ISO/TS 11133-1:2000
(Main)Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and production of culture media — Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and production of culture media — Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory
Microbiologie des aliments — Guide pour la préparation et la production des milieux de culture — Partie 1: Guide général pour l'assurance de la qualité pour la préparation des milieux de culture en laboratoire
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TECHNICAL ISO/TS
SPECIFICATION 11133-1
First edition
2000-06-01
Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Guidelines on preparation and
production of culture media —
Part 1:
General guidelines on quality assurance for
the preparation of culture media in the
laboratory
Microbiologie des aliments — Guide pour la préparation et la production
des milieux de culture —
Partie 1: Guide général pour l'assurance de la qualité pour la préparation
des milieux de culture en laboratoire
Reference number
ISO/TS 11133-1:2000(E)
©
ISO 2000
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ISO/TS 11133-1:2000(E)
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ISO/TS 11133-1:2000(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO
member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical
committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards adopted
by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
In other circumstances, particularly when there is an urgent market requirement for such documents, a technical
committee may decide to publish other types of normative document:
— an ISO Publicly Available Specification (ISO/PAS) represents an agreement between technical experts in an
ISO working group and is accepted for publication if it is approved by more than 50 % of the members of the
parent committee casting a vote;
— an ISO Technical Specification (ISO/TS) represents an agreement between the members of a technical
committee and is accepted for publication if it is approved by 2/3 of the members of the committee casting a
vote.
An ISO/PAS or ISO/TS is reviewed every three years with a view to deciding whether it can be transformed into an
International Standard.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this Technical Specification may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO/TS 11133-1 was prepared by the European Committee for Standardization (CEN) in collaboration with ISO
Technical Committee TC 34, Agricultural food products, Subcommittee SC 9, Microbiology, in accordance with the
Agreement on technical cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
Throughout the text of this part of ISO/TS 11133, read ".this European Prestandard." to mean ".this Technical
Specification.".
ISO/TS 11133 consists of the following parts, under the general title Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Guidelines on preparation and production of culture media:
— Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory
— Part 2: Practical implementation of the general guidelines on quality assurance of culture media in the
laboratory
— Part3:Performancetesting
Annexes A, B and C of this part of ISO/TS 11133 are for information only.
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Contents Page
Foreword. v
Introduction . v
1 Scope. 1
2 Normative references. 1
3 Terminology . 1
3.1 General. 1
3.2 Terminology of quality assurance . 1
3.3 Terminology of culture media. 2
3.4 Terminology for test organisms. 5
4 Practices for quality control of culture media. 5
4.1 Documentation . 5
4.2 Storage. 6
4.3 Laboratory preparation of media. 7
4.4 Preparation for use. 9
4.5 Disposal of media. 10
5 Quality control of finished product . 10
5.1 Physical quality control. 10
5.2 Microbiological quality control . 10
Annex A (informative) Designation of the components of the culture media in standards on
microbiological analysis of food and animal feeding stuffs products. 12
Annex B (informative) Guidance on preservation and maintenance of control strains. 14
Annex C (informative) Quality assurance of culture media – trouble shooting . 15
Bibliography . 16
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ISO/TS 11133-1:2000(E)
Foreword
The text of ENV ISO 11133-1:2000 has been prepared by Technical Committee CEN/TC 275 "Food analysis -
Horizontal methods", the secretariat of which is held by DIN, in collaboration with Technical Committee ISO/TC 34
"Agricultural food products".
This European Standard shall be given the status of a national standard, either by publication of an identical text or
by endorsement, at the latest by December 2000, and conflicting national standards shall be withdrawn at the latest
by December 2000.
This draft European standard “Microbiology of food and animal feeding stuffs – Guidelines on preparation and
production of culture media” consists of two parts :
- Part 1 : General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory
- Part 2 : Practical guidelines on performance testing of culture media in the laboratory
Annexes designated as “informative” are given for information only. In this standard Annexes A, B and C are
informative.
According to the CEN/CENELEC Internal Regulations, the national standards organizations of the following
countries are bound to implement this European Standard: Austria, Belgium, Czech Republic, Denmark, Finland,
France, Germany, Greece, Iceland, Ireland, Italy, Luxembourg, Netherlands, Norway, Portugal, Spain, Sweden,
Switzerland and the United Kingdom.
Introduction
In the microbiology laboratory many tests and procedures depend upon culture media being consistent and
providing reproducible results. Culture media are used in all traditional cultural techniques and also for many
alternative techniques. Many formulae of dehydrated culture media are commercially available and many more,
designed for specific growth purposes, are described in the literature. Additionally, in laboratories carrying out the
microbiological examination of food, the main objectives are to maintain, resuscitate, grow, detect and / or
enumerate a wide variety of microorganisms. The requirements for media are specific to both the sample and the
organisms to be detected. Culture media meeting established or minimal performance criteria are therefore a pre-
requisite for any reliable microbiological work. Sufficient testing should be carried out to demonstrate i) the
acceptability of each batch of medium ii) that the medium is ‘fit for purpose’ and iii) that the medium can produce
consistent results.
These three criteria are an essential part of internal quality control procedures and, with appropriate
documentation, will permit effective monitoring of culture media and contribute to the production of both accurate
and precise data.
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ISO/TS 11133-1:2000(E)
1 Scope
This European prestandard provides the general terminology related to quality assurance of the preparation of
culture media and specifies the minimum requirements to be used for the microbiological analysis of products
intended for human consumption or animal feeding.
