ISO 15152:2003
(Main)Tobacco — Determination of the content of total alkaloids as nicotine — Continuous-flow analysis method
Tobacco — Determination of the content of total alkaloids as nicotine — Continuous-flow analysis method
ISO 15152:2003 specifies a method for the determination of the content of total alkaloids as nicotine in tobacco by continuous-flow analysis. This method is applicable to manufactured and unmanufactured tobacco.
Tabac — Détermination de la teneur en alcaloïdes totaux exprimés en nicotine — Méthode par analyse en flux continu
L'ISO 15152:2003 spécifie une méthode pour la détermination de la teneur en alcaloïdes totaux exprimés en nicotine dans le tabac, par une analyse en flux continu. Cette méthode est applicable aux tabacs bruts et aux tabacs manufacturés.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 15152
First edition
2003-04-15
Tobacco — Determination of the content
of total alkaloids as nicotine —
Continuous-flow analysis method
Tabac — Détermination de la teneur en alcaloïdes totaux exprimés en
nicotine — Méthode par analyse en flux continu
Reference number
ISO 15152:2003(E)
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ISO 2003
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ISO 15152:2003(E)
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Published in Switzerland
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ISO 15152:2003(E)
Contents Page
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Principle . 1
4 Safety precautions . 1
5 Reagents . 4
6 Apparatus . 5
7 Procedure . 5
8 Calculation . 6
9 Repeatability and reproducibility . 6
10 Test report . 7
Annex A (informative) Information about alternative analytical methods . 8
Annex B (informative) Example of a continuous-flow analyser . 9
Annex C (informative) Preparation of a microbore five-turn mixing coil . 10
Bibliography . 11
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ISO 15152:2003(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International
Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 15152 was prepared by Technical Committee ISO/TC 126, Tobacco and tobacco products, Subcommittee
SC 2, Leaf tobacco.
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ISO 15152:2003(E)
Introduction
1)
A CORESTA Task Force studied the various widely used procedures for the determination of total alkaloids in
tobacco in order to adopt one of them as the CORESTA Recommended Method. Two procedures were adopted
as ISO 2881 and this International Standard. Studies carried out by the CORESTA Task Force between 1989
and 1993 have shown that the two methods may not produce identical results for some dark tobaccos or those
containing significant levels of alkaloids other than nicotine. The studies have indicated that these differences
may be due to the fact that the recoveries and detection sensitivities of the methods for alkaloids other than
nicotine are different.
1) CORESTA: Cooperation Centre for Scientific Research Relative to Tobacco.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 15152:2003(E)
Tobacco — Determination of the content of total alkaloids as
nicotine — Continuous-flow analysis method
1Scope
This International Standard specifies a method for the determination of the content of total alkaloids as nicotine
in tobacco by continuous-flow analysis.
This method is applicable to manufactured and unmanufactured tobacco.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced document
(including any amendments) applies.
ISO 13276, Tobacco and tobacco products — Determination of nicotine purity — Gravimetric method using
tungstosilicic acid
3 Principle
An aqueous extract (see below) of the tobacco is prepared and the total alkaloids content (as nicotine) of the
extract is determined by reaction with sulfanilic acid and cyanogen chloride. Cyanogen chloride is generated in
situ by the reaction of potassium cyanide and chloramine T (see Annex A). The developed colour is measured
at .460 nm
Collaborative studies have shown that this method gives equivalent results for water and 5% acetic acid
extracts. It is recommended that 5% acetic acid extracts should be used if total alkaloids (as nicotine) and
reducing substances (see ISO 15153) or reducing carbohydrate analyses (see ISO 15154) are to be carried out
simultaneously.
4 Safety precautions
WARNING — Potassium cyanide is poisonous and an irritant, thus all safety precautions shall be
observed when handling this material.
Solutions shall be prepared by a designated responsible person. Gloves and safety glasses shall always be
used when making up solutions. Bottles of the made-up reagent shall always be carried in a suitable safety
carrier. To prevent the escape of vapour into the laboratory, reagent pick-up tubes shall pass through a soda-
lime trap into the reagent bottle (see Figure 1).
The cyanide neutralizing solutions A and B (5.5 and 5.6) shall be pumped as shown in the flow diagram (see
Figure B.1) and mixed in a 2 litre Büchner flask with magnetic stirring (see Figure 2). All waste solutions
containing cyanogen chloride shall be run into this flask where conversion to the “Prussian Blue” complex
occurs. The contents of the Büchner flask shall be allowed to overflow into a storage flask, the contents of which
shall be stored overnight in a fume cupboard and then disposed of as waste.
Suitable cyanide poisoning treatment kits are available from laboratory equipment suppliers and shall be
located in the vicinity of the analyser to be used by a competent person.
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Key
1 soda lime
2 cotton wool
3 reagent pick-up tube
4 storage flask
5 reagent
Figure 1 — Soda-lime trap
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2 ISO 2003 – All rights reserved
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ISO 15152:2003(E)
Key
1 soda lime traps
2 PVC tube, 2cm diameter
3Büchner flask
4 Winchester bottle
5 magnetic stirrer
NOTE The apparatus consists of a 2 litre Büchner flask on a magnetic stirrer, with a 2cm diameter PVC tube inserted
into it, through a rubber bung, such that the tube is just above the magnetic follower in the flask. Four holes are drilled in
the tube and nipples attached by gluing into position. The pullback line and the debubble line containing the cyanogen
chloride are attached to the nipples, together with the two neutralizing agents. This arrangement ensures that the
cyanogen chloride has to pass down the tube and through the bulk of the flask before overflowing to waste, thus ensuring
complete neutralization.
Figure 2 — On-line apparatus for destruction of cyanogen chloride
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ISO 15152:2003(E)
5Reagents
All reagents shall be used according to good laboratory practice and existing national regulations. Use distilled
water or water of at least equivalent purity.
5.1 Polyoxyethylene lauryl ether (Brij 35 solution).
Add 1 litre of water to 250 g of Brij 35. Warm and stir until dissolved.
5.2 Buffer solution A
Dissolve 2,35 g of sodium chloride (NaCl) and 7,60 g of sodium tetraborate (Na B O ·10H O) in water. Transfer
2 4 7 2
to a 1 litre volumetric flask, add 1ml of Brij 35 solution (5.1) and dilute to volume with water. Filter the so
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 15152
Première édition
2003-04-15
Tabac — Détermination de la teneur en
alcaloïdes totaux exprimés en nicotine —
Méthode par analyse en flux continu
Tobacco — Determination of the content of total alkaloids as nicotine —
Continuous-flow analysis method
Numéro de référence
ISO 15152:2003(F)
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ISO 2003
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ISO 15152:2003(F)
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© ISO 2003
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Publié en Suisse
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ii ISO 2003 – Tous droits réservés
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ISO 15152:2003(F)
Sommaire Page
1 Domaine d'application . 1
2Références normatives . 1
3 Principe . 1
4 Mesures de sécurité . 1
5Réactifs . 4
6 Appareillage . 5
7 Mode opératoire . 6
8 Calculs . 6
9Répétabilité et reproductibilité . 7
10 Rapport d'essai . 7
Annexe A (informative) Informations concernant des méthodes analytiques alternatives . 8
Annexe B (informative) Exemple d'analyseur à flux continu . 9
Annexe C (informative) Préparation d'une bobine de mélange à cinq spires
à faible diamètre intérieur . 10
Bibliographie . 11
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ISO 15152:2003(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la
Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de droits
de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir
identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 15152 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 126, Tabac et produits du tabac, sous-comité SC 2,
Tabacs en feuilles.
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iv ISO 2003 – Tous droits réservés
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ISO 15152:2003(F)
Introduction
1)
Un groupe de travail du CORESTA a étudié les différents modes opératoires utilisés pour la détermination des
alcaloïdes totaux dans le tabac afin d'en retenir un qui deviendra la méthode recommandée par le CORESTA.
Deux modes opératoires ont été adoptés: l'ISO 2881 et la présente Norme internationale. Des études menées
par le groupe de travail du CORESTA entre 1989 et 1993 ont montré que ces deux méthodes peuvent ne pas
donner les mêmes résultats pour certains tabacs bruns ou pour ceux contenant des niveaux significatifs
d'alcaloïdes autres que la nicotine. Ces études ont indiqué que ces différences pouvaient être dues au fait que
les taux de récupération et de sensibilité de détection de ces méthodes vis-à-vis des alcaloïdes autres que la
nicotine sont différents.
1) CORESTA: Centre de coopération pour les recherches scientifiques relatives au tabac.
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NORME INTERNATIONALE ISO 15152:2003(F)
Tabac — Détermination de la teneur en alcaloïdes totaux
exprimés en nicotine — Méthode par analyse en flux continu
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode pour la détermination de la teneur en alcaloïdes totaux
exprimés en nicotine dans le tabac, par analyse en flux continu.
La présente méthode est applicable aux tabacs bruts et aux tabacs manufacturés.
2Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 13276, Tabac et produits du tabac — Détermination de la pureté de la nicotine — Méthode gravimétrique à
l'acide tungstosilicique
3Principe
Un extrait aqueux (voir ci-dessous) de tabac est préparé et la teneur en alcaloïdes totaux (exprimés en nicotine)
contenue dans l'extrait est déterminée par réaction avec de l'acide sulfanilique et du chlorure de cyanogène. Le
chlorure de cyanogène est produit in situ par la réaction du cyanure de potassium avec la chloramine T (voir
l'Annexe A). La couleur produite est mesurée à .460 nm
Des essais interlaboratoires ont montré que cette méthode donne des résultats équivalents pour l'extraction à
l'eau et à l'acide acétique à 5%. Il est recommandé d'utiliser des extraits à l'acide acétique à 5% dans le cas
d'analyses simultanées des alcaloïdes totaux (exprimés en nicotine), des substances réductrices (voir
l'ISO 15153) ou des hydrates de carbone réducteurs (voir l'ISO 15154).
4 Mesures de sécurité
AVERTISSEMENT — Le cyanure de potassium est un réactif toxique et irritant, c'est pourquoi toutes les
précautions de sécurité doivent être observées lors de sa manipulation.
Les solutions doivent être préparées par une personne désignée responsable de cette opération. Il est
nécessaire de toujours porter des gants et des lunettes de protection lors de la préparation des solutions. Les
flacons de réactifs doivent toujours être transportés dans des dispositifs de sécurité appropriés. Afin d'éviter
toute émanation de vapeur dans le laboratoire, des tubes plongeurs doivent passer à travers un piège à soude
caustique et déboucher dans le flacon de réactif (voir la Figure 1).
Les solutions A et B de neutralisation du cyanure (5.5 et 5.6) doivent être pompées comme illustré sur le
schéma opérationnel (voir la Figure B.1) et mélangées dans une fiole de type Büchner de 2 litres à l'aide d'un
agitateur magnétique (voir la Figure2). Toutes les solutions de résidus qui contiennent du chlorure de
cyanogène doivent être dirigées dans cette fiole dans laquelle la transformation en complexe «bleu de Prusse»
a lieu. Le trop-plein du contenu de la fiole de type Büchner doit pouvoir se déverser dans une fiole de stockage
dont le contenu doit être stocké toute une nuit dans une hotte et mis au rebut.
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Des trousses de soins contre l'empoisonnement au cyanure sont disponibles auprès des fournisseurs de
matériel de laboratoire. Elles doivent se trouver à proximité de l'analyseur et être utilisées par une personne
compétente.
Légende
1 soude caustique
2 ouate
3 tube plongeur pour prélever le réactif
4 fiole de stockage
5réactif
Figure 1 — Piège à soude caustique
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2 ISO 2003 – Tous droits réservés
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ISO 15152:2003(F)
Légende
1pièges à soude caustique
2 tube en PVC de 2cm de diamètre
3 fiole de type Büchner
4 flacon Winchester
5 agitateur magnétique
NOTE L'équipement comprend une fiole de type Büchner de 2 litres posée sur un agitateur magnétique, dans laquelle a
été introduit un tube en PVC de 2cm de diamètre à travers un bouchon en caoutchouc afin que le tube se trouve juste
au-dessus du barreau magnétique contenu dans la fiole. Quatre trous sont percés dans le tube sur lesquels sont collés
des raccords. Sur ces raccords sont reliés la conduite de reflux et la conduite de dégazage qui contient le chlorure de
cyanogène ainsi que les deux neutralisants. Dans ce montage, le chlorure de cyanogène doit remplir tout le tube et le fond
de la fiole avant de se déverser dans le flacon de stockage des résidus, ce qui assure une neutralisation complète.
Figure 2 —Équipement de destruction du chlorure de cyanogène
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ISO 15152:2003(F)
5Réactifs
Tous les réactifs doivent être utilisés selon les bonnes pratiques de laboratoire et les réglementations
nationales en vigueur. Utiliser de l'eau distillée ou de pureté au moins équivalente.
5.1 Éther laurique de polyoxyéthylène (solution de Brij 35)
Ajouter 1 litre d'eau à 250 g de solution de Brij 35. Chauffer et agiter jusqu'à dissolution.
5.2 Solution tampon A
Dissoudre 2,35 g de chlorure de sodium (NaCl) et 7,60 g de tétraborate de sodium (Na B O ,10H O) dans de
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l'eau. Verser cette solution dans une fiole jaugée de 1 litre, ajouter 1ml de solution de Brij 35 (5.1) et compléter
2)
au volume avec de l'eau. Filtrer la solution à travers un papier-filtre Whatman n° 1 (ou l'équivalent) avant
utilisation.
5.3 Solution tampon B
Dissoudre 26 g d'orthophosphate de sodium anhydre
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Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.