ISO 8432:1987

Essential oils — Analysis by high performance liquid chromatography — General method

Liquid chromatography is a method of separation based on the phenomena of adsorption, partition, ion exchange and/or exclusion. It enables a small quantity of aromatic essential oil or other raw materials for the perfume industry to be analysed on a chromatographic column with an appropriate packing and under appropriate conditions, the possible identification of the different constituent and the quantitative determination of specific compounds by measuring the area or height of their peaks. Details of the method are described.

Huiles essentielles — Analyse par chromatographie liquide sous pression — Méthode générale

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 16-Sep-1987
• ICS: 71.100.60 - Essential oils
• Technical Committee: ISO/TC 54 - Essential oils
• Drafting Committee: ISO/TC 54 - Essential oils
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 09-Sep-2021

Standards Content (Sample)

ISO
INTERNATIONAL STANDARD
8432
First edition
1987-10-01
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION
ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
MEXflYHAPOflHAR OPrAHkl3A~MR I-IO CTAH/JAPTM3A~MM
Analysis by high Performance liquid
Essential oils -
chromatography - General method
Huiles essentielles - Analyse par Chromatographie liquide sous Pression - Mthode g&x?rale:
Reference number
ISO 8432 : 1987 (E)

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Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national Standards bodies (ISO member bedies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through ISO technical committees. Esch member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take patt in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the ISO Council. They are approved in accordance with ISO procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard ISO 8432 was prepared by Technical Committee ISO/TC 54,
Essential oik.
Users should note that all International Standards undergo revision from time to time
and that any reference made herein to any other International Standard implies its
latest edition, unless otherwise stated.
0 International Organkation for Standardkation, 1987
Printed in Switzerland

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INTERNATIONAL STANDARD
ISO 8432: 1987 (E)
Essential oils - Analysis by high Performance liquid
chromatography - General method
specified Programme (gradient of elution). lt will be specified in
1 Scope and field of application
each relevant International Standard.
This International Standard specifies a general method for the
analysis of essential oils by high Performance liquid chromato-
4.4 Elution solvent.
graphy for the purpose of determining the content of a specific
compound and/or searching for a characteristic Profile.
The nature and quality of solvents will be Chosen according to
the Sample to be analysed and according to the nature of the
column and detector used. The solutions shall be free from
solid particles smaller than 0,5 Fm.
2 Reference
ISO 356, Essential oils - Prepara tion 0 f test Sample. 4.5 Gas.
If the pumping System requires the use of a gas, it shall be inert.
Helium, nitrogen or argon may be used.
3 Principle
Liquid chromatography is a method of Separation based on the 5 Apparatus
phenomena of adsorption, partition, ion exchange and/or ex-
clusion. lt enables a small quantity of aromatic essential oil or
5.1 Separation System.
other raw materials for the perfume industry to be analysed on
a chromatographic column with an appropriate packing and
5.1 .l Chromatograph.
under appropriate conditions, the possible identification of the
different constituents and the quantitative determination of
specific compounds by measuring the area or height of their
5.1.2 Pumping System or any other System, which
peaks.
enables a constant or programmed flow rate to be obtained and
maintained.
5.1.3 Solvent supply System.
4 Reagents and materials
5.1.4 Solvent degassing System.
4.1 Reference substance, corresponding to the compound
to be determined or detected. The reference substance will be
indicated in each relevant International Standard. The 5.1.5 Suitable detector System, which enables the quan-
tities of compounds present in the Sample to be determined.
reference substance shall have been recently purified.
4.2 Internal Standard or extemal Standard. 5.2 Recorder, and (optional) integrator, whose perfor-
mance is compatible with the rest of the apparatus.
The internal Standard or external Standard will be specified in
each relevant International Standard; it shall elute as closely as
5.3 Column, made of an inert material (for example glass,
possible to the compound to be determined and its peak shall
stainless steel) having mechanical proper-Ges which enable the
not superpose on that of any compound in the essential oil
pressure to be withstood.
which is detectable by the detection System used.
The nature and the particle size of the stationary Phase will be
4.3 Mobile Phase. specified in each relevant International Standard.
The composition of the mobile Phase may remain constant dur- The temperature of the column may be stabilized or pro-
grammed.
ing Operation (isocratic elution) or Change according to a

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ISO 8432: 1987 (El
6 Preparation of the test Sample 8.3 Resolution
Calculate the resolution factor, R, of two neighbouring peaks I
See ISO 356.
and II, from the equation
If the test Sample to be injected has to undergo special prepara-
tion, this will be indicated in the relevant International Stan- d,(H) - d,(l)
R=2
dard.
bo,5(l) + bo,5(W
where
7 Procedure
d,(l) is the retention distance of peak 1;
7.1 Temperature
d,(H)
is the retention distance of peak II;
b. 5(l) is the width, in millimetres, at half of peak I height;
If the temperature is different from ambient, it will be specified
in each relevant International Standard.
bo’5(ll) is the width, in millimetres, at half of peak II height.
,
(See the figure.)
7.2 Elution solvent flow rate
Regulate the flow rate so as to obtain the Separation of con-
stituents to be determined.
9 Methods of determination
8 Column Performance
9.1 General conditions
8.1 Chemical inertness test
Record the chromatogram as specified in the relevant lnter-
national Standard.
Ensure that the products to be identified are not damaged.
For the determination of certain specific constituents, the rele-
vant International Standard may specify isocratic Operation or
8.2 Column efficiency
an Operation by elution gradient.
Determine the number of effective plates UV) from the internal
In such cases, the flow rate shall be regulated so that the
Standard peak specified in each relevant International Standard
Separation obtained is that specified in the relevant lnter-
and using the solvents also specified, at an isothermal
national Standard.
temperature, and under isocratic conditions from the equation
After stabilization of the Operati
...

ISO
NORME INTERNATIONALE
8432
Premiére édition
1987-10-01
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION
ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
MEX~YHAPO~HAR OPTAHlMAL(MR Il0 CTAH~APTM3A~MM
- Analyse par chromatographie
Huiles essentielles
liquide sous pression - Méthode générale
Essen tial oils - Analysis b y high performance liquid chromatography - General method
Numéro de référence
1 ISO 8432: 1987 (F)

---------------------- Page: 1 ----------------------
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est normalement confiée aux comités techniques de I’ISO.
Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requiérent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 8432 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 54,
Huiles essentielles.
L’attention des utilisateurs est attirée sur le fait que toutes les Normes internationales
sont de temps en temps soumises à révision et que toute référence faite à une autre
Norme internationale dans le présent document implique qu’il s’agit, sauf indication
contraire, de la dernière édition.
0 Organisation internationale de normalisation, 1987
Imprimé en Suisse

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NORME INTERNATIONALE ISO 8432: 1987 (F)
Huiles essentielles - Analyse par chromatographie
liquide sous pression - Méthode générale
1 Objet et domaine d’application 4.4 Solvant d’élution.
La présente Norme internationale spécifie une méthode géné- La nature et la qualité des solvants seront choisies selon
rale d’analyse par chromatographie liquide sous pression des l’échantillon à analyser, la colonne et le détecteur utilisés. Les
huiles essentielles, dans le but de doser un composé spécifique solutions doivent être exemptes de particules solides inférieures
et/ou de rechercher un profil caractéristique. à 0,5 prn.
4.5 Gaz.
2 Référence
Si le systéme de pompage nécessitc l’utilisation d’un gaz, celui-
ISO 356, Hui/es essentielles - Préparation de l’&han tillon pour
ci doit être inerte. On utilise l’hélium, l’azote ou l’argon.
essai.
3 Principe
5 Appareillage
La chromatographie liquide sous pression est une méthode de
5.1 Système de séparation.
séparation fondée sur des phénomènes d’absorption, de par-
tage, d’échange d’ions et/ou d’exclusion. Elle permet l’analyse
de petites quantités d’huiles essentielles, d’arômes ou d’autres 5.1 .l Chromatographie.
matières premières pour l’industrie de la parfumerie sur une
colonne de chromatographie avec un remplissage et des condi-
5.1.2 Système de pompage ou tout autre système, per-
tions opératoires appropriées, la localisation éventuelle des dif-
mettant d’obtenir et de maintenir un débit constant ou pro-
férents constituants, et la détermination quantitative des com-
grammé.
posés spécifiques par mesure de l’aire ou de la hauteur de leurs
pics.
5.1.3 Système délivrant le solvant.
4 Réactifs et produits
5.1.4 Système de degazage des solvants.
4.1 Substance de reference, correspondant au composé à
5.1.5 Systeme de détection approprié, permettant de
doser ou à localiser. Elle sera indiquée dans chaque Norme
déterminer des quantités de composés présents dans I’échantil-
internationale particulière. La substance de référence devra être
Ion.
récemment purifiée.
4.2 Étalon interne ou étalon externe.
5.2 Enregistreur et, éventuellement, intégrateur, dont les
performances sont compatibles avec l’ensemble de I’appareil-
L’étalon interne ou l’étalon externe doit être précisé dans la
lage.
Norme internationale particulière appliquée, et doit éluer aussi
prés que possible du composé à doser et ne se superposer à
5.3 Colonne, en matériau inerte (par exemple, verre, acier
aucun des composés de I’huile essentielle détectables par le
inoxydable), dont les qualités mécaniques permettent de sup-
système de détection utilisé.
porter la pression.
4.3 Phase mobile.
La nature et la granulométrie de la phase stationnaire doivent
être précisées dans chaque Norme internationale particulière.
La composition de la phase mobile peut rester constante pen-
dant toute la durée (élution isocratique) ou varier selon un pro-
gramme défini (gradient d’élution). Elle sera définie dans cha- La température de la colonne peut être stabilisée ou program-
que Norme internationale particuliére. mée.
1

