ISO 12010:2019
(Main)Water quality — Determination of short-chain polychlorinated alkanes (SCCP) in water — Method using gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and negative-ion chemical ionization (NCI)
Water quality — Determination of short-chain polychlorinated alkanes (SCCP) in water — Method using gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and negative-ion chemical ionization (NCI)
This document specifies a method for the quantitative determination of the sum of short-chain polychlorinated n-alkanes also known as short-chain polychlorinated paraffins (SCCPs) in the carbon bond range n-C10 to n-C13 inclusive, in mixtures with chlorine mass fractions ("contents") between 50 % and 67 %, including approximately 6 000 of approximately 8 000 congeners. This method is applicable to the determination of the sum of SCCPs in unfiltered surface water, ground water, drinking water and waste water using gas chromatography-mass spectrometry with electron capture negative ionization (GC-ECNI-MS). Depending on the capability of the GC-ECNI-MS instrument, the concentration range of the method is from 0,1 µg/l or lower to 10 µg/l. Depending on the waste water matrix, the lowest detectable concentration is estimated to be > 0,1 µg/l. The data of the interlaboratory trial concerning this method are given in Annex I.
Qualité de l'eau — Détermination des alcanes polychlorés à chaîne courte (SCCP) dans l'eau — Méthode par chromatographie gazeuse-spectrométrie de masse (CG-SM) avec ionisation chimique négative (ICN)
Le présent document spécifie une méthode de détermination quantitative de la somme des n-alcanes polychlorés à chaîne courte également connus sous le nom de paraffines polychlorées à chaîne courte (SCCP), ayant une chaîne carbonée comprise entre n-C10 et n-C13 inclus, dans des mélanges dont la fraction massique (« teneur ») de chlore varie de 50 % à 67 %, contenant environ 6 000 des environ 8 000 congénères. Cette méthode est applicable à la détermination de la somme des SCCP dans les eaux de surface, les eaux souterraines, l'eau potable et les eaux usées non filtrées, par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC-MS) en mode d'ionisation négative par capture d'électrons (GC-ECNI-MS). En fonction de la capacité de l'instrument de GC-ECNI-MS, la plage de concentration de la méthode se situe entre 0,1 µg/l ou inférieur et 10 µg/l. Selon la matrice de l'échantillon d'eau usée, la plus petite concentration détectable est estimée comme étant > 0,1 µg/l. Les données de l'essai interlaboratoires portant sur cette méthode sont présentés dans l'Annexe I.
General Information
Relations
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 12010
Second edition
2019-03
Water quality — Determination of
short-chain polychlorinated alkanes
(SCCP) in water — Method using gas
chromatography-mass spectrometry
(GC-MS) and negative-ion chemical
ionization (NCI)
Qualité de l'eau — Détermination des alcanes polychlorés à
chaîne courte (SCCP) dans l'eau — Méthode par chromatographie
gazeuse-spectrométrie de masse (CG-SM) avec ionisation chimique
négative (ICN)
Reference number
©
ISO 2019
© ISO 2019
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Published in Switzerland
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Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Interferences . 2
6 Reagents and standards . 3
6.1 Solvents for extraction and preparation of stock solutions . 3
6.2 Reference SCCP stock solutions . 3
6.3 Internal standard stock solutions from individual congeners . 4
6.4 Calibration solutions . 5
6.5 Extraction auxiliary and clean-up materials . 5
7 Apparatus . 6
8 Sampling and sample pretreatment . 7
9 Procedure. 7
9.1 Extraction with liquid-liquid extraction . 7
9.2 Extraction with higher content of suspended matter . 7
9.3 Extract clean-up . 8
9.4 Measurement and integration of the chromatogram. 8
9.5 Calibration . 9
9.5.1 General. 9
9.5.2 Basic calibration .10
9.5.3 Identification and quantification with mass fragment combinations .11
9.5.4 Calculation of the results .11
9.5.5 Quality checks for internal standardization .12
10 Expression of results .12
11 Test report .12
Annex A (normative) Independent quality control check solutions .13
Annex B (informative) Explanation of the calibration of the sum of SCCPs with multiple
linear regression .15
Annex C (informative) Typical GC-MS conditions .21
Annex D (informative) Typical chromatograms of standard solutions and quality control
check solutions 1 µg/ml .24
Annex E (informative) Presentation of goodness of fit .31
Annex F (normative) Alternative clean-up with column chromatography .32
Annex G (informative) Alternative clean-up with gel chromatography .35
Annex H (informative) Chromatograms of real SPM samples .36
Annex I (informative) Performance data .40
Bibliography .42
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
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on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see the following
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This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 2,
Physical, chemical and biochemical methods.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/members .html.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 12010:2012), which has been technically
revised. The main changes compared to the previous edition are:
— the m/z values (mass/charge ratios) for quantification and identification;
— the calibration mixtures;
— the clean up procedure by gel chromatography;
— reduced interferences.
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Introduction
The user should be aware that particular problems might require the specifications of additional
marginal conditions.
This document achieves synergetic effects in the practical laboratory work. The following points
partially allow a combination of water and sediment analysis:
[2]
1) same mass combination as for sediment analysis (see ISO 18635 );
2) same calibration mixtures as for sediment analysis (see ISO 18635);
3) same GPC-clean up as for sediment analysis (see ISO 18635).
INTERNATIONAL STANDARD ISO 12010:2019(E)
Water quality — Determination of short-chain
polychlorinated alkanes (SCCP) in water — Method using
gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and
negative-ion chemical ionization (NCI)
WARNING — Persons using this document should be familiar with normal laboratory practice.
This document does not purport to address all of the safety problems, if any, associated with its
use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health practices.
IMPORTANT — It is absolutely essential that tests conducted in accordance to this document be
carried out by suitably qualified staff.
1 Scope
This document specifies a method for the quantitative determination of the sum of short-chain
polychlorinated n-alkanes also known as short-chain polychlorinated paraffins (SCCPs) in the carbon
bond range n-C to n-C inclusive, in mixtures with chlorine mass fractions (“contents”) between
10 13
50 % and 67 %, including approximately 6 000 of approximately 8 000 congeners.
This method is applicable to the determination of the sum of SCCPs in unfiltered surface water, ground
water, drinking water and waste water using gas chromatography-mass spectrometry with electron
capture negative ionization (GC-ECNI-MS).
Depending on the capability of the GC-ECNI-MS instrument, the concentration range of the method
is from 0,1 µg/l or lower to 10 µg/l. Depending on the waste water matrix, the lowest detectable
concentration is estimated to be > 0,1 µg/l. The data of the interlaboratory trial concerning this method
are given in Annex I.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 5667-1, Water quality — Sampling — Part 1: Guidance on the design of sampling programmes and
sampling techniques
ISO 5667-3, Water quality — Sampling — Part 3: Preservation and handling of water samples
ISO 8466-1, Water quality — Calibration and evaluation of analytical methods and estimation of
performance characteristics — Part 1: Statistical evaluation of the linear calibration function
ISO/TS 13530, Water quality — Guidance on analytical quality control for chemical and physicochemical
water analysis
3 Terms and definitions
No terms and definitions are listed in this document.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https: //www .iso .org/obp
— IEC Electropedia: available at http: //www .electropedia .org/
4 Principle
Determination of the sum of SCCPs in the carbon bond range n-C to n-C inclusive, in technical and
10 13
environmental transposed mixtures with chlorine mass fractions (“contents”) between 50 % and 67 %
(for example a mean of approximately 4 to 10 chlorine atoms per molecule) and independent of the
C-number distribution pattern of the congeners. No recognition of the chlorine content is necessary.
The analysed sum of SCCPs includes the variety of SCCPs with their differing chlorine content
and C-number distribution patterns as found in technical mixtures as well as compositions in the
environment (References [5] to [9]).
SCCPs in whole water samples are fortified with an internal standard and extracted using liquid-
liquid extraction with an organic solvent. The sample enrichment procedure is followed by a clean-
up procedure to eliminate interfering compounds. Gas chromatography (GC) is undertaken using a
short capillary column within a short retention time range. The detection of selected mass fragments
is carried out using mass spectrometry (MS) in selected ion-monitoring mode using electron capture
negative ionization mode (ECNI). The mass fragments and the compositions of the calibration solutions
used in this document are essential for the analysis of the sum of SCCPs (see References [3] and [4]).
The selected ion chromatogram is integrated over the full retention time range of the SCCPs. The
quantification of the sum of SCCPs is carried out after establishing a calibration by a multiple linear
regression. The calibration requires the specified three differently composed standard mixtures
fortified with an internal standard.
These standard mixtures mimick different mixtures found in the environment. In this method, only
the multiple linear regression quantification with these specific mixtures enables the quantification of
the variety of observed mixtures of SCCP in the environment and in technical compositions, described
in Clause 1 and in References [3] and [4]. It is not possible to use only one reference mixture for that
complex task.
The method allows for a quantification of the sum of SCCPs expected to be within an expanded
measurement uncertainty of less than 50 %.