These requirements are applicable to three categories of culture media used in laboratories that prepare and/or
use culture media for performing microbiological analyses :
- commercially manufactured ready-to-use media ;
- media prepared from commercially available dehydrated formulations (either complete e.g. plate count agar or
basal media to which supplements are added e.g. Baird-Parker agar) ;
- media prepared from its individual components.
2 Normative references
This European Prestandard incorporates by dated or undated reference, provisions from other publications. These
normative references are cited at the appropriate places in the text and the publications are listed hereafter. For
dated references, subsequent amendments to or revisions of any of these publications apply to this European
Prestandard only when incorporated in it by amendment or revision. For undated references the latest edition of the
publication referred to applies.
EN 1659:1996, In vitro diagnostic systems – Culture media for microbiology – Terms and definitions.
EN 12322:1999, In vitro diagnostic medical devices – Culture media for microbiology – Performance criteria for
culture media.
1)
ISO 8402:1994, Quality management and quality assurance – Vocabulary.
3 Terminology
3.1 General
This clause gives the general definitions related to quality assurance and provides different types of terminology
related to culture media and to control cultures. Standards cited between brackets indicate that the text given is
identical to that cited.
3.2 Terminology of quality assurance
3.2.1
quality assurance
all the planned and systematic activities implemented within the quality system and demonstrated as needed, to
provide adequate confidence that an entity will fulfil the requirements for quality
�ISO 8402�
1) This is under revision and will be combined with ISO 9000-1:1994 to become ISO 9000:2000, Quality management
systems — Fundamentals and vocabulary.
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ISO/TS 11133-1:2000(E)
3.2.2
quality control
operational techniques and activities that are used to fulfil the requirements for quality
�ISO 8402�
3.2.3
internal quality control
a continuous control programme of the laboratory's work prepared by or for them, and based on control analysis
together with follow-up and, if necessary, corrective actions
3.2.4
batch of culture media ; lot of culture media
fully traceable unit of a medium referring to a defined amount of bulk, semi-finished product or end product, which
is consistent in type and quality and which has passed the requirements of production (in-process control) and
quality assurance testing, and which has been produced within one defined production period, having been
assigned the same lot number
�EN 12322�
3.2.5
performance of culture media
the response of a culture medium to challenge by test organisms under defined conditions
3.3 Terminology of culture media
3.3.1
culture medium
formulation of substances, in liquid, semi-solid or in solid form, which contain natural and/or synthetic constituents
intended to support the multiplication, or to preserve the viability, of microorganisms
NOTE When used in connection with compound words, this term is often shortened into "medium" (e.g. enrichment
medium).
�EN 1659�
3.3.1 Culture media classified by composition
3.3.2.1
chemically defined culture medium
culture medium consisting only of chemically defined constituents (i.e. of known molecular structure and degree of
purity)
�EN 1659�
3.3.2.2
chemically incomplete culture medium
culture medium consisting entirely or partly of natural materials, processed or otherwise, the chemical composition
of which is not completely defined
NOTE For the various chemically undefined components used in culture media, ISO/TC 34/SC 9 has specified harmonised
designations - see Annex A.
3.3.2 Culture media classified by consistency
3.3.3.1
liquid culture medium
culture medium consisting of an aqueous solution of one or more constituents (e.g. peptone water, nutrient broth)
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ISO/TS 11133-1:2000(E)
NOTE 1 In some cases, solid particles are added to the liquid culture medium.
NOTE 2 Liquid media in tubes, flasks or bottles are commonly called "broth".
�EN 1659�
3.3.3.2
solid culture medium and semi-solid culture medium
liquid culture medium containing solidifying materials (e.g. agar-agar, gelatine, etc.,) in different concentrations
NOTE 1 Due to the world-wide use of culture media solidified with agar-agar, the shortened term "agar" is often used
synonymously for solid culture media and therefore in connection with nouns, e.g. "Plate count agar".
NOTE 2 Solid culture media poured into Petri dishes are commonly called "plates". Solid culture media poured into tubes that
are kept in slanted positions while the media are solidifying are often called "slants".
�EN 1659�
3.3.3 Culture media classified by intent of use
3.3.4.1
transport medium
culture medium designed to preserve and maintain the viability of microorganisms for the time period between
sample collection and laboratory processing of the sample
NOTE Transport media usually contain substances that do not permit multiplication of microorganisms but ensure their
preservation (e.g. Stuart's or Amies' Transport medium).
�EN 1659�
3.3.4.2
preservation medium
culture medium designed to preserve and maintain the viability of microorganisms over an extended period, to
protect them against the adverse influences which may occur during long-term storage and to allow recovery after
this period (e.g. Dorset egg medium)
�EN 1659�
3.3.4.3
resuscitation medium
culture medium enabling stressed and damaged microorganisms to repair and recover their capacity for normal
growth without necessarily promoting their multiplication
�EN 1659�
3.3.4.4
enrichment medium
predominantly liquid culture medium which, due to its composition, provides particularly favourable conditions for
multiplication of microorganisms
�EN 1659�
3.3.4.4.1
selective enrichment medium
enrichment medium which supports the multiplication of specific microorganisms whilst partially or totally inhibiting
the growth of other microorganisms (e.g. Rappaport-Vassiliadis medium)
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3.3.4.4.2
non-selective enrichment medium
enrichment medium which supports the growth of most microorganisms (e.g. nutrient broth)
3.3.4.5
isolation medium
solid or semi-solid culture medium which supports the growth of microorganisms
3.3.4.5.1
selective isolation medium
isolation medium which supports growth of specific microorganisms, while inhibiting other microorganisms (e.g.