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ISO 8432: 1987 (FI
6 Préparation de l’échantillon pour essai b~,~ est la largeur, en millimètres, de ce pic à mi-hauteur.
Voir I’ISO 356.
8.3 Résolution
Si l’échantillon pour essai à injecter doit subir une préparation
Calculer le facteur de résolution, R, de deux pics avoisinants I
spéciale, celle-ci sera indiquée dans la Norme internationale
et II, à l’aide de la formule
particulière.
d,Ul) - d,(l)
7 Mode opératoire
R=2
bo#) + b()5(ll)
7.1 Température
où
Si la température est différente de la température ambiante, elle
d,(l) est la distance de rétention du pic 1;
sera précisée dans la Norme internationale particulière.
d,( II) est la distance de rétention du pic Il ;
bo 5(l) est la largeur, en millimètres, du pic I à mi-hauteur;
7.2 Débit du solvant d’élution
I
en millimétres, du pic II à mi-
b0,kJ II) est la largeur,
Régler le débit de manière à obtenir les séparations des compo-
hauteur.
sés à doser.
(Voir la figure.)
8 Performance de la colonne
9 Méthodes de dosage
8.1 Test d’inertie chimique
9.1 Conditions générales
S’assurer que les produits à identifier ne sont pas dégradés.
Réaliser le chromatogramme comme le précise la Norme inter-
8.2 Efficacité de la colonne
nationale particuliére.
Déterminer le nombre de plateaux effectifs UV) sur le pic de
Dans certaines déterminations de composants spécifiques, la
l’étalon interne spécifié dans chaque norme particulière et en
Norme internationale particuliére peut prescrire d’opérer en iso-
utilisant les solvants également spécifiés, à température iso-
cratique ou en gradient d’élution.
therme, et dans des conditions isocratiques à l’aide de la for-
mule suivante
Dans ces cas, le débit doit être réglé de telle sorte que l’on
obtienne la séparation indiquée dans la Norme internationale
...

ISO
NORME INTERNATIONALE
8432
Premiére édition
1987-10-01
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION
ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
MEX~YHAPO~HAR OPTAHlMAL(MR Il0 CTAH~APTM3A~MM
- Analyse par chromatographie
Huiles essentielles
liquide sous pression - Méthode générale
Essen tial oils - Analysis b y high performance liquid chromatography - General method
Numéro de référence
1 ISO 8432: 1987 (F)

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Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est normalement confiée aux comités techniques de I’ISO.
Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requiérent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 8432 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 54,
Huiles essentielles.
L’attention des utilisateurs est attirée sur le fait que toutes les Normes internationales
sont de temps en temps soumises à révision et que toute référence faite à une autre
Norme internationale dans le présent document implique qu’il s’agit, sauf indication
contraire, de la dernière édition.
0 Organisation internationale de normalisation, 1987
Imprimé en Suisse