5 Interferences
Non-specific matrix interferences, as well as interferences from other environmental situations, are
dealt with using the given clean-up procedure. A further reduction of matrix effects can be achieved by
reducing the mass spectrometric resolution power to, for example, 0,4 u, which is often possible with
a quadrupole mass spectrometer. The exact m/z values are 374,958 8; 410,916 9; 422,935 5; 448,810 6
(see Reference [8]).
Applying the entire procedure using the clean up procedure given in 9.3, a selection of chlorinated
pollutants has been tested and found not to cause interferences below the concentrations given in
Table 1.
Table 1 — Highest concentration level which causes no interferences higher than the limit of
quantification of 0,1 µg/l
Highest concentration level which
causes no interferences higher
Potential interfering compounds
than the limit of quantification of
0,1 µg/l
a
Aroclor 1262 1,25 µg/l
a
Aroclor 1242 10 µg/l
a
Aroclor 1221 10 µg/l
a
Aroclor 1262, Aroclor 1242, Aroclor 1221, Halowax 1014 and Halowax 1051 are examples of suitable products
available commercially. These examples are given for the convenience of users of this document and do not constitute an
endorsement by ISO of these products.
2 © ISO 2019 – All rights reserved
Table 1 (continued)
Highest concentration level which
causes no interferences higher
Potential interfering compounds
than the limit of quantification of
0,1 µg/l
Campheclor (toxaphene) 1,75 µg/l
a
Halowax 1014 10 µg/l
a
Halowax 1051 0,4 µg/l
MCCP (medium-chain chlorinated n-alkanes C -C ) 42 % chlorine 10 µg/l
14 17
MCCP (medium-chain chlorinated n-alkanes C -C ) 52 % chlorine 6 µg/l
14 17
MCCP (medium-chain chlorinated n-alkanes C -C ) 57 % chlorine 10 µg/l
14 17
a
Aroclor 1262, Aroclor 1242, Aroclor 1221, Halowax 1014 and Halowax 1051 are examples of suitable products
available commercially. These examples are given for the convenience of users of this document and do not constitute an
endorsement by ISO of these products.
6 Reagents and standards
Use solvents and reagents of sufficient purity, i.e. with negligibly low concentrations of SCCPs, e.g. lower
than the limit of detection of the method. Check blanks regularly over the entire procedure to ensure
they are suitable and establish proper analytical control.
6.1 Solvents for extraction and preparation of stock solutions
The solvent for extraction is n-heptane. Other non-polar solvents, e.g. n-hexane (C H ), cyclohexane
6 14
(C H ), can be used if the extraction efficiency is comparable with those of n-heptane.
6 12
Use 2,2,4-trimethylpentane (C H , isooctane) for conditioning of the glass bottles (7.1).
8 18
For preparation of the stock solution and dilutions of the internal standard, use propanone
(acetone), C H O.
3 6
For conditioning of the clean-up columns, use mixtures of n-heptane and propanone (acetone).
For the first elution step of the filtrated suspended matter, use methanol (CH OH).
6.2 Reference SCCP stock solutions
Use commercially available solutions, such as in cyclohexane or n-hexane, of the single mixtures of SCCP
congeners with defined carbon chain length and with different defined chlorine contents (see Table 2,
first two columns). Alternatively, use commercially available ready mixed solutions with the same
composition.
Mixtures of synthetic solutions were used to simulate environmentally occurring SCCPs or technical
products of SCCPs. For example, the synthetic mixed calibration stock solution “Lake Ontario water” is
mixed to resemble a Lake Ontario water as reported in Reference [6]. Its characteristic is a relatively
high content of C to C , especially C and a low chlorine content as partly reported in water samples
10 12 12
too. The synthetic mixed calibration stock solution “Perch” simulates a C-number distribution found in
a perch (see Reference [7]). The standard mixture “Sediment Drevnice” simulates a natural mixture
reported about a sediment of the river Drevnice (see Reference [8]) with a high content of C and a
higher chlorine content.
The compositions of the calibration mixtures as well as of the independent quality assurance solutions
are mandatory to achieve the quantification of the variety of SCCP-mixtures.
Prepare the solutions “Lake Ontario water”, ”Perch”, and “Sediment Drevnice” according to Table 2.
Table 2 — Reference substances stock solutions
Reference substances stock solutions in
accordance with 6.2
Commercially available standard solutions
(Synthetic mixed standard solutions, which
resemble environmental mixtures composi-
tion, ng/ml)
“Lake Ontario “Sediment
“Perch”
Chlorine content
water” Drevnice”
n-alkane
% of the individual Mean number of chlorines in
chain
Chlorine Chlorine Chlorine
C-number mixtures as the molecules (calculated)
length a a a
content content content
certified
50,2 % 60,6 % 65,0 %
C 50,18 3,97 1 000
C 55,00 4,79 1 000
C 60,09 5,86 500
C 65,02 7,16 1 100 280
C 45,50 3,63 1 000
C 50,21 4,37 1 000
C 55,20 5,31 600
C 60,53 6,55 1 000 500
C 65,25 7,94 3 000 660
C 45,32 3,93 2 000
C 50,18 4,76 2 000 800
C 55,00 5,74 2 000 2 000
C 65,08 8,59 900 1 000
C 69,98 10,62 830
C 59,98 7,56 100 730
C 65,18 9,34 6 000
Sum of SCCP (ng/ml) 10 000 10 000 10 000
a
The chlorine content of the mixtures is calculated as the weighted mean.
Store the prepared solutions in a refrigerator at 2 °C to 8 °C. Avoiding losses of the solvent by evaporation,
solutions can be used for five years.
Use as well commercially available solutions, e.g. in cyclohexane or n-hexane, of the reference substances
stock solutions (see Table 2, last three columns) of SCCP. See Reference [8].
1)
An example is DRE-ZS22102105HP . See Reference [8].
6.3 Internal standard stock solutions from individual congeners
Use commercially available individual congener standard solutions and prepare a stock solution in
propanone (acetone) (6.1) at a concentration of, for example, 1 µg/ml.
Individual SCCP congeners with chlorine contents of between 50 % and 67 % are suitable as internal
standards, for example:
— 1,1,1,3,10,11-hexachloroundecane, with e.g. 0,1 µg/ml;
— 1,1,1,3,11,13,13,13-octachlorotridecane, with e.g. 0,1 µg/ml;
— 1,2,5,5,6,9,10-heptachlorodecane, with e.g. 0,01 µg/ml.
1) DRE-ZS22102105HP is an example of a suitable product available commercially. These examples are given for
the convenience of users of this document and do not constitute an endorsement by ISO of these products.
4 © ISO 2019 – All rights reserved
NOTE 1 The different individual SCCP congeners used as internal standard substances contribute in
environmental samples to the sum of SCCPs. Nevertheless, the contribution is approximately <1 %, which means
that the enhancement of the measurement uncertainty is negligible.
NOTE 2 Different individual SCCP congeners can produce different response factors, hence it can be necessary
for different concentrations to be used.
If validated, other individual SCCP congeners can be used as the internal standard if the congener shows
the same properties over the entire analytical process as the SCCPs being determined.
The solutions can be stored in a refrigerator at 2 °C to 8 °C.
6.4 Calibration solutions
Use the standard mixtures according to Table 2. Prepare a minimum of nine calibration solutions (see
Table 3) with concentrations according to the detection capability of the mass spectrometer. Combine
and dilute the solutions (6.2) and the internal standard solution (6.3) with n-heptane to produce
solutions for the calibration range.
Table 3 — Calibration solutions
Internal standard
“Lake Ontario water” “Perch” “Sediment Drevnice”
e.g. 1,1,1,3,11,13,13,13-octa-
chlorotridecane
Sum of SCCPs, µg/ml µg/ml µg/ml µg/ml
µg/ml
0,15 0,15 0,1
0,15 0,15 0,1
0,15 0,15 0,1
0,3 0,3 0,1
0,3 0,3 0,1
0,3 0,3 0,1
0,6 0,6 0,1
0,6 0,6 0,1
0,6 0,6 0,1
The solutions may be stored in a refrigerator at 2 °C to 8 °C at least for six months. Check the
concentration of the calibration solutions against an independently prepared standard prior to use.
Quality control check solutions shall be prepared to check the calibration independently. To do so, use
the mixtures as given in Annex A.
6.5 Extraction auxiliary and clean-up materials
6.5.1 Copper powder, grain size < 63 µm. Copper powder is used in the clean-up procedure to remove
sulfur and sulfur-containing matrix components.
6.5.2 Hydrochloric acid, 2 mol/l, used for copper activation in the clean-up column.
6.5.3 Aluminium oxide, Al O , neutral, high activity (10 % water).
2 3
6.5.4 Glass wool.
6.6 Operating gases, for GC-MS, of high purity and in accordance with the manufacturer’s
specifications.
6.7 Nitrogen, N , purity ≥ 99,996 % volume fraction, for concentrating the solutions.
6.8 Sodium sulfate, anhydrous, Na SO , powdered.
2 4
6.9 Test solution for check of linearity of the internal standards.
Prepare solutions of the internal standard used at concentrations of 0,1 µg/ml, 0,5 µg/ml, and 1 µg/ml.