PALCAM agar, MacConkey agar)
�EN 1659�
3.3.4.5.2
non-selective isolation medium
isolation medium which is not devised to selectively inhibit microorganisms (e.g. nutrient agar)
�EN 1659�
3.3.4.6
differential medium
culture medium which permits the testing of one or more physiological/biochemical characteristics of the
microorganisms for their identification (e.g. Urea medium, Kligler agar)
NOTE Differential media which can be used as isolation media are referred to as isolation/differential media (e.g. xylose
lysine desoxycholate (XLD) agar).
�EN 1659�
3.3.4.7
identification medium
culture medium designed to produce a specific identification reaction which does not require any further
confirmatory test
NOTE Identification media which can be used as isolation media are referred to as isolation/identification media.
�EN 1659�
3.3.4.8
media having multiple uses
certain culture media may be assigned to several categories, e.g. Blood agar is a resuscitation medium according
to 3.3.4.3. an isolation medium according to 3.3.4.5 and a differential medium according to 3.3.4.6 used for
detection of haemolysis
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3.3.4 Culture media classified according to preparation method
3.3.5.1
ready-to-use medium
culture medium which is supplied in containers in ready-to-use form (e.g. Petri dishes or tubes or other containers)
3.3.5.2
culture medium prepared from commercially dehydrated formulations
culture medium in dry form which is not ready for immediate use (e.g. powders, granules, lyophilised products).
Rehydration will make one of two kinds of medium
- a complete ready-to-use medium ;
- an incomplete medium to which labile components are added at the time of use.
3.3.5.3 Culture medium prepared from individual components in the laboratory
3.4 Terminology for test organisms
3.4.1 General
These are microorganisms generally used for quality control and performance testing of culture media. They are
defined according to their source as follows.
3.4.2
reference strain
microorganism defined to at least the genus and species level, catalogued and described according to its
characteristics and preferably stating its origin
�EN 12322�
3.4.3
reference stocks
a set of separate identical cultures obtained in the laboratory by a single sub-culture from the reference strain either
in the laboratory or from a supplier
�EN 12322�
3.4.4
working culture
a primary sub-culture from a reference stock (3.4.3)
4 Practices for quality control of culture media
4.1 Documentation
4.1.1 Documentation required from manufacturer
The following details should be available from the manufacturer:
- name of the medium, individual components and any supplements, and their product codes ;
- batch code ;
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- pH value of the medium before use ;
- storage information and expiry date ;
- any performance evaluation and test organism used ;
- technical data sheet ;
- quality-control certificate ;
- safety and/or hazard data where needed.
4.1.2 Check list by the laboratory
Laboratory checks upon receipt of the medium:
- name of medium and batch code ;
- date of receipt ;
- expiry date ;
- condition and integrity of packaging ;
4.2 Storage
4.2.1 General
In all cases follow the manufacturer’s instructions where available regarding storage conditions, expiry date and
use.
4.2.2 Quality management and control for dehydrated media and supplements
Media are usually purchased from commercial manufacturers. They are delivered in dehydrated powdered or
granulated form in sealed containers and supplements of different selective or diagnostic substances are supplied
in either the lyophilised or liquid state. However, purchases should be planned to encourage a regular turnover of
stock (i.e. first in-first out). To maintain an effective inventory further checks should include :
- re-checking of the seal ;
- date of first opening ;
- visual assessment of contents of opened containers.
Especially after opening a new container, the quality of the medium may depend on the storage environment. Loss
of quality of dehydrated media is shown by change in flow characteristics of the powder, homogeneity, caking,
colour changes etc. Any dehydrated medium that has absorbed moisture or shows obvious changes in physical
appearance should be discarded.
4.2.3 Commercially supplied ready-to-use media
Follow the manufacturer’s instructions regarding storage conditions, expiry date and use.
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4.2.4 Media prepared from commercially available dehydrated formulations and basic individual
components
The shelf-life of these types of media varies. It is therefore difficult to state general time limits for storage of
prepared media. Specific International or National Standards may stipulate specific conditions and shelf life.
Sterilised culture media dispensed in plates, tubes or bottles and reagents which are not used immediately shall be
protected against light and desiccation.
Unless a validated expiry date has been established or is specified in the International Standard in question, sterile
partially complete media, i.e. media to which final components are added immediately before use, shall be kept in a
refrigerator for not more than 3 months or at room temperature for not more than 1 month under conditions which
prevent their composition from being modified. However, it is recommended that media to which labile selective
supplements have been added should be used on the day of preparation. Solid media containing chemically
reactive and / or labile substances should not be stored in bulk for remelting.
Observe any colour change, sign of evaporation/dehydration or microbial growth. Batches of media showing such
changes should not be used.
Prior to use or before further heating, it is recommended that the culture media be equilibrated to ambient
temperature.
4.3 Laboratory preparation of media
4.3.1 General
The accurate preparation of culture media is one of the fundamental steps in microbiological examination and it
shall be given special care.
Respect good laboratory practice and the manufacturer’s instructions regarding the handling of dehydrated media
and other components, particularly those containing hazardous materials i.e. bile salts or other selective agents.
Where media are prepared from dehydrated commercial formulations follow the manufacturer’s instructions
precisely. Document all relevant data, i.e. weights/volume, pH, date of preparation, sterilisation conditions,
operator.
