ISO 12966-4:2015
(Main)Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty acid methyl esters — Part 4: Determination by capillary gas chromatography
Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty acid methyl esters — Part 4: Determination by capillary gas chromatography
ISO 12966-4:2015 specifies a method for the determination of fatty acid methyl esters (FAMEs) derived by transesterification or esterification from fats, oils, and fatty acids by capillary gas chromatography (GLC). Fatty acid methyl esters from C8 to C24 can be separated using this part of ISO 12966 including saturated fatty acid methyl esters, cis- and trans-monounsaturated fatty acid methyl esters, and cis- and trans-polyunsaturated fatty acid methyl esters. The method is applicable to crude, refined, partially hydrogenated, or fully hydrogenated fats, oils, and fatty acids derived from animal and vegetable sources. This method is not suitable for the analysis of dairy, ruminant fats and oils, or products supplemented with conjugated linoleic acid (CLA). Milk and milk products (or fat coming from milk and milk products) are excluded from the scope of this part of ISO 12966. ISO 12966-4:2015 is not applicable to di-, tri-, polymerized and oxidized fatty acids, and fats and oils.
Corps gras d'origines animale et végétale — Chromatographie en phase gazeuse des esters méthyliques d'acides gras — Partie 4: Détermination par chromatographie capillaire en phase gazeuse
ISO 12966-4:2015 spécifie une méthode de détermination des esters méthyliques d'acides gras (EMAG) obtenus par transestérification ou estérification de corps gras et d'acide gras par chromatographie en phase gazeuse (CPG) sur colonne capillaire. Les esters méthyliques d'acides gras de C8 à C24 peuvent être séparés en utilisant la présente partie de l'ISO 12966, y compris les esters méthyliques d'acides gras saturés, les esters méthyliques d'acides gras mono-insaturés cis et trans et les esters méthyliques d'acides gras poly-insaturés cis et trans. La méthode s'applique aux corps gras et acides gras bruts, raffinés, partiellement hydrogénés ou totalement hydrogénés d'origines animale et végétale. La présente méthode ne convient pas à l'analyse des matières grasses laitières provenant des ruminants, ou des produits supplémentés en acide linoléique conjugué (CLA). Le lait et les produits laitiers (ou corps gras dérivés du lait et des produits laitiers) ne relèvent pas du domaine d'application de la présente partie de l'ISO 12966. ISO 12966-4:2015 ne s'applique pas aux acides gras et corps gras dimérisés, trimérisés, polymérisés et oxydés.
General Information
Relations
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 12966-4
First edition
2015-06-01
Animal and vegetable fats and oils —
Gas chromatography of fatty acid
methyl esters —
Part 4:
Determination by capillary gas
chromatography
Corps gras d’origines animale et végétale — Chromatographie en
phase gazeuse des esters méthyliques d’acides gras —
Partie 4: Détermination par chromatographie capillaire en phase
gazeuse
Reference number
©
ISO 2015
© ISO 2015, Published in Switzerland
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ii © ISO 2015 – All rights reserved
Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Principle . 1
4 Reagents and materials . 1
4.1 Reference fatty acid methyl esters (FAMEs) . 2
4.2 Internal standards . 2
5 Apparatus . 3
6 Sampling . 4
7 Preparation of test sample . 4
8 Preparation of methyl esters from fats, oils, and fatty acids . 4
9 Procedure. 4
9.1 General . 4
9.2 GC conditions . 4
9.3 Performance check . 5
10 Calculations. 5
10.1 Qualitative analysis and peak identification . 5
10.2 Quantitative analysis . 5
10.2.1 Calculation of the composition of fatty acid methyl esters . 5
10.2.2 Calculation of the composition of fatty acid methyl esters using
correction factors . 6
10.2.3 Calculation of the composition of fatty acid methyl esters using an
internal standard . 6
11 Precision . 7
11.1 Results of interlaboratory test . 7
11.2 Repeatability . 7
11.3 Reproducibility . 7
12 Test report . 7
Annex A (informative) Theoretical flame ionization detector correction factor (TCF) for
fatty acid methyl esters (FAMEs) . 9
Annex B (informative) Examples of chromatograms .10
Annex C (informative) Comparison of FAME composition with two different GC columns.12
Annex D (informative) Results of an interlaboratory trial .14
Bibliography .20
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of any
patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or on
the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity
assessment, as well as information about ISO’s adherence to the WTO principles in the Technical Barriers
to Trade (TBT) see the following URL: Foreword - Supplementary Information
The committee responsible for this document is ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11, Animal
and vegetable fats and oils.