7 Apparatus
Glassware and equipment which may come into contact with water samples or their extracts should be
free from interfering compounds.
Clean all glassware by rinsing with propanone (acetone) (6.1).
7.1 Flat-bottomed glass bottles, conical shoulder, 1 000 ml capacity, for collecting water samples,
preferably with glass stoppers.
The sample bottle shall enable direct extraction of the sample to be undertaken.
Before use, condition it by rinsing the dry sample bottle with, for example, 2 ml of isooctane (6.1). Then,
invert it and allow the solvent to drain and evaporate from it.
7.2 Evaporation device, e.g. rotary evaporator, or nitrogen evaporating system.
[1]
7.3 Separator, for example micro-separator in accordance with ISO 6468 , separation funnel or
other suitable device for phase separation.
7.4 Vials, compatible with the GC-autosampler (e.g. with a capacity of 1,5 ml).
7.5 Chromatographic column, internal diameter (ID) 10 mm (empty) for clean-up.
7.6 Gas chromatograph, temperature-programmable, with all required accessories, including gases,
capillary column, split/splitless injector and mass spectrometer detector with negative-ion chemical
ionization option and appropriate reactant gas (CH ).
7.7 Volumetric flasks, 1 ml, 2 ml, 10 ml and 25 ml.
7.8 Disposable glass Pasteur pipettes, e.g. 150 mm or 250 mm.
7.9 Syringes, 2 µl, 5 µl, 10 µl and 50 µl.
7.10 Analytical column
Fused silica column with medium or non-polar low bleed separating phase (see Annex C for examples);
e.g. ID < 0,25 mm, length 15 m and film thickness 0,1 µm.
7.11 Glass fibre filter, binderless, fine porosity (<0,45 µm particle retention).
7.12 Vacuum filtration device, volume 1 l.
7.13 Shaking device or magnetic stirrer device (with a magnetic stir bar).
6 © ISO 2019 – All rights reserved
7.14 GPC clean-up system (with modular design).
7.14.1 Pump, sampling injector, sample rack; fraction collector.
2)
7.14.2 GPC-Column: Shodex CLNpakPAE 800 AC® , Maximum pore size 40 nm, column size 80 mm
(inner diameter) × 300 mm (length).
8 Sampling and sample pretreatment
Take samples as specified in ISO 5667-1 and ISO 5667-3. To collect water samples (1 l per sample), use
conditioned glass bottles (7.1). Do not fill the sample bottle completely (e.g. fill to the shoulder) in order
to allow the addition of the extracting solvent.
Samples are extracted without filtering the sample and suspended solids are not removed prior to
analysis.
Weigh, to the nearest gram, the sample bottle with its contents and cap, and record the mass for
subsequent use. Thoroughly shake the bottle to homogenize the water sample. Add the internal
standard solution (6.3) to achieve a concentration of, for example, 0,1 µg/l in the water sample. Record
the mass, in micrograms, of internal standard added. Shake the bottle thoroughly.
9 Procedure
9.1 Extraction with liquid-liquid extraction
Add 10 ml of extraction solvent, n-heptane (6.1), to the bottle and shake it or stir (7.13) thoroughly for
about 2 h to carry out the extraction directly in the sample bottle. Allow the phases to separate and
use the separator (7.3) to collect the organic extract in a separate tube. If an emulsion forms, break
it by centrifuging and/or by adding sodium sulfate (6.8) to the tube. Discard the remaining water to
waste. Transfer the solvent from the tube to the evaporating device (7.2) or, using a gentle stream
of nitrogen (6.7), carefully evaporate the solvent (at a temperature of 40 °C) to about 1 ml. Weigh, to
the nearest gram, the empty sample bottle and cap. Calculate the volume of water extracted and the
concentration of internal standard in the water.
Proceed as in 9.3.
9.2 Extraction with higher content of suspended matter
If the content of suspended matter is higher than approximately 200 mg/l, filter the sample through a
glass fibre filter (7.11) and collect the filtrate in the bottle (7.1).
Weigh, to the nearest gram, the empty sample bottle and cap. Calculate the volume of water extracted
and the concentration of internal standard in the water.
Add 10 ml of methanol to the filter (without vacuum) separately to extract the suspended matter. Allow
to soak for 5 min, then use vacuum to add methanol to the sample filtrate collected before.
Add 10 ml n-heptane (without vacuum) to the filter and allow to soak for another 5 min, then use weak
vacuum to add n-heptane also to the sample filtrate collected before.
Shake or stir (7.13) the mixture thoroughly for about 2 h to carry out the extraction directly in the
sample bottle. Allow the phases to separate and use the separator (7.3) to collect the organic extract in
a separate tube. If an emulsion forms, break it by centrifuging and/or by adding sodium sulfate (6.8) to
the tube. Discard the remaining water to waste. Transfer the solvent from the tube to the evaporating
2) Shodex CLNpakPAE 800 AC is an example of a suitable product available commercially. This example is given for
the convenience of users of this document and does not constitute an endorsement by ISO of this product.
device (7.2) or, using a gentle stream of nitrogen (6.7), carefully evaporate the solvent (at a temperature
of 40 °C) to about 1 ml.
9.3 Extract clean-up
Often, matrix contents can be cleaned by procedure b) only.
A two-step clean-up procedure [a) and b)] for high matrix content shall be carried out.
Begin the cleanup procedure using the extract concentrated to approximately 1 ml in n-heptane:
a) column chromatographic clean-up with 2 g activated copper powder and (6.5.1) 2 g Al O , neutral,
2 3
high activity (6.5.3);
3)
b) gel chromatographic clean-up (7.14). with Shodex CLNpakPAE 800 AC® , 8,0 mm × 300 mm and
0,5 ml/min propanone (acetone) as the eluent.
Fill the copper powder in a glass column with a glass wool plug. Activate the copper by adding 10 ml
of 2 mol/l hydrochloric acid (6.5.2). Allow all of the hydrochloric acid (6.5.2) to soak into the copper
powder before washing the column, first with 25 ml of water and subsequently with 20 ml of acetone to
remove acid and water from the column. Then, a stopcock may be attached to the bottom of the column
for controlling the elution progress. After the solvent level has reached the upper level of the copper
powder, wash the copper layer with 3 × 2 ml n-heptane. Then, 2 g of aluminium oxide (10 % water)
and about 10 ml of n-heptane are added for obtaining a copper/aluminium oxide - sandwich column.
The wet column is used for applying the sample extract. The SCCPs are eluted by 10 ml of a mixture
of n-heptane/acetone (98:2) which is concentrated to approx. 1,2 ml. It shall be noted that the column
shall never run dry.
This concentrate is used for the subsequently following GPC clean-up. Inject e.g 1 ml of the concentrate
and elute in a fraction between 12 ml and 13,5 ml. This fraction is concentrated again to, for example, 1 ml,
dried by sodium sulfate (6.8) and transferred into a sample vial for injection into the GC-MS.
When using a new column for the GPC clean-up, verify the eluent volume for complete elution of the
analytes of interest by analysing an appropriate standard solution and/or spiked sample extract.
Recoveries of SCCPs should be > 50 % and no interfering peak should appear in the gas chromatogram.
If necessary, GPC conditions need to be modified to meet these requirements.
NOTE 1 Alternative clean-up procedures, an extended column chromatographic clean-up (see Annex F) and
a modified gel chromatographic clean-up (see Annex G) can be used. The interferences quantified in Clause 4 of
this document apply only to the conditions described in this clause.
NOTE 2 Due to the physico-chemical properties of SCCP’s results in water higher than the LOD (limit of
detection) are very rare. The absence of SCCP can be proved by testing without the described clean up steps
only after drying the extract. If the peak areas of the specific mass ions are below the peak areas of the LOD, a
result < LOD can be reported.
9.4 Measurement and integration of the chromatogram
Optimize the operating conditions of the GC-ECNI-MS system, e.g. according to the manufacturer’s
instructions. Examples of the gas chromatographic conditions are given in Annex C.
Prior to analysis, verify the performance of the GC-ECNI-MS system by analysis of calibration standards.
Use as a minimum the calibration solutions “Lake Ontario water” and “Sediment Drevnice” to optimize
the GC-ECNI-MS system.
3) Shodex CLNpakPAE 800 AC® is an example of a suitable product available commercially. This example is given
only as information for the convenience of users of this document and does not constitute an endorsement by ISO of
this product.
8 © ISO 2019 – All rights reserved
Check the GC-ECNI-MS system performance regularly, for example between every 10 to 20 samples,
by independently prepared calibration solutions (see Table 3) with a concentration of e.g. 1 µg/ml
sum of SCCP.
The measurement is performed in the selected ion mode with four selected mass ion fragments (mass
to charge values, m/z), i.e. m/z 375, m/z 411, and m/z 423, m/z 449. The peak areas of the two masses,
m/z 375 and m/z 423, are used in the multiple linear regression calculation of the sum of SCCP’s. The
peak areas of m/z 411 and m/z 449 are used for an additional identification. This specific selection has
been carried out by data analysis to analyse the sum of SCCPs of a large variety of environmentally
occurring SCCP-mixtures. For an explanation of this selection, see Reference [4].
The integration of the different m/z values should be carried out within different retention time ranges
that are established from calibration solutions. Retention time ranges of chromatograms in Annex D
are given in Table 4 as an example.
Table 4 — Typical retention time ranges
Approximate retention time range Approximate retention time range of the
m/z value
a
response maximum
min min
375 6,6 to 9,0 7,1 to 8,2
411 7,0 to 8,8 7,4 to 8,2
423 7,0 to 9,0 7,5 to 8,4
449 7,0 to 8,7 7,5 to 8,2
a
This represents the major portion of the SCCPs for the mass ion fragment monitored and is represented by an
unresolved complex mixture of peaks.
An example for integration of a real sample is given in Annex H.
Use selected ion mode measurements for detecting the internal standard. Integrate the response of the
internal standard as a single peak with the following m/z values (see Table 5).
Table 5 — m/z values of internal standard
Internal standard substance m/z for quantification m/z optional
1,1,1,3,10,11-Hexachloroundecane 364 362
1,1,1,3,11,13,13,13-Octachlorotridecane 460 458
1,2,5,5,6,9,10-Heptachlorodecane 348 346
Examples with chromatograms of the mixtures are given in Annex D.
9.5 Calibration
9.5.1 General
Short-chain polychlorinated n-alkanes with 50 % to 67 % chlorine content are mixtures containing
approximately 6 000 congeners. SCCP compounds of different chlorine contents exhibit different
response factors in ECNI-MS. Interferences occur in the mass spectra because individual compounds
cannot be separated by GC.
Using multiple linear regression techniques quantification can be carried out to a large extent
independent of chlorine content. See Annex B and Reference [4].
While modern mass spectrometric software frequently does not enable multiple linear regression
techniques to be carried out, commercial software that does is available. See also the ready to use Excel
sheet accessible through the following link: http: //standards .iso .org/iso/12010/ed -2/en
9.5.2 Basic calibration
Analyse the calibration solutions (6.4) and integrate the responses as described in 9.4. Calibration is
carried out by multiple linear regression using Formula (1):
A A
1 2
ρ =+bb +b (1)
01 2
SCCPscal
∑
A A
IS IS
or in case of calibration only with m/z 411, using Formula (2):
A
ρ =+bb (2)
SCCPscal
∑
A
IS
where
ρ is the target concentration of the sum of SCCPs in the calibration solution, in micrograms
ΣSCCPscal
per millilitre, µg/ml;
b is the regression intercept, in micrograms per millilitre, µg/ml; use it if significant, oth-
erwise it is may be set to zero.
b , b are the regression coefficients, in micrograms per millilitre, µg/ml;
1 2
A , A are the peak areas of the analyte, e.g. m/z 375, m/z 423;
1 2
A is the peak area of the internal standard, e.g. m/z 460.
IS
The regression coefficients determined are used for quantification of unknown concentrations in
samples. Typical regression coefficients are given in Table 6. A graphical presentation of the three-
dimensional calibration area is given in B.3.
The graphical presentation of calculated against target sum concentrations of SCCPs is a suitable means
for two-dimensional graphical assessment of the goodness of fit. A typical example is given in Annex E,
using 9 calibration solutions in Table 3.
Table 6 — Typical regression coefficients for the sum of SCCP with 50 % to 67 % chlorine
content based on internal standardization
Regression coefficient Regression coefficient with Regression coeffi-
with associated standard associated standard devi- cient with associated
deviation (in brackets) ation (in brackets) for the standard deviation
for the mass ion fragment mass ion fragment (in brackets) for the
combination combination mass ion fragment
m/z 375 and m/z 423 m/z 411 and m/z 449 m/z 411
b b b
0 0 0
0,024 3; 0,079 3; 0,097 5
s(b ) = s(b ) = s(b ) =
0 0 0
0,010 2 0,060 1 0,062 3
Not significant Not significant
b (m/z 375) b (m/z 411) b (m/z 411)
1 1 1
Concentration range 0,117 7; 0,205 7; 0,141 9;
0,15 μg/ml to 0,6 μg/ml,
s(b ) = s(b ) = 0,053 79 s(b ) =
1 1 1
see Table 3
0,003 39 0,029 34
b (m/z 423) b (m/z 449)
2 2
10 © ISO 2019 – All rights reserved
Table 6 (continued)
Regression coefficient Regression coefficient with Regression coeffi-
with associated standard associated standard devi- cient with associated
deviation (in brackets) ation (in brackets) for the standard deviation
for the mass ion fragment mass ion fragment (in brackets) for the
combination combination mass ion fragment
m/z 375 and m/z 423 m/z 411 and m/z 449 m/z 411
0,029 4; −0,186 8;
s(b ) = s(b ) =
2 2
0,001 34 0,135 11
Standard deviation of the 0,015 2 0,095 8 0,101 9
predicted concentration
Correlation coefficient 0,996 0,825 0,769
The calibration should be checked with independent quality control mixtures of known concentrations
of the sum of SCCPs. Any variation in the expected values should not exceed specified levels. Typical
examples are shown in Annex A.
Verify the limit of quantification and the limit of detection according to, for example, ISO/TS 13530. Use
the graphical presentation of the goodness of fit (see Annex E) as a start-estimate of the concentration
of the limits of quantification and detection. Verify these measures in suitable matrix.
9.5.3 Identification and quantification with mass fragment combinations
Values based on mass ion fragment combinations m/z 375 and m/z 423 are used to quantify the
concentration, as this combination produces most precise results.
Identification criteria:
a) the chromatographic hump should be situated in the m/z specific retention time range of the
different SCCP-standard solutions (see Table 4);
b) the shape of the chromatographic hump should resemble the SCCP-standard patterns (see Annex D
and Annex H);
c) the calculated result based on m/z 411 (simple linear regression) or on m/z 411 and m/z 449
(negative results are a hint to MCCP-abundance) should not differ more than ±70 % of the result
based on m/z 375 and m/z 423. Higher deviations can be observed with single SCCP-mixtures
containing lower chlorine.
9.5.4 Calculation of the results
Calculate the results according to Formula (3) using the regression coefficients determined by the
calibration (see 9.5.2).
ρ
A A
IS,s
1 2
ρ =+bb +b (3)
01 2
SCCPs
∑
A A ρ
IS IS IS,cal
where
ρ is the concentration of the sum of SCCPs in the water sample, in micrograms per litre, µg/l;
ΣSCCPs
ρ is the concentration of the internal standard in the water sample, in micrograms per litre, µg/l;
IS,s
ρ is the concentration of the internal standard in the calibration solutions, in micrograms
IS,cal
per litre, µg/ml;
b , b , b are the regression coefficients, in micrograms per millilitre, known from Formula (1) or
0 1 2
Formula (2);
A , A are the peak areas of the analyte, e.g. m/z 375, m/z 423;
1 2
A is the peak area of the internal standard, e.g. m/z 460.
IS
9.5.5 Quality checks for internal standardization
Perform a linearity check according to ISO 8466-1 with the solutions, see e.g. Table 3.
Determine recovery rates of the internal standard after optimizing the clean-up procedure. Adjust,
differing from 9.3, the final volume to 1 ml. Then calculate the recovery rates of the internal standards
from Formula (4):
A
IS,s
R=×100% (4)
A
IS,cal
where
A is the average peak area of the internal standard in the calibration samples;
IS,cal
A is the peak area of the internal standard in a water sample.
IS,s
The minimum recovery rate of the internal standard in real samples is 25 %.
10 Expression of results
The analysis results obtained when applying this document are subject to a measurement uncertainty
that is to be considered in the interpretation of the results.
Report the results as the sum of SCCPs (with chlorine content between 50 % and 67 %), in micrograms
per litre, to two significant figures.