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NORME INTERNATIONALE ISO 8432: 1987 (F)
Huiles essentielles - Analyse par chromatographie
liquide sous pression - Méthode générale
1 Objet et domaine d’application 4.4 Solvant d’élution.
La présente Norme internationale spécifie une méthode géné- La nature et la qualité des solvants seront choisies selon
rale d’analyse par chromatographie liquide sous pression des l’échantillon à analyser, la colonne et le détecteur utilisés. Les
huiles essentielles, dans le but de doser un composé spécifique solutions doivent être exemptes de particules solides inférieures
et/ou de rechercher un profil caractéristique. à 0,5 prn.
4.5 Gaz.
2 Référence
Si le systéme de pompage nécessitc l’utilisation d’un gaz, celui-
ISO 356, Hui/es essentielles - Préparation de l’&han tillon pour
ci doit être inerte. On utilise l’hélium, l’azote ou l’argon.
essai.
3 Principe
5 Appareillage
La chromatographie liquide sous pression est une méthode de
5.1 Système de séparation.
séparation fondée sur des phénomènes d’absorption, de par-
tage, d’échange d’ions et/ou d’exclusion. Elle permet l’analyse
de petites quantités d’huiles essentielles, d’arômes ou d’autres 5.1 .l Chromatographie.
matières premières pour l’industrie de la parfumerie sur une
colonne de chromatographie avec un remplissage et des condi-
5.1.2 Système de pompage ou tout autre système, per-
tions opératoires appropriées, la localisation éventuelle des dif-
mettant d’obtenir et de maintenir un débit constant ou pro-
férents constituants, et la détermination quantitative des com-
grammé.
posés spécifiques par mesure de l’aire ou de la hauteur de leurs
pics.
5.1.3 Système délivrant le solvant.
4 Réactifs et produits
5.1.4 Système de degazage des solvants.
4.1 Substance de reference, correspondant au composé à
5.1.5 Systeme de détection approprié, permettant de
doser ou à localiser. Elle sera indiquée dans chaque Norme
déterminer des quantités de composés présents dans I’échantil-
internationale particulière. La substance de référence devra être
Ion.
récemment purifiée.
4.2 Étalon interne ou étalon externe.
5.2 Enregistreur et, éventuellement, intégrateur, dont les
performances sont compatibles avec l’ensemble de I’appareil-
L’étalon interne ou l’étalon externe doit être précisé dans la
lage.
Norme internationale particulière appliquée, et doit éluer aussi
prés que possible du composé à doser et ne se superposer à
5.3 Colonne, en matériau inerte (par exemple, verre, acier
aucun des composés de I’huile essentielle détectables par le
inoxydable), dont les qualités mécaniques permettent de sup-
système de détection utilisé.
porter la pression.
4.3 Phase mobile.
La nature et la granulométrie de la phase stationnaire doivent
être précisées dans chaque Norme internationale particulière.
La composition de la phase mobile peut rester constante pen-
dant toute la durée (élution isocratique) ou varier selon un pro-
gramme défini (gradient d’élution). Elle sera définie dans cha- La température de la colonne peut être stabilisée ou program-
que Norme internationale particuliére. mée.
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ISO 8432: 1987 (FI
6 Préparation de l’échantillon pour essai b~,~ est la largeur, en millimètres, de ce pic à mi-hauteur.
Voir I’ISO 356.
8.3 Résolution
Si l’échantillon pour essai à injecter doit subir une préparation
Calculer le facteur de résolution, R, de deux pics avoisinants I
spéciale, celle-ci sera indiquée dans la Norme internationale
et II, à l’aide de la formule
particulière.
d,Ul) - d,(l)
7 Mode opératoire
R=2
bo#) + b()5(ll)
7.1 Température
où
Si la température est différente de la température ambiante, elle
d,(l) est la distance de rétention du pic 1;
sera précisée dans la Norme internationale particulière.
d,( II) est la distance de rétention du pic Il ;
bo 5(l) est la largeur, en millimètres, du pic I à mi-hauteur;
7.2 Débit du solvant d’élution
I
en millimétres, du pic II à mi-
b0,kJ II) est la largeur,
Régler le débit de manière à obtenir les séparations des compo-
hauteur.
sés à doser.
(Voir la figure.)
8 Performance de la colonne
9 Méthodes de dosage
8.1 Test d’inertie chimique
9.1 Conditions générales
S’assurer que les produits à identifier ne sont pas dégradés.
Réaliser le chromatogramme comme le précise la Norme inter-
8.2 Efficacité de la colonne
nationale particuliére.
Déterminer le nombre de plateaux effectifs UV) sur le pic de
Dans certaines déterminations de composants spécifiques, la
l’étalon interne spécifié dans chaque norme particulière et en
Norme internationale particuliére peut prescrire d’opérer en iso-
utilisant les solvants également spécifiés, à température iso-
cratique ou en gradient d’élution.
therme, et dans des conditions isocratiques à l’aide de la for-
mule suivante
Dans ces cas, le débit doit être réglé de telle sorte que l’on
obtienne la séparation indiquée dans la Norme internationale
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