ISO 6888-3:2003
(Main)Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species) — Part 3: Detection and MPN technique for low numbers
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species) — Part 3: Detection and MPN technique for low numbers
ISO 6888-3:2003 specifies a horizontal method for the enumeration and detection of coagulase-positive staphylococci, using the most probable number (MPN) technique. It is applicable to products intended for human consumption and the feeding of animals, and environmental samples in the area of food production and food handling. This method is recommended for products where staphylococci are expected to be stressed and in low numbers as, for example, in dried products. Coagulase-positive staphylococci will primarily be Staphylococcus aureus but Staphylococcus intermedius and some strains of Staphylococcus hyicus also produce coagulase.
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le dénombrement des staphylocoques à coagulase positive (Staphylococcus aureus et autres espèces) — Partie 3: Recherche et méthode NPP pour les faibles nombres
L'ISO 6888-3:2003 spécifie une méthode horizontale pour le dénombrement et la recherche des staphylocoques à coagulase positive par la méthode NPP (nombre le plus probable). Elle est applicable aux produits destinés à l'alimentation humaine et animale; échantillons d'environnement dans le domaine de la production et de la distribution des aliments. Cette méthode est recommandée pour les produits susceptibles de contenir des staphylocoques stressés et en faible nombre, comme c'est le cas, par exemple, des produits secs. Les staphylocoques à coagulase positive seront surtout des Staphylococcus aureus, mais les Staphylococcus intermedius et certaines souches de Staphylococcus hyicus peuvent également sécréter de la coagulase libre.
General Information
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Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 6888-3
First edition
2003-03-15
Corrected version
2004-01-15
Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Horizontal method for the
enumeration of coagulase-positive
staphylococci (Staphylococcus aureus
and other species) —
Part 3:
Detection and MPN technique for low
numbers
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le
dénombrement des staphylocoques à coagulase positive
(Staphylococcus aureus et autres espèces) —
Partie 3: Recherche et méthode NPP pour les faibles nombres
Reference number
ISO 6888-3:2003(E)
©
ISO 2003
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ISO 6888-3:2003(E)
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Published in Switzerland
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ISO 6888-3:2003(E)
Contents Page
Foreword. iv
Introduction . v
1 Scope. 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions. 2
4 Principle . 2
4.1 Detection method. 2
4.2 Enumeration method . 2
5 Diluents and culture media . 3
6 Apparatus. 6
7 Sampling . 6
8 Preparation of test sample. 6
9 Procedure. 6
9.1 Detection method. 6
9.2 Enumeration method . 7
9.3 Selection of plates and interpretation. 8
10 Expression of results. 9
10.1 Detection method. 9
10.2 Enumeration method . 9
11 Precision . 10
12 Test report. 10
Bibliography . 11
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ISO 6888-3:2003(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 6888-3 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9,
Microbiology.
ISO 6888 consists of the following parts, under the general title Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus
and other species):
Part 1: Technique using Baird-Parker agar medium
Part 2: Technique using rabbit plasma fibrinogen agar medium
Part 3: Detection and MPN technique for low numbers
This corrected version of ISO 6888-3:2003 incorporates the following correction:
Subclause 9.1.1
The second paragraph has been amended to resolve any ambiguity.
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ISO 6888-3:2003(E)
Introduction
Because of the large variety of food and feed products, this horizontal method may not be appropriate in every
detail for certain products. In this case, different methods, which are specific to these products, may be used if
absolutely necessary for justified technical reasons. Nevertheless, every attempt should be made to apply this
horizontal method as far as possible.
When this part of ISO 6888 is next reviewed, account will be taken of all information then available regarding
the extent to which this horizontal method has been followed and the reasons for deviations from this method
in the case of particular products.