11 Test report
The test report shall contain at least the following information:
a) the test method used, together with a reference to this document, i.e. ISO 12010:2019;
b) identity of the sample;
c) expression of the results according to Clause 10;
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 12010
Deuxième édition
2019-03
Qualité de l'eau — Détermination
des alcanes polychlorés à chaîne
courte (SCCP) dans l'eau — Méthode
par chromatographie gazeuse-
spectrométrie de masse (CG-SM) avec
ionisation chimique négative (ICN)
Water quality — Determination of short-chain polychlorinated
alkanes (SCCP) in water — Method using gas chromatography-mass
spectrometry (GC-MS) and negative-ion chemical ionization (NCI)
Numéro de référence
©
ISO 2019
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2019
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publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
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Fax: +41 22 749 09 47
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2019 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Interférences . 2
6 Réactifs et étalons . 3
6.1 Solvants d’extraction et de préparation des solutions mères. 3
6.2 Solutions mères de SCCP de référence . 3
6.3 Solutions mères d’étalon interne préparées à partir de congénères individuels . . 5
6.4 Solutions d’étalonnage . 5
7 Appareillage . 6
8 Échantillonnage et prétraitement des échantillons . 7
9 Mode opératoire. 7
9.1 Extraction par la méthode d’extraction liquide-liquide . 7
9.2 Extraction contenant une quantité plus élevée de matières en suspension . 8
9.3 Purification de l’extrait . 8
9.4 Mesurage et intégration du chromatogramme . 9
9.5 Étalonnage .10
9.5.1 Généralités .10
9.5.2 Étalonnage de base .10
9.5.3 Identification et quantification au moyen de combinaisons de fragments
massiques.11
9.5.4 Calcul des résultats .12
9.5.5 Vérification qualité de l’étalonnage interne .12
10 Expression des résultats.12
11 Rapport d’essai .13
Annexe A (normative) Solutions pour les vérifications indépendantes de contrôle qualité .14
Annexe B (informative) Principe de l’étalonnage de la somme des SCCP par régression
linéaire multiple .16
Annexe C (informative) Conditions GC-MS typiques .22
Annexe D (informative) Chromatogrammes typiques obtenus avec les solutions étalons et
les solutions pour les vérifications de contrôle qualité à 1 µg/ml .25
Annexe E (informative) Représentation de la qualité de l’ajustement .31
Annexe F (normative) Purification alternative par chromatographie sur colonne .32
Annexe G (informative) Purification alternative par chromatographie d’exclusion stérique .35
Annexe H (informative) Chromatogrammes d’échantillons réels de MES .36
Annexe I (informative) Données de performance .39
Bibliographie .41
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant : www .iso .org/iso/fr/avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 147, Qualité de l’eau, sous-comité
SC 2, Méthodes physiques, chimiques et biochimiques.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 12010:2012), qui a fait l’objet d’une
révision technique. Les principales modifications par rapport à l’édition précédente sont les suivantes :
— les valeurs m/z (rapports masse/charge) pour la quantification et l’identification ;
— les solutions d’étalonnage ;
— le mode opératoire de purification par chromatographie d’exclusion stérique ;
— la réduction de l’impact des interférences.
iv © ISO 2019 – Tous droits réservés
Introduction
Il convient que l’utilisateur ait à l’esprit que des problèmes particuliers sont susceptibles de nécessiter
la spécification de conditions secondaires supplémentaires.
Le présent document produit des effets de synergie dans le travail pratique de laboratoire. Les points
suivants permettent de combiner partiellement l’analyse d’eau et de sédiments :
[2]
1) même combinaison de masse que pour l’analyse de sédiments (voir l’ISO 18635 );
2) mêmes solutions d’étalonnage que pour l’analyse de sédiments (voir l’ISO 18635) ;
3) même purification par chromatographie d’exclusion stérique que pour l’analyse de sédiments
(voir l’ISO 18635).
NORME INTERNATIONALE ISO 12010:2019(F)
Qualité de l'eau — Détermination des alcanes polychlorés
à chaîne courte (SCCP) dans l'eau — Méthode par
chromatographie gazeuse-spectrométrie de masse (CG-SM)
avec ionisation chimique négative (ICN)
AVERTISSEMENT — Il convient que l’utilisateur du présent document connaisse bien les
pratiques courantes de laboratoire. Le présent document n’a pas pour but de traiter tous les
problèmes de sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son utilisation. Il relève de la responsabilité
de l’utilisateur d’établir des pratiques de santé et de sécurité appropriées.
IMPORTANT — Il est absolument essentiel que les essais réalisés conformément au présent
document soient exécutés par un personnel ayant reçu une formation adéquate.
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de détermination quantitative de la somme des n-alcanes
polychlorés à chaîne courte également connus sous le nom de paraffines polychlorées à chaîne courte
(SCCP), ayant une chaîne carbonée comprise entre n-C et n-C inclus, dans des mélanges dont la
10 13
fraction massique (« teneur ») de chlore varie de 50 % à 67 %, contenant environ 6 000 des environ
8 000 congénères.
Cette méthode est applicable à la détermination de la somme des SCCP dans les eaux de surface, les
eaux souterraines, l’eau potable et les eaux usées non filtrées, par chromatographie en phase gazeuse
couplée à la spectrométrie de masse (GC-MS) en mode d’ionisation négative par capture d’électrons
(GC-ECNI-MS).
En fonction de la capacité de l’instrument de GC-ECNI-MS, la plage de concentration de la méthode se
situe entre 0,1 µg/l ou inférieur et 10 µg/l. Selon la matrice de l’échantillon d’eau usée, la plus petite
concentration détectable est estimée comme étant > 0,1 µg/l. Les données de l’essai interlaboratoires
portant sur cette méthode sont présentés dans l’Annexe I.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 5667-1, Qualité de l'eau — Échantillonnage — Partie 1: Lignes directrices pour la conception des
programmes et des techniques d'échantillonnage
ISO 5667-3, Qualité de l'eau — Échantillonnage — Partie 3: Conservation et manipulation des
échantillons d'eau
ISO 8466-1, Qualité de l'eau — Étalonnage et évaluation des méthodes d'analyse et estimation des
caractères de performance — Partie 1: Évaluation statistique de la fonction linéaire d'étalonnage
ISO/TS 13530, Qualité de l'eau — Lignes directrices pour le contrôle de qualité analytique pour l'analyse
chimique et physicochimique de l'eau
3 Termes et définitions
Aucun terme n’est défini dans le présent document.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes :
— ISO Online browsing platform : disponible à l’adresse https: //www .iso .org/obp ;
— IEC Electropedia : disponible à l’adresse http: //www .electropedia .org/.
4 Principe
Détermination de la somme des SCCP ayant une chaîne carbonée comprise entre n-C et n-C inclus,
10 13
dans des mélanges techniques et environnementaux reconstitués dont la fraction massique (« teneur »)
de chlore varie entre 50 % et 67 % (soit, par exemple, environ 4 atomes à 10 atomes de chlore par
molécule en moyenne) et demeure indépendante du mode de répartition des chaînes carbonées des
congénères. Il n’est pas nécessaire de chercher à connaître la teneur en chlore.
La somme des SCCP analysée comprend la diversité des SCCP avec leurs différentes teneurs en chlore et
leurs différents modes de répartition des chaînes carbonées telles que rencontrées dans les mélanges
techniques, ainsi que dans les compositions présentes dans l’environnement (Références [5] à [9]).
Les SCCP dans les échantillons d’eau brute sont dopés avec un étalon interne et extraits par extraction
liquide-liquide avec un solvant organique. L’étape d’enrichissement de l’échantillon est suivie d’une
étape de purification destinée à éliminer les substances interférentes. La chromatographie en phase
gazeuse (GC) est effectuée sur une colonne capillaire courte, sur une plage étroite de temps de rétention.
La détection des fragments correspondant aux masses sélectionnées est réalisée par spectrométrie de
masse (MS) en mode suivi d’ions sélectionnés, fonctionnant en mode d’ionisation négative par capture
électronique (ECNI). Les fragments massiques et les compositions des solutions d’étalonnage utilisées
dans le présent document sont essentiels pour l’analyse de la somme des SCCP (voir les Références [3]
et [4]).
Le chromatogramme de l’ion sélectionné est intégré sur la totalité de la plage de temps de rétention
des SCCP. La détermination quantitative de la somme des SCCP est effectuée après réalisation d’un
étalonnage par régression linéaire multiple. L’étalonnage nécessite au moins les trois mélanges étalons
de compositions différentes spécifiés, dopés par ajout d’un étalon interne.
Ces mélanges étalons reproduisent différents mélanges rencontrés dans l’environnement. Dans cette
méthode, seule la quantification par régression linéaire multiple avec trois mélanges spécifiques
permet la quantification de la diversité des mélanges observés de SCCP dans l’environnement et dans
les compositions techniques, décrite dans l’Article 1 et dans les Références [3] et [4]. Il est impossible
d’utiliser uniquement un mélange de référence pour cette tâche complexe.
La méthode permet de quantifier la somme des SCCP, potentiellement avec une incertitude de mesure
étendue inférieure à 50 %.
5 Interférences
Les interférences non spécifiques liées à la matrice ou provenant d’autres sources environnementales
sont prises en compte en appliquant une étape de purification. Une réduction supplémentaire des effets
de matrice peut être atteinte en réduisant le pouvoir de résolution du spectromètre de masse, par
exemple à 0,4 u, ce qui est souvent possible avec un analyseur quadripolaire. Les valeurs m/z exactes
sont 374,958 8 ; 410,916 9 ; 422,935 5 ; 448,810 6 (voir la Référence [8]).
En appliquant le mode opératoire complet à l’aide du mode opératoire de purification donné en 9.3, une
sélection des polluants chlorés a été soumise à essai et aucun ne s’est avéré provoquer des interférences
en dessous des concentrations données dans le Tableau 1.
