ISO 16140-7:2024
(Main)Microbiology of the food chain — Method validation — Part 7: Protocol for the validation of identification methods of microorganisms
Microbiology of the food chain — Method validation — Part 7: Protocol for the validation of identification methods of microorganisms
This document specifies the general principle and the technical protocol for the validation of identification methods of microorganisms for microbiology in the food chain. As there is no reference method, no method comparison study can be run. Therefore, this document provides a protocol to evaluate the performance characteristics and validate the method workflow using well-defined strains. When required, an additional identification method can be used. This document is applicable to the validation of identification methods of microorganisms that are used for the analysis of isolated colonies from: — products intended for human consumption; — products for feeding animals; — environmental samples in the area of food and feed production and handling; — samples from the primary production stage. Identification methods only validated in accordance with this document cannot be used instead of confirmation described in: — the reference method; — an alternative method validated in accordance with ISO 16140-2; — an alternative method validated in accordance with ISO 16140-6. In these instances, the identification method is validated in accordance with ISO 16140-6 method that is used as a confirmation method. This document is applicable to bacteria and fungi. Some clauses can be applicable to other (micro)organisms, which can be determined on a case-by-case basis.
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Validation des méthodes — Partie 7: Protocole pour la validation de méthodes d’identification des micro-organismes
Le présent document spécifie le principe général ainsi que le protocole technique pour la validation de méthodes d’identification des micro-organismes dans le domaine de la microbiologie de la chaîne alimentaire. Dans la mesure où il n’existe pas de méthode de référence, une étude de comparaison des méthodes ne peut être entreprise. Par conséquent, le présent document fournit un protocole pour évaluer les caractéristiques de performance et valider le flux de travail de la méthode utilisant des souches bien définies. Si nécessaire, une méthode d’identification supplémentaire peut être utilisée. Le présent document est applicable à la validation de méthodes d’identification des micro-organismes qui sont utilisées pour l’analyse de colonies isolées provenant: — les produits destinés à la consommation humaine; — les produits destinés à l’alimentation animale; — les échantillons environnementaux dans le domaine de la production et de la manutention de produits alimentaires; — les échantillons au stade de la production primaire. Les méthodes d'identification validées uniquement conformément au présent document ne peuvent pas être utilisées pour remplacer le mode opératoire de confirmation décrit dans: — la méthode de référence; — une méthode alternative validée conformément à l’ISO 16140-2; — une méthode alternative validée conformément à l’ISO 16140-6. Dans ces cas, la méthode d’identification est validée conformément à la méthode de l’ISO 16140-6 qui est utilisée comme méthode de confirmation. Le présent document est applicable aux bactéries et aux champignons. Certains articles peuvent être applicables à d’autres (micro-)organismes, qui peuvent être déterminés au cas par cas.
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ISO 16140-7
First edition
Microbiology of the food chain —
2024-11
Method validation —
Part 7:
Protocol for the validation
of identification methods of
microorganisms
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Validation des
méthodes —
Partie 7: Protocole pour la validation de méthodes
d’identification des micro-organismes
Reference number
© ISO 2024
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Published in Switzerland
ii
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 General principles for the validation of identification methods of microorganisms . 4
5 Strains . 4
6 Performance characteristics of an identification method . 5
6.1 General .5
6.2 Description of the concept and limitation(s) of the identification method .5
6.3 Identification reliability of the identification method .6
6.3.1 Number of strains to be tested .6
6.3.2 Selection of the strains .7
6.3.3 Testing of the strains .7
6.3.4 Expression and interpretation of results .8
6.4 Evaluation .9
7 Interlaboratory study .10
7.1 General .10
7.2 Data sets to be obtained .10
7.3 Protocol .11
7.4 Expression of results . .11
7.5 Interpretation and evaluation . 12
Annex A (informative) Guidelines for the validation of methods for the identification
of microorganisms in ecosystems . 14
Annex B (normative) Points to be considered when selecting strains for an identification
reliability study .21
Annex C (informative) Expression, interpretation and evaluation of results.22
Annex D (informative) Illustrations on the validation of methods for the identification
of microorganisms in ecosystems .30
Bibliography .35
iii
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee
has been established has the right to be represented on that committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely
with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are described
in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the different types
of ISO document should be noted. This document was drafted in accordance with the editorial rules of the
ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
ISO draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use of (a)
patent(s). ISO takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed patent
rights in respect thereof. As of the date of publication of this document, ISO had not received notice of (a)
patent(s) which may be required to implement this document. However, implementers are cautioned that
this may not represent the latest information, which may be obtained from the patent database available at
www.iso.org/patents. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and expressions
related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the World Trade
Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9,
Microbiology, in collaboration with the European Committee for Standardization (CEN) Technical Committee
CEN/TC 463, Microbiology of the food chain, in accordance with the Agreement on technical cooperation
between ISO and CEN (Vienna Agreement).
