ISO 15517:2003

Tobacco — Determination of nitrate content — Continuous-flow analysis method

ISO 15517:2003 specifies a method for the determination of the nitrate content in tobacco by continuous-flow analysis. This method is applicable to manufactured and unmanufactured tobacco.

Tabac — Détermination de la teneur en nitrates — Méthode par analyse en flux continu

L'ISO 15517:2003 spécifie une méthode pour la détermination de la teneur en nitrates dans le tabac, par analyse en flux continu. Cette méthode est applicable aux tabacs bruts et aux tabacs manufacturés.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 08-May-2003
• ICS: 65.160 - Tobacco, tobacco products and related equipment
• Technical Committee: ISO/TC 126/SC 2 - Leaf tobacco
• Drafting Committee: ISO/TC 126/SC 2 - Leaf tobacco
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 24-Sep-2020

Relations

• Amended By: ISO 15517:2003/Amd 1:2012 - Tobacco — Determination of nitrate content — Continuous-flow analysis method — Amendment 1
• Effective Date: 04-Sep-2021

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 15517
First edition
2003-04-15
Tobacco — Determination of nitrate
content — Continuous-flow analysis
method
Tabac — Détermination de la teneur en nitrates — Méthode par analyse
en flux continu

Reference number
ISO 15517:2003(E)
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ISO 2003

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ISO 15517:2003(E)
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Published in Switzerland
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ii ISO 2003 – All rights reserved

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ISO 15517:2003(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International
Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 15517 was prepared by Technical Committee ISO/TC 126, Tobacco and tobacco products, Subcommittee
SC 2, Leaf tobacco.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 15517:2003(E)
Tobacco — Determination of nitrate content — Continuous-flow
analysis method
1Scope
This International Standard specifies a method for the determination of the nitrate content in tobacco by
continuous-flow analysis.
This method is applicable to manufactured and unmanufactured tobacco.
2 Principle
An aqueous extract (see below) of the tobacco is prepared and the nitrate content of the extract is determined
by reduction of the nitrate ions to nitrite ions with hydrazinium sulfate in the presence of a copper catalyst,
followed by reaction with sulfanilamide to form the diazo compound. This is coupled with N-1-naphthyl-
ethylenediamine dihydrochloride to form a coloured complex, which is measured at 520 nm. If there is any nitrite
content, it will be detected and included in the nitrate content result.
Collaborative studies have shown that this method gives equivalent results for water and 5% acetic acid
extracts. It is recommended that acetic acid extracts should be used if nitrate and reducing substances (see
5%
ISO 15153) or reducing carbohydrate analyses (see ISO 15154) are to be carried out simultaneously.
3Reagents
All reagents shall be used according to good laboratory practice and existing national regulations. Use distilled
water or water of at least equivalent purity.
3.1 Polyoxyethylene lauryl ether (Brij 35 solution)
Add 1 litre of water to 250 g of Brij 35. Warm and stir until dissolved.
3.2 Sodium hydroxide solution (NaOH), p.a.
Dissolve 8,0 g of sodium hydroxide in distilled water. Add 1 ml of Brij 35 solution (3.1) and dilute to 1 litre.
3.3 Copper sulfate stock solution (CuSO ), p.a.
4
Dissolve 1,20 g of copper(II) sulfate pentahydrate in distilled water and dilute to 100 ml.
3.4 Hydrazinium sulfate/copper sulfate reagent
Dissolve the optimum amount of hydrazinium sulfate (N H SO , p.a.) in water. Add 1,5 ml of copper sulfate
2 6 4
stock solution (3.3) and dilute to 1 litre with water. Store in an amber glass bottle. Prepare a fresh solution every
month.
3.5 Sulfanilamide reagent (NH C H SO NH )
2 6 4 2 2
Add 25 ml of concentrated orthophosphoric acid (H PO , volume fraction 85 %, of grade low in nitrate) to
3 4
approximately 175 ml of water. Dissolve 2,5 g of sulfanilamide in the solution followed by 0,125 g of
N-1-naphthylethylenediamine dihydrochloride (C H NHCH CH NH ·2HCI).
10 7 2 2 2
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1)
Dilute to 250 ml with water and filter through a Whatman No. 40 (or equivalent) filter paper. Store in an amber
glass bottle. Prepare a fresh solution every 2 days.
3.6 Potassium nitrate (KNO ), p.a.
3
3.7 Standard nitrate solutions
3.7.1 Stock solution
Weigh, to the nearest 0,000 1 g, approximately 3,3 g of potassium nitrate (3.6). Dissolve in water and dilute to
1 litre in a volumetric flask. This solution contains approximately 2 mg/ml of nitrate. Store in a refrigerator.
Prepare a fresh solution every month.
3.7.2 Working standards
From the stock solution (3.7.1), produce a series of at least five calibration solutions whose concentrations
cover the range expected to be found in the samples (e.g. 10µg/ml to 200µg/ml of nitrate). Calculate the exact
concentration for each standard. Store in a refrigerator. Prepare fresh solutions every 2 weeks.
If 5% acetic acid (five times) is to be used to extract the nicotine from the test sample in 5.2, the working
standards (3.7.2) shall be made from the stock solution every 2 weeks using 5% acetic acid instead of water.
4 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following items.
4.1 Continuous flow analyser consisting of
— sampler,
— dialyser,
— heating bath,
— delay coils,
— colorimeter (or equivalent) with 520 nm filter(s), and
— recorder.
See Annex B for an example of a suitable layout.
5 Procedure
5.1 Preparation of samples for analysis
Prepare the tobacco samples for analysis by grinding (the sample should totally pass through a 1mm sieve)
and determine the moisture content. If the tobacco is too wet for grinding, it may be dried at a temperature not
◦
exceeding 40 C. Any contamination from nitrate and
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 15517
Première édition
2003-04-15
Tabac — Détermination de la teneur en
nitrates — Méthode par analyse en flux
continu
Tobacco — Determination of nitrate content — Continuous-flow analysis
method

