Water quality — Evaluation of ultimate aerobic biodegradability of organic compounds in aqueous medium by determination of oxygen demand in a closed respirometer

Qualité de l'eau — Évaluation, en milieu aