ISO 4134:1999

Meat and meat products — Determination of L-(+)- glutamic acid content — Reference method

This International Standard specifies a reference method for the determination of the L-(+)-glutamic acid content of meat and meat products, including poultry.

Viande et produits à base de viande — Détermination de la teneur en acide L-(+)-glutamique — Méthode de référence

La présente Norme internationale spécifie une méthode de référence pour la détermination de la teneur en acide L-(+)-glutamique des viandes et produits à base de viande, y compris la volaille.

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 24-Nov-1999
• Withdrawal Date: 24-Nov-1999
• ICS: 67.120.10 - Meat and meat products
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 6 - Meat, poultry, fish, eggs and their products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 6 - Meat, poultry, fish, eggs and their products
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 23-Jul-2021

Relations

• Revised: ISO 4134:2021 - Meat and meat products — Determination of L-(+)-glutamic acid content — Reference method
• Effective Date: 23-Apr-2020
• Revises: ISO 4134:1978 - Meat and meat products — Determination of L-(+)- glutamic acid content — Reference method
• Effective Date: 15-Apr-2008

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 4134
Second edition
1999-12-01
Meat and meat products — Determination
of L-(+)-glutamic acid content — Reference
method
Viande et produits à base de viande — Détermination de la teneur
en acide L-(+)-glutamique — Méthode de référence
A
Reference number
ISO 4134:1999(E)

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ISO 4134:1999(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO
member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical
committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting.
Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
International Standard ISO 4134 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Agricultural food products,
Subcommittee SC 6, Meat and meat products.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 4134:1978), which has been technically revised.
Annex A is a normative part of this International Standard. Annexes B and C are for information only.
©  ISO 1999
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means, electronic
or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from the publisher.
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Printed in Switzerland
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INTERNATIONAL STANDARD  © ISO ISO 4134:1999(E)
Meat and meat products — Determination
of L-(+)-glutamic acid content — Reference method
1 Scope
This International Standard specifies a reference method for the determination of the L-(+)-glutamic acid content of
meat and meat products, including poultry.
2 Normative references
The following normative documents contain provisions which, through reference in this text, constitute provisions of
this International Standard. For dated references, subsequent amendments to, or revisions of, any of these
publications do not apply. However, parties to agreements based on this International Standard are encouraged to
investigate the possibility of applying the most recent editions of the normative documents indicated below. For
undated references, the latest edition of the normative document referred to applies. Members of ISO and IEC
maintain registers of currently valid International Standards.
ISO 648, Laboratory glassware — One-mark pipettes.
ISO 835-2, Laboratory glassware — Graduated pipettes — Part 2: Pipettes for which no waiting time is specified.
ISO 1042, Laboratory glassware — One-mark volumetric flasks.
ISO 1442, Meat and meat products — Determination of moisture content (Reference method).
3 Terms and definitions
For the purposes of this International Standard, the following term and definition apply.
3.1
L-(+)-glutamic acid content of meat and meat products
mass fraction of L-(+)-glutamic acid determined according to the procedure described in this International Standard
NOTE The L-(+)-glutamic acid content is expressed in percent.
4 Principle
The L-(+)-glutamic acid present in a test portion is extracted with perchloric acid solution at a temperature of 0 °C.
The extract is centrifuged, decanted and filtered and the pH is adjusted to 10,0. Nicotinamide adenine dinucleotide
(NAD) is reduced by the L-(+)-glutamic acid in the presence of glutamate dehydrogenase [equation (1)]. The
resultant reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) is reacted with iodonitrotetrazolium chloride in the
presence of diaphorase [equation (2)]. The resulting formazane is measured at a wavelength of 492 nm and the
L-(+)-glutamic acid content is calculated.
1