Numéro de référence
ISO 15517:2003(F)
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ISO 2003

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ISO 15517:2003(F)
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Publié en Suisse
©
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ISO 15517:2003(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la
Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de droits
de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir
identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 15517 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 126, Tabac et produits du tabac, sous-comité SC 2,
Tabacs en feuilles.
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ISO 2003 – Tous droits réservés iii

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NORME INTERNATIONALE ISO 15517:2003(F)
Tabac — Détermination de la teneur en nitrates — Méthode par
analyse en flux continu
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode pour la détermination de la teneur en nitrates dans le
tabac, par analyse en flux continu.
La présente méthode est applicable aux tabacs bruts et aux tabacs manufacturés.
2Principe
Un extrait aqueux (voir ci-dessous) de tabac est préparé et la teneur en nitrates contenue dans l'extrait est
déterminée par réduction des nitrates en nitrites par du sulfate d'hydrazine en présence d'un catalyseur au
cuivre, suivie d'une réaction avec de la sulfanilamide pour former le composé diazoïque. Celui-ci est associé à
du N-napthyl-1 éthylènediamine dichlorhydrate pour former un complexe coloré, mesuré à 520 nm. Les nitrites
éventuellement présents seront également mesurés et ajoutés au résultat des nitrates.
Des essais interlaboratoires ont montré que cette méthode donne des résultats équivalents pour l'extraction à
l'eau et à l'acide acétique à 5%. Il est recommandé d'utiliser des extraits à l'acide acétique à 5% dans le cas
d'analyses simultanées des nitrates, des substances réductrices (voir l'ISO 15153) ou des hydrates de carbone
réducteurs (voir l'ISO 15154).
3Réactifs
Tous les réactifs doivent être utilisés selon les bonnes pratiques de laboratoire et les réglementations
nationales en vigueur. Utiliser de l'eau distillée ou d'une pureté au moins équivalente.
3.1 Éther laurique de polyoxyéthylène (solution de Brij 35)
Ajouter 1 litre d'eau à 250 g de solution de Brij 35. Chauffer et agiter jusqu'à dissolution.
3.2 Solution d'hydroxyde de sodium (NaOH), de qualité pour analyse
Dissoudre 8,0 g d'hydroxyde de sodium dans de l'eau distillée. Ajouter 1 ml de solution de Brij 35 (3.1) et
compléter à 1litre.
3.3 Solution mère de sulfate de cuivre (CuSO ), de qualité pour analyse
4
Dissoudre 1,20 g de sulfate de cuivre(ll) pentahydraté dans de l'eau distillée et compléter à .100 ml
3.4 Réactif au sulfate d'hydrazine/sulfate de cuivre
Dissoudre la quantité optimale de sulfate d'hydrazine (N H SO , de qualité pour analyse) dans de l'eau. Ajouter
2 6 4
1,5 ml de solution mère de sulfate de cuivre (3.3) et compléter à 1 litre avec de l'eau. Conserver dans un flacon
en verre ambré. Préparer une solution fraîche tous les mois.
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ISO 2003 – Tous droits réservés 1