For media prepared from individual components, follow the recipe precisely and record all details as in (4.1.2) and,
in addition, the full identity (i.e. code and batch number) of all the components used.
4.3.2 Water
The water used shall be distilled water or water of equivalent quality i.e. free from substances likely to inhibit or
influence the growth of microorganisms under the test conditions. If the distilled water is prepared from chlorinated
water, neutralise the chlorine prior to distillation.
The distilled water shall be stored in containers manufactured preferably from inert materials (e.g. neutral glass,
polyethylene etc.) which shall be shown to be free of any inhibitory substances prior to their initial use.
NOTE In some cases, it may be necessary to use freshly prepared water, free of dissolved carbon dioxide.
In order to be considered as being of good quality, the distilled water shall have a resistivity of at least
300 000�cm.
WARNING Water processed through an ion exchanger (de-ionised), may have a high microorganism
content ; it is therefore advisable not to use such water without verifying that the microorganism content of
the water is low. Consult the manufacturer for the best way to minimise microbial contamination. Heavily
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contaminated deionised water that has been filter sterilised may still contain substances inhibitory to the
growth of some microorganisms.
4.3.3 Weighing and rehydration
Carefully weigh the appropriate amount of dehydrated medium (taking care not to inhale powder, especially with
media containing toxic substances) and progressively add the required amount of water avoiding clumping.
4.3.4 Dissolution and dispersion
Dehydrated media needs rapid dispersion by instant and repeated stirring followed by heating, if necessary, to
dissolve. Media containing agar should be allowed to soak for several minutes prior to heating with mixing to
dissolve. For media prepared from individual components each component should be added separately and
allowed to dissolve before finally making up to volume.
4.3.5 Measurement and adjustment of pH
Measure the pH using a pH meter and adjust if necessary i.e. for media prepared from individual components in
the laboratory so that after sterilising and cooling to 25 �C the medium is at the required pH � 0,2 pH units, unless
otherwise stated. The adjustment is normally carried out using a solution of approximately 40g/l (about 1 mol/l) of
sodium hydroxide (NaOH) or approximately 36,5 g/l (about 1 mol/l) hydrochloric acid (HCl).
NOTE Commercially manufactured media may show significant changes in pH before and after autoclaving. However,
provided good quality distilled or de-ionised water is used, pH adjustment prior to autoclaving should not be necessary.
4.3.6 Dispensing
Dispense the medium into appropriate containers having a volume 1,2 to 3 times that of the medium.
4.3.7 Sterilisation
4.3.7.1 General
The sterilisation of culture media and of reagents may be carried out by using sterilisation by moist heat (4.3.7.2) or
sterilisation by filtration (4.3.7.3).
Certain media do not need sterilisation by autoclaving but can be used following boiling. For example, media for
Enterobacteriaceae containing brilliant green are particularly sensitive to heat and light and should be rapidly
cooled after boiling and protected from strong light. Also some reagents can be used without sterilisation (refer to
appropriate International standard or manufacturer’s instructions).
4.3.7.2 Sterilisation by moist heat
Sterilisation by moist heat is performed in an autoclave or media preparator. Generally the autoclaving operation
takes 15 min at 121 �C. For volumes greater than 1 000 ml, adapt the sterilisation cycle as necessary. In all cases
follow the instructions given in the International Standard or the manufacturer's instructions. The performance of
the autoclave should be monitored by temperature profiling using thermocouples and test strips under typical load
conditions to ensure the desired temperatures can be reached.
NOTE Overheating can occur when large volumes of media (> 1 000 ml) are processed in an autoclave.
Control of the efficacy of sterilisation is essential.
After heating it is essential that media be cooled in a manner to prevent boiling over. This is particularly important
for sensitive media e.g. Enterobacteriaceae and media in large volumes.
8 © ISO 2000 – All rights reserved
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ISO/TS 11133-1:2000(E)
4.3.7.3 Sterilisation by filtration
Ste
...
SPÉCIFICATION ISO/TS
TECHNIQUE 11133-1
Première édition
2000-06-01
Microbiologie des aliments — Guide pour la
préparation et la production des milieux de
culture —
Partie 1:
Guide général pour l'assurance de la
qualité pour la préparation des milieux de
culture en laboratoire
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation
and production of culture media —
Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of
culture media in the laboratory
Numéro de référence
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©
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Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comité membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 3.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres votants.
Dans d'autres circonstances, en particulier lorsqu'il existe une demande urgente du marché, un comité technique
peut décider de publier d'autres types de documents normatifs:
— une Spécification publiquement disponible ISO (ISO/PAS) représente un accord entre les experts dans un
groupe de travail ISO et est acceptée pour publication si elle est approuvée par plus de 50 % des membres
votants du comité dont relève le goupe de travail;
— une Spécification technique ISO (ISO/TS) représente un accord entre les membres d'un comité technique et
est acceptée pour publication si elle est approuvée par plus de 2/3 des membres votants du comité.
Les ISO/PAS et ISO/TS font l'objet d'un nouvel examen tous les trois ans afin de décider éventuellement de leur
transformation en Normes internationales.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments de la présente Spécification technique peuvent faire
l'objet de droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de
ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO/TS 11133-1 a été élaborée par le Comité européen de normalisation (CEN) en collaboration avec le comité
technique ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 9, Microbiologie, conformément à l’Accord
de coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Tout au long du texte du présent document, lire «… la présente norme européenne …» avec le sens de
«… la présente Spécification technique …».