2 © ISO 2019 – Tous droits réservés
Tableau 1 — Niveau de concentration maximal qui ne produit aucune interférence supérieure à
la limite de quantification de 0,1 µg/l
Niveau de concentration maximal
qui ne produit aucune interférence
Composés susceptibles de provoquer des interférences
supérieure à la limite de
quantification de 0,1 µg/l
a
Aroclor 1262 1,25 µg/l
a
Aroclor 1242 10 µg/l
a
Aroclor 1221 10 µg/l
Camphechlor (toxaphène) 1,75 µg/l
a
Halowax 1014 10 µg/l
a
Halowax 1051 0,4 µg/l
MCCP (n-alcanes chlorés à chaîne moyenne en C -C ) 42 % de chlore 10 µg/l
14 17
MCCP (n-alcanes chlorés à chaîne moyenne en C -C ) 52 % de chlore 6 µg/l
14 17
MCCP (n-alcanes chlorés à chaîne moyenne en C -C ) 57 % de chlore 10 µg/l
14 17
a Aroclor 1262, Aroclor 1242, Aroclor 1221, Halowax 1014 et Halowax 1051 sont des exemples de produits appropriés
disponibles dans le commerce. Ces exemples sont donnés à l’intention des utilisateurs du présent document et ne signifient
nullement que l’ISO approuve ou recommande l’emploi exclusif des produits ainsi désignés.
6 Réactifs et étalons
Utiliser des solvants et des réactifs de pureté suffisante, c’est-à-dire renfermant des concentrations de
SCCP suffisamment faibles pour être négligées (par exemple, inférieures à la limite de détection de la
méthode). Soumettre régulièrement des blancs à l’intégralité du mode opératoire pour vérifier qu’ils
sont satisfaisants et assurer ainsi un contrôle analytique correct.
6.1 Solvants d’extraction et de préparation des solutions mères
Le solvant d’extraction est le n-heptane. D’autres solvants non polaires, tels que le n-hexane (C H )
6 14
ou le cyclohexane (C H ) peuvent être employés, à condition d’obtenir des rendements d’extraction
6 12
comparables à ceux du n-heptane.
Utiliser du triméthyl-2,2,4-pentane (C H , isooctane) pour le conditionnement des flacons en verre (7.1).
8 18
Pour la préparation de la solution mère et des dilutions de l’étalon interne, utiliser de la propanone
(acétone), C H O.
3 6
Pour le conditionnement des colonnes de purification, utiliser des mélanges de n-heptane et de
propanone (acétone).
Pour la première étape d’élution des matières en suspension filtrées, utiliser le méthanol (CH OH).
6.2 Solutions mères de SCCP de référence
Utiliser des solutions du commerce, par exemple dans le cyclohexane ou le n-hexane, de mélanges
simples de congénères SCCP de longueur de chaîne carbonée définie, et de différentes teneurs en chlore
connues (voir les deux premières colonnes du Tableau 2). Sinon, employer des solutions prêtes à l’emploi
disponibles dans le commerce avec la même composition.
Des mélanges de solutions synthétiques ont été utilisés pour simuler des SCCP ou des mélanges
techniques de SCCP rencontrés dans l’environnement. Par exemple, la solution mère d’étalonnage
mélangée synthétique « Eau du lac Ontario » est mélangée pour ressembler à l’eau du lac Ontario, tel
que décrit dans la Référence [6]. Sa caractéristique est une teneur relativement élevée en C à C ,
10 12
particulièrement en C , et une faible teneur en chlore, tel que cela a été également partiellement relevé
dans les échantillons d’eau. La solution mère d’étalonnage mélangée synthétique « Perche » simule une
répartition des chaînes carbonées trouvées dans une perche (voir la Référence [7]). Le mélange étalon
« Sédiment Drevnice » simule un mélange naturel décrit à propos d’un sédiment provenant du cours
d’eau Drevnice (voir la Référence [8]), avec une haute teneur en C et une teneur en chlore plus élevée.
Les compositions des solutions d’étalonnage ainsi que des solutions d’assurance qualité indépendantes
sont obligatoires pour obtenir la quantification de la diversité des mélanges de SCCP.
Préparer les solutions « Eau du lac Ontario », « Perche » et « Sédiment Drevnice » conformément au
Tableau 2.
Tableau 2 — Solutions mères de substances de référence
Solutions mères de substances de
référence selon 6.2
Solutions étalons commercialement disponibles
(Mélanges synthétiques de solutions étalons,
proches de la composition des mélanges
environnementaux, ng/ml)
« Eau du lac « Sédiment
Teneur en chlore
« Perche »
Longueur
Ontario » Drevnice »
des mélanges des Nombre moyen d’atomes
de la
chaînes carbonées de chlore dans les
Teneur en Teneur en Teneur en
chaîne
individuelles (%), molécules (calculé) a a a
chlore chlore chlore
n-alcane
tel que certifiée
50,2 % 60,6 % 65,0 %
C 50,18 3,97 1 000
C 55,00 4,79 1 000
C 60,09 5,86 500
C 65,02 7,16 1 100 280
C 45,50 3,63 1 000
C 50,21 4,37 1 000
C 55,20 5,31 600
C 60,53 6,55 1 000 500
C 65,25 7,94 3 000 660
C 45,32 3,93 2 000
C 50,18 4,76 2 000 800
C 55,00 5,74 2 000 2 000
C 65,08 8,59 900 1 000
C 69,98 10,62 830
C 59,98 7,56 100 730
C 65,18 9,34 6 000
Somme des SCCP (ng/ml) 10 000 10 000 10 000
a
La teneur en chlore des mélanges est calculée en tant que moyenne pondérée.
Conserver les solutions préparées au réfrigérateur entre 2 °C et 8 °C. À condition d’éviter toute perte de
solvant par évaporation, les solutions peuvent être utilisées pendant cinq ans.
Utiliser également des solutions du commerce, par exemple dans le cyclohexane ou le n-hexane, des
solutions mères de substances de référence de SCCP (voir les trois dernières colonnes du Tableau 2), par
1)
exemple la solution DRE-ZS22102105HP . Voir la Référence [8].
1) DRE-ZS22102105HP est un exemple de solution adaptée commercialement disponible. Ces exemples sont
donnés à l’intention des utilisateurs du présent document et ne signifient nullement que l’ISO approuve ou
recommande l’emploi exclusif des produits ainsi désignés.
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6.3 Solutions mères d’étalon interne préparées à partir de congénères individuels
Préparer, à partir de solutions étalons de congénères individuels proposées dans le commerce, une
solution mère dans la propanone (acétone) (6.1), à une concentration de, par exemple, 1 µg/ml.
Par exemple, des congénères individuels de SCCP de teneur en chlore entre 50 % et 67 % conviennent
comme étalons internes :
— hexachloro-1,1,1,3,10,11-undécane, par exemple à 0,1 µg/ml ;
— octachloro-1,1,1,3,11,13,13,13-tridécane, par exemple à 0,1 µg/ml ;
— heptachloro-1,2,5,5,6,9,10-décane, par exemple à 0,01 µg/ml.
NOTE 1 Les différents congénères de SCCP individuels utilisés comme étalons internes contribuent à la
quantité totale de SCCP dans les échantillons environnementaux. Cette contribution est cependant < 1 % environ,
ce qui signifie que l’augmentation de l’incertitude de mesure est négligeable.
NOTE 2 Des congénères de SCCP individuels différents peuvent engendrer des facteurs de réponse différents ;
il peut par conséquent s’avérer nécessaire d’utiliser des concentrations différentes.
Sous réserve de validation, d’autres congénères SCCP individuels peuvent être utilisés comme étalon
interne s’ils présentent les mêmes propriétés que les SCCP à doser sur la totalité du processus analytique.
Les solutions peuvent être conservées au réfrigérateur, entre 2 °C et 8 °C.
6.4 Solutions d’étalonnage
Utiliser les mélanges étalons conformément au Tableau 2. Préparer neuf solutions d’étalonnage au
minimum (voir le Tableau 3), à des concentrations conformes à la capacité de détection du spectromètre
de masse. Combiner et diluer les solutions (6.2) et la solution d’étalon interne (6.3) avec du n-heptane,
de manière à préparer des solutions correspondant à la plage d’étalonnage.
Tableau 3 — Solutions d’étalonnage
Étalon interne
« Eau du lac « Sédiment
« Perche »
par exemple, octachloro-
Ontario » Drevnice »
Somme des SCCP, 1,1,1,3,11,13,13,13-tridécane
µg/ml µg/ml µg/ml µg/ml µg/ml
0,15 0,15 0,1
0,15 0,15 0,1
0,15 0,15 0,1
0,3 0,3 0,1
0,3 0,3 0,1
0,3 0,3 0,1
0,6 0,6 0,1
0,6 0,6 0,1
0,6 0,6 0,1
Les solutions peuvent être stockées au réfrigérateur entre 2 °C et 8 °C pendant au moins six mois.
Vérifier avant utilisation la concentration des solutions d’étalonnage par rapport à un étalon préparé de
manière indépendante.
Des solutions de contrôle qualité doivent être préparées pour vérifier l’étalonnage de façon
indépendante. À cet effet, utiliser les mélanges tel qu’indiqué dans l’Annexe A.
