ISO 5983:1997

Animal feeding stuffs — Determination of nitrogen content and calculation of crude protein content — Kjeldahl method

Aliments des animaux — Détermination de la teneur en azote et calcul de la teneur en protéines brutes — Méthode Kjeldahl

Krmila - Določevanje dušika in izračun surovih beljakovin - Metoda po Kjeldahlu

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 22-Oct-1997
• Withdrawal Date: 22-Oct-1997
• ICS: 65.120 - Animal feeding stuffs
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 10 - Animal feeding stuffs
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 10 - Animal feeding stuffs
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 30-Jun-2005
• Ref Project: SIST ISO 5983:2001 - Animal feeding stuffs -- Determination of nitrogen content and calculation of crude protein content -- Kjeldahl method

Relations

• Revised: ISO 5983-1:2005 - Animal feeding stuffs — Determination of nitrogen content and calculation of crude protein content — Part 1: Kjeldahl method
• Effective Date: 15-Apr-2008
• Revises: ISO 5983:1979 - Animal feeding stuffs — Determination of nitrogen content and calculation of crude protein content
• Effective Date: 15-Apr-2008

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 5983
Second edition
1997-11-01
Animal feeding stuffs — Determination of
nitrogen content and calculation of crude
protein content — Kjeldahl method
Aliments des animaux — Détermination de la teneur en azote et calcul de la
teneur en protéines brutes — Méthode Kjeldahl
Reference number
A
ISO 5983:1997(E)

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ISO 5983:1997(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (ISO member bodies). The work of
preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which
a technical committee has been established has the right to be represented
on that committee. International organizations, governmental and non-
governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collab-
orates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on
all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard ISO 5983 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 34, Agricultural food products, Subcommittee SC 10, Animal
feeding stuffs.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 5983:1979),
the procedure of which has been technically revised to exclude the use of
mercury as a catalyst.
Annexes A and B of this International Standard are for information only.
©  ISO 1997
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced
or utilized in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying and
microfilm, without permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case postale 56 • CH-1211 Genève 20 • Switzerland
Internet [e-mail]
X.400 c=ch; a=400net; p=iso; o=isocs; s=central
Printed in Switzerland
ii

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©
INTERNATIONAL STANDARD  ISO ISO 5983:1997(E)
Animal feeding stuffs — Determination of nitrogen content and
calculation of crude protein content — Kjeldahl method
1 Scope
This International Standard specifies a method for the determination of the nitrogen content of animal
feeding stuffs by the Kjeldahl process, and a method for the calculation of the crude protein content.
This method does not distinguish between protein nitrogen and non-protein nitrogen. If it is important to
determine the content of non-protein nitrogen, an appropriate method should be used.
NOTE — Under certain circumstances, full recovery of nitrogen in nitrates and nitrites is not possible by this method.
2 Normative reference
The following standard contains provisions which, through reference in this text, constitute provisions of
this International Standard. At the time of publication, the edition indicated was valid. All standards are
subject to revision, and parties to agreements based on this International Standard are encouraged to
investigate the possibility of applying the most recent edition of the standard indicated below. Members of
IEC and ISO maintain registers of currently valid International Standards.
ISO 6498:1983, Animal feeding stuffs — Preparation of test samples.
3 Principle
Digestion of organic matter by sulfuric acid in the presence of a catalyst. Rendering of the reaction product
alkaline, then distillation and titration of the liberated ammonia. Calculation of the nitrogen content.
Multiplication of the result by the conventional factor 6,25 to obtain the crude protein content.
4 Reagents and materials
Use only reagents of recognized analytical grade and distilled or deionized water or water of at least
equivalent purity.
The reagents (except the standard materials (4.6)) shall be practically free from nitrogenous compounds.
4.1 Potassium sulfate.
4.2 Catalyst, either 4.2.1 or 4.2.2.
4.2.1 Copper(II) oxide (CuO).
4.2.2 Copper(II) sulfate pentahydrate (CuSO .5H O).
4 2
4.3 Sulfuric acid, c(H SO ) = 18 mol/l, r (H SO ) = 1,84 g/ml.
2 4 20 2 4
4.4 Paraffin wax.
1