L'ISO/TS 11133 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Microbiologie des aliments —
Guide pour la préparation et la production des milieux de culture:
— Partie 1: Guide général pour l'assurance de la qualité pour la préparation des milieux de culture en laboratoire
— Partie 2: Mise en application pratique des lignes directrices générales concernant l'assurance de la qualité
des milieux de culture en laboratoire
— Partie 3: Essais de performance
Les annexes A, B et C de la présente partie de l'ISO/TS 11133 sont données uniquement à titre d'information.
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ISO/TS 11133-1:2000(F)
Sommaire Page
Avant-propos. v
Introduction . vi
1 Domaine d'application . 1
2 Références normatives. 1
3 Terminologie . 1
3.1 Généralités. 1
3.2 Terminologie de l'assurance qualité. 1
3.3 Terminologie des milieux de culture. 2
3.4 Terminologie des organismes de contrôle . 5
4 Pratiques pour le contrôle qualité des milieux de culture . 5
4.1 Documentation . 5
4.2 Conservation . 6
4.3 Préparation des milieux en laboratoire . 7
4.4 Préparation avant utilisation. 9
4.5 Mise au rebut des milieux . 10
5 Contrôle qualité des produits finis . 10
5.1 Contrôle de la qualité physique. 10
5.2 Contrôle de la qualité microbiologique. 10
Annexe A (informative) Désignation des composants des milieux de culture dans les normes
d’analyse microbiologique destinées à l’alimentation humaine et animale. 12
Annexe B (informative) Conseils de conservation et d'entretien des souches de contrôle . 13
Annexe C (informative) Assurance qualité des milieux de culture – Tableaux d’anomalies . 15
Bibliographie . 16
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ISO/TS 11133-1:2000(F)
Avant-propos
Le texte de l’ENV ISO 11133-1:2000 a été élaboré par le Comité Technique CEN/TC 275 "Analyse des produits
alimentaires - Méthodes horizontales" dont le secrétariat est tenu par le DIN, en collaboration avec le Comité
Technique ISO/TC 34 "Produits agricoles alimentaires".
Cette norme européenne devra recevoir le statut de norme nationale, soit par publication d'un texte identique, soit
par entérinement, au plus tard en décembre 2000, et toutes les normes nationales en contradiction devront être
retirées au plus tard en décembre 2000.
Le présent projet de norme européenne "Microbiologie des aliments - Guide pour la préparation et la production
des milieux de culture" comprend deux parties :
- Partie 1 : Guide général pour l’assurance qualité pour la préparation des milieux de culture en laboratoire
- Partie 2 : Mise en pratique de l’assurance qualité des milieux de culture en laboratoire
Les annexes désignées "informatives" sont données à titre d'information uniquement. Dans la présente norme, les
Annexes A, B et C sont informatives.
Selon le Règlement Intérieur du CEN/CENELEC, les instituts de normalisation nationaux des pays suivants sont
tenus de mettre cette norme européenne en application: Allemagne, Autriche, Belgique, Danemark, Espagne,
Finlande, France, Grèce, Irlande, Islande, Italie, Luxembourg, Norvège, Pays-Bas, Portugal, République Tchèque,
Royaume-Uni, Suède et Suisse.
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v
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ISO/TS 11133-1:2000(F)
Introduction
Dans les laboratoires de microbiologie, de nombreux essais et procédures dépendent de la constance des milieux
de culture et de leur capacité à donner des résultats reproductibles. Ces milieux de culture sont utilisés dans le cas
de techniques traditionnelles et également dans plusieurs cas de techniques alternatives. De nombreuses formules
de milieux de culture déshydratés sont disponibles commercialement et beaucoup plus, destinés à des utilisations
spécifiques, sont décrits dans la littérature. De plus, dans les laboratoires réalisant des examens microbiologiques
sur les aliments, les principaux objectifs sont la revivification, la croissance, la détection et / ou la recherche d’une
large variété de microorganismes. Les exigences concernant les milieux sont spécifiques selon l'échantillon et les
micro-organismes à détecter. Les critères relatifs aux milieux de culture ou aux performances minimales
constituent donc un préalable à toute analyse microbiologique fiable. Il convient de réaliser un nombre d'essais
suffisant pour démontrer i) l'acceptabilité de chaque lot de milieu, ii) que le milieu répond aux besoins et iii) que le
milieu peut donner des résultats constants.
Ces trois critères constituent une part essentielle des procédures internes de contrôle qualité et, avec la
documentation appropriée, permettent une surveillance efficace de milieux de culture, contribuant ainsi à
l'obtention de données précises et fiables.
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ISO/TS 11133-1:2000(F)
1 Domaine d'application
La présente norme européenne indique les définitions générales relatives à l’assurance qualité pour la préparation
des milieux de culture et spécifie les exigences minimales à appliquer en analyse microbiologique de produits
destinés à la consommation humaine ou animale.
Ces exigences sont applicables à trois catégories de milieux de culture utilisés dans les laboratoires qui les
préparent et/ou les utilisent pour réaliser leurs analyses microbiologiques :
- milieux commerciaux prêts à l'emploi ;
- milieux préparés à partir de formules déshydratées commerciales (soit complets, par exemple gélose pour
dénombrement, soit partiellement complets dans lesquels sont ajoutés des suppléments, par exemple gélose
Baird-Parker) ;
- milieux préparés à partir de ses composants individuels.
