ISO 7609:1985

Essential oils - Analysis by gas chromatography on capillary columns - General method

The Standard gives detailed information on all recurrent parameters, apparatus, products, methods and formulae for the analysis. The method consists in analyzing a small quantity of essential oil on a column of small diameter but great length, the inside wall of the column having been previously coated either directly with a specified stationary phase or with an impregnated support. If required different constituents are identified from their retention indexes. Quantitative determination of specific constituents is carried out by measurement of peak areas.

Huiles essentielles — Analyse par chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire — Méthode générale

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 04-Dec-1985
• ICS: 71.100.60 - Essential oils
• Technical Committee: ISO/TC 54 - Essential oils
• Drafting Committee: ISO/TC 54 - Essential oils
• Current Stage: 9092 - International Standard to be revised
• Start Date: 04-Sep-2025
• Completion Date: 13-Dec-2025

Overview

ISO 7609:1985 - Essential oils - Analysis by gas chromatography on capillary columns - General method - defines a practical, repeatable procedure for analyzing essential oils by gas chromatography (GC) using capillary columns. The Standard provides detailed guidance on recurrent parameters, apparatus, reagents, test mixtures, operating conditions and calculation methods used to identify constituents (by retention indexes) and to perform quantitative determinations (by peak area measurement).

Key topics and technical requirements

• Scope and principle: Analysis of a small quantity of essential oil on a long, narrow capillary column whose inner wall is coated with a specified stationary phase or impregnation. Identification by retention indexes; quantitation by peak areas.
• Apparatus & columns:
  • Capillary columns of inert material (glass, stainless steel, fused silica) with internal diameter 0.2–0.5 mm and length 15–100 m.
  • Typical stationary phases: methyl- or phenylpolysiloxanes and polyethylene glycols (terminal alcohol groups may be free or esterified).
• Gases and reagents:
  • Carrier gases: hydrogen, helium or nitrogen (detector-dependent).
  • Auxiliary gases per detector (e.g., FID requires high-purity air and hydrogen).
  • Reference/checking substances: linalyl acetate, linalool, methane; normal alkanes for retention index calibration.
• Column performance checks:
  • Chemical inertness (single peak for linalyl acetate).
  • Efficiency: measure number of theoretical plates (N ≥ 25 000) from linalool at isothermal 130 °C.
  • Resolution and separation tests using a defined test mixture (limonene, acetophenone, linalol, linalyl acetate, naphthalene, cinnamic alcohol).
• Operating conditions:
  • Temperature control of oven, injector and detector; flow rate set to obtain required efficiency.
  • Programmed temperature checks (e.g., 80 → 220 °C at 2–3 °C/min) for separation testing.
• Identification & quantitation:
  • Retention index calculation using normal alkanes; procedures for isothermal and linear temperature programming.
  • Quantitative methods: internal standard method (response factor determination), addition method, and internal normalization (semi-quantitative).

Applications and users

ISO 7609:1985 is used by:

• Analytical chemists and GC laboratories performing quality control and composition analysis of essential oils.
• Flavor, fragrance and cosmetics manufacturers ensuring batch consistency and ingredient identification.
• Regulatory and standards bodies validating methods for product specification and labeling.
• Research groups studying essential oil composition and chemotaxonomy.

Related standards

• ISO 356 - Essential oils - Preparation of test sample.
• ISO 7359 - Essential oils - Analysis by gas chromatography on packed columns - General method.

Keywords: ISO 7609:1985, essential oils, gas chromatography, capillary columns, retention index, internal standard, column efficiency, GC method.

Standards Content (Sample)

International Standard
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION.MEIKJJYHAPOAHAR OPI-AHM3ALWlR fl0 CTAH~APTbl3ALWlM.ORGANISATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Essential oils - Analysis by gas chromatography on
capillary columns - General method
Huiles essentielles - Analyse par chromatographie en Phase gazeuse SW colonne capillaire - M&hode g&x?rale
First edition - 1985-12-01
Ref. No. ISO 76094985 (E)
UDC 665.5 : 543.544
w
-
Descriptors : essential oils, Chemical analysis, chromatographic analysis, gas chromatography.
Price based on 7 pages
--
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national Standards bodies (ISO member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through ISO technical committees. Esch member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the ISO Council. They are approved in accordance with ISO procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard ISO 7609 was prepared by Technical Committee ISO/TC 54,
Essen tiaf oils.
Users should note that all International Standards undergo revision from time to time
and that any reference made herein to any other International Standard implies its
latest edition, unless otherwise stated.
0 International Organkation for Standardkation, 1985
Printed in Switzerland
INTERNATIONAL STANDARD ISO 76094985 (E)
Essential oils - Analysis by gas chromatography on
capillary columns - General method
If required, identification of the different constituents from their
0 lntroduction
retention indexes.
Since the description of methods of analysis by gas
Quantitative determination of specific constituents by measure-
chromatography is very long, it is considered useful to establish
general methods on the one hand, giving detailed information ment of peak areas.
on all the recurrent Parameters, apparatus, products, methods,
formulae, etc., and on the other hand Standards with short
details on the determination of specific constituents in the 4 Reagents and products
essential oils, giving only those operating conditions specific to
During the analysis, unless otherwise specified, use only
the pertinent determination.
reagents of recognized analytical grade and freshly distilled
products.
These short-Version Standards will either refer to the present
International Standard for gas chromatographic analyses on
capillary columns or to ISO 7359 for analyses on packed
4.1 Carrier gas: hydrogen*), helium or nitrogen, according
columns.
to the type of detector used. If detectors are used which require
carrier gases other than those mentioned, the carrier gas shall
be specif ied .
1 Scope and field of application
4.1.1 Auxiliary gases: any gases suitable for the detector
used. For a flame ionization detector air and hydrogen of high
This International Standard specifies a general method for the
pu rity .
analysis of essential oils by gas chromatography on capillary
columns for the purpose of determining the content of a
specific constituent and/or searching for a characteristic 4.2 Product for checking the Chemical inertness of the
prof ile.
column: linalyl acetate, of purity at least 98 %.
4.3 Products for checking the efficiency of the
column.3)
2 References
4.3.1 Linalol, of purity at least 99 % determined by
ISO 356, Essential oils - Prepara tion 0 f test Sample.
chromatography.
Analysis by gas chromatography on
ISO 7359, Essential oils -
packed columns - General method.
4.3.2 Methane, of purity at least 99 % determined by
chromatography.
4.4 Reference substance, corresponding to the con-
3 Principle
stituent to be determined or detected. The reference substance
will be indicated in each relevant International Standard.
Analysis by gas chromatography under specified conditions of
a small quantityl) of essential oil on a column of small diameter
4.5 lnternal Standard.
but great length, the inside wall of the column having been
previously coated either directly with a specified stationary
The internal Standard will be specified in each relevant Inter-
Phase or with an impregnated support (column coated in-
national Standard; it shall elute as near as possible to the con-
ternally with impregnated support).
1) Take care to ensure that the injected test Portion does not saturate the column.
2) Stritt observance of safety regulations is essential when using this gas.
3) Other products may be used to check the efficiency of the column; they will be specified in each relevant International Standard.

ISO 76094985 (EI
stituent to be determined and should not superimpose on the 7 Operating conditions
peaks of a ny of the constituents of th e essential Oil.
7.1 Temperatures
4.6 Normal alkanes, of purity at least 95 % determined by
The temperatures of the oven, the injecti on System and the
chromatography. The range of normal alkanes to be used in a
specific International Standard depends on the retention in- detector will be specified in each relevant International S #tan-
dard.
dexes of the constituents involved under the test conditions.
NOTE - Normal alkanes are used only when it is required to determine
7.2 Carrier gas flow rate
the retention indexes.
Regulate the flow rate so as to obtain the necessary efficiency
4.7 Test mixture (see 8.2).
Prepare a mixture containing more or less equal proportions of:
7.3 Auxiliary gases flow rate
- limonene,
Refer to the manufacturer’s instructions to obtain the Optimum
-
acetophenone,
response from the detector.
- linalol,
- linalyl acetate,
8 Column Performance
-
naphthalene,
- 8.1 Chemical inertness test
cinnamic alcohol.
Inject a quantity of linalyl acetate under the test conditions
All these reagents shall be of purity at least 95 % determined by
(sec 7.1).
chromatography.
One peak only shall be obtained (within the defined limit of
used; they will be in each
NOTE - Other products may be
relevant International Standard. purity).
8.2 Column efficiency
5 Apparatus
Determine the column efficiency from the linalol peak at an
isothermal temperature of 130 OC. Determine the number of ef-
fective plates N, which should be at least 25 000, by either of
5.1 Chromatograph, equipped with a special injector for
the following formulae:
capillary columns, permitting the injection of quantities of the
Order of 10W6g, with a suitable detector and a temperature pro-
Formula No. 7: (see figure 1)
grammer. The injection and detection Systems shall be fitted
with devices for independent control of their respective
temperatures.
5.2 Column, made of an inert material (for example glass or
Formula No. 2:
stainless steel, silica or fused silica) of internal diameter be-
tween 0,2 and 0,5 mm and length between 15 and 100 m.
The nature of the stationary Phase will be specified in each rel-
evant International Standard. At present, the most frequently
used stationary phases are methyl- or phenylpolysiloxanes and
polyethyleneglycols the terminal alcohol groups of which may
d: is the reduced retention distance, expressed in length
be free or esterified.
units (retention distance of the linalol peak minus the reten-
tion distance of the air peak or the methane peak at 130 OC,
comparable to the air peak);
53 Recorder and electronie integ rator, the performances
0; wh ich shall be compatible wi th the rest of the apparatus.
cc) is the distance, expressed in the same length units as
the retention distance, between the two Points of intersec-
tion of the base line with the two tangents at the Points of
inflection of the linalol peak;
Preparation of test Sample
b is the width, in millimetres, of the peak of specif ied
See ISO 356.
compound (linalol) at half of the peak height.
If the test Sample to be injected has to undergo special prep-
of
aration, this will be indicated in the relevant International The Chart Speed the recorder shall be such that CO is at least
10 mm, in Order to obtain adequate precision.
Standard.
ISO 7609-1985 (El
-
I
I
t
w= 40
Figure 1
The Chart Speed of the recorder shall be such that b is at least
5 mm, in Order to obtain adequate precision.
8.3 Resolution and Separation
In Order to determine resolution and/or Separation, inject a
suitable quantity of test mixture (4.7) under the conditions of
test.
8.3.1 Determination of resolution (see figure 2)
Calculate the resolution factor, R, of two neighbouring peaks I
Figure 2
and II, by means of the formula
If the two peaks are not completely resolved, the tangents to
d
- dr(l)
the Points of inflection of the two peaks meet at Point C. For
R = 2 rf”)
the resolution to be total, the distance between the peaks shall
ql) + qll)
be equal to
where
= 60
dr(lI) -
dr(l)
d r(r) is the retention distance of peak 1;
from which R = 1,5 (see figure 3).
dr(ll> is the retention distance of peak II;
w(~) is the width of the base of peak 1;
~~~~~ is the width of the base of peak II;
calculate R by means of the formula
If ql) = qll)f
dr(ll) - dr(O dr( II) - dr(l)
=
R=
ct) 40
where a is the Standard deviation (sec figure 1).
If the distance between the two peaks, drclll -drcl> = 4 B, the
Figure 3
resolution factor R = 1 (sec figure 2).

-
ISO 76094985 (El
b) in the case of polyethylene glycol (Mr = 20 000)
8.3.2 Determination of Separation (see figure 4)
columns, the peaks of linalol and linalyl acetate shall have a
Separation of at least 95 % (see 8.3.2).
Draw a straight line connecting the tops of the peaks con-
cerned. From the base line, draw a perpendicular through the
minimum between the two peaks. Measure the distance, h, If another packing is specified in the relevant International
Standard, the requi;ements will be specified therein.
along this perpendicular, between the base line and the Point of
intersection with the straight line connecting the tops of the
peaks concerned.
8.3.3.2 Inject a suitable quantity of the test mixture (4.7) and
calculate the retention indexes (sec clause 9) of the con-
Measure also the distance, v, along the perpendicular from the
stituents of the test mixture.
baseline to the minimum between the two peaks.
In the case of dimethylpolysiloxane columns, use alkanes CIO
Calculate the Separation, p, expressed as a percentage, by
to C,&
means of the formula
In the case of polyethylene glycol (M, = 20 000) columns, use
100 (h - v)
alkanes CI1 to &.
P=
h
.
The retention indexes so calculated indicate the polarity of the
column in comparison to the various structural characteristics
8.3.3 Checking the Separation at the programmed
of the constituents analysed.
temperature
The results obtained on different columns with the same
Use the following conditions :
nominal packing are comparable if the retention indexes of the
con
...

Norme internationale
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION@MEXAYHAPOJJHAR OPI-AHM3AL&lR l-l0 CTAHJJAPTM3ALWl~ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Huiles essentielles - Analyse par chromatographie en
phase gazeuse sur colonne capillaire - Méthode générale
Essen tial oils - Analysis b y gas chromatography on capillary columns - General method
Première édition - 1985-12-01
CDU 665.5: 543.544 Réf. no : ISO 76094985 (F)
Descripteurs : huile essentielle, analyse chimique, méthode chromatographique, chromatographie en phase gazeuse.
v> Prix basé sur 7 pages
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comite membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requiérent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 7609 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 54,
Huiles essen tîelles.
L’attention des utilisateurs est attirée sur le fait que toutes les Normes internationales
sont de temps en temps soumises à révision et que toute référence faite à une autre
Norme internationale dans le présent document implique qu’il s’agit, sauf indication
contraire, de la derniére édition.
0 Organisation internationale de normalisation, 1985
Imprimé en Suisse
NORME INTERNATIONALE ISO 76094985 (FI
Huiles essentielles - Analyse par chromatographie en
phase gazeuse sur colonne capillaire - Méthode générale
0 Introduction Localisation éventuelle des différents composés par mesure de
leurs indices de rétention.
La description des méthodes d’analyse par chromatographie
étant longue, il a été estimé utile d’établir, d’une part, des Détermination quantitative des composés spécifiques par
mesure de l’aire de leurs pics.
normes générales donnant en détail tous les paramétres répéti-
tifs : appareillage, produits, méthodes, formules de calcul, etc.,
et, d’autre part, des normes constituant des fiches d’analyse
abrégées relatives au dosage des composés dans les huiles
4 Réactifs et produits
essentielles, et ne reprenant que les conditions opératoires spé-
cifiques au dosage concerné.
Au cours de l’analyse, sauf indications différentes, utiliser uni-
quement des réactifs de qualité analytique reconnue et des pro-
Ces fiches se référeront, selon le cas, soit à la présente Norme duits récemment distillés.
internationale pour les analyses effectuées par chromatogra-
phie en phase gazeuse sur colonne capillaire, soit à I’ISO 7359
4.1 Gaz vecteur: hydrogènez), hélium ou azote, selon le
pour les analyses effectuées sur colonne remplie.
type de détecteur que l’on utilise. Lorsqu’on utilise des détec-
teurs exigeant l’emploi de gaz vecteurs autres que ceux indi-
qués ci-dessus, le gaz vecteur à utiliser devra être indiqué.
1 Objet et domaine d’application
4.1.1 Gaz auxiliaires: tous gaz utiles selon le détecteur uti-
La présente Norme internationale spécifie une méthode géné-
lisé. Pour un détecteur à ionisation de flamme, air et hydrogène
rale d’analyse des huiles essentielles par chromatographie en
de haute pureté.
phase gazeuse sur colonne capillaire, dans le but de doser un
composé spécifique et/ou de rechercher un profil caractéristi-
4.2 Produit pour le contrôle de l’inertie chimique de la
que.
colonne: acétate de linalyle, de pureté minimale 98 %.
4.3 Produits pour le contrôle de l’efficacité de la
2 Références
colonne.3)
I SO 356, Huiles essentielles - Préparation de l’échantillon pour
essai.
4.3.1 Linalol, de pureté minimale 99 % déterminée par chro-
matographie.
ISO 7359, Huiles essentielles - Analyse par chromatographie
en phase gazeuse sur colonne remplie - Méthode générale.
4.3.2 Méthane, de pureté minimale 99 % déterminée par
chromatographie.
3 Principe
4.4 Substance de référence, correspondant au composé à
doser ou à localiser. Elle sera indiquée dans chaque Norme
Analyse par chromatographie en phase gazeuse, dans des con-
internationale particulière.
ditions spécifiées, d’une petite quantitél) d’huile essentielle sur
une colonne de faible diamètre et de longueur importante, la
4.5 Étalon interne.
paroi intérieure de cette colonne étant préalablement enduite,
soit directement d’une phase stationnaire déterminée, soit d’un
support imprégné (colonne enduite intérieurement d’un sup- L’étalon interne sera précisé dans chaque Norme internationale
particulière, et devra éluer aussi près que possible du composé
port imprégné).
1) Prendre soin que la prise d’essai injectée ne risque pas de saturer la colonne.
2) Se conformer strictement aux consignes de sécurité en cas d’utilisation de ce gaz.
3) D’autres produits peuvent être utilisés pour déterminer l’efficacité de la colonne; ils seront précisésdans chaque Norme internationale particulière.
ISO 76094985 (FI
7 Conditions opératoires
à doser et ne se superposer à aucun des pics correspondant aux
composés de I’huile essentielle.
7.1 Températures
4.6 Alcanes normaux, de pureté minimale 95 % détermi-
Les températures du fo ur, de I ‘injecteur et du détecteur seront
née par chromatographie. La gamme des alcanes normaux à
précisées dans chaque Norme internationale particulière.
utiliser dans une certaine Norme internationale dépend de
l’indice de rétention des composés concernés dans les condi-
tions de l’essai.
7.2 Débit du gaz vecteur
uniquement si l’on désire
NOTE - Les alcanes normaux sont Régler le débit de manière à obtenir l’efficacité nécessaire
déterminer les indices de rétention.
(voir 8.2).
4.7 Mélange d’essai.
7.3 Débit des gaz auxiliaires
Préparer un mélange contenant des proportions à peu près
Se référer aux instructions du constructeur de l’appareil, de
égales de
maniére à respecter les conditions optimales de réponse du
détecteur.
- limonéne,
-
acétophénone,
8 Performances de la colonne
- linalol,
-
acétate de linalyle,
8.1 Test d’inertie chimique
-
naphtaléne,
Injecter une quantité d’acétate de linalyle dans les conditions
-
alcool cinnamique.
d’analyse (voir 7.1).
Tous ces réactifs doivent être de pureté minimale 95 % détermi-
On doit obtenir un seul pic (dans la limite de pureté définie).
née par chromatographie.
8.2 Efficacité de la colonne
; ils
NOTE - D’autres produits peuvent être utilisés seront précisés
iére.
dans chaque Norme internationale particu
Déterminer l’efficacité de la colonne sur le pic du linalol, à tem-
pérature isotherme de 130 OC. Déterminer le nombre de pla-
teaux effectifs, N, qui doit être au moins égal a 25 000, à l’aide
5 Appareillage
de l’une ou l’autre des formules suivantes:
5.1 Chromatographe, équipé d’un injecteur spécial pour
Formule no 7 (voir figure 1)
colonnes capillaires, permettant l’injection de quantités de
l’ordre de 10w6 g, d’un détecteur approprié et d’un programma-
d’ 2
N=16 r
teur de température. Les systèmes d’injection et de détection
cr)
doivent être munis de dispositifs permettant le réglage indépen-
dant de leurs températures respectives.
Formule no 2
5.2 Colonne, en matériau inerte (par exemple verre, acier
inoxydable, silice ou silice fondue), d’un diamètre intérieur
compris entre 0,2 et 0,5 mm, et d’une longueur de 15 à 100 m.
où
La nature de la phase stationnaire sera précisée dans chaque
Norme internationale particuliére. Actuellement, les phases sta-
d: est la distance de rétention réduite, en unités de lon-
tionnaires les plus couramment utilisées sont: les polysiloxanes
gueur (distance de rétention du p.ic du linalol moins la dis-
méthylés ou phénylés ou polyéthylénes glycols dont les fonc-
tance de rétention du pic de l’air ou du pic du méthane à
tions alcool terminales peuvent être libres ou estérifiées.
130 OC, assimilable au pic de l’air);
r électronique, dont les per-
53 Enregistreur et intégrateu ct) est la distance, en mêmes unités de longueur que la dis-
forma nces sont compatibles avec l’ensemble de 1’ ‘appareillage.
tance de rétention, comprise entre les deux points d’inter-
section de la ligne de base avec les deux tangentes aux
points d’inflexion du pic du linalol;
6 Préparation de l’échantillon pour essai
b est la largeur, en millimètres, du pic du composé spécifié
(linalol) à mi-hauteur du pic.
Voir ISO 356.
La vitesse de déroulement du papier de l’enregistreur doit être
Si l’échantillon pour essai à injecter doit subir une préparation
telle que cc) soit au moins égale à 10 mm, de facon à avoir une
spéciale, celle-ci sera indiquée dans la Norme internationale
précision suffisante.
particulière.
ISO 76094985 (F)
Figure 1
La vitesse de déroulement du papier de l’enregistreur doit être
telle que b soit au moins égale à 5 mm, de facon à avoir une
précision suffisante.
8.3 Résolution et shparation
Pour dbterminer la résolution et/ou la séparation, injecter une
quantité du mélange d’essai (4.7) dans les conditions de l’essai.
8.3.1 Dbtermination de la rhsolution
Calculer le facteur de résolution, R, de deux pics avoisinants I
Figure 2
et II, à l’aide de la formule
Si les deux pics ne sont pas complétement séparés, les tangen-
dr(ll) - d,(l)
tes aux points d’inflexion des deux pics se croisent au point C.
=
R 2
Pour séparer complétement les deux pics la distance entre les
ql) + WI)
deux pics doit être égale à
où
d
r(ll) --4(l) = 6 0
d,(l) est la distance de rétention du pic 1;
d’où R
= 1,5 (voir figure 3).
est la distance de rétention du pic II;
d,(ll,
OI(~) est la largeur de la base du pic 1;
~(11) est la largeur de la base du pic II;
Si o(l) = o(~I), calculer R à l’aide de la formule
4(lI) - 411) - 4(l)
4l) =
R=
cc) 40
où 0 est l’écart-type (voir figure 1).
Si la distance entre les deux pics, drlllj -drllj, est égale à 4 O,
le facteur de rhsolution R = 1. Figure 3
ISO 76094985 (FI
b) sur les colonnes de polyéthylène glycol UV, = 20 OOO),
8.3.2 Détermination de la séparation (voir figure 4)
les pics du linalol et de l’acétate de linalyle doivent etre sepa-
Tracer une droite passant par les sommets des pics concernés. rés à 95 % au moins (voir 8.3.2).
A partir de la ligne de base, tracer une perpendiculaire passant
Pour les autres remplissages éventuellement indiqués dans
par le minimum entre les deux pics. Mesurer la distance, h, sur
la méthode d’analyse, les exigences seront précisées dans
cette perpendiculaire, entre la ligne de base et son point
d’intersection avec la droite passant par les sommets des pics celle-ci.
concernés.
8.3.3.2 Injecter une quantité appropriée du mélange d’essai
Mesurer également la distance, v, sur la perpendiculaire entre la
(4.7) et calculer les indices de rétention (voir chapitre 9) des
ligne de base et le point minimal entre les deux pics.
constituants du mélange d’essai.
Calculer la séparation, p, exprimée en pourcentage, à l’aide de
Sur les colonnes de diméthylpolysiloxane, utiliser les alcanes
la formule
100 (h - v)
P=
Sur les colonnes de polyéthylène glycol (M, = 20 00
...

Norme internationale
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Huiles essentielles - Analyse par chromatographie en
phase gazeuse sur colonne capillaire - Méthode générale
Essen tial oils - Analysis b y gas chromatography on capillary columns - General method
Première édition - 1985-12-01
CDU 665.5: 543.544 Réf. no : ISO 76094985 (F)
Descripteurs : huile essentielle, analyse chimique, méthode chromatographique, chromatographie en phase gazeuse.
v> Prix basé sur 7 pages
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comite membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requiérent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 7609 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 54,
Huiles essen tîelles.
L’attention des utilisateurs est attirée sur le fait que toutes les Normes internationales
sont de temps en temps soumises à révision et que toute référence faite à une autre
Norme internationale dans le présent document implique qu’il s’agit, sauf indication
contraire, de la derniére édition.
0 Organisation internationale de normalisation, 1985
Imprimé en Suisse
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Huiles essentielles - Analyse par chromatographie en
phase gazeuse sur colonne capillaire - Méthode générale
0 Introduction Localisation éventuelle des différents composés par mesure de
leurs indices de rétention.
La description des méthodes d’analyse par chromatographie
étant longue, il a été estimé utile d’établir, d’une part, des Détermination quantitative des composés spécifiques par
mesure de l’aire de leurs pics.
normes générales donnant en détail tous les paramétres répéti-
tifs : appareillage, produits, méthodes, formules de calcul, etc.,
et, d’autre part, des normes constituant des fiches d’analyse
abrégées relatives au dosage des composés dans les huiles
4 Réactifs et produits
essentielles, et ne reprenant que les conditions opératoires spé-
cifiques au dosage concerné.
Au cours de l’analyse, sauf indications différentes, utiliser uni-
quement des réactifs de qualité analytique reconnue et des pro-
Ces fiches se référeront, selon le cas, soit à la présente Norme duits récemment distillés.
internationale pour les analyses effectuées par chromatogra-
phie en phase gazeuse sur colonne capillaire, soit à I’ISO 7359
4.1 Gaz vecteur: hydrogènez), hélium ou azote, selon le
pour les analyses effectuées sur colonne remplie.
type de détecteur que l’on utilise. Lorsqu’on utilise des détec-
teurs exigeant l’emploi de gaz vecteurs autres que ceux indi-
qués ci-dessus, le gaz vecteur à utiliser devra être indiqué.
1 Objet et domaine d’application
4.1.1 Gaz auxiliaires: tous gaz utiles selon le détecteur uti-
La présente Norme internationale spécifie une méthode géné-
lisé. Pour un détecteur à ionisation de flamme, air et hydrogène
rale d’analyse des huiles essentielles par chromatographie en
de haute pureté.
phase gazeuse sur colonne capillaire, dans le but de doser un
composé spécifique et/ou de rechercher un profil caractéristi-
4.2 Produit pour le contrôle de l’inertie chimique de la
que.
colonne: acétate de linalyle, de pureté minimale 98 %.
4.3 Produits pour le contrôle de l’efficacité de la
2 Références
colonne.3)
I SO 356, Huiles essentielles - Préparation de l’échantillon pour
essai.
4.3.1 Linalol, de pureté minimale 99 % déterminée par chro-
matographie.
ISO 7359, Huiles essentielles - Analyse par chromatographie
en phase gazeuse sur colonne remplie - Méthode générale.
4.3.2 Méthane, de pureté minimale 99 % déterminée par
chromatographie.
3 Principe
4.4 Substance de référence, correspondant au composé à
doser ou à localiser. Elle sera indiquée dans chaque Norme
Analyse par chromatographie en phase gazeuse, dans des con-
internationale particulière.
ditions spécifiées, d’une petite quantitél) d’huile essentielle sur
une colonne de faible diamètre et de longueur importante, la
4.5 Étalon interne.
paroi intérieure de cette colonne étant préalablement enduite,
soit directement d’une phase stationnaire déterminée, soit d’un
support imprégné (colonne enduite intérieurement d’un sup- L’étalon interne sera précisé dans chaque Norme internationale
particulière, et devra éluer aussi près que possible du composé
port imprégné).
1) Prendre soin que la prise d’essai injectée ne risque pas de saturer la colonne.
2) Se conformer strictement aux consignes de sécurité en cas d’utilisation de ce gaz.
3) D’autres produits peuvent être utilisés pour déterminer l’efficacité de la colonne; ils seront précisésdans chaque Norme internationale particulière.
ISO 76094985 (FI
7 Conditions opératoires
à doser et ne se superposer à aucun des pics correspondant aux
composés de I’huile essentielle.
7.1 Températures
4.6 Alcanes normaux, de pureté minimale 95 % détermi-
Les températures du fo ur, de I ‘injecteur et du détecteur seront
née par chromatographie. La gamme des alcanes normaux à
précisées dans chaque Norme internationale particulière.
utiliser dans une certaine Norme internationale dépend de
l’indice de rétention des composés concernés dans les condi-
tions de l’essai.
7.2 Débit du gaz vecteur
uniquement si l’on désire
NOTE - Les alcanes normaux sont Régler le débit de manière à obtenir l’efficacité nécessaire
déterminer les indices de rétention.
(voir 8.2).
4.7 Mélange d’essai.
7.3 Débit des gaz auxiliaires
Préparer un mélange contenant des proportions à peu près
Se référer aux instructions du constructeur de l’appareil, de
égales de
maniére à respecter les conditions optimales de réponse du
détecteur.
- limonéne,
-
acétophénone,
8 Performances de la colonne
- linalol,
-
acétate de linalyle,
8.1 Test d’inertie chimique
-
naphtaléne,
Injecter une quantité d’acétate de linalyle dans les conditions
-
alcool cinnamique.
d’analyse (voir 7.1).
Tous ces réactifs doivent être de pureté minimale 95 % détermi-
On doit obtenir un seul pic (dans la limite de pureté définie).
née par chromatographie.
8.2 Efficacité de la colonne
; ils
NOTE - D’autres produits peuvent être utilisés seront précisés
iére.
dans chaque Norme internationale particu
Déterminer l’efficacité de la colonne sur le pic du linalol, à tem-
pérature isotherme de 130 OC. Déterminer le nombre de pla-
teaux effectifs, N, qui doit être au moins égal a 25 000, à l’aide
5 Appareillage
de l’une ou l’autre des formules suivantes:
5.1 Chromatographe, équipé d’un injecteur spécial pour
Formule no 7 (voir figure 1)
colonnes capillaires, permettant l’injection de quantités de
l’ordre de 10w6 g, d’un détecteur approprié et d’un programma-
d’ 2
N=16 r
teur de température. Les systèmes d’injection et de détection
cr)
doivent être munis de dispositifs permettant le réglage indépen-
dant de leurs températures respectives.
Formule no 2
5.2 Colonne, en matériau inerte (par exemple verre, acier
inoxydable, silice ou silice fondue), d’un diamètre intérieur
compris entre 0,2 et 0,5 mm, et d’une longueur de 15 à 100 m.
où
La nature de la phase stationnaire sera précisée dans chaque
Norme internationale particuliére. Actuellement, les phases sta-
d: est la distance de rétention réduite, en unités de lon-
tionnaires les plus couramment utilisées sont: les polysiloxanes
gueur (distance de rétention du p.ic du linalol moins la dis-
méthylés ou phénylés ou polyéthylénes glycols dont les fonc-
tance de rétention du pic de l’air ou du pic du méthane à
tions alcool terminales peuvent être libres ou estérifiées.
130 OC, assimilable au pic de l’air);
r électronique, dont les per-
53 Enregistreur et intégrateu ct) est la distance, en mêmes unités de longueur que la dis-
forma nces sont compatibles avec l’ensemble de 1’ ‘appareillage.
tance de rétention, comprise entre les deux points d’inter-
section de la ligne de base avec les deux tangentes aux
points d’inflexion du pic du linalol;
6 Préparation de l’échantillon pour essai
b est la largeur, en millimètres, du pic du composé spécifié
(linalol) à mi-hauteur du pic.
Voir ISO 356.
La vitesse de déroulement du papier de l’enregistreur doit être
Si l’échantillon pour essai à injecter doit subir une préparation
telle que cc) soit au moins égale à 10 mm, de facon à avoir une
spéciale, celle-ci sera indiquée dans la Norme internationale
précision suffisante.
particulière.
ISO 76094985 (F)
Figure 1
La vitesse de déroulement du papier de l’enregistreur doit être
telle que b soit au moins égale à 5 mm, de facon à avoir une
précision suffisante.
8.3 Résolution et shparation
Pour dbterminer la résolution et/ou la séparation, injecter une
quantité du mélange d’essai (4.7) dans les conditions de l’essai.
8.3.1 Dbtermination de la rhsolution
Calculer le facteur de résolution, R, de deux pics avoisinants I
Figure 2
et II, à l’aide de la formule
Si les deux pics ne sont pas complétement séparés, les tangen-
dr(ll) - d,(l)
tes aux points d’inflexion des deux pics se croisent au point C.
=
R 2
Pour séparer complétement les deux pics la distance entre les
ql) + WI)
deux pics doit être égale à
où
d
r(ll) --4(l) = 6 0
d,(l) est la distance de rétention du pic 1;
d’où R
= 1,5 (voir figure 3).
est la distance de rétention du pic II;
d,(ll,
OI(~) est la largeur de la base du pic 1;
~(11) est la largeur de la base du pic II;
Si o(l) = o(~I), calculer R à l’aide de la formule
4(lI) - 411) - 4(l)
4l) =
R=
cc) 40
où 0 est l’écart-type (voir figure 1).
Si la distance entre les deux pics, drlllj -drllj, est égale à 4 O,
le facteur de rhsolution R = 1. Figure 3
ISO 76094985 (FI
b) sur les colonnes de polyéthylène glycol UV, = 20 OOO),
8.3.2 Détermination de la séparation (voir figure 4)
les pics du linalol et de l’acétate de linalyle doivent etre sepa-
Tracer une droite passant par les sommets des pics concernés. rés à 95 % au moins (voir 8.3.2).
A partir de la ligne de base, tracer une perpendiculaire passant
Pour les autres remplissages éventuellement indiqués dans
par le minimum entre les deux pics. Mesurer la distance, h, sur
la méthode d’analyse, les exigences seront précisées dans
cette perpendiculaire, entre la ligne de base et son point
d’intersection avec la droite passant par les sommets des pics celle-ci.
concernés.
8.3.3.2 Injecter une quantité appropriée du mélange d’essai
Mesurer également la distance, v, sur la perpendiculaire entre la
(4.7) et calculer les indices de rétention (voir chapitre 9) des
ligne de base et le point minimal entre les deux pics.
constituants du mélange d’essai.
Calculer la séparation, p, exprimée en pourcentage, à l’aide de
Sur les colonnes de diméthylpolysiloxane, utiliser les alcanes
la formule
100 (h - v)
P=
Sur les colonnes de polyéthylène glycol (M, = 20 00
...