A list of all parts in the ISO 16140 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
iv
Introduction
0.1 The ISO 16140 series
The ISO 16140 series has been expanded in response to the need for various ways to validate or verify test
methods. It is the successor to ISO 16140:2003. The ISO 16140 series consists of several parts with the
general title, Microbiology of the food chain — Method validation:
— Part 1: Vocabulary;
— Part 2: Protocol for the validation of alternative (proprietary) methods against a reference method;
— Part 3: Protocol for the verification of reference methods and validated alternative methods in a single
laboratory;
— Part 4: Protocol for method validation in a single laboratory;
— Part 5: Protocol for factorial interlaboratory validation for non-proprietary methods;
— Part 6: Protocol for the validation of alternative (proprietary) methods for microbiological confirmation and
typing procedures;
— Part 7: Protocol for the validation of identification methods of microorganisms.
ISO 17468 is a closely linked International Standard, which establishes technical rules for the development
and validation of standardized methods.
In general, two stages are needed before a method can be used in a laboratory.
— The first stage is the validation of the method. Validation is conducted using a study in a single laboratory
followed by an interlaboratory study (see ISO 16140-2, ISO 16140-5, ISO 16140-6 and as described in
this document). In the case when a method is validated within one laboratory (see ISO 16140-4), no
interlaboratory study is conducted.
— The second stage is method verification, where a laboratory demonstrates that it can satisfactorily
perform a validated method. This is described in ISO 16140-3. Verification is only applicable to methods
that have been validated using an interlaboratory study.
In general, two types of methods are distinguished: reference methods and alternative methods.
A reference method is defined in ISO 16140-1:2016, 2.59, as an “internationally recognized and widely
accepted method”. The note to entry clarifies that “these are ISO standards and standards jointly published
by ISO and CEN or other regional/national standards of equivalent standing”.
In the ISO 16140 series, reference methods include standardized reference (ISO and CEN) methods as
defined in ISO 17468:2023, 3.7, as a “reference method described in a standard”.
An alternative method (method submitted for validation) is defined in ISO 16140-1:2016, 2.4, as a “method
of analysis that detects or quantifies, for a given category of products, the same analyte as is detected or
quantified using the corresponding reference method”. The note to entry clarifies that: “The method can be
proprietary. The term ‘alternative’ is used to refer to the entire ‘test procedure and reaction system’. This
term includes all ingredients, whether material or otherwise, required for implementing the method”.
ISO 16140-4 addresses validation within a single laboratory. The results are therefore only valid for the
laboratory that conducted the study. In this case, verification (as described in ISO 16140-3) is not applicable.
ISO 16140-5 describes protocols for non-proprietary methods where a more rapid validation is required or
when the method to be validated is highly specialized and the number of participating laboratories required
by ISO 16140-2 cannot be reached. ISO 16140-4 and ISO 16140-5 can be used for validation against a
reference method. ISO 16140-4 (regarding qualitative and quantitative methods) and ISO 16140-5 (regarding
quantitative methods only) can also be used for validation without a reference method.
v
The flow chart in Figure 1 gives an overview of the links between the different parts mentioned above. It
also guides the user in selecting the right part of the ISO 16140 series, taking into account the purpose of the
study and the remarks given above.