2 Références normatives
Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui en est faite,
constituent des dispositions valables pour la présente norme internationale. Au moment de la publication, l'édition
indiquée était en vigueur. Toute norme est sujette à révision et les parties prenantes des accords fondés sur la
présente norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer l'édition la plus récente des
normes indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de l'ISO possèdent le registre des normes internationales en
vigueur à un moment donné.
EN 1659:1996, Systèmes de diagnostic in vitro – Milieux de culture de microbiologie – Termes et définitions.
EN 12322 :1999, Dispositifs médicaux de diagnostic in vitro – Milieux de culture de microbiologie – Critères de
performance des milieux de culture.
1)
ISO 8402 :1994, Management de la qualité et assurance de la qualité — Vocabulaire.
3 Terminologie
3.1 Généralités
Ce paragraphe rappelle les définitions générales relatives à l’assurance qualité et donne plusieurs terminologies
relatives aux milieux de culture et à leur contrôle. Les normes citées entres crochets signifient que le texte donné
est identique à celui de la source citée.
3.2 Terminologie de l'assurance qualité
3.2.1
assurance qualité
ensemble des activités préétablies et systématiques mises en œuvre dans le cadre du système qualité et
démontrées en tant que de besoin pour donner la confiance appropriée en ce qu'une entité satisfera aux exigences
pour la qualité
[ISO 8402]
1) Cette Norme internationale est en voie de révision et sera combinée avec l'ISO 9000-1:1994 pour devenir l'ISO 9000:2000,
Systèmes de management de la qualité — Principes essentiels et vocabulaire.
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ISO/TS 11133-1:2000(F)
3.2.2
contrôle qualité
opérations techniques et activités qui sont utilisées pour remplir les exigences de qualité
[ISO 8402]
3.2.3
contrôle qualité interne
programme de contrôle continu des activités d'un laboratoire, préparé par ou pour celui-ci et fondé sur des
analyses de contrôle et de suivi et sur des actions correctives si nécessaire
3.2.4
lot
un lot de milieu est une entité présentant une traçabilité totale. Il s'agit d'une quantité définie de produit en vrac,
semi-fini ou fini, de même type et de même qualité, conforme aux spécifications de production (contrôle en cours
de fabrication) et aux essais d'assurance de la qualité, qui a été produite au cours d'une période donnée et qui
porte le même numéro de lot
[EN 12322]
3.2.5
performance d’un milieu de culture
réponse d’un milieu de culture soumis à des souches de contrôle sous des conditions définies
3.3 Terminologie des milieux de culture
3.3.1
milieu de culture
mélange de substances, sous forme liquide, semi-solide ou solide, qui contient des constituants naturels et/ou
synthétiques permettant la croissance des microorganismes ou le maintien de leur viabilité
NOTE Lorsque cette expression fait partie d'un mot composé, on l'abrège souvent pour n'utiliser que le terme "milieu"
(exemple : milieu d'enrichissement).
[EN 1659]
3.3.2 Milieux de culture classés selon leur composition
3.3.2.1
milieu de culture chimiquement défini
milieu de culture exclusivement composé de constituants chimiquement définis (c'est-à-dire dont la structure
moléculaire et le degré de pureté sont connus)
[EN 1659]
3.3.2.2
milieu de culture chimiquement incomplètement défini
milieu de culture entièrement ou partiellement composé de matières premières naturelles, dont la composition
chimique n'est pas complètement définie
NOTE Pour les différents composants non définis chimiquement utilisés dans les milieux de culture, l'ISO/TC 34/SC 9 a
établi une liste harmonieuse des désignations, voir Annexe A.
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ISO/TS 11133-1:2000(F)
3.3.3 Milieux de culture classés selon leur consistance
3.3.3.1
milieu de culture liquide
milieu de culture consistant en une solution aqueuse d'un ou plusieurs constituants (exemple : eau peptonée,
bouillon nutritif)
NOTE 1 Dans certains cas on ajoute des particules solides dans le milieu de culture liquide.
NOTE 2 Les milieux liquides répartis en tubes, ou flacons sont couramment appelés "bouillon".
[EN 1659]
3.3.3.2
milieu de culture solide et milieu de culture semi-solide
milieu de culture liquide auquel on a ajouté des produits gélifiants (exemple : agar-agar ou gélose, gélatine, etc.) à
différentes concentrations
NOTE 1 Etant donné que les milieux de culture solidifiés par de la gélose (agar-agar) sont utilisés dans le monde entier, le
terme "gélose" est souvent utilisé comme synonyme de "milieu de culture solide" et donc en association avec un autre terme
(exemple : gélose dénombrement).
NOTE 2 Les milieux de culture solides contenus dans des boîtes de Pétri sont couramment appelés "milieux gélosés". Les
milieux de culture solides contenus dans des tubes placés en position inclinée pendant la solidification du milieu sont
fréquemment appelés "géloses inclinées".
[EN 1659]
3.3.4 Milieux de culture classés selon leur destination
3.3.4.1
milieu de transport
milieu de culture destiné à préserver et à maintenir la viabilité des micro-organismes pendant la période qui sépare
le prélèvement de l'échantillon du traitement de celui-ci au laboratoire
NOTE Les milieux de transport contiennent généralement des substances qui ne permettent pas la multiplication des micro-
organismes mais assurent leur conservation (exemple : milieu de transport de Stuart ou d'Amies).