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ISO
ISO 5983:1997(E)
4.5 Saccharose.
4.6 Standard materials, either 4.6.1 or 4.6.2.
4.6.1 Acetanilide, with melting point 114 °C; nitrogen (N) content 103,6 g/kg.
4.6.2 Tryptophan,with melting point 282 °C; nitrogen (N) content 137,2 g/kg.
Before use, dry the tryptophan.
4.7 Sodium hydroxide solution, w(NaOH) = 33 % (m/m).
4.8 Collecting liquid, either 4.8.1 or 4.8.2.
4.8.1 Sulfuric acid, standard volumetric dilution, c(H SO ) = 0,05 mol/l or c(H SO ) = 0,125 mol/l.
2 4 2 4
4.8.2 Boric acid, r(H BO ) = 40 g/l.
3 3
4.9 Solution for titration, either 4.9.1 or 4.9.2.
4.9.1 Sodium hydroxide, standard volumetric solution, c(NaOH) = 0,1 mol/l or c(NaOH) = 0,25 mol/l.
4.9.2 Sulfuric acid, standard volumetric dilution, c(H SO ) = 0,05 mol/l or c(H SO ) = 0,125 mol/l.
2 4 2 4
4.10 Mixed indicator, neutral point at pH 4,4 to 5,8.
Dissolve 2 g of Methyl red and 1 g of Methylene blue in 1000 ml of ethanol [w(C H OH) = 95 % (V/V)].
2 5
4.11 Litmus paper.
4.12 Boiling aids, such as granulated pumice stone, or glass beads of diameter 5 mm to 7 mm, or
carborundum chips, washed in hydrochloric acid and in distilled water, and ashed.
5 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
5.1 Analytical balance.
5.2 Digestion, distillation and titration apparatus.
6 Sampling
It is important that the laboratory receive a sample which is truly representative and has not been damaged
or changed during transport or storage.
Sampling is not part of the method specified in this International Standard. A recommended sampling
[5]
method is given in ISO 6497 .
Store the sample in such a way that deterioration and change in its composition are prevented.
7 Preparation of test sample
Prepare the test sample in accordance with ISO 6498.
2

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ISO
ISO 5983:1997(E)
8 Procedure
[1]
NOTE — For general directions on the application of the Kjeldahl method, see ISO 1871 .
8.1 Test portion
Weigh, to the nearest 1 mg, a mass of the test sample chosen according to the expected nitrogen content so
that the test portion contains between 0,005 g and 0,2 g of nitrogen and, preferably, more than 0,02 g.
NOTE — The mass of the test portion of homogeneous air-dry samples should be between 0,5 g and 2,0 g. The mass of
the test portion of wet and/or inhomogeneous samples should be between 2,5 g and 5,0 g.
8.2 Determination
WARNING - The following operations should be carried out under a well-ventilated hood or in a
fume cupboard which is resistant to sulfuric acid.
8.2.1 Digestion of organic matter
Transfer the test portion quantitatively into a Kjeldahl digestion flask of suitable size (usually 800 ml).
Add 15 g of potassium sulfate (4.1).
Add an appropriate quantity of catalyst as follows: 0,3 g of copper(II) oxide (4.2.1) or 0,9 g to 1,2 g of
copper(II) sulfate pentahydrate (4.2.2).
Add 25 ml of sulfuric acid (4.3) for the first gram of dry matter of the test portion and 6 ml to 12 ml for each
additional gram of dry matter. Mix thoroughly, ensuring complete wetting of the test portion.
Support the flask so that its axis is inclined at an angle of 30° to 45° to the vertical. Maintain the flask in this
position throughout heating.
Heat the flask moderately at first to prevent foam from rising into the neck of the flask or escaping from the
flask.
NOTES
1 It may be advisable to add an anti-foaming agent such as paraffin wax (4.4).
2 A destruction block is a suitable digestion apparatus for ensuring that the destruction mixture is heated steadily.
Heat moderately, swirling from time to time, until the mass has carbonized and the foam has disappeared.
Then heat more intensively until the liquid is boiling steadily.
NOTE 3 Heating is adequate if the boiling acid condenses towards the middle of the neck of the Kjeldahl flask.
Avoid overheating of the walls of the flask not in contact with liquid.
NOTE 4 If a naked flame is used, such overheating can be prevented by placing the flask on a sheet of heat-resistant
material with an aperture of diameter slightly less than that of the flask at the liquid level.
After the liquid has become clear with a light green-blue colour, heat for 2 h.
Leave to cool. If the digest starts to solidify, add some water and mix by swirling.
8.2.2 Distillation of ammonia
8.2.2.1 Carefully add 250 ml to 350 ml of water to dissolve the sulfates completely. If necessary, facilitate
dissolving by heating the flask in warm water. Mix by swirling and allow to cool.
3

