2,4-dinitrofluorobenzene.
All the reagents shall be of recognized analytical grade. The
1 Scope and field of application
water used shall be distilled water or water of at least equivalent
purity.
This International Standard specifies a method for the deter-
mination of the available lysine in animal feeding stuffs contain-
5.1 Diethyl ether, free from peroxides.
ing animal or vegetable proteins.
5.2 Sodium bicarbonate, 80 g/l solution.
Compared with biological determination, the method does,
however, overestimate the amount of availabie lysine and care
is necessary in interpreting the results.
5.3 2,4-Dinitrofluorobenrene (DNFB), ethanolic solution.
Dissolve 0,15 ml of DNFB in 12 ml of 95 % ( Vl v) ethanol.
2 References
Prepare this solution at the time of use.
IS0 5983, Animal feeding stuffs - Determination of nitrogen
content and calculation of crude protein content.
5.4 Hydrochloric acid, approximately 6 mol/l .
I SO 6497, Animal feeding stuffs - Sampling. 1 )
Mix 1 volume of hydrochloric acid & = 1,19 g/ml) with
IS0 6498, Animal feeding stuffs - Preparation of test samples.
1 volume of water.
5.5 Sodium citrate, buffer solution, pH 2,2 approximately.
3 Definition
Successively dissolve in water
available lysine: The quantity of lysine corresponding to the
difference between the total lysine and the non-available lysine
21 g of citric acid monohydrate;
determined under the conditions specified in this International
Standard.
8 g of sodium hydroxide;
It is expressed as a percentage by mass of the raw product.
16 ml of hydrochloric acid & = 1,19 g/ml);
0,l ml of octanoic (caprylic) acid;
4 Principle
Hydrolysis with hydrochloric acid of a ground test portion, 20 ml of thiodiglycol;
followed by separation of the total Iysine by column
3 ml of a 30 % (Vl V) aqueous solution of polyoxyethylene
chromatography and determination by spectrometry at
570 nm. dodecyl ether with approximately 23 molecules of oxy-
ethylene?
Reaction of a second ground test portion with an ethanolic
solution of 2,4-dinitrofluorobenzene in an alkaline medium, Dilute to 1 000 ml with water.
1) At present at the stage of draft.
2) A suitable commercially available product is BRIJ 35. This information is given for the convenience of the user of this International Standard and
does not constitute an endorsement of this product by ISO.
1
---------------------- Page: 3 ----------------------
IS0 55104984 (El
6.1 Grinder, having the following characteristics:
5.6 Sodium citrate, buffer solution, pH 5,28.
a) constructed of a material which does not absorb
Successively dissolve in water
moisture;
24,5 g of citric acid monohydrate;
b) easy to clean and having minimum dead space;
14 g of sodium hydroxide;
c) permitting rapid and uniform grinding, without causing
6,8 ml of hydrochloric acid (eZO = 1,19 g/ml); undue heating and preventing, as much as possible, contact
with the outside air;
0,l ml of octanoic (caprylic) acid;
d) capable of being regulated to give particles of the sizes
specified in 7.1.
3 ml of a 30 % 1 V/v) aqueous solution of polyethoxyl
dodecyl ether with approximately 23 molecules of oxy-
ethylene. 1 )
of capacities 250 ml and 1 000 ml, flat-
6.2 Flasks,
bottomed, short-necked with ground conical joints and reflux
Dilute to 1 000 ml with water. Adjust the pH to 5,28 + 0,02
condensers to fit the flasks.
using hydrochloric acid (eZO = 1,19 g/ml) or 50 % (m/m)
sodium hydroxide solution.
6.3 Crucible, with a sintered glass plate of grade P 16 (pore
size index 10 to 16 pm).
5.7 Ninhydrin reagent.
6.4 Oil-bath, capable of being maintained at a temperature
57.1 Sodium propionate, buffer solution, pH 5,5 + 0,l.
which will ensure refluxing (120 to 130 “C).
Dissolve 168 g of sodium hydroxide in about 400 ml of water.