The harmonization of test methods cannot be immediate and, for certain groups of products, International
Standards and/or national standards may already exist that do not comply with this horizontal method. It is
hoped that when such standards are reviewed they will be changed to comply with this part of ISO 6888 so
that eventually the only remaining departures from this horizontal method will be those necessary for
well-established technical reasons.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 6888-3:2003(E)
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal
method for the enumeration of coagulase-positive
staphylococci (Staphylococcus aureus and other species) —
Part 3:
Detection and MPN technique for low numbers
1 Scope
This part of ISO 6888 specifies a horizontal method for the enumeration and detection of coagulase-positive
staphylococci, using the most probable number (MPN) technique. It is applicable to
products intended for human consumption and the feeding of animals, and
environmental samples in the area of food production and food handling.
This method is recommended for products where staphylococci are expected to be stressed and in low
numbers as, for example, in dried products. Coagulase-positive staphylococci will primarily be Staphylococcus
aureus but Staphylococcus intermedius and some strains of Staphylococcus hyicus also produce coagulase.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 6887 (all parts), Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial
suspension and decimal dilutions for microbiological examination
ISO 8261, Milk and milk products — General guidance for the preparation of test samples, initial suspensions
and decimal dilutions for microbiological examination
ISO 6888-1:1999, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of
coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species) — Part 1: Technique using
Baird-Parker agar medium
ISO 6888-2:1999, Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal method for the enumeration of
coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species) — Part 2: Technique using
rabbit plasma fibrinogen agar medium
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General rules for microbiological examinations
ISO/TS 11133-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and production
of culture media — Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the
laboratory
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ISO 6888-3:2003(E)
1)
ISO/TS 11133-2:— , Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and
production of culture media — Part 2: Practical guidelines on performance testing culture media
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
coagulase-positive staphylococci
bacteria which form typical and/or atypical colonies on the surface of a selective culture medium and which
show a positive coagulase reaction or a specific rabbit plasma reaction on rabbit plasma fibrinogen agar
NOTE For the purpose of this part of ISO 6888, the confirmation of coagulase-positive staphylococci is based on a
strongly positive coagulase reaction, but it is recognized that some strains of coagulase-positive staphylococci give weakly
positive coagulase reactions. These latter strains can be confused with other bacteria but they can be distinguished from
such other bacteria by the use of additional tests such as the production of thermonuclease (for details, see IDF 83).
3.2
enumeration of the coagulase-positive staphylococci
determination of the number of coagulase-positive staphylococci found per millilitre or per gram of sample
when the test is carried out according to the method specified in this part of ISO 6888
4 Principle
4.1 Detection method
4.1.1 A selective culture medium is inoculated with a specified quantity of the test sample if the initial
product is liquid, or a specified quantity of an initial suspension in the case of other products.
4.1.2 The tubes are incubated at 37 °C, anaerobically, for 24 h and 48 h. The presence of presumptive
coagulase-positive staphylococci is indicated by the reduction of potassium tellurite.
NOTE In this part of ISO 6888, anaerobiosis is obtained by pouring a plug of agar or paraffin into each tube, but an
alternative procedure is to incubate the tubes in a jar or an incubator under anaerobic conditions.
4.1.3 The surface of solid selective Baird-Parker medium is inoculated from presumptive positive tubes
(4.1.2) after 24 h, and all the remaining tubes after 48 h.
4.1.4 The plates are inoculated at 37 °C for 24 h and 48 h. The presence of presumptive coagulase-positive
staphylococci is indicated by the reduction of potassium tellurite and an egg yolk reaction.
4.1.5 Typical and/or atypical colonies are confirmed by a coagulase reaction.
4.1.6 Alternatively, the surface of rabbit plasma fibrinogen agar may be inoculated and, after appropriate
incubation, the presence of coagulase-positive staphylococci is indicated by colonies showing a specific rabbit
plasma fibrinogen reaction.
4.1.7 The results are given as the “presence” or “absence” of coagulase-positive staphylococci in x g or x ml
of product.
4.2 Enumeration method
4.2.1 Serial dilutions of product are inoculated into liquid selective culture medium.
1) To be published.