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+ + (1)
   L-(+)-glutamate + NAD + H O a-ketoglutamate + NADH + NH + H
2 3
+ + (2)
   NADH + iodonitrotetrazolium chloride + H NAD + formazane
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified.
Except for the solutions of inorganic compounds (5.2 and 5.3), store all solutions in stoppered brown glass bottles
which have been scrupulously cleaned and steamed or sterilized.
5.1  Water, double-distilled, or demineralized and distilled water, obtained by carrying out the final distillation in an
all-glass apparatus.
NOTE Water distilled only once may contain metal ion traces, and demineralized water may contain microorganisms. Metal
ions may decrease the activity of enzymes, while microorganisms may give rise to an aspecific enzymatic background activity
that might adversely affect the results of analysis.
5.2  Dilute perchloric acid, c(HClO ) = 1,0 mol/l.
4
WARNING — Contact with oxidizable or combustible materials or with dehydrating or reducing agents may
result in fire or explosion. Persons using this acid should be thoroughly familiar with its hazards. See
safety practices listed in annex A.
Dilute 8,6 ml of perchloric acid, 70 % (by mass), r = 1,67 g/ml, to 100 ml with water (5.1). Add the perchloric acid
20
to the bulk of the water before the final dilution to volume and mix.
5.3  Potassium hydroxide solution, c(KOH) = 2 mol/l.
Dissolve 56,1 g of potassium hydroxide in water (5.1). Dilute when cooled to 500 ml and mix.
5.4  Triethanolamine phosphate buffer solution, pH = 8,6.
Dissolve 1,86 g of triethanolamine hydrochloride in water (5.1) and adjust the pH to 8,6 with the potassium
hydroxide solution (5.3) using a pH-meter. Add 0,68 g of octylphenol decaethyleneglycol ether (e.g. Triton X-100).
Dilute to 100 ml with water and mix (solution A).
Dissolve 0,86 g of dipotassium hydrogen phosphate (K HPO ) and 7 mg of potassium dihydrogen phosphate
2 4
(KH PO ) in water (5.1). Dilute to 100 ml with water and mix (solution B).
2 4
Mix 20 ml of solution A with 5 ml of solution B.
The solution is stable for 2 months when stored at a temperature of between 0 °C and 6 °C.
5.5  Nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) solution.
Weigh 25 mg of NAD in a small, stoppered flask. Add 5,0 ml of water (5.1) and mix.
The solution is stable for 2 months when stored in the dark at a temperature of between 0 °C and 6 °C.
5.6  Iodonitrotetrazolium chloride (INT) solution, 2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-phenyltetrazolium chloride.
Weigh 30 mg of INT in a small, stoppered brown flask. Add 50 ml of water (5.1) and mix.
The solution is stable for 4 weeks when stored in the dark at a temperature of between 0 °C and 6 °C.
2

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1
)
 (lipoamide dehydrogenase, EC 1.8.1.4).
5.7 Diaphorase solution
Dissolve 3 mg of lyophilized diaphorase in 1 ml of water (5.1) and mix.
The solution is stable for 4 weeks when stored at a temperature of between 0 °C and 6 °C.
1)
5.8  Glutamate dehydrogenase (GLDH) solution (EC 1.4.1.3), 10 mg/ml, free from ammonium sulfate,
ethylene-dinitrilotetraacetic acid (EDTA) and glutaminase.
This solution is supplied as such (for example in quantities of 1,0 ml) and is stable for 12 months when stored at a
temperature of between 0 °C and 6 °C.
5.9  L-(+)-glutamic acid, standard solution.
Dissolve 50,0 mg of L-(+)-glutamic acid (C H O N) in 25 ml of water (5.1). Adjust the pH to 7,0 with potassium
5 9 4
hydroxide solution (5.3). Dilute to 50 ml and mix.
Keep this solution at a temperature of between 0 °C and 6 °C and dilute 1 + 49 shortly before use.
6 Apparatus
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
6.1  Mechanical or electrical equipment, capable of homogenizing the laboratory sample.
This includes a high-speed rotational cutter, or a mincer fitted with a plate with apertures not exceeding 4,0 mm in
diameter.
6.2  Laboratory mixer.
6.3  Laboratory centrifuge, with 50 ml or 100 ml centrifuge tubes, operating at a radial acceleration of about
2 000 g .
n
6.4  pH-meter.
6.5  Fluted filter papers, of diameter about 15 cm, high or moderate speed.
6.6  One-mark volumetric flasks, of capacities 100 ml and 250 ml, complying with ISO 1042, class B.
 of capacities 100 ml, 50 ml and 25 ml, complying with ISO 648, class B.
6.7 One-mark pipettes,
6.8  Graduated (automatic) pipettes, for delivering 2,50 ml, 0,50 ml, 0,20 ml and 0,05 ml, complying with
ISO 835-2, class A.
6.9  Small plastics spatula, bent at 90°, for mixing the contents of the cuvettes.
6.10  Photoelectric colorimeter, provided with a filter having a transmittance maximum at a wavelength of
492 nm, or spectrometer.
6.11  Cuvettes, of 10 mm optical path length.
6.12  Analytical balance, capable of weighing to the nearest 0,1 mg.

)
1
The EC number refers to the Enzyme Classification number as given in: The International Union of Biochemistry, Enzyme
nomenclature, Elsevier, Amsterdam, 1965.
3

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ISO 4134:1999(E)
7 Sampling
Sampling is not part of the method specified in this International Standard. A recommended sampling method is
given in ISO 3100-1.
It is important that the laboratory receive a sample which is truly representative and has not been damaged or
changed during transport or storage.
Start from a representative sample of at least 200 g. Store the sample in such a way that deterioration and change
in composition are prevented.
8 Preparation of test sample
Homogenize the laboratory sample with the appropriate equipment (6.1). Take care that the temperature of the
sample material does not rise above 25 °C. If a mincer is used, pass the sample at least twice through the
equipment.
Fill a suitable airtight container with the prepared sample. Close the container and store in such a way that
deterioration and change in composition are prevented. Analyse the sample as soon as practicable, but always
within 24 h after homogenization.
9 Procedure
NOTE If it is required to check whether the repeatability requirement is met, carry out two single determinations in
accordance with 9.1 to 9.3.
9.1 Test portion
Weigh, to the nearest 0,01 g, approximately 50 g of the test sample (see clause 8) and transfer this test portion to
the jar of the labo
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 4134
Deuxième édition
1999-12-01
Viande et produits à base de viande —
Détermination de la teneur en acide
L-(+)-glutamique — Méthode de référence
Meat and meat products — Determination of L-(+)-glutamic acid content —
Reference method
A
Numéro de référence
ISO 4134:1999(F)

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ISO 4134:1999(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI, Partie 3.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour
vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
La Norme internationale ISO 4134 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits agricoles
alimentaires, sous-comité SC 6, Viande et produits à base de viande.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 4134:1978), dont elle constitue une révision
technique.
L’annexe A constitue un élément normatif de la présente Norme internationale. Les annexes B et C sont données
uniquement à titre d'information.
©  ISO 1999
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque
forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit de l'éditeur.
Organisation internationale de normalisation
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Imprimé en Suisse
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NORME INTERNATIONALE  © ISO ISO 4134:1999(F)
Viande et produits à base de viande — Détermination de la
teneur en acide L-(+)-glutamique — Méthode de référence
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale spécifie une méthode de référence pour la détermination de la teneur en acide
L-(+)-glutamique des viandes et produits à base de viande, y compris la volaille.
2 Références normatives
Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui y est faite,
constituent des dispositions valables pour la présente Norme internationale. Pour les références datées, les
amendements ultérieurs ou les révisions de ces publications ne s’appliquent pas. Toutefois, les parties prenantes
aux accords fondés sur la présente Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer les
éditions les plus récentes des documents normatifs indiqués ci-après. Pour les références non datées, la dernière
édition du document normatif en référence s’applique. Les membres de l'ISO et de la CEI possèdent le registre des
Normes internationales en vigueur.
ISO 648, Verrerie de laboratoire — Pipettes à un trait.
Verrerie de laboratoire — Pipettes graduées — Partie 2: Pipettes sans temps d’attente.
ISO 835-2,
ISO 1042, Verrerie de laboratoire — Fioles jaugées à un trait.
ISO 1442, Viande et produits à base de viande — Détermination de l’humidité (Méthode de référence).
3 Terme et définition
Pour les besoins de la présente Norme internationale, le terme et la définition suivants s'appliquent.
3.1
teneur en acide L-(+)-glutamique des viandes et produits à base de viande
fraction massique d’acide L-(+)-glutamique déterminée selon la méthode décrite dans la présente Norme
internationale
NOTE La teneur en acide L-(+)-glutamique est exprimée en pourcentage.
4 Principe
L’acide L-(+)-glutamique présent dans une prise d’essai est extrait au moyen d’une solution d’acide perchlorique à
une température de 0 °C. L’extrait est centrifugé, décanté et filtré, puis le pH est ajusté à 10,0. La dinucléotide
nicotinamide adénine (NAD) est réduite par l’acide L-(+)-glutamique en présence de glutamate déhydrogénase
[équation (1)]. La dinucléotide nicotinamide adénine réduite résultante (NADH) réagit avec du chlorure
d’iodonitrotétrazolium en présence de diaphorase [équation (2)]. La formazane résultante est mesurée à une
longueur d’onde de 492 nm et la teneur en acide L-(+)-glutamique est calculée.
1