6.5 Rotary evaporator.
Cool, then add while shaking, 498 ml of propionic acid. Dilute
to 1 000 ml with water.
6.6 Apparatus for automatic analysis of amino acids, or
57.2 Preparation of reagent.
if this is not available, manual chromatographic system
comprising :
Prepare the ninhydrin reagent in an atmosphere of nitrogen and
in the dark. Into a 2 I flask, place 1 litre of peroxide-free
a) a chromatography column, of length about 250 mm
ethylene glycol monomethyl ether, 1 litre of the sodium pro-
and of internal diameter 6 mm, thermostatically maintained
pionate buffer solution (5.7.1) and 40 g of ninhydrin. Shake un-
at 55 OC by means of a water jacket and circulation bath,
til completely dissolved, then add 1,33 g of tin(ll) chloride
and filled up to 200 mm with an 8 % cross-linked strongly
dihydrate (SnCl,.2H,O). Shake until completely dissolved. (See
acidic, cation exchange resin with sulfonic functional
the note. 1
groups, of particle size 13 + 2 pm;2)
This reagent is stable for 1 month if kept at 4 OC under light
b) small piston pump, producing a flow of 50 ml/h;
pressure in an atmosphere of nitrogen and in the dark.
c) fraction collector ;
NOTE - If precipitation of SnCl2 occurs, replace the tin(H) chloride
with 7,5 ml of 150 g/l titanium (Ill) chloride solution or by I,5 g of
d) boiling water-bath;
hydrindantin per litre of reagent.
e) spectrometer, set at 570 nm, with cells of thickness
10 mm.
5.8 Lysine, standard solution, corresponding to 1 mmol of
lysine base per litre.
6.7 Graduated pipettes, of capacities 1; 5; and 10 ml.
Dissolve l82,5 mg of lysine monohydrochloride in 100 ml of
0,l mol/l hydrochloric acid. Take exactly 10 ml of this solution
6.8 Volumetric flasks, of capacities 10; 20; and 100 ml.
and dilute it to 100 ml with sodium citrate buffer solution of
pH 2,2 (5.5).
6.9 Analytical balance.
1 ml of this solution contains 1 pmol of lysine base.
7 Sampling
6 Apparatus
See IS0 6497.
Usual laboratory equipment,. and in particular:
1) A suitable commercially available product is BRIJ 35. This information is given for the convenience of the user of this International Standard and
does not constitute an endorsement of this product by ISO.
2) A suitable commercially available product is Aminex A5. This information is given for the convenience of the user of this International Standard
and does not constitute an endorsement of this product by ISO.
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
IS0 55104984 (E)
of the lysine standard solution (5.8)l or the amount specified in
8 Procedure
the manufacturer ’s instructions.
8.1 Preparation of the test sample
8.3.3.2 Manual system
Grind 5 to 10 g of the laboratory sample to obtain particles
8.3.3.2.1 Localization of lysine
which will pass completely through a sieve of aperture size
315 pm.
The fraction of eluate containing the lysine shall be checked by
The aperture size specified is smaller than that recommended
NOTE -
using a lysine so!ution of known concentration, for example the
in IS0 6498 in order to ensure maximum contact with the DNFB.
1 ~mol/ml solution (5.8). For this purpose, discard the first 25
to 30 ml of eluate and then collect fractions of 1 ml in test-
8.2 Test portions
tubes until the 50th fraction is obtained, reckoned from the
beginning of the elution. Add to each fraction, between the
Weigh, to the nearest 1 mg, and place respectively in the two
30th and th
...
Norme internationale
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATIONWlE~YHAPO~HAR OPrAHHJALWlR ll0 CTAHP(APTM3ALWl~RGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Aliments des animaux - Dosage de la lysine disponible
Animal feeding stuffs - Determination of avaitable lysine
Première édition - 19844145
CDU 636.087.1: 543.544: 547.466.46
Réf. no : ISO 55104984 (FI
Descripteurs :
produit d’alimentation animale, essai, dosage, lysine.
Prix basé sur 5 pages
---------------------- Page: 1 ----------------------
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requiérent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 5510 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires.