2 © ISO 2003 — All rights reserved
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ISO 6888-3:2003(E)
4.2.2 The tubes are incubated at 37 °C, anaerobically, for 24 h and 48 h. The presence of presumptive
coagulase-positive staphylococci is indicated by the reduction of potassium tellurite.
NOTE In this part of ISO 6888, anaerobiosis is obtained by pouring a plug of agar or paraffin into each tube, but an
alternative procedure is to incubate the tubes in a jar or an incubator under anaerobic conditions.
4.2.3 The surface of solid selective Baird-Parker medium is inoculated from presumptive positive tubes
(4.2.2) after 24 h, and all the remaining tubes after 48 h.
4.2.4 The plates are incubated at 37 °C for 24 h and 48 h. The presence of presumptive coagulase-positive
staphylococci is indicated by the reduction of potassium tellurite and an egg yolk reaction.
4.2.5 Typical and/or atypical colonies are confirmed by a coagulase reaction.
4.2.6 Alternatively, the surface of rabbit plasma fibrinogen agar may be inoculated and, after appropriate
incubation, the presence of coagulase-positive staphylococci is indicated by colonies showing a specific rabbit
plasma fibrinogen reaction.
4.2.7 The most probable number of coagulase-positive staphylococci per gram or per millilitre of sample is
calculated by reference to most probable number tables for confirmed dilutions (4.2.5 or 4.2.6).
5 Diluents and culture media
For current laboratory practice, see ISO 7218.
The chemical products used for the preparation of the culture media and reagents shall be of recognized
analytical quality.
5.1 Diluents
Refer to the relevant part of ISO 6887, or to ISO 8261, or the specific standard dealing with the product to be
examined.
5.2 Modified Giolitti and Cantoni broth
5.2.1 Base medium
5.2.1.1 Composition
Double-strength medium Single-strength medium
Enzymatic digest of casein 20,0 g 10,0 g
Meat extract 10,0 g 5,0 g
Yeast extract 10,0 g 5,0 g
Lithium chloride 10,0 g 5,0 g
Mannitol 40,0 g 20,0 g
Sodium chloride 10,0 g 5,0 g
Glycine 2,4 g 1,2 g
Sodium pyruvate 6,0 g 3,0 g
Polyoxyethylene sorbitan mono-oleate 2,0 g 1,0 g
(Tween 80)
Water 1 000 ml 1 000 ml
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ISO 6888-3:2003(E)
5.2.1.2 Preparation
Dissolve the ingredients in the water, by heating and mixing if necessary, to obtain complete dissolution. Cool
to room temperature and adjust the pH, if necessary, so that after sterilization the final pH is 6,9 ± 0,2.
Dispense the medium in appropriate quantities into tubes of suitable dimensions (e.g. 16 mm × 160 mm in the
case of single-strength medium, and 20 mm × 200 mm in the case of double-strength medium).
Sterilize for 15 min in an autoclave set at 121 °C.
5.2.2 Potassium tellurite solution
5.2.2.1 Composition
2)
1,0 g
Potassium tellurite (K TeO )
2 3
Water 100 ml
5.2.2.2 Preparation
Dissolve the potassium tellurite in the water with minimal heating.
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 6888-3
Première édition
2003-03-15
Version corrigée
2004-01-15
Microbiologie des aliments — Méthode
horizontale pour le dénombrement des
staphylocoques à coagulase positive
(Staphylococcus aureus et autres
espèces) —
Partie 3:
Recherche et méthode NPP pour les
faibles nombres
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for
the enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus
aureus and other species) —
Part 3: Detection and MPN technique for low numbers
Numéro de référence
ISO 6888-3:2003(F)
©
ISO 2003
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ISO 6888-3:2003(F)
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Publié en Suisse
ii © ISO 2003 — Tous droits réservés
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ISO 6888-3:2003(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
Introduction . v
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives. 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe . 2
4.1 Méthode de recherche. 2
4.2 Méthode de dénombrement . 3
5 Diluants et milieux de culture . 3
6 Appareillage. 6
7 Échantillonnage . 7
8 Préparation de l'échantillon pour essai. 7
9 Mode opératoire . 7
9.1 Méthode de recherche. 7
9.2 Méthode de dénombrement . 8
9.3 Sélection des boîtes et interprétation. 8
10 Expression des résultats. 10
10.1 Méthode de recherche. 10
10.2 Méthode de dénombrement . 10
11 Fidélité. 10
12 Rapport d'essai . 11
Bibliographie . 12
© ISO 2003 — Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 6888-3:2003(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 6888-3 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie.