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©
ISO
ISO 5983:1997(E)
Add a few boiling aids (4.12).
NOTE — For some specific samples, the sulfates may not completely dissolve in the water. In that case, it is
recommended to repeat the digestion with a reduced mass of potassium sulfate (4.1).
8.2.2.2 Pipette into the collecting flask of the distillation apparatus 25 ml of the sulfuric acid (4.8.1),
choosing the concentration according to the expected nitrogen content of the test portion. Add 100 ml to
150 ml of water. Add a few drops of the mixed indicator (4.10). Proceed in accordance with 8.2.2.4.
8.2.2.3 Alternatively, transfer into the collecting flask 100 ml to 250 ml of boric acid (4.8.2). Add a few
drops of mixed indicator (4.10).
...

SLOVENSKI STANDARD
SIST ISO 5983:2001
01-februar-2001
.UPLOD'RORþHYDQMHGXãLNDLQL]UDþXQVXURYLKEHOMDNRYLQ0HWRGDSR.MHOGDKOX
Animal feeding stuffs -- Determination of nitrogen content and calculation of crude
protein content -- Kjeldahl method
Aliments des animaux -- Détermination de la teneur en azote et calcul de la teneur en
protéines brutes -- Méthode Kjeldahl
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 5983:1997
ICS:
65.120 Krmila Animal feeding stuffs
SIST ISO 5983:2001 en
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.

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SIST ISO 5983:2001

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SIST ISO 5983:2001
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 5983
Second edition
1997-11-01
Animal feeding stuffs — Determination of
nitrogen content and calculation of crude
protein content — Kjeldahl method
Aliments des animaux — Détermination de la teneur en azote et calcul de la
teneur en protéines brutes — Méthode Kjeldahl
Reference number
A
ISO 5983:1997(E)

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ISO 5983:1997(E)
Foreword
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federation of national standards bodies (ISO member bodies). The work of
preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which
a technical committee has been established has the right to be represented
on that committee. International organizations, governmental and non-
governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collab-
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Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard ISO 5983 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 34, Agricultural food products, Subcommittee SC 10, Animal
feeding stuffs.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 5983:1979),
the procedure of which has been technically revised to exclude the use of
mercury as a catalyst.
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Animal feeding stuffs — Determination of nitrogen content and
calculation of crude protein content — Kjeldahl method
1 Scope
This International Standard specifies a method for the determination of the nitrogen content of animal
feeding stuffs by the Kjeldahl process, and a method for the calculation of the crude protein content.
This method does not distinguish between protein nitrogen and non-protein nitrogen. If it is important to
determine the content of non-protein nitrogen, an appropriate method should be used.
NOTE — Under certain circumstances, full recovery of nitrogen in nitrates and nitrites is not possible by this method.
2 Normative reference
The following standard contains provisions which, through reference in this text, constitute provisions of
this International Standard. At the time of publication, the edition indicated was valid. All standards are
subject to revision, and parties to agreements based on this International Standard are encouraged to
investigate the possibility of applying the most recent edition of the standard indicated below. Members of
IEC and ISO maintain registers of currently valid International Standards.
ISO 6498:1983, Animal feeding stuffs — Preparation of test samples.
3 Principle
Digestion of organic matter by sulfuric acid in the presence of a catalyst. Rendering of the reaction product
alkaline, then distillation and titration of the liberated ammonia. Calculation of the nitrogen content.
Multiplication of the result by the conventional factor 6,25 to obtain the crude protein content.
4 Reagents and materials
Use only reagents of recognized analytical grade and distilled or deionized water or water of at least
equivalent purity.
The reagents (except the standard materials (4.6)) shall be practically free from nitrogenous compounds.
4.1 Potassium sulfate.
4.2 Catalyst, either 4.2.1 or 4.2.2.
4.2.1 Copper(II) oxide (CuO).
4.2.2 Copper(II) sulfate pentahydrate (CuSO .5H O).
4 2
4.3 Sulfuric acid, c(H SO ) = 18 mol/l, r (H SO ) = 1,84 g/ml.
2 4 20 2 4
4.4 Paraffin wax.
1