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ISO 4134:1999(F)
+ + (1)
   L-(+)-glutamate + NAD + H O a-cétoglutamate + NADH + NH + H
2 3
+ + (2)
   NADH + chlorure d'iodonitrotétrazolium + H NAD + formazane
5 Réactifs
Sauf indication différente, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
Conserver toutes les solutions, sauf les solutions des composés minéraux (5.2 et 5.3), dans des récipients fermés
en verre brun, soigneusement nettoyés puis traités à la vapeur ou stérilisés.
5.1  Eau bi-distillée, ou eau distillée et déminéralisée obtenue en réalisant la distillation finale dans un appareil
entièrement en verre.
NOTE L’eau distillée une seule fois peut contenir des traces d’ions métalliques et l’eau déminéralisée peut contenir des
micro-organismes. Les ions métalliques peuvent provoquer une diminution de l’activité des enzymes, tandis que les micro-
organismes peuvent donner lieu à une activité enzymatique secondaire non spécifique qui pourrait affecter défavorablement
les résultats de l’analyse.
5.2  Acide perchlorique dilué, c(HCIO ) = 1,0 mol/l.
4
AVERTISSEMENT — Le contact avec un matériau oxydable ou combustible ou avec des agents
déshydratants ou réducteurs peut entraîner une inflammation ou une explosion. Il convient que les
personnes utilisant cet acide soient familiarisées avec les risques correspondants. Voir les pratiques de
sécurité mentionnées à l'annexe A.
Diluer 8,6 ml d’acide perchlorique à 70 % (en masse), r = 1,67 g/ml, à 100 ml avec de l'eau (5.1). Ajouter l’acide
20
perchlorique dans la plus grande partie de l’eau avant dilution finale au volume et homogénéiser.
5.3  Hydroxyde de potassium, solution, c(KOH) = 2 mol/l.
Dissoudre 56,1 g d’hydroxyde de potassium dans de l’eau (5.1). Laisser refroidir, puis compléter à 500 ml et
homogénéiser.
5.4  Phosphate-triéthanolamine, solution tampon, pH = 8,6.
Dissoudre 1,86 g de chlorhydrate de triéthanolamine dans de l’eau (5.1) et ajuster le pH à 8,6 au moyen de la
solution d’hydroxyde de potassium (5.3), en se servant d’un pH-mètre. Ajouter 0,68 g d’octylphénol-décaéthylène-
glycoléther (par exemple Triton X-100). Compléter à 100 ml avec de l’eau puis homogénéiser (solution A).
Dissoudre 0,86 g d’hydrogénophosphate dipotassique (K HPO ) et 7 mg de dihydrogénoorthophosphate de
2 4
potassium (KH PO ) dans de l’eau (5.1). Compléter à 100 ml avec de l’eau puis homogénéiser (solution B).
2 4
Mélanger 20 ml de solution A avec 5 ml de la solution B.
La solution reste stable pendant 2 mois si elle est conservée à une température comprise entre 0 °C et 6 °C.
5.5  Dinucléotide nicotinamide adénine (NAD), solution.
Peser 25 mg de NAD dans une fiole étroite bouchée. Ajouter 5,0 ml d’eau (5.1) et homogénéiser.
Cette solution reste stable pendant 2 mois si elle est conservée à l’abri de la lumière et à une température comprise
entre 0 °C et 6 °C.
2