[EN 1659]
3.3.4.2
milieu de préservation
milieu de culture destiné à préserver et à maintenir la viabilité des micro-organismes pendant une longue durée et
à protéger ceux-ci contre les influences défavorables qui peuvent se manifester pendant le stockage de longue
durée et permettant la récupération desdits micro-organismes au terme de cette période (exemple : milieu à l'œuf
de Dorset)
[EN 1659]
3.3.4.3
milieu de revivification
milieu de culture permettant aux micro-organismes choqués et endommagés de se régénérer et de retrouver leur
capacité de croissance normale, sans nécessairement favoriser leur multiplication
[EN 1659]
3.3.4.4
milieu d'enrichissement
milieu de culture généralement sous forme liquide qui, de par sa composition, crée des conditions particulièrement
favorables à la multiplication des micro-organismes
[EN 1659]
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ISO/TS 11133-1:2000(F)
3.3.4.4.1
milieu d'enrichissement sélectif
milieu d'enrichissement qui favorise la multiplication de microorganismes spécifiques tout en empêchant
partiellement ou totalement celle d'autres microorganismes (exemple : milieu de Rappaport-Vassiliadis)
3.3.4.4.2
milieu d'enrichissement non sélectif
milieu d'enrichissement sur lequel croissent la plupart des microorganismes (exemple : bouillon nutritif)
3.3.4.5
milieu d'isolement
milieu de culture solide ou semi-solide qui favorise la croissance des microorganismes
3.3.4.5.1
milieu d'isolement sélectif
milieu d'isolement qui favorise la croissance de micro-organismes spécifiques, tout en empêchant celle d'autres
micro-organismes (exemple : gélose PALCAM, gélose MacConkey)
[EN 1659]
3.3.4.5.2
milieu d'isolement non sélectif
milieu d'isolement qui n'est pas prévu pour inhiber de manière sélective des microorganismes (exemple : gélose
nutritive)
[EN 1659]
3.3.4.6
milieu de différenciation
milieu de culture qui permet de rechercher une ou plusieurs caractéristiques physiologiques/biochimiques des
micro-organismes en vue de leur identification (exemple : milieu à l'urée, gélose de Kligler)
NOTE Les milieux de différenciation qui peuvent être utilisés comme des milieux d'isolement sont désignés sous le nom de
milieux d'isolement/différenciation (exemple : gélose XLD).
[EN 1659]
3.3.4.7
milieu d'identification
milieu de culture destiné à produire une réaction d'identification spécifique et qui ne nécessite pas d'essais
ultérieurs de confirmation
NOTE Les milieux d'identification qui peuvent être utilisés comme milieux d'isolement sont désignés sous le nom de milieux
d'isolement/identification.
[EN 1659]
3.3.4.8
milieu pour plusieurs applications
certains milieux de culture peuvent se rapporter à plusieurs catégories, par exemple, la gélose au sang est un
milieu de revivification selon 3.3.4.3, un milieu d'isolement selon 3.3.4.5, et un milieu de différenciation selon
3.3.4.6, utilisé pour la détection de l'hémolyse
3.3.5 Milieux de culture classés en fonction de sa méthode de préparation
3.3.5.1
milieu prêt à l'emploi
milieu de culture fourni dans des récipients sous forme de produit prêt à l'emploi (exemple : boîtes de Petri, tubes
ou autres contenants)
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3.3.5.2
milieu de culture préparé à partir de formules déshydratées commerciales
milieu de culture sous forme déshydratée qui n'est pas immédiatement prêt à l'emploi (par exemple, produits en
poudre, granulés ou lyophilisés). La réhydratation aboutit à l'un des deux produits suivants :
- un milieu complet prêt à l'emploi
- un milieu incomplet auquel sont ajoutés des composants labiles juste avant utilisation
3.3.5.3
milieu de culture préparé dans le laboratoire à partir de composants individuels
3.4 Terminologie des organismes de contrôle
3.4.1 Généralité
Il s’agit de microorganismes utilisés généralement pour le contrôle qualité et les tests de performance des milieux
de culture. Ils sont définis selon leur origine.
3.4.2
souche de référence
micro-organisme dont au moins le genre et l'espèce sont définis, classé et décrit selon ses caractéristiques et
établissant de préférence son origine
[EN 12322]
3.4.3
stock de référence
ensemble de cultures identiques séparées obtenu à partir d'une seule subculture de la souche de référence en
laboratoire ou chez un fournisseur
[EN 12322]
3.4.4
culturedetravail
première sous-culture issue d'un stock de référence (3.4.3)
4 Pratiques pour le contrôle qualité des milieux de culture
4.1 Documentation
4.1.1 Documentation fournie par le fabricant
Il convient que les informations suivantes soient disponibles auprès du fabricant :
- nom du milieu, de ses composants et suppléments, et leurs codes produit ;
- numéro de lot ;
- valeur du pH du milieu avant utilisation ;
- conditions de stockage et date d'expiration ;
- toute évaluation des performances et organismes de contrôle utilisées ;
- fiche technique ;
- certificat de contrôle qualité ;
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ISO/TS 11133-1:2000(F)
- fiche de données de sécurité, si nécessaire.
4.1.2 Vérification faite par le laboratoire
Lors de la livraison des milieux, le laboratoire vérifie les données suivantes :
- le nom du milieu et le numéro du lot ;
- la date de réception ;
- la date d'expiration ;
- conditions et intégrité de l'emballage.
4.2 Conservation
4.2.1 Généralités
Dans tous les cas, suivre les instructions du fabricant lorsqu'elles existent, pour ce qui concerne les conditions de
conservation, la date de péremption et l'utilisation.