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SIST ISO 5983:2001
©
ISO
ISO 5983:1997(E)
4.5 Saccharose.
4.6 Standard materials, either 4.6.1 or 4.6.2.
4.6.1 Acetanilide, with melting point 114 °C; nitrogen (N) content 103,6 g/kg.
4.6.2 Tryptophan,with melting point 282 °C; nitrogen (N) content 137,2 g/kg.
Before use, dry the tryptophan.
4.7 Sodium hydroxide solution, w(NaOH) = 33 % (m/m).
4.8 Collecting liquid, either 4.8.1 or 4.8.2.
4.8.1 Sulfuric acid, standard volumetric dilution, c(H SO ) = 0,05 mol/l or c(H SO ) = 0,125 mol/l.
2 4 2 4
4.8.2 Boric acid, r(H BO ) = 40 g/l.
3 3
4.9 Solution for titration, either 4.9.1 or 4.9.2.
4.9.1 Sodium hydroxide, standard volumetric solution, c(NaOH) = 0,1 mol/l or c(NaOH) = 0,25 mol/l.
4.9.2 Sulfuric acid, standard volumetric dilution, c(H SO ) = 0,05 mol/l or c(H SO ) = 0,125 mol/l.
2 4 2 4
4.10 Mixed indicator, neutral point at pH 4,4 to 5,8.
Dissolve 2 g of Methyl red and 1 g of Methylene blue in 1000 ml of ethanol [w(C H OH) = 95 % (V/V)].
2 5
4.11 Litmus paper.
4.12 Boiling aids, such as granulated pumice stone, or glass beads of diameter 5 mm to 7 mm, or
carborundum chips, washed in hydrochloric acid and in distilled water, and ashed.
5 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
5.1 Analytical balance.
5.2 Digestion, distillation and titration apparatus.
6 Sampling
It is important that the laboratory receive a sample which is truly representative and has not been damaged
or changed during transport or storage.
Sampling is not part of the method specified in this International Standard. A recommended sampling
[5]
method is given in ISO 6497 .
Store the sample in such a way that deterioration and change in its composition are prevented.
7 Preparation of test sample
Prepare the test sample in accordance with ISO 6498.
2