L'ISO 6888 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Microbiologie des aliments —
Méthode horizontale pour le dénombrement des staphylocoques à coagulase positive (Staphylococcus
aureus et autres espèces):
Partie 1: Technique utilisant le milieu gélosé de Baird-Parker
Partie 2: Technique utilisant le milieu gélosé au plasma de lapin et au fibrinogène
Partie 3: Recherche et méthode NPP pour les faibles nombres
La présente version corrigée de l’ISO 6888-3:2003 a fait l’objet de la correction suivante:
Paragraphe 9.1.1
Le deuxième alinéa a été modifié afin d’éliminer toute ambiguïté.
iv © ISO 2003 — Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 6888-3:2003(F)
Introduction
En raison de la grande diversité des produits alimentaires, il est possible que la présente méthode horizontale
ne soit pas applicable dans tous ses détails à certains d'entre eux. Dans ce cas, des méthodes différentes,
spécifiques à ces produits, pourront être utilisées si cela s'avère absolument nécessaire pour des raisons
techniques justifiées. Néanmoins, il convient que tous les efforts soit faits pour appliquer cette méthode
horizontale chaque fois que possible.
Lors du prochain réexamen périodique de la présente partie de l'ISO 6888, il sera tenu compte de toutes les
évolutions intervenues depuis sa publication et, notamment, dans quelle mesure cette méthode horizontale
aura été suivie ainsi que les raisons des dérogations dans le cas de produits particuliers.
L'harmonisation de toutes les méthodes d'essai ne peut être réalisée de façon immédiate; de ce fait, il peut
déjà exister des Normes internationales et/ou nationales pour certains groupes de produits, qui ne concordent
pas avec la présente méthode horizontale. Lorsque de telles normes viendront en révision, il serait
souhaitable de les aligner avec les prescriptions de la présente partie de l'ISO 6888 et de ne conserver que
les seules divergences justifiées indispensables pour des raisons techniques.
© ISO 2003 — Tous droits réservés v
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NORME INTERNATIONALE ISO 6888-3:2003(F)
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le
dénombrement des staphylocoques à coagulase positive
(Staphylococcus aureus et autres espèces) —
Partie 3:
Recherche et méthode NPP pour les faibles nombres
1 Domaine d'application
La présente partie de l'ISO 6888 spécifie une méthode horizontale pour le dénombrement et la recherche des
staphylocoques à coagulase positive par la méthode NPP (nombre le plus probable). Elle est applicable aux
produits destinés à l’alimentation humaine et animale;
échantillons d’environnement dans le domaine de la production et de la distribution des aliments.