6.5 Extraction des matières auxiliaires et de purification
6.5.1 Poudre de cuivre, granulométrie < 63 µm. La poudre de cuivre est utilisée pendant l’étape de
purification, pour éliminer le soufre et les composants soufrés de la matrice.
6.5.2 Acide chlorhydrique, 2 mol/l, utilisé pour activer le cuivre dans la colonne de purification.
6.5.3 Oxyde d’aluminium, Al O , neutre, haute activité (10 % d’eau).
2 3
6.5.4 Laine de verre
6.6 Gaz vecteurs, pour GC-MS, de grande pureté et conformes aux spécifications du fabricant.
6.7 Azote, N , pureté ≥ 99,996 % en fraction volumique, pour concentrer les solutions.
6.8 Sulfate de sodium, anhydre, Na SO , sous forme de poudre.
2 4
6.9 Solution d’essai pour la vérification de la linéarité des étalons internes
Préparer des solutions contenant l’étalon interne utilisé, aux concentrations de 0,1 µg/ml, 0,5 µg/ml et
1 µg/ml.
7 Appareillage
Il convient que la verrerie et le matériel susceptibles d’entrer en contact avec les échantillons d’eau ou
les extraits soient exempts de substances interférentes.
Nettoyer toute la verrerie de laboratoire en la rinçant à la propanone (acétone) (6.1).
7.1 Flacons en verre à fond plat, à épaulement conique, 1 000 ml, pour le prélèvement des
échantillons d’eau, de préférence munis de bouchons en verre.
Le flacon de prélèvement doit permettre de réaliser une extraction de l’échantillon directement dans
le flacon.
Avant utilisation, le conditionner en rinçant le flacon de prélèvement sec avec par exemple 2 ml
d’isooctane (6.1). Puis le renverser et laisser le solvant s’écouler et s’évaporer.
7.2 Dispositif d’évaporation, par exemple évaporateur rotatif ou système d’évaporation sous azote.
[1]
7.3 Séparateur, par exemple micro-séparateur conforme à l’ISO 6468 ampoule à décanter ou tout
autre dispositif adapté permettant de séparer des phases.
7.4 Flacons, compatibles avec le passeur d’échantillons du GC (de capacité 1,5 ml, par exemple).
7.5 Colonne chromatographique, de diamètre intérieur 10 mm, vide, pour la purification.
7.6 Chromatographe en phase gazeuse, à température programmable, muni de tous les accessoires
requis, parmi lesquels les gaz, la colonne capillaire, l’injecteur avec division/sans division de débit et le
détecteur à spectromètre de masse équipé de l’option d’ionisation chimique négative et du gaz réactant
approprié (CH ).
7.7 Fioles jaugées, 1 ml, 2 ml, 10 ml et 25 ml.
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7.8 Pipettes Pasteur jetables en verre, par exemple de 150 mm ou 250 mm.
7.9 Seringues, 2 µl, 5 µl, 10 µl et 50 µl.
7.10 Colonne analytique
Colonne en silice fondue garnie d’une phase séparatrice moyennement polaire ou non polaire à faible
relargage (voir des exemples dans l’Annexe C) ; par exemple de diamètre intérieur < 0,25 mm, de
longueur 15 m et d’épaisseur de film 0,1 µm.
7.11 Filtre en fibre de verre, sans liant, porosité fine (rétention des particules < 0,45 µm).
7.12 Dispositif de filtration sous vide, volume 1 l.
7.13 Dispositif d’agitation ou agitateur magnétique (avec barreau magnétique).
7.14 Système de purification par chromatographie d’exclusion stérique (avec conception
modulaire).
7.14.1 Pompe, injecteur d’échantillonnage, casier à échantillons, échantillonneur de fraction
2)
7.14.2 Colonne de chromatographie d’exclusion stérique : Shodex CLNpakPAE 800 AC® , porosité
maximale 40 nm, dimensions de colonne 80 mm (diamètre interne) × 300 mm (longueur).
8 Échantillonnage et prétraitement des échantillons
Prélever les échantillons comme spécifié dans l’ISO 5667-1 et l’ISO 5667-3. Utiliser des flacons en verre
conditionnés (7.1) pour prélever les échantillons d’eau (1 l par échantillon). Ne pas remplir complètement
les flacons de prélèvement (par exemple les remplir jusqu’à l’épaulement) de façon à pouvoir ajouter le
solvant d’extraction.
Les échantillons sont soumis à extraction sans filtration préalable. Les solides en suspension ne sont
pas éliminés avant l’analyse.
Peser le flacon de prélèvement avec son contenu et son bouchon, à 1 g près, et noter la masse pour
une utilisation ultérieure. Secouer vigoureusement le flacon pour homogénéiser l’échantillon d’eau.
Ajouter la solution d’étalon interne (6.3) pour obtenir, par exemple, une concentration de 0,1 µg/l dans
l’échantillon d’eau. Noter la masse, en microgrammes, d’étalon interne ajoutée. Secouer vigoureusement
le flacon.
9 Mode opératoire
9.1 Extraction par la méthode d’extraction liquide-liquide
Ajouter 10 ml de solvant d’extraction, le n-heptane (6.1), dans le flacon, puis agiter ou secouer celui-
ci (7.13) vigoureusement pendant environ 2 h, afin de réaliser l’extraction directement dans le flacon
de prélèvement. Laisser les phases se séparer et utiliser le séparateur (7.3) pour recueillir l’extrait
organique dans un tube distinct. Si une émulsion se forme, la casser en la centrifugeant et/ou en
ajoutant du sulfate de sodium (6.8) dans le tube. Éliminer la phase aqueuse résiduelle. Transférer le
solvant du tube dans le dispositif d’évaporation (7.2) ou évaporer précautionneusement le solvant sous
un léger courant d’azote (6.7) (à une température de 40 °C) jusqu’à 1 ml environ. Peser le flacon de
2) Shodex CLNpakPAE 800 AC est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cet exemple est
donné à titre pratique aux utilisateurs du présent document et ne signifie nullement l’approbation de ce produit par
l’ISO.
prélèvement vide et son bouchon, à 1 g près. Calculer le volume d’eau extrait et la concentration d’étalon
interne dans l’eau.
Poursuivre comme indiqué en 9.3.
9.2 Extraction contenant une quantité plus élevée de matières en suspension
Si la quantité de matières en suspension est supérieure à environ 200 mg/l, filtrer l’échantillon sur un
filtre en fibre de verre (7.11) et recueillir le filtrat dans le flacon (7.1).
Peser le flacon de prélèvement vide et son bouchon, à 1 g près. Calculer le volume d’eau extrait et la
concentration d’étalon interne dans l’eau.
Ajouter 10 ml de méthanol sur le filtre, sans appliquer de vide, pour extraire séparément les matières en
suspension. Laisser le filtre s’imprégner pendant 5 min, puis appliquer le vide pour ajouter le méthanol
au filtrat d’échantillon préalablement recueilli.
Ajouter 10 ml de n-heptane sur le filtre, sans appliquer de vide, et le laisser s’imprégner pendant encore
5 min, puis appliquer un faible vide pour ajouter le n-heptane au filtrat d’échantillon préalablement
recueilli.
Agiter ou secouer (7.13) vigoureusement le mélange pendant environ 2 h, afin de réaliser l’extraction
directement dans le flacon de prélèvement. Laisser les phases se séparer et utiliser le séparateur
(7.3) pour recueillir l’extrait organique dans un tube distinct. Si une émulsion se forme, la casser
en la centrifugeant et/ou en ajoutant du sulfate de sodium (6.8) dans le tube. Éliminer la phase
aqueuse résiduelle. Transférer le solvant du tube dans le dispositif d’évaporation (7.2) ou évaporer
précautionneusement le solvant sous un léger courant d’azote (6.7) (à une température de 40 °C) jusqu’à
1 ml environ.
9.3 Purification de l’extrait
Souvent, les composés provenant de la matrice peuvent être éliminés par l’étape b) uniquement.
Un mode opératoire de purification en deux étapes [a) et b)] doit être effectué pour les teneurs
matricielles élevées.
Commencer la procédure de purification avec l'extrait concentré à environ 1 mL dans du n-heptane :
a) purification par colonne chromatographique avec 2 g de poudre de cuivre (6.5.1) activée et 2 g
d’Al O , neutre, haute activité (6.5.3) ;
2 3
3)
b) purification par chromatographie d’exclusion stérique (7.14), avec Shodex CLNpakPAE 800 AC® ,
8,0 mm × 300 mm et 0,5 ml/min de propanone (acétone) comme éluant.
Verser la poudre de cuivre dans une colonne en verre avec un tampon de laine de verre. Activer le cuivre
en ajoutant 10 ml d’acide chlorhydrique à 2 mol/l (6.5.2). Laisser tout l’acide chlorhydrique (6.5.2)
s’imprégner dans la poudre de cuivre avant de rincer la colonne, d’abord avec 25 ml d’eau, puis avec
20 ml d’acétone pour éliminer l’acide et l’eau de la colonne. Un robinet peut alors être relié à la partie
inférieure de la colonne pour contrôler la progression de l’élution. Une fois que le niveau de solvant a
atteint le niveau supérieur de la poudre de cuivre, rincer la couche de cuivre avec 3 × 2 ml de n-heptane.