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SIST ISO 5983:2001
©
ISO
ISO 5983:1997(E)
8 Procedure
[1]
NOTE — For general directions on the application of the Kjeldahl method, see ISO 1871 .
8.1 Test portion
Weigh, to the nearest 1 mg, a mass of the test sample chosen according to the expected nitrogen content so
that the test portion contains between 0,005 g and 0,2 g of nitrogen and, preferably, more than 0,02 g.
NOTE — The mass of the test portion of homogeneous air-dry samples should be between 0,5 g and 2,0 g. The mass of
the test portion of wet and/or inhomogeneous samples should be between 2,5 g and 5,0 g.
8.2 Determination
WARNING - The following operations should be carried out under a well-ventilated hood or in a
fume cupboard which is resistant to sulfuric acid.
8.2.1 Digestion of organic matter
Transfer the test portion quantitatively into a Kjeldahl digestion flask of suitable size (usually 800 ml).
Add 15 g of potassium sulfate (4.1).
Add an appropriate quantity of catalyst as follows: 0,3 g of copper(II) oxide (4.2.1) or 0,9 g to 1,2 g of
copper(II) sulfate pentahydrate (4.2.2).
Add 25 ml of sulfuric acid (4.3) for the first gram of dry matter of the test portion and 6 ml to 12 ml for each
additional gram of dry matter. Mix thoroughly, ensuring complete wetting of the test portion.
Support the flask so that its axis is inclined at an angle of 30° to 45° to the vertical. Maintain the flask in this
position throughout heating.
Heat the flask moderately at first to prevent foam from rising into the neck of the flask or escaping from the
flask.
NOTES
1 It may be advisable to add an anti-foaming agent such as paraffin wax (4.4).
2 A destruction block is a suitable digestion apparatus for ensuring that the destruction mixture is heated steadily.
Heat moderately, swirling from time to time, until the mass has carbonized and the foam has disappeared.
Then heat more intensively until the liquid is boiling steadily.
NOTE 3 Heating is adequate if the boiling acid condenses towards the middle of the neck of the Kjeldahl flask.
Avoid overheating of the walls of the flask not in contact with liquid.
NOTE 4 If a naked flame is used, such overheating can be prevented by placing the flask on a sheet of heat-resistant
material with an aperture of diameter slightly less than that of the flask at the liquid level.
After the liquid has become clear with a light green-blue colour, heat for 2 h.
Leave to cool. If the digest starts to solidify, add some water and mix by swirling.
8.2.2 Distillation of ammonia
8.2.2.1 Carefully add 250 ml to 350 ml of water to dissolve the sulfates completely. If necessary, facilitate
dissolving by heating the flask in warm water. Mix by swirling and allow to cool.
3

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SIST ISO 5983:2001
©
ISO
ISO 5983:1997(E)
Add a few boiling aids (4.12).
NOTE — For some specific samples, the sulfates may not completely dissolve in the water. In that case, it is
recommended to
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 5983
Deuxième édition
1997-11-01
Aliments des animaux — Détermination de
la teneur en azote et calcul de la teneur en
protéines brutes — Méthode Kjeldahl
Animal feeding stuffs — Determination of nitrogen content and calculation
of crude protein content — Kjeldahl method
A
Numéro de référence
ISO 5983:1997(F)

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ISO 5983:1997(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d'organismes nationaux de normalisation (comités membres de
l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales,
en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore
étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce
qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 5983 a été élaborée par le comité technique
ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 10, Aliments
des animaux.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition
(ISO 5983:1979), dont le mode opératoire a fait l’objet d’une révision
technique afin d’exclure l’usage du mercure comme catalyseur.
Les annexes A et B de la présente Norme internationale sont données
uniquement à titre d’information.
©  ISO 1997
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord
écrit de l'éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case postale 56 • CH-1211 Genève 20 • Suisse
Internet [e-mail]
Version française tirée en 1998
Imprimé en Suisse
ii