0 Organisation internationale de normalisation, 1984 0
Imprimé en Suisse
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 5510-1984 (F)
NORME INTERNATIONALE
Aliments des animaux - Dosage de la lysine disponible
0 Introduction fication puis hydrolyse chlorhydrique, séparation de la lysine
indisponible par chromatographie sur colonne et détermination
La lysine des produits alimentaires est généralement considérée par spectrométrie a 570 nm.
comme assimilable lorsque ses groupes aminés terminaux
(E amines) ne sont pas engagés dans des liaisons. Cette frac-
5 Réactifs
tion de lysine peut être déterminée parce que ces groupes se
combinent avec le dinitro-2,4 fluorobenzéne.
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique reconnue.
L’eau utilisée doit être de l’eau distillée ou de l’eau de pureté
1 Objet et domaine d’application
équivalente.
La présente Norme internationale spécifie une méthode de
5.1 Oxyde di&hylique, exempt de peroxydes.
dosage de la @sine disponible dans les aliments des animaux
contenant des protéines d’origine animale ou végétale.
5.2 - Hydrog6nocarbonate de sodium, solution a 80 g/l.
Cependant, cette méthode comparée à une détermination bio-
logique surestime souvent la quantité de lysine disponible et il
est nécessaire d’en tenir compte dans l’interprétation des résul- 5.3 Dinitro-2,4 fluorobenzène (DNFB), solution éthanoli-
que.
tats.
Dissoudre 0,15 ml de DNFB dans 12 ml d’éthanol à
2 Références
95 % (V/vl.
ISO 5903, Aliments des animaux - Détermination de fa teneur
Préparer cette solution au moment de l’emploi.
en azote en vue du calcul de la teneur en protéliies brutes.
ISO 6497, Aliments des animaux - ÉchantiVonnage. 1)
5.4 Acide chlorhydrique, à environ 6 mol/l.
ISO 6498, Aliments des animaux - Préparation des &chanti/-
Mélanger 1 volume d’acide chlorhydrique (Q~ = 1 ,lS g/ml) et
Ions pour essai.
1 volume d’eau.
3 Définition
5.5 Citrate de sodium, solution tampon de pH 2,2 environ.
lysine disponible: Quantite de lysine obtenue par différence
Dissoudre successivement dans de l’eau
entre la lysine totale et la lysine indisponible, déterminees dans
les conditions spécifiées dans la présente Norme internationale.
21 g d’acide citrique monohydraté;
Elle est exprimée en pourcentage en masse du produit tel quel.
8 g d’hydroxyde de sodium;
4 Principe 16 ml d’acide chlorhydrique (ea = 1 ,lS g/ml) ;
Hydrolyse chlorhydrique d’une prise d’essai broyée, puis sépa-
0,l ml d’acide octanoïque (acide caprylique);
ration de la lysine totale par chromatographie sur colonne et
détermination par spectrométrie à 570 nm. 20 ml de thiodiglycol;
Réaction d’une deuxiéme prise d’essai broyée avec une solution 3 ml d’une solution aqueuse à 30 % ( V/ VI de dodécyléther
éthanolique de dinitro-2,4 fluorobenzène en milieu alcalin, puri- polyéthoxyle à environ 23 molécules d’oxyéthyléne.2)
1) Actuellement au stade de projet.
2) Un produit commercialisé sous le nom de BRIJ 35 convient. Cette information est donnée pour aider les utilisateurs de la présente Norme interna-
tionale et ne signifie pas que I’ISO approuve ce produit.
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 55104984 (FI
6 Appareillage
Compléter à 1 000 ml avec de l’eau.
Matériel courant de laboratoire, et notamment:
5.6 Citrate de sodium, solution tampon de pH 5,28.
successivement dans de l’eau 6.1 Broyeur, ayant les caractéristiques suivantes:
Dissoud re
d’acide citrique mono Ihydraté;
24,5
g a) construit en matériau n’absorbant pas l’humidité;
14 g d’hydroxyde de sodium;
b) facile à nettoyer et présentant un espace mort minimal;
6,8 ml d’acide chlorhydrique (e;zO = 1,19 g/ml);
c) permettant un broyage rapide et uniforme, sans provo-
0,l ml d’acide octanoïque (acide caprylique);
quer d’échauffement sensible et en évitant au maximum le
contact avec l’air extérieur;
3 ml d’une solution aqueuse à 30 % ( ‘v/ V) de dodécyléther
polyéthoxylé à environ 23 molécules d’oxyéthylène?
d) pouvant être réglé de facon à obtenir des dimensions de
particules correspondant aux indications fixées en 7.1.
Compléter à 1 000 ml avec de l’eau. Ajuster le pH à
5,28 + 0,02 à l’aide d’acide chlorhydrique (eZO = 1,19 g/ml)
6.2 Ballons, de 250 et 1 000 ml de capacités, à fond plat, col
ou d’une solution d’hydroxyde de sodium à 50 % (mlm).
court muni d’un joint conique rodé, et refrigérants à reflux
adaptables.
5.7 Réactif à la ninhydrine.
6.3 Creuset, muni d’une plaque en verre fritté de série P 16
5.7.1 Propionate de sodium, solution tampon, de
(dimensions des pores 10 à 16 pm).
pH 5,5 k 0,l.
Dissoudre 168 g d’hydroxyde de sodium dans environ 400 ml
6.4 Bain d’huile, réglable à une température permettant de
d’eau. Refroidir, puis ajouter, sous agitation, 498 ml d’acide
maintenir une ébullition à reflux (120 à 130 OC).
propionique. Compléter à 1 000 ml avec de l’eau.
6.5 Évaporateur rotatif.
5.7.2 Preparation du réactif.
Préparer le réactif à la ninhydrine sous atmosphère d’azote et à 6.6 Appareil pour analyse automatique des acides ami-
l’abri de la lumière. Dans un flacon de 2 1, introduire 1 litre nés, ou à défaut, système analytique manuel de chromato-
d’éther monométhylique de I’éthyléne glycol exempt de peroxy- graphie comprenant les éléments suivants :
des, 1 litre de la solution tampon de propionate de sodium
a) une colonne à chromatographie, d’environ 250 mm de
(5.7.1) et 40 g de ninhydrine. Agiter jusqu’à dissolution com-
hauteur et de 6 mm de diamétre intérieur, Chemis&e, ther-
plète, puis ajouter 133 g de chlorure d’étain(ll) dihydraté
mostatée à 55 OC à l’aide d’un bain à circulation d’eau, et
(SnCl,.2H,O). Agiter jusqu’à dissolution compléte. (Voir la
remplie jusqu’à 200 mm de résine échangeuse d’ions, catio-
nnte. 1
nique, fortement acide (groupement sulfonique) avec un
taux de réticulation de 8 %, de granulométrie 13 +2 pm;2)
Conservé à 4 OC sous une Iégére pression en atmosphère
-. --- -
-__- -
d’azote et à l’abri de la lumière, ce réactif est stable durant
b) une minipompe à piston permettant d’obtenir un débit
1 mois.
de 50 ml/h;
c) un collecteur de fractions;
NOTE - S’il se forme un précipité de SnCl2, remplacer le chlorure
d’étain(H) par 7,5 ml d’une solution de chlorure de titane(lll) à 150 g/l,
d) un bain d’eau bouillante;
ou par de I’hydrindantine, à raison de 1,5 g pour 1 litre de réactif.
e) un spectromètre réglé à 570 nm, équipé de cuves de
5.8 Lysine, solution étalon correspondant à 1 mmol de 10 mm d’épaisseur.
lysine base par litre.
6.7 Pipettes graduées, de capacités 1; 5 et 10 ml.
Dissoudre 182,5 mg de monochlorhydrate de lysine dans
100 ml d’acide chlorhydrique à 0,l mol/l. Prélever exactement
10 ml de cette solution et diluer à 100 ml avec la solution tam-
6.8 Fioles jaugées, de capacités 10; 20 et 100 ml.
pon de citrate de sodium de pH 2,2 (5.5).