Ajouter ensuite 2 g d’oxyde d’aluminium (10 % d’eau) et environ 10 ml de n-heptane pour obtenir une
colonne-sandwich de cuivre/oxyde d’aluminium. La colonne humide est utilisée pour appliquer l’extrait
d’échantillon. Les SCCP sont élués par 10 ml d’un mélange de n-heptane/acétone (98:2), concentré
ensuite à environ 1,2 ml. Il doit être signalé que la colonne ne doit jamais être sèche.
Ce concentré est utilisé pour la purification par chromatographie d’exclusion stérique subséquente.
Injecter par exemple 1 ml du concentré et éluer dans une fraction entre 12 ml et 13,5 ml. La fraction est
3) Shodex CLNpakPAE 800 AC est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cet exemple est
donné uniquement à titre informatif à l’intention des utilisateurs du présent document et ne signifie nullement que
l’ISO approuve ou recommande l’emploi exclusif du produit ainsi désigné.
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concentrée une nouvelle fois à, par exemple, 1 ml, séchée à l’aide de sulfate de sodium (6.8) et transférée
dans un flacon pour échantillons pour être injectée dans le GC-MS.
Quand une nouvelle colonne est utilisée pour la purification par chromatographie d'exclusion stérique,
vérifier le volume d’éluant pour l’élution complète des analytes d’intérêt en analysant une solution
étalon et/ou un extrait d’échantillon dopé appropriés. Il convient que les taux de récupération des SCCP
soient > 50 % et qu’aucun pic interférent n’apparaisse dans le chromatogramme en phase gazeuse.
Si nécessaire, les conditions de chromatographie d’exclusion stérique peuvent être modifiées pour
satisfaire à ces exigences.
NOTE 1 Des modes opératoires de purification alternatifs, une purification par colonne chromatographique
étendue (voir l’Annexe F) et une purification par chromatographie d’exclusion stérique modifiée (voir l’Annexe G)
peuvent être utilisés. Les interférences quantifiées dans l’Article 4 du présent document s’appliquent uniquement
aux conditions décrites dans le présent article.
NOTE 2 En raison des propriétés physico-chimiques des SCCP, il est très rare que les résultats dans l’eau soient
supérieurs à la limite de détection (LD). L’absence de SCCP peut être prouvée par des essais sans les étapes de
purification décrites, uniquement après le séchage de l’extrait. Si les aires de pic des ions de masses spécifiques
sont inférieures aux aires de pic de la LD, un résultat < LD peut être consigné.
9.4 Mesurage et intégration du chromatogramme
Optimiser les conditions opératoires du système GC-ECNI-MS, par exemple conformément aux
instructions du fabricant. L’Annexe C donne un exemple de conditions pour la chromatographie en
phase gazeuse.
Avant l’analyse, vérifier les performances du système GC-ECNI-MS en analysant les solutions
d’étalonnage. Utiliser au moins les solutions d’étalonnage « Eau du lac Ontario » et « Sédiment Drevnice »
pour optimiser le système GC-ECNI-MS.
Vérifier régulièrement les performances du système GC-ECNI-MS, par exemple tous les 10 à
20 échantillons, à l’aide des solutions d’étalonnage préparées indépendamment (voir Tableau 3), avec
une concentration de par exemple 1 µg/ml de la somme des SCCP.
Le mesurage est effectué en mode de suivi d’ions sélectionnés, sur une sélection de quatre fragments
(valeurs masse/charge, m/z), à savoir m/z 375, m/z 411 et m/z 423, m/z 449. Les aires de pic des deux
masses, m/z 375 et m/z 423, sont utilisées dans le calcul de la somme des SCCP par régression linéaire
multiple. Les aires de pic de m/z 411 et m/z 449 sont utilisées pour une identification supplémentaire.
Cette sélection spécifique a été réalisée par une analyse de données en analysant la somme des SCCP
d’une grande diversité de mélanges de SCCP rencontrés dans l’environnement. Pour une explication de
cette sélection, voir la Référence [4].
Il convient de réaliser l’intégration des différentes valeurs m/z sur des plages de temps de rétention
différentes, déterminées à partir des solutions d’étalonnage. Les plages de temps de rétention des
chromatogrammes dans l’Annexe D sont indiquées dans le Tableau 4 à titre d’exemple.
Tableau 4 — Plages de temps de rétention types
Plage de temps de rétention Plage de temps de rétention approximatif
Valeur m/z
a
approximatif maximal de la réponse
min min
375 6,6 à 9,0 7,1 à 8,2
411 7,0 à 8,8 7,4 à 8,2
423 7,0 à 9,0 7,5 à 8,4
449 7,0 à 8,7 7,5 à 8,2
a Plage correspondant à la majeure partie des SCCP pour le fragment d’ion de masse mesuré. Elle est représentée par un
mélange complexe de pics non séparés.
Un exemple d’intégration d’un échantillon réel est donné dans l’Annexe H.
Effectuer des mesurages en mode de suivi d’ions sélectionnés pour détecter l’étalon interne. Intégrer
la réponse de l’étalon interne sous la forme d’un pic unique, avec les valeurs de m/z suivantes (voir le
Tableau 5).
Tableau 5 — Valeurs m/z de l’étalon interne
Substance étalon interne m/z pour quantification m/z facultatif
Hexachloro-1,1,1,3,10,11 undécane 364 362
Octachloro-1,1,1,3,11,13,13,13 tridécane 460 458
Heptachloro-1,2,5,5,6,9,10 décane 348 346
Des exemples de chromatogrammes obtenus pour ces mélanges sont donnés dans l’Annexe D.
9.5 Étalonnage
9.5.1 Généralités
Les n-alcanes polychlorés à chaîne courte à teneur en chlore de 50 % à 67 % sont des mélanges contenant
environ 6 000 congénères. Les composés SCCP ayant des teneurs en chlore différentes génèrent des
facteurs de réponse différents en ECNI-MS. Des interférences se produisent dans le spectre de masse,
car les composés individuels ne peuvent pas être séparés par GC.
L’utilisation de techniques de régression linéaire multiple permet d’effectuer une quantification en
grande partie indépendante de la teneur en chlore. Voir l’Annexe B et la Référence [4].
Les logiciels de spectrométrie de masse actuels ne permettent pas, pour la plupart, d’appliquer
des régressions linéaires multiples. Il existe cependant dans le commerce des logiciels qui offrent
cette possibilité. Voir également la feuille Excel prête à l’emploi, accessible par le lien suivant : http:
//standards .iso .org/iso/12010/ed -2/en.
9.5.2 Étalonnage de base
Analyser les solutions d’étalonnage (6.4) et intégrer les réponses comme décrit en 9.4. L’étalonnage est
effectué par régression linéaire multiple, à l’aide de la Formule (1) :
A A
1 2
ρ =+bb +b (1)
01 2
SCCPscal
∑
A A
IS IS
ou en cas d’étalonnage uniquement avec m/z 411, à l’aide de la Formule (2) :
A
ρ =+bb (2)
SCCPscal
∑
A
IS
où
ρ est la concentration cible de la somme des SCCP dans la solution d’étalonnage, en
ΣSCCPscal
microgrammes par millilitre, µg/ml ;
b est l’ordonnée à l’origine de la ligne de régression, en microgrammes par millilitre, µg/ml ;
à utiliser si pertinente ; dans le cas contraire, elle peut être définie sur zéro ;
b , b sont les coefficients de régression, en microgrammes par millilitre, µg/ml ;
1 2
A , A sont les aires des pics de l’analyte, par exemple m/z 375, m/z 423 ;
1 2
A est l’aire du pic de l’étalon interne, par exemple m/z 460.
IS
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Les coefficients de régression déterminés sont utilisés pour quantifier les concentrations inconnues
dans les échantillons. Les coefficients de régression typiques sont présentés dans le Tableau 6. Une
représentation graphique de la surface d’étalonnage tridimensionnelle est donnée en B.3.
La représentation graphique de la concentration de la somme calculée des SCCP en fonction de la
concentration cible constitue un moyen adéquat pour une évaluation graphique bidimensionnelle de la
qualité de l’ajustement. Un exemple typique, obtenu à partir des 9 solutions d’étalonnage du Tableau 3,
est indiqué dans l’Annexe E.
Tableau 6 — Coefficients de régression typiques pour la somme de SCCP ayant une teneur en
chlore de 50 % à 67 %, en appliquant une méthode avec étalon interne
Coefficient de régression Coefficient de régression Coefficient de
avec écart-type associé avec écart-type associé régression avec
(entre parenthèses), (entre parenthèses), écart-type associé
pour la combinaison de pour la combinaison de (entre parenthèses),
fragments d’ion de masse fragments d’ion de masse pour le fragment
d’ion de masse
m/z 375 et m/z 423 m/z 411 et m/z 449 m/z 411
b b b
0 0 0
0,024 3 ; 0
...
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