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NORME INTERNATIONALE  © ISO ISO 5983:1997(F)
Aliments des animaux — Détermination de la teneur en azote et
calcul de la teneur en protéines brutes — Méthode Kjeldahl
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale spécifie une méthode pour la détermination de la teneur en azote des aliments
des animaux, selon la méthode de Kjeldahl, et une méthode de calcul de la teneur en protéines brutes.
La méthode ne fait pas la distinction entre azote protéique et azote non protéique. S'il importe de déterminer la
teneur en azote non protéique, il convient d'appliquer une méthode appropriée.
NOTE Dans certains cas, la récupération de la totalité de l'azote des nitrates et nitrites n'est pas possible par cette
méthode.
2 Référence normative
La norme suivante contient des dispositions qui, par suite de la référence qui en est faite, constituent des
dispositions valables pour la présente Norme internationale. Au moment de la publication, l’édition indiquée était en
vigueur. Toute norme est sujette à révision et les parties prenantes des accords fondés sur la présente Norme
internationale sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer l’édition la plus récente de la norme indiquée ci-
après. Les membres de la CEI et de l'ISO possèdent le registre des Normes internationales en vigueur à un
moment donné.
ISO 6498:1983, Aliments des animaux — Préparation des échantillons pour essai.
3 Principe
Minéralisation de la matière organique par l'acide sulfurique en présence d'un catalyseur. Alcalinisation des produits
de la réaction, puis distillation et titrage de l'ammoniac libéré. Calcul de la teneur en azote. Multiplication du résultat
par le facteur conventionnel 6,25 afin d'obtenir la teneur en protéines brutes.
4 Réactifs et matériaux
Sauf indication différente, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue, et de l'eau distillée ou de
l'eau déminéralisée ou de pureté équivalente.
Les réactifs [à l'exception des matériaux étalons (4.6)] doivent être pratiquement exempts de composés azotés.
4.1  Sulfate de potassium.
4.2  Catalyseur, 4.2.1 ou 4.2.2.
4.2.1  Oxyde de cuivre(II) (CuO).
1

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© ISO
ISO 5983:1997(F)
4.2.2  Sulfate de cuivre(II) pentahydraté (CuSO ,5H O).
4 2
4.3  Acide sulfurique, c(H SO ) = 18 mol/l, r (H SO ) = 1,84 g/ml.
2 4 20 2 4