This first edition cancels and replaces ISO 5508:1990 and ISO 15304:2002, which have been
technically revised.
ISO 12966 consists of the following parts, under the general title Animal and vegetable fats and oils — Gas
chromatography of fatty acid methyl esters:
— Part 1: Guidelines on modern gas chromatography of fatty acid methyl esters
— Part 2: Preparation of methyl esters of fatty acids
— Part 3: Preparation of methyl esters using trimethylsulfonium hydroxide (TMSH)
— Part 4: Determination by capillary gas chromatography
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 12966-4:2015(E)
Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography
of fatty acid methyl esters —
Part 4:
Determination by capillary gas chromatography
1 Scope
This part of ISO 12966 specifies a method for the determination of fatty acid methyl esters (FAMEs) derived
by transesterification or esterification from fats, oils, and fatty acids by capillary gas chromatography
(GLC). Fatty acid methyl esters from C8 to C24 can be separated using this part of ISO 12966 including
saturated fatty acid methyl esters, cis- and trans-monounsaturated fatty acid methyl esters, and cis- and
trans-polyunsaturated fatty acid methyl esters.
The method is applicable to crude, refined, partially hydrogenated, or fully hydrogenated fats, oils, and
fatty acids derived from animal and vegetable sources.
This method is not suitable for the analysis of dairy, ruminant fats and oils, or products supplemented
with conjugated linoleic acid (CLA). Milk and milk products (or fat coming from milk and milk products)
are excluded from the scope of this part of ISO 12966.
This part of ISO 12966 is not applicable to di-, tri-, polymerized and oxidized fatty acids, and fats and oils.
2 Normative references
The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are
indispensable for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated
references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 661, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of test sample
ISO 3696, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods
ISO 6353, Reagents for chemical analysis
ISO 12966-2, Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty acid methyl esters — Part 2:
Preparation of methyl esters of fatty acids
ISO 12966-3, Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty acid methyl esters —
Part 3: Preparation of methyl esters using trimethylsulfonium hydroxide (TMSH)
3 Principle
Using capillary gas chromatography, FAMEs are separated on a highly polar stationary phase with
respect to their chain length, degree of (un)saturation, and geometry and position of the double bonds.
4 Reagents and materials
Unless otherwise stated, use only reagents as specified in ISO 6353-2 and ISO 6353-3 (if listed there). If
not, then use reagents of recognized analytical grade and water of at least grade 3, as defined in ISO 3696.
WARNING — Attention is drawn to the regulations which specify the handling of dangerous
matter. Technical, organizational, and personal safety measures shall be followed.
4.1 Reference fatty acid methyl esters (FAMEs)
4.1.1 Reference mixtures of pure FAMEs and/or oils with known fatty acid composition should be used
for the identification of fatty acids analysed under the test conditions of this method.
4.1.2 Fats and oils with certified fatty acid composition, e.g. certified reference material BCR 162.
4.1.3 Reference fatty acid methyl esters (FAMEs) - Methyl esters of pure fatty acids, in particular, cis- and
trans-isomers of octadecenoic (oleic), trans-isomers of octadecadienoic (linoleic), and octadecatrienoic
(α-linolenic) acids. Wide ranges of cis- and trans-octadecenoic methyl ester isomers are available on the
market. Trans-geometrical isomers of linoleic and α-linolenic acids can be prepared in the laboratory
with the aid of p-toluenesulfonic acid. In addition to pure compounds, convenient mixtures of FAMEs are
also commercially available.