4.2.2 Maîtrise et contrôle de la qualité des milieux déshydratés et des suppléments
Les milieux sont généralement achetés auprès de fabricants commerciaux. Ils sont livrés sous forme déshydratée,
en poudre ou en granulés dans des emballages étanches et les suppléments contenant différentes substances
sélectives ou de diagnostic sont fournis sous forme lyophilisée ou liquide. Il convient toutefois d'organiser les
approvisionnements de manière à assurer une rotation régulière du stock. Pour garantir un inventaire efficace
(c'est-à-dire premier entré, premier sorti), il convient d'effectuer des vérifications supplémentaires, comprenant :
- une nouvelle vérification de l'étanchéité ;
- ladatedelapremièreouverture ;
- l'évaluation visuelle du contenu des emballages ouverts.
La qualité d'un milieu peut dépendre des conditions de stockage, spécialement après ouverture d'un nouvel
emballage. Une diminution de la qualité des milieux déshydratés se caractérise par un changement des
caractéristiques d'écoulement de la poudre, l'homogénéité, la prise en masse, des changements de couleur, etc. Il
convient d'éliminer tout milieu ayant pris l'humidité ou montrant des signes manifestes de changement d'apparence
physique.
4.2.3 Milieux prêts à l'emploi commerciaux
Suivre les instructions du fabricant pour ce qui concerne les conditions de stockage, la date de péremption et
l'utilisation.
4.2.4 Milieux préparés à partir de formules déshydratées commerciales et à partir de composants
individuels
La durée de conservation de ce type de milieu est variable. Il est donc difficile de donner des limites générales
pour le stockage des milieux préparés. Des normes internationales et nationales peuvent stipuler des conditions
spécifiques et des durées de conservation.
Les milieux de culture stériles répartis en boîtes, tubes ou en flacons et les réactifs qui ne sont pas utilisés
extemporanément doivent être conservés à l'abri de la lumière et de la dessiccation.
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ISO/TS 11133-1:2000(F)
Sauf si une date d’expiration validée a été définie ou est indiquée dans la norme internationale concernée, les
milieux stériles partiellement complets (c’est-à-dire les milieux auxquels les composants finaux sont ajoutés
immédiatement avant utilisation) doivent être conservés trois mois au maximum au réfrigérateur ou 1 mois au
maximum à température ambiante dans des conditions évitant toute modification de leur composition. Cependant,
il est recommandé que les milieux ayant été additionnés de suppléments sélectifs labiles soient utilisés le jour de
leur préparation. Il ne convient pas de stocker en vrac dans le but d’un mélange ultérieur les milieux solides
contenant des substances labiles et / ou des composés chimiquement réactifs.
Observer tout changement de couleur, tout signe d'évaporation/déshydratation ou prolifération microbienne. Il
convient d'éliminer tout lot de milieux montrant de tels changements.
Avant utilisation ou chauffage ultérieur, il est recommandé de mettre les milieux de culture à température ambiante.
4.3 Préparation des milieux en laboratoire
4.3.1 Généralités
La préparation précise des milieux de culture est une des étapes fondamentales de l'analyse microbiologique et il
est nécessaire d'y apporter toute la rigueur nécessaire.
Suivre de bonnes pratiques de laboratoires ou les instructions du fabricant concernant la manipulation des milieux
déshydratés et d'autres composants, particulièrement ceux contenant des matériaux dangereux, c'est-à-dire des
sels biliaires ou autres agents sélectifs.
Lorsque les milieux sont préparés à partir de formules déshydratées commerciales, suivre précisément les
instructions du fabricant. Consigner toutes les données importantes, c'est-à-dire pesées, pH, date de préparation,
conditions de stérilisation, opérateur.
Pour les milieux préparés à partir de composants individuels, suivre précisément la recette et enregistrer tous les
détails (4.1.2), ainsi que l'identité complète (c'est-à-dire le code et le numéro du lot) de tous les composants
utilisés.
4.3.2 Eau
L'eau utilisée doit être de l'eau distillée ou de qualité équivalente, c'est-à-dire exempte de substances susceptibles
d'inhiber ou d'influencer la croissance des micro-organismes dans les conditions d'essai. Si l'eau distillée est
préparée à partir d'eau chlorée, neutraliser le chlore avant la distillation.
L'eau distillée doit être conservée dans des récipients en matériau inerte (exemple : verre neutre, polyéthylène,
etc.) qui doit être exempt de toutes substance inhibitrice avant utilisation.
NOTE Dans certains cas, il est nécessaire d'utiliser de l'eau fraîchement préparée, exempte de gaz carbonique dissous.
Pour être considérée de bonne qualité, l'eau distillée doit avoir une résistivité d'au moins 300 000�cm.
AVERTISSEMENT L'eau déminéralisée par passage sur résine échangeuse d'ions est souvent très
chargée en micro-organismes ; aussi est-il conseillé de ne pas utiliser ce procédé sans vérifier la pauvreté
en micro-organismes de l'eau. Il convient de consulter le fabricant pour appliquer la meilleure méthode de
minimisation de la contamination microbienne. La stérilisation par filtration d'une eau déionisée et
contaminée par une grande quantité de micro-organismes, peut encore contenir des substances
inhibitrices pour la croissance de certains micro-organismes.
4.3.3 Pesée et réhydratation
Peser soigneusement la quantité appropriée de milieu déshydraté (en prenant soin de ne pas inhaler de poudre,
particulièrement avec les milieux contenant de
...
Questions, Comments and Discussion
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