4.4 Paraffine.
4.5  Saccharose.
4.6  Matériaux étalons, 4.6.1 ou 4.6.2.
4.6.1  Acétanilide, point de fusion à 114 °C; teneur en azote (N) de 103,6 g/kg.
4.6.2  Tryptophane, point de fusion à 282 °C; teneur en azote (N) de 137,2 g/kg.
Sécher le tryptophane avant utilisation.
4.7  Solution d'hydroxyde de sodium, w(NaOH) = 33 % (m/m).
4.8  Liquide de récupération, 4.8.1 ou 4.8.2.
4.8.1  Acide sulfurique, solution titrée, c(H SO ) = 0,05 mol/l ou c(H SO ) = 0,125 mol/l.
2 4 2 4
4.8.2  Acide borique, r(H BO ) = 40 g/l.
3 3
, 4.9.1 ou 4.9.2.
4.9 Solution de titrage
4.9.1  Hydroxyde de sodium, solution titrée, c(NaOH) = 0,1 mol/l ou c(NaOH) = 0,25 mol/l.
4.9.2  Acide sulfurique, solution titrée, c(H SO ) = 0,05 mol/l ou c(H SO ) = 0,125 mol/l.
2 4 2 4
4.10  Indicateur mixte, point neutre pour un pH compris entre 4,4 et 5,8.
Dissoudre 2 g de rouge de méthyle et 1 g de bleu de méthylène dans 1 000 ml d'éthanol w(C H OH) = 95 % (V/V).
2 5
4.11  Papier de tournesol.
4.12  Régularisateurs d'ébullition: pierre ponce en grains, ou billes en verre de 5 mm à 7 mm de diamètre, ou
morceaux de carborundum lavés à l'acide chlorhydrique et à l'eau distillée puis réduits en poussière.
5 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
5.1  Balance analytique.
5.2  Appareillage pour la minéralisation, la distillation et le titrage.
6 Échantillonnage
L'échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente Norme internationale. Une méthode
d'échantillonnage recommandée est donnée dans l'ISO 6497 [5].
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon réellement représentatif, non endommagé ou modifié lors
du transport et de l’entreposage.
Conserver l'échantillon de façon à éviter toute modification ou détérioration de sa composition.
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ISO 5983:1997(F)
7 Préparation de l'échantillon pour essai
Préparer l'échantillon pour essai conformément à l'ISO 6498.
8 Mode opératoire
NOTE Pour des indications générales sur l'application de la méthode de Kjeldahl, voir l'ISO 1871 [1].
8.1 Prise d'essai
Peser, à 1 mg près, une masse de l'échantillon pour essai choisie en fonction de la teneur présumée en azote, de
façon que la prise d'essai contienne entre 0,005 g et 0,2 g d'azote et, de préférence, plus de 0,02 g.
NOTE Il convient que la masse de la prise d'essai d'échantillons homogènes séchés à l'air se situe entre 0,5 g et 2,0 g. Il
convient que la masse de la prise d'essai d'échantillons humides et/ou non homogènes soit comprise entre 2,5 g et 5,0 g.
8.2 Détermination
AVERTISSEMENT — Il convient d'effectuer les opérations suivantes sous une hotte bien ventilée ou dans
une hotte fermée résistant à l'acide sulfurique.
8.2.1 Minéralisation de la matière organique
Introduire quantitativement la prise d'essai dans un ballon à minéralisation de Kjeldahl ayant une capacité
convenable (en général 800 ml).
Ajouter 15 g de sulfate de potassium (4.1).
Ajouter une quantité appropriée de catalyseur de la manière suivante: 0,3 g d'oxyde de cuivre(II) (4.2.1) ou 0,9 g à
1,2 g de sulfate de cuivre(II) pentahydraté (4.2.2).
Ajouter 25 ml d'acide sulfurique (4.3) pour le premier gramme de matière sèche de la prise d'essai et 6 ml à 12 ml
pour chaque gramme supplémentaire de matière sèche. Mélanger soigneusement de manière à assurer un
mouillage complet de la prise d'essai.
Placer le ballon sur un support de manière à incliner son axe dans un angle compris entre 30° et 45° par rapport à
la verticale. Maintenir le ballon dans cette position pendant la durée du chauffage.
Chauffer le ballon tout d'abord doucement pour éviter que de la mousse monte dans le col du ballon ou ne
s'échappe du ballon.
NOTE 1 Il peut être utile d'ajouter un agent antimoussant tel que de la paraffine (4.4).
NOTE 2 Un bloc de destruction constitue un appareil de minéralisation convenant pour assurer le chauffage régulier du
mélange.
Chauffer avec modération, en agitant de temps en temps par tournoiement, jusqu'à carbonisation de la masse et
disparition de la mousse. Chauffer ensuite plus fort jusqu'à ébullition régulière du liquide.
NOTE 3 Le chauffage est correct si l'acide bouillant se condense au niveau du milieu du col du ballon de Kjeldahl.
Éviter la surchauffe des parois du ballon qui ne sont pas au contact du liquide.
NOTE 4 En cas d'utilisation d'une flamme nue, une telle surchauffe peut être évitée en posant le ballon sur une plaque en
matériau résistant à la chaleur et munie d'un orifice de diamètre légèrement inférieur à celui du ballon au niveau du liquide.
Lorsque la solution est devenue limpide, avec une légère coloration bleu-vert, chauffer pendant 2 h.
Laisser refroidir. Si le résidu commence à se solidifier, ajouter un peu d'eau et mélanger par tournoiement.
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8.2.2 Distillation de l'ammoniac
8.2.2.1  Ajouter, avec précaution, 250 ml à 350 ml d'eau pour dissoudre complètement les sulfates. Si nécessaire,
faciliter la dissolution en chauffant le ballon dans de l'eau chaude. Mélanger par tournoiement et laisser refroidir.
Ajouter quelques régulateurs d'ébullition (4.12).
NOTE Dans le cas de certains échantillons spécifiques, les sulfates peuvent ne pas se dissoudre complètement dans
l'eau. Dans ce cas, il est recommandé de répéter la minéralisation en utilisant une masse réduite de sulfate de potassium (4.1).
8.2.2.2  À l'aide d'une pipette, introduire dans la fiole de réception de l'appareil à distillation 25 ml d'acide sulfurique
(4.8.1) en choisissant la concentration selon la teneur présumée en azote de la prise d'essai. Ajouter 100 ml à
150 ml d'eau. Ajouter quelques gouttes de l'indicateur mixte (4.10). Procéder ensuite conformément à 8.2.2.4.
8.2.2.3  En alternative, introduire dans la fiole de réception 100
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