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ISO 15517:2003(F)
3.5 Réactif à la sulfanilamide (NH C H SO NH )
2 6 4 2 2
Ajouter 25 ml d'acide orthophosphorique concentré (H PO , 85 % en fraction volumique, faible teneur en
3 4
nitrates) à environ 175 ml d'eau. Dissoudre 2,5 g de sulfanilamide dans la solution, puis ajouter 0,125 g de
N-napthyl-1 éthylènediamine dichlorhydrate (C H NHCH CH NH ,2HCl).
10 7 2 2 2
1)
Compléter à 250 ml avec de l'eau et filtrer à l'aide d'un papier-filtre Whatman n° 40 (ou l'équivalent).
Conserver dans un flacon en verre ambré. Préparer une solution fraîche tous les deux jours.
3.6 Nitrate de potassium (KNO ), de qualité pour analyse
3
3.7 Solutions étalons de nitrates
3.7.1 Solution mère
Peser, à 0,000 1 gprès, environ 3,3 g de nitrate de potassium (3.6). Dissoudre dans de l'eau dans une fiole
2 mg/ml
jaugée et compléter à 1 litre. Cette solution contient environ de nitrates. Conserver au réfrigérateur.
Préparer une solution fraîche tous les mois.
3.7.2 Solutions d'étalonnage
À partir de la solution mère (3.7.1), préparer une série d'au moins cinq solutions d'étalonnage dont les
concentrations couvrent la gamme de concentrations présumées des échantillons à analyser (par exemple de
10µg/ml à 200µg/ml de nitrates). Calculer la concentration exacte pour chaque étalon. Conserver au
réfrigérateur. Préparer des solutions fraîches toutes les deux semaines.
Si de l'acide acétique à 5%doit être utilisé (5 fois) pour extraire la nicotine de l'échantillon pour essai en 5.2, les
solutions d'étalonnage (3.7.2) doivent être préparées toutes les deux semaines à partir de la solution mère en
utilisant de l'acide acétique à 5% à la place de l'eau.
4 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
4.1 Analyseur à flux continu, comprenant
— un échantillonneur,
— un dialyseur,
— un bain-marie,
— des bobines de réaction,
— un colorimètre (ou l'équivalent) avec filtre(s) de 520 nm,
— un enregistreur.
Voir un exemple à l'Annexe B.
5 Mode opératoire
5.1 Préparation des échantillons à analyser
Broyer les échantillons de tabac à analyser (il convient que la totalité de l'échantillon passe à travers un tamis
de 1mm d'ouverture de maille) et en déterminer le taux d'humidité. Si le tabac est trop humide pour être broyé,
1) Whatman n° 40 est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l'intention
des utilisateurs de la présente
...