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5.6  Chlorure d’iodonitrotétrazolium (INT) [chlorure de (4-iodophényl) -2 (4-nitrophényl) -3 phényltétrazolium-5],
solution.
Peser 30 mg d’INT dans une fiole étroite bouchée, en verre brun. Ajouter 50 ml d’eau (5.1) et homogénéiser.
Cette solution reste stable pendant 4 semaines si elle est conservée à l’abri de la lumière et à une température
comprise entre 0 °C et 6 °C.
1)
5.7  Diaphorase (lipoamine déhydrogénase, EC 1.8.1.4), solution.
Dissoudre 3 mg de diaphorase lyophilisée dans 1 ml d’eau (5.1) et homogénéiser.
Cette solution reste stable pendant 4 semaines si elle est conservée à une température comprise entre 0 °C et
6 °C.
1)
5.8  Glutamate déhydrogénase (GLDH) (EC 1.4.1.3), solution à 10 mg/ml, exempte de sulfate d’ammonium,
d’acide éthylène dinitrilotétraacétique (EDTA) et de glutaminase.
Cette solution est fournie telle quelle (par exemple en quantités de 1,0 ml) et reste stable pendant 12 mois si elle est
conservée à une température comprise entre 0 °C et 6 °C.
5.9  Acide -(+)-glutamique, solution étalon.
L
Dissoudre 50,0 mg d’acide L-(+)-glutamique (C H O N) dans 25 ml d’eau (5.1). Ajuster le pH à 7,0 au moyen de la
5 9 4
solution d’hydroxyde de potassium (5.3). Diluer à 50 ml et homogénéiser.
Conserver cette solution à une température comprise entre 0 °C et 6 °C et la diluer à 1 + 49 peu de temps avant
usage.
6 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
6.1  Appareil mécanique ou électrique, capable d’homogénéiser l’échantillon pour laboratoire.
Cet appareil comprend un couteau rotatif à grande vitesse ou un hachoir muni d’une plaque avec des trous
n’excédant pas 4,0 mm de diamètre.
6.2  Mélangeur de laboratoire.
6.3  Centrifugeuse de laboratoire, munie de tubes de centrifugeuse de 50 ml ou 100 ml, ayant une accélération
radiale d’environ 2 000 g .
n
6.4  pH-mètre.
6.5  Papier-filtre plissé, de diamètre 15 cm environ, vitesse moyenne ou élevée.
6.6  Fioles jaugées à un trait, de capacités 100 ml et 250 ml, conformes à l’ISO 1042, classe B.
6.7  Pipettes à un trait, de capacités 100 ml, 50 ml et 25 ml, conformes à l’ISO 648, classe B.

1)
  Le numéro EC se réfère au «Enzyme Classification Number» tel qu’il est donné dans: The International Union of
Biochemistry, Enzyme nomenclature, Elsevier, Amsterdam, 1965.
3

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ISO 4134:1999(F)
6.8  Pipettes (automatiques) graduées, permettant de délivrer 2,50 ml, 0,50 ml, 0,20 ml et 0,05 ml, conformes à
l’ISO 835-2, classe A.
6.9  Spatule étroite, en plastique, courbée à 90°, destinée à mélanger le contenu des cuves de photomètre.
6.10  Colorimètre photoélectrique, muni d’un filtre ayant son absorbance maximale à une longueur d’onde de
492 nm, ou spectromètre.
6.11  Cuves de photomètre, de 10 mm de trajet optique.
6.12  Balance analytique, précise à 0,1 mg près.
7 Échantillonnage
L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente Norme internationale. Une méthode
d’échantillonnage recommandée est donnée dans l’ISO 3100-1.
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon vraiment représentatif, non endommagé ou modifié lors du
transport et de l'entreposage.
Partir d’un échantillon représentatif d’au moins 200 g. Le conserver de manière à éviter toute détérioration ou
changement de la composition.
8 Préparation de l’échantillon pour essai
Homogénéiser l’échantillon pour laboratoire à l’aide de l’appareil approprié (6.1). Veiller à ce que la température du
matériau échantillon ne dépasse pas 25 °C. En cas d’utilisation d’un hachoir, faire passer l’échantillon au moins
deux fois dans l’appareil.
Placer l’échantillon préparé dans un récipient hermétique convenable. Fermer le récipient et le stocker de manière à
éviter toute détérioration ou changement de la composition. Analyser l’échantillon aussi rapidement que possible,
mais toujours dans les 24 h qui suivent l’homogénéisation.
9 Mode opératoire
NOTE S’il est demandé de vérifier que l'on satisfait aux exigences données en ce qui concerne la limite de répétabilité
(11.2), effectuer deux déterminations séparées conformément à 9.1 à 9.3.
9.1 Prise d’essai
Peser, à 0,01 g près, environ 50 g de l’échantillon pour essai (article 8) et transférer cette prise d’essai d
...