La présente méthode est recommandée pour les produits susceptibles de contenir des staphylocoques
stressés et en faible nombre, comme c’est le cas, par exemple, des produits secs. Les staphylocoques à
coagulase positive seront surtout des Staphylococcus aureus, mais les Staphylococcus intermedius et
certaines souches de Staphylococcus hyicus peuvent également sécréter de la coagulase libre.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 6887 (toutes les parties), Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension
mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique
ISO 8261, Lait et produits laitiers — Lignes directrices générales pour la préparation des échantillons pour
essai, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique
ISO 6888-1:1999, Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le dénombrement des
staphylocoques à coagulase positive (Staphylococcus aureus et autres espèces) — Partie 1: Technique
utilisant le milieu gélosé de Baird-Parker
ISO 6888-2:1999, Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le dénombrement des
staphylocoques à coagulase positive (Staphylococcus aureus et autres espèces) — Partie 2: Technique
utilisant le milieu gélosé au plasma de lapin et au fibrinogène
ISO 7218:1996, Microbiologie des aliments — Règles générales pour les examens microbiologiques
ISO/TS 11133-1, Microbiologie des aliments — Guide pour la préparation et la production des milieux de
culture — Partie 1: Guide général pour l'assurance de la qualité pour la préparation des milieux de culture en
laboratoire
© ISO 2003 — Tous droits réservés 1
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ISO 6888-3:2003(F)
1)
ISO/TS 11133-2:— , Microbiologie des aliments — Guide pour la préparation et la production des milieux de
culture — Partie 2: Guide général pour les essais de performance des milieux de culture
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
staphylocoque à coagulase positive
bactérie formant des colonies caractéristiques et/ou non caractéristiques à la surface d’un milieu de culture
sélectif et donnant une réaction positive à la coagulase ou une réaction spécifique au plasma de lapin sur un
milieu gélosé au plasma de lapin et au fibrinogène
NOTE Dans le cadre de la présente partie de l'ISO 6888, la confirmation des staphylocoques à coagulase positive
repose sur une réaction fortement positive à la coagulase. Toutefois, il est reconnu que certaines souches de
staphylocoques à coagulase positive présentent des réactions faiblement positives à la coagulase. Ces souches sont
susceptibles d’être confondues avec d’autres bactéries, mais il est possible de les différencier à l’aide d’essais
supplémentaires comme la recherche de la thermonucléase (pour plus de détails, voir la norme FIL 83).
3.2
dénombrement des staphylocoques à coagulase positive
détermination du nombre de staphylocoques à coagulase positive trouvé par millilitre ou par gramme
d’échantillon, lorsque l’essai est effectué selon la méthode spécifiée dans la présente partie de l’ISO 6888
4 Principe
4.1 Méthode de recherche
4.1.1 Ensemencement dans le milieu de culture sélectif d’une quantité déterminée de l'échantillon pour
essai si le produit à examiner est liquide, ou d’une quantité déterminée de suspension mère dans le cas
d'autres produits.
4.1.2 Incubation des tubes à essais en conditions anaérobies à 37 °C pendant 24 h et 48 h. La présence
éventuelle de staphylocoques à coagulase positive est indiquée par une réduction du tellurite de potassium.
NOTE Dans la présente partie de l'ISO 6888, l’anaérobiose est obtenue en disposant une couche de gélose ou de
paraffine dans chaque tube pour former un bouchon. Une autre méthode consiste à faire incuber les tubes à essais dans
une jarre ou dans une étuve en conditions anaérobies.
4.1.3 Ensemencement de la surface du milieu sélectif solide de Baird-Parker à partir des tubes à essais
présumés positifs (4.1.2) après 24 h d’incubation, et à l’aide des autres tubes après 48 h.
4.1.4 Incubation des boîtes à 37 °C pendant 24 h et 48 h. La présence éventuelle de staphylocoques à
coagulase positive est indiquée par une réduction du tellurite de potassium et par une réaction au jaune d’œuf.
4.1.5 Confirmation, par une réaction de la coagulase, de colonies caractéristiques et/ou non
caractéristiques.
4.1.6 Autre méthode possible: ensemencement de la surface du milieu gélosé au plasma de lapin et au
fibrinogène. Après un temps d’incubation approprié, la présence de staphylocoques à coagulase positive est
indiquée par des colonies présentant une réaction spécifique au plasma de lapin et au fibrinogène.
1) À publier.
2 © ISO 2003 — Tous droits réservés
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ISO 6888-3:2003(F)
4.1.7 Présentation des résultats sous la forme «présence» ou «absence» de staphylocoques à coagulase
positive dans x g ou x ml de produit.