4.2 Internal standards
For the quantification of the fatty acids, in grams per 100 g, the use of a FAME as an internal standard
(IS) is necessary. An external calibration with mixtures of different fatty acids is also possible.
NOTE If it is necessary to check the recovery and the effectiveness of the derivatization method, then either
or both a TAG and a FAME internal standard should be used. While the TAG-IS is added to the sample prior to the
FAME preparation, the FAME-IS is added before or after the FAME preparation. The FAME-IS is used to calculate
the recovery of the FAME from the TAG-IS and therefore, the efficiency of the derivatisation procedure. In this
case, a different chain length of the standards is required.
Depending on the type of fat, different internal standards can be used (C11:0 FAME, C17:0 FAME, C19:0
FAME, C21:0 FAME, C23:0 FAME, etc.). An external calibration with mixtures of different f
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 12966-4
Première édition
2015-06-01
Corps gras d’origines animale et
végétale — Chromatographie en
phase gazeuse des esters méthyliques
d’acides gras —
Partie 4:
Détermination par chromatographie
capillaire en phase gazeuse
Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty
acid methyl esters —
Part 4: Determination by capillary gas chromatography
Numéro de référence
©
ISO 2015
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sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur
l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à
l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Principe . 2
4 Réactifs et matériaux . 2
4.1 Esters méthyliques d’acides gras (EMAG) de référence . 2
4.2 Étalons internes . 2
5 Appareillage . 3
6 Échantillonnage . 4
7 Préparation de l’échantillon pour essai . 4
8 Préparation des esters méthyliques de corps gras et d’acides gras .5
9 Mode opératoire. 5
9.1 Généralités . 5
9.2 Conditions de chromatographie en phase gazeuse . 5
9.3 Contrôle des performances . 5
10 Calculs . 6
10.1 Analyse qualitative et identification des pics . 6
10.2 Analyse quantitative . 6
10.2.1 Calcul de la composition en esters méthyliques d’acides gras . 6
10.2.2 Calcul de la composition en esters méthyliques d’acides gras en utilisant
des facteurs de correction . 6
10.2.3 Calcul de la composition en esters méthyliques d’acides gras en utilisant
un étalon interne . 7
11 Fidélité . 8
11.1 Résultats d’un essai interlaboratoires . 8
11.2 Répétabilité . 8
11.3 Reproductibilité . 8
12 Rapport d’essai . 8
Annexe A (informative) Facteur de correction théorique (FCT) du détecteur à ionisation de
flamme pour les esters méthyliques d’acides gras (EMAG) .10
Annexe B (informative) Exemples de chromatogrammes .11
Annexe C (informative) Comparaison de la composition en EMAG avec deux colonnes
CPG différentes .13
Annexe D (informative) Résultats d’un essai interlaboratoires .15
Bibliographie .21
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne
la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les
références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration
du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par
l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de
la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes de l’OMC concernant
les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos — Informations
supplémentaires.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 11, Corps gras d’origines animale et végétale.
Cette première édition annule et remplace l’ISO 5508:1990 et l’ISO 15304:2002, qui ont fait l’objet d’une
révision technique.
L’ISO 12966 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Corps gras d’origines animale
et végétale — Chromatographie en phase gazeuse des esters méthyliques d’acides gras:
— Partie 1: Lignes directrices relatives à la chromatographie en phase gazeuse moderne des esters
méthyliques d’acides gras
— Partie 2: Préparation des esters méthyliques d’acides gras
— Partie 3: Préparation des esters méthyliques à l’aide d’hydroxyde de triméthylsulfonium (TMSH)
— Partie 4: Détermination par chromatographie capillaire en phase gazeuse
iv © ISO 2015 – Tous droits réservés
NORME INTERNATIONALE ISO 12966-4:2015(F)
Corps gras d’origines animale et végétale —
Chromatographie en phase gazeuse des esters méthyliques
d’acides gras —
Partie 4:
Détermination par chromatographie capillaire en phase
gazeuse
1 Domaine d’application
La présente partie de l’ISO 12966 spécifie une méthode de détermination des esters méthyliques
d’acides gras (EMAG) obtenus par transestérification ou estérification de corps gras et d’acide gras par
chromatographie en phase gazeuse (CPG) sur colonne capillaire. Les esters méthyliques d’acides gras
de C8 à C24 peuvent être séparés en utilisant la présente partie de l’ISO 12966, y compris les esters
méthyliques d’acides gras saturés, les esters méthyliques d’acides gras mono-insaturés cis et trans et les
esters méthyliques d’acides gras poly-insaturés cis et trans.
La méthode s’applique aux corps gras et acides gras bruts, raffinés, partiellement hydrogénés ou
totalement hydrogénés d’origines animale et végétale.
La présente méthode ne convient pas à l’analyse des matières grasses laitières provenant des ruminants,
ou des produits supplémentés en acide linoléique conjugué (CLA). Le lait et les produits laitiers (ou corps
gras dérivés du lait et des produits laitiers) ne relèvent pas du domaine d’application de la présente
partie de l’ISO 12966.
La présente partie de l’ISO 12966 ne s’applique pas aux acides gras et corps gras dimérisés, trimérisés,
polymérisés et oxydés.
2 Références normatives
Les documents ci-après, dans leur intégralité ou non, sont des références normatives indispensables à
l’application du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 661, Corps gras d’origines animale et végétale — Préparation de l’échantillon pour essai
ISO 3696, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d’essai
ISO 6353, Réactifs pour analyse chimique
ISO 12966-2, Corps gras d’origines animale et végétale — Chromatographie en phase gazeuse des esters
méthyliques d’acides gras — Partie 2: Préparation des esters méthyliques d’acides gras
ISO 12966-3, Corps gras d’origines animale et végétale — Chromatographie en phase gazeuse des
esters méthyliques d’acides gras — Partie 3: Préparation des esters méthyliques à l’aide d’hydroxyde de
triméthylsulfonium (TMSH)
3 Principe
En utilisant la chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire, les EMAG sont séparés sur une
phase stationnaire de polarité élevée, en fonction de la longueur de leur chaîne, de leur degré de (in)
saturation ainsi que de la géométrie et de la position des doubles liaisons.
4 Réactifs et matériaux
Sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs spécifiés dans l’ISO 6353-2 et l’ISO 6353-3
(s’ils y sont énumérés). Sinon, utiliser des réactifs de qualité analytique reconnue et de l’eau de qualité 3
au minimum, telle que définie dans l’ISO 3696.
AVERTISSEMENT — L’attention est appelée sur les réglementations relatives à la manipulation
des substances dangereuses. Des mesures de sécurité d’ordre technique, organisationnel et
personnel doivent être suivies.
4.1 Esters méthyliques d’acides gras (EMAG) de référence
4.1.1 Il convient d’utiliser des mélanges d’EMAG purs et/ou des huiles ayant une composition connue en
acides gras pour l’identification des acides gras analysés dans les conditions d’essai de la présente méthode.
4.1.2 Corps gras ayant une composition certifiée en acides gras, par exemple le matériau de référence
certifié BCR 162.
4.1.3 Esters méthyliques d’acides gras (EMAG) de référence - Esters méthyliques d’acides gras purs,
en particulier isomères cis et trans de l’acide octadécénoïque (oléique), isomères trans des acides
octadécadiénoïque (linoléique) et octadécatriénoïque (α-linolénique). Une vaste gamme d’isomères
cis et trans de l’ester méthylique
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.