Figure 1 — Flow chart for application of ISO 16140-2 to ISO 16140-5
NOTE 1 In this document, the words “category”, “type” and/or “item” are sometimes combined with “(food)” to
improve readability. However, the word “(food)” is interchangeable with “(feed)” and other areas of the food chain as
mentioned in Clause 1.
ISO 16140-6 and this document (ISO 16140-7) are somewhat different from the other parts in the ISO 16140
series in that they relate to very specific situations.
ISO 16140-6 is restricted to the confirmation procedure of a method to be validated [e.g. the biochemical
confirmation of Enterobacteriaceae (see ISO 21528-2)]. The confirmation procedure advances a suspected
(presumptive) result to a confirmed positive result. The validation of alternative typing techniques
(e.g. serotyping of Salmonella) is also covered by ISO 16140-6. The validation study in ISO 16140-6 clearly
specifies the selective agar(s) from which strains can be confirmed using the alternative confirmation
method. If successfully validated, the alternative conf
...
Norme
internationale
ISO 16140-7
Première édition
Microbiologie de la chaîne
2024-11
alimentaire — Validation des
méthodes —
Partie 7:
Protocole pour la validation de
méthodes d’identification des
micro-organismes
Microbiology of the food chain — Method validation —
Part 7: Protocol for the validation of identification methods of
microorganisms
Numéro de référence
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
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y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
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Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principes généraux applicables à la validation de méthodes d’identification des micro-
organismes . 4
5 Souches . 5
6 Caractéristiques de performance d’une méthode d’identification . 5
6.1 Généralités .5
6.2 Description du concept et de la ou des limites de la méthode d’identification .5
6.3 Fiabilité d’identification de la méthode d’identification .6
6.3.1 Nombre de souches à soumettre à essai .6
6.3.2 Sélection des souches .8
6.3.3 Essais des souches.8
6.3.4 Expression et interprétation des résultats .8
6.4 Évaluation .10
7 Étude interlaboratoires .11
7.1 Généralités .11
7.2 Jeux de données à obtenir .11
7.3 Protocole . 12
7.4 Expression des résultats . . 12
7.5 Interprétation et évaluation . 13
Annexe A (informative) Lignes directrices relatives à la validation des méthodes pour
l’identification des micro-organismes présents dans les écosystèmes .15
Annexe B (normative) Aspects à prendre en compte lors de la sélection des souches pour une
étude de fiabilité d’identification .23
Annexe C (informative) Expression, interprétation et évaluation des résultats .24
Annexe D (informative) Illustrations relatives à la validation des méthodes d’identification de
micro-organismes dans les écosystèmes .32
Bibliographie .37
iii
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a
été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir
www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité de
tout droit de brevet revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, l’ISO n'avait pas
reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application. Toutefois,
il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des informations
plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à l'adresse
www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié tout ou partie de
tels droits de propriété.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion de
l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au
commerce (OTC), voir www.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie, en collaboration avec le comité technique CEN/TC 463, Microbiologie de la chaîne alimentaire,
du Comité européen de normalisation (CEN) conformément à l’Accord de coopération technique entre l’ISO
et le CEN (Accord de Vienne).
Une liste de toutes les parties de la série ISO 16140 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes se
trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
iv
Introduction
0.1 Série ISO 16140
La série ISO 16140 a été étendue en réponse à la nécessité de disposer de différents protocoles pour la
validation ou la vérification des méthodes d’essai. Elle succède à l’ISO 16140:2003. La série ISO 16140
comprend plusieurs parties sous le titre général Microbiologie de la chaîne alimentaire — Validation des
méthodes:
— Partie 1: Vocabulaire;
— Partie 2: Protocole pour la validation de méthodes alternatives (commerciales) par rapport à une méthode
de référence;
— Partie 3: Protocole pour la vérification dans un seul laboratoire de méthodes de référence et de méthodes
alternatives validées;
— Partie 4: Protocole pour la validation de méthodes dans un seul laboratoire;
— Partie 5: Protocole pour la validation interlaboratoires de méthodes non commerciales par plan factoriel;
— Partie 6: Protocole pour la validation de méthodes alternatives (commerciales) pour la confirmation
microbiologique et le typage;
— Partie 7: Protocole pour la validation de méthodes d’identification des micro-organismes.
L’ISO 17468 est une Norme internationale étroitement liée, qui établit les règles techniques pour le
développement et la validation de méthodes normalisées.
En général, deux étapes sont nécessaires avant de pouvoir utiliser une méthode en laboratoire:
— la première étape est la validation de la méthode. Celle-ci est effectuée à l’aide d’une étude dans un seul
laboratoire suivie d’une étude interlaboratoires (voir l’ISO 16140-2, l’ISO 16140-5, l’ISO 16140-6 et le
présent document). Dans le cas où une méthode est validée dans un seul laboratoire (voir l’ISO 16140-4),
aucune étude interlaboratoires n’est effectuée;
— la seconde étape est la vérification de la méthode, au cours de laquelle un laboratoire prouve qu’il
peut effectuer une méthode validée de manière satisfaisante. Celle-ci est décrite dans l’ISO 16140-3.
La vérification est uniquement applicable aux méthodes qui ont été validées à l’aide d’une étude
interlaboratoires.
On distingue en général deux types de méthodes: les méthodes de référence et les méthodes alternatives.
Une méthode de référence est définie dans l’ISO 16140-1:2016, 2.59, comme étant une «méthode reconnue
internationalement et largement acceptée». La note à l’article précise qu’«il s’agit des normes ISO et des
normes publiées conjointement par l’ISO et le CEN ou d’autres normes régionales/nationales de statut
équivalent».
Dans la série ISO 16140, les méthodes de référence comprennent les méthodes de référence normalisées (ISO et
CEN) telles que définies dans l’ISO 17468:2023, 3.7, en tant que «méthode de référence décrite dans une norme».
Une méthode alternative (méthode soumise à validation) est définie dans l’ISO 16140-1:2016, 2.4, en tant
que «méthode d’analyse permettant de détecter ou de quantifier, pour une catégorie de produits donnée,
le même analyte que celui détecté ou quantifié avec la méthode de référence correspondante». La note à
l’article précise que: «La méthode peut être commerciale. L’adjectif «alternatif» se réfère à la totalité du
«mode opératoire d’analyse et du système réactionnel». Ce terme recouvre tous les éléments nécessaires à la
mise en œuvre de la méthode, qu’ils soient matériels ou autres.»
L’ISO 16140-4 traite de la validation dans un seul laboratoire. Par conséquent, les résultats sont uniquement
valides pour le laboratoire effectuant l’étude. Dans ce cas, aucune vérification (comme décrit dans
l’ISO 16140-3) n’est applicable. L’ISO 16140-5 décrit les protocoles applicables dans le cas de méthodes
non commerciales nécessitant une validation plus rapide ou lorsque la méthode à valider est hautement
v
spécialisée et que le nombre de laboratoires participants requis par l’ISO 16140-2 ne peut pas être atteint.
L’ISO 16140-4 et l’ISO 16140-5 peuvent être utilisées pour la validation avec méthode de référence.
L’ISO 16140-4 (concernant les méthodes qualitatives et quantitatives) et l’ISO 16140-5 (concernant les
méthodes quantitatives uniquement) peuvent également être utilisées pour la validation sans méthode de
référence.
Le logigramme de la Figure 1 donne une vue d’ensemble des relations entre les différentes parties
susmentionnées. Il aide également l’utilisateur à choisir la partie appropriée de la série ISO 16140, en tenant
compte de l’objectif de l’étude et des remarques énoncées ci-dessus.
Figure 1 — Logigramme relatif à l’ap
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.