6.9 Balance analytique.
1 ml de cette solution contient 1 pmol de lysine de base.
1) Un produit commercialisé sous le nom de BRIJ 35 convient. Cette information est donnée pour aider les utilisateurs de la présente Norme interna-
tionale et ne signifie pas que I’ISO approuve ce produit.
2) Un produit commercialisé sous le nom d’Aminex A5 convient. Cette information est donnée pour aider les utilisateurs de la présente Norme inter-
, nationale et ne signifie pas que I’ISO approuve ce produit.
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO5510-1984 (FI
7 Échantillonnage
8.3.3 Détermination
Voir ISO 6497.
8.3.3.1 À l’aide de l’analyseur automatique
Mettre en marche l’analyseur automatique. Étalonner l’appareil
8 Mode opératoire
avec 0,25 pmol de lysine [0,25 ml de la solution étalon de lysine
8.1 Préparation de l’échantillon pour essai (5.811 ou la quantité spécifiée par les instructions du fabricant
en procédant comme décrit en 8.3.2.
Broyer 5 à 10 g de l’échantillon pour laboratoire jusqu’à obten-
tion de particules passant complètement à travers un tamis de
8.3.3.2 À l’aide du système manuel
315 prn d’ouverture de maille.
8.3.3.2.1 Localisation de la lysine
NOTE - L’ouverture de maille spécifiée est inférieure à celle préconi-
I’ISO 5498, afin d’assurer un contact maximal avec le DNFB.
sée dans
La zone d’élution de la lysine doit être vérifiée en utilisant une
solution de lysine de concentration connue, par exemple la
8.2 Prises d’essai
solution (5.8) à 1 ~mol/ml. À cette
...
Norme internationale
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATIONWlE~YHAPO~HAR OPrAHHJALWlR ll0 CTAHP(APTM3ALWl~RGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Aliments des animaux - Dosage de la lysine disponible
Animal feeding stuffs - Determination of avaitable lysine
Première édition - 19844145
CDU 636.087.1: 543.544: 547.466.46
Réf. no : ISO 55104984 (FI
Descripteurs :
produit d’alimentation animale, essai, dosage, lysine.
Prix basé sur 5 pages
---------------------- Page: 1 ----------------------
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requiérent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 5510 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires.
0 Organisation internationale de normalisation, 1984 0
Imprimé en Suisse
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 5510-1984 (F)
NORME INTERNATIONALE
Aliments des animaux - Dosage de la lysine disponible
0 Introduction fication puis hydrolyse chlorhydrique, séparation de la lysine
indisponible par chromatographie sur colonne et détermination
La lysine des produits alimentaires est généralement considérée par spectrométrie a 570 nm.
comme assimilable lorsque ses groupes aminés terminaux
(E amines) ne sont pas engagés dans des liaisons. Cette frac-
5 Réactifs
tion de lysine peut être déterminée parce que ces groupes se
combinent avec le dinitro-2,4 fluorobenzéne.
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique reconnue.
L’eau utilisée doit être de l’eau distillée ou de l’eau de pureté
1 Objet et domaine d’application
équivalente.
La présente Norme internationale spécifie une méthode de
5.1 Oxyde di&hylique, exempt de peroxydes.
dosage de la @sine disponible dans les aliments des animaux
contenant des protéines d’origine animale ou végétale.
5.2 - Hydrog6nocarbonate de sodium, solution a 80 g/l.
Cependant, cette méthode comparée à une détermination bio-
logique surestime souvent la quantité de lysine disponible et il
est nécessaire d’en tenir compte dans l’interprétation des résul- 5.3 Dinitro-2,4 fluorobenzène (DNFB), solution éthanoli-
que.
tats.
Dissoudre 0,15 ml de DNFB dans 12 ml d’éthanol à
2 Références
95 % (V/vl.
ISO 5903, Aliments des animaux - Détermination de fa teneur
Préparer cette solution au moment de l’emploi.
en azote en vue du calcul de la teneur en protéliies brutes.