4.2 Méthode de dénombrement
4.2.1 Ensemencement de dilutions successives de produit dans le milieu de culture sélectif liquide.
4.2.2 Incubation des tubes à essais en conditions anaérobies à 37 °C pendant 24 h et 48 h. La présence
éventuelle de staphylocoques à coagulase positive est indiquée par une réduction du tellurite de potassium.
NOTE Dans la présente partie de l'ISO 6888, l’anaérobiose est obtenue en disposant une couche de gélose ou de
paraffine dans chaque tube pour former un bouchon. Une autre méthode consiste à faire incuber les tubes à essais dans
une jarre ou dans une étuve en conditions anaérobies.
4.2.3 Ensemencement de la surface du milieu sélectif solide de Baird-Parker à partir des tubes à essais
présumés positifs (4.2.2) après 24 h d’incubation, et à l’aide des autres tubes après 48 h.
4.2.4 Incubation des boîtes à 37 °C pendant 24 h et 48 h. La présence éventuelle de staphylocoques à
coagulase positive est indiquée par une réduction du tellurite de potassium et par une réaction au jaune d’œuf.
4.2.5 Confirmation, par une réaction de la coagulase, de colonies caractéristiques et/ou non
caractéristiques.
4.2.6 Autre méthode possible: ensemencement de la surface du milieu gélosé au plasma de lapin et au
fibrinogène. Après un temps d’incubation approprié, la présence de staphylocoques à coagulase positive est
indiquée par des colonies présentant une réaction spécifique au plasma de lapin et au fibrinogène.
4.2.7 Calcul du nombre le plus probable (NPP) de staphylocoques à coagulase positive par gramme ou par
millilitre d’échantillon en se référant aux tableaux des nombres les plus probables pour les dilutions
confirmées (4.2.5 ou 4.2.6).
5 Diluants et milieux de culture
Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir l’ISO 7218.
Les produits chimiques utilisés pour la préparation des milieux de culture et des réactifs doivent être de
qualité analytique reconnue.
5.1 Diluants
Se référer aux parties pertinentes de l’ISO 6887, ou à l’ISO 8261, ou à la norme spécifique relative au produit
à étudier.
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ISO 6888-3:2003(F)
5.2 Bouillon de Giolitti et Cantoni modifié
5.2.1 Milieu de base
5.2.1.1 Composition
Milieu double Milieu simple
concentration concentration
Digestat enzymatique de caséine 20,0 g 10,0 g
Extrait de viande 10,0 g 5,0 g
Extrait de levure 10,0 g 5,0 g
Chlorure de lithium 10,0 g 5,0 g
Mannitol 40,0 g 20,0 g
Chlorure de sodium 10,0 g 5,0 g
Glycine 2,4 g 1,2 g
Pyruvate de sodium 6,0 g 3,0 g
Polyoxyéthylène mono-oléate de sorbitol (Tween 80) 2,0 g 1,0 g
Eau 1 000 ml 1 000 ml
5.2.1.2 Préparation
Dissoudre les ingrédients dans l'eau et, si nécessaire, chauffer et agiter pour arriver à complète dissolution.
Laisser refroidir à la température ambiante et ajuster le pH de façon qu’après stérilisation il soit de 6,9 ± 0,2.
Répartir le milieu en portions appropriées dans des tubes à essais de dimensions adéquates (par exemple
16 mm × 160 mm pour le milieu simple concentration, et 20 mm × 200 mm pour les milieux double
concentration).
Stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15 min.
5.2.2 Solution de tellurite de potassium
5.2.2.1 Composition
2)
1,0 g
Tellurite de potassium (K TeO )
2 3
Eau 100 ml
5.2.2.2 Préparation
Dissoudre le tellurite de potassium dans l’eau en chauffant le moins possible.
Il convient que la poudre soit facilement dissoute. Si un composé blanc insoluble se forme dans l’eau, éliminer
le tellurite de potassium.
Stériliser par filtration à l’aide de membranes de 0,22 µm de porosité.
2) Il est recommandé de s'assurer au préalable que le tellurite de potassium dont on dispose est adapté à cet essai
(5.2.2.2).
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