ISO 6497, Aliments des animaux - ÉchantiVonnage. 1)
5.4 Acide chlorhydrique, à environ 6 mol/l.
ISO 6498, Aliments des animaux - Préparation des &chanti/-
Mélanger 1 volume d’acide chlorhydrique (Q~ = 1 ,lS g/ml) et
Ions pour essai.
1 volume d’eau.
3 Définition
5.5 Citrate de sodium, solution tampon de pH 2,2 environ.
lysine disponible: Quantite de lysine obtenue par différence
Dissoudre successivement dans de l’eau
entre la lysine totale et la lysine indisponible, déterminees dans
les conditions spécifiées dans la présente Norme internationale.
21 g d’acide citrique monohydraté;
Elle est exprimée en pourcentage en masse du produit tel quel.
8 g d’hydroxyde de sodium;
4 Principe 16 ml d’acide chlorhydrique (ea = 1 ,lS g/ml) ;
Hydrolyse chlorhydrique d’une prise d’essai broyée, puis sépa-
0,l ml d’acide octanoïque (acide caprylique);
ration de la lysine totale par chromatographie sur colonne et
détermination par spectrométrie à 570 nm. 20 ml de thiodiglycol;
Réaction d’une deuxiéme prise d’essai broyée avec une solution 3 ml d’une solution aqueuse à 30 % ( V/ VI de dodécyléther
éthanolique de dinitro-2,4 fluorobenzène en milieu alcalin, puri- polyéthoxyle à environ 23 molécules d’oxyéthyléne.2)
1) Actuellement au stade de projet.
2) Un produit commercialisé sous le nom de BRIJ 35 convient. Cette information est donnée pour aider les utilisateurs de la présente Norme interna-
tionale et ne signifie pas que I’ISO approuve ce produit.
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 55104984 (FI
6 Appareillage
Compléter à 1 000 ml avec de l’eau.
Matériel courant de laboratoire, et notamment:
5.6 Citrate de sodium, solution tampon de pH 5,28.
successivement dans de l’eau 6.1 Broyeur, ayant les caractéristiques suivantes:
Dissoud re
d’acide citrique mono Ihydraté;
24,5
g a) construit en matériau n’absorbant pas l’humidité;
14 g d’hydroxyde de sodium;
b) facile à nettoyer et présentant un espace mort minimal;
6,8 ml d’acide chlorhydrique (e;zO = 1,19 g/ml);
c) permettant un broyage rapide et uniforme, sans provo-
0,l ml d’acide octanoïque (acide caprylique);
quer d’échauffement sensible et en évitant au maximum le
contact avec l’air extérieur;
3 ml d’une solution aqueuse à 30 % ( ‘v/ V) de dodécyléther
polyéthoxylé à environ 23 molécules d’oxyéthylène?
d) pouvant être réglé de facon à obtenir des dimensions de
particules correspondant aux indications fixées en 7.1.
Compléter à 1 000 ml avec de l’eau. Ajuster le pH à
5,28 + 0,02 à l’aide d’acide chlorhydrique (eZO = 1,19 g/ml)
6.2 Ballons, de 250 et 1 000 ml de capacités, à fond plat, col
ou d’une solution d’hydroxyde de sodium à 50 % (mlm).
court muni d’un joint conique rodé, et refrigérants à reflux
adaptables.
5.7 Réactif à la ninhydrine.
6.3 Creuset, muni d’une plaque en verre fritté de série P 16
5.7.1 Propionate de sodium, solution tampon, de
(dimensions des pores 10 à 16 pm).
pH 5,5 k 0,l.
Dissoudre 168 g d’hydroxyde de sodium dans environ 400 ml
6.4 Bain d’huile, réglable à une température permettant de
d’eau. Refroidir, puis ajouter, sous agitation, 498 ml d’acide
maintenir une ébullition à reflux (120 à 130 OC).
propionique. Compléter à 1 000 ml avec de l’eau.
6.5 Évaporateur rotatif.
5.7.2 Preparation du réactif.
Préparer le réactif à la ninhydrine sous atmosphère d’azote et à 6.6 Appareil pour analyse automatique des acides ami-
l’abri de la lumière. Dans un flacon de 2 1, introduire 1 litre nés, ou à défaut, système analytique manuel de chromato-
d’éther monométhylique de I’éthyléne glycol exempt de peroxy- graphie comprenant les éléments suivants :
des, 1 litre de la solution tampon de propionate de sodium
a) une colonne à chromatographie, d’environ 250 mm de
(5.7.1) et 40 g de ninhydrine. Agiter jusqu’à dissolution com-
hauteur et de 6 mm de diamétre intérieur, Chemis&e, ther-
plète, puis ajouter 133 g de chlorure d’étain(ll) dihydraté
mostatée à 55 OC à l’aide d’un bain à circulation d’eau, et
(SnCl,.2H,O). Agiter jusqu’à dissolution compléte. (Voir la
remplie jusqu’à 200 mm de résine échangeuse d’ions, catio-
nnte. 1
nique, fortement acide (groupement sulfonique) avec un
taux de réticulation de 8 %, de granulométrie 13 +2 pm;2)
Conservé à 4 OC sous une Iégére pression en atmosphère
-. --- -
-__- -
d’azote et à l’abri de la lumière, ce réactif est stable durant
b) une minipompe à piston permettant d’obtenir un débit
1 mois.
de 50 ml/h;
c) un collecteur de fractions;
NOTE - S’il se forme un précipité de SnCl2, remplacer le chlorure
d’étain(H) par 7,5 ml d’une solution de chlorure de titane(lll) à 150 g/l,
d) un bain d’eau bouillante;
ou par de I’hydrindantine, à raison de 1,5 g pour 1 litre de réactif.
e) un spectromètre réglé à 570 nm, équipé de cuves de
5.8 Lysine, solution étalon correspondant à 1 mmol de 10 mm d’épaisseur.
lysine base par litre.
6.7 Pipettes graduées, de capacités 1; 5 et 10 ml.
Dissoudre 182,5 mg de monochlorhydrate de lysine dans
100 ml d’acide chlorhydrique à 0,l mol/l. Prélever exactement
10 ml de cette solution et diluer à 100 ml avec la solution tam-
6.8 Fioles jaugées, de capacités 10; 20 et 100 ml.
pon de citrate de sodium de pH 2,2 (5.5).
6.9 Balance analytique.
1 ml de cette solution contient 1 pmol de lysine de base.
1) Un produit commercialisé sous le nom de BRIJ 35 convient. Cette information est donnée pour aider les utilisateurs de la présente Norme interna-
tionale et ne signifie pas que I’ISO approuve ce produit.
2) Un produit commercialisé sous le nom d’Aminex A5 convient. Cette information est donnée pour aider les utilisateurs de la présente Norme inter-
, nationale et ne signifie pas que I’ISO approuve ce produit.
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO5510-1984 (FI
7 Échantillonnage
8.3.3 Détermination
Voir ISO 6497.
8.3.3.1 À l’aide de l’analyseur automatique
Mettre en marche l’analyseur automatique. Étalonner l’appareil
8 Mode opératoire
avec 0,25 pmol de lysine [0,25 ml de la solution étalon de lysine
8.1 Préparation de l’échantillon pour essai (5.811 ou la quantité spécifiée par les instructions du fabricant
en procédant comme décrit en 8.3.2.
Broyer 5 à 10 g de l’échantillon pour laboratoire jusqu’à obten-
tion de particules passant complètement à travers un tamis de
8.3.3.2 À l’aide du système manuel
315 prn d’ouverture de maille.
8.3.3.2.1 Localisation de la lysine
NOTE - L’ouverture de maille spécifiée est inférieure à celle préconi-
I’ISO 5498, afin d’assurer un contact maximal avec le DNFB.
sée dans
La zone d’élution de la lysine doit être vérifiée en utilisant une
solution de lysine de concentration connue, par exemple la
8.2 Prises d’essai
solution (5.8) à 1 ~mol/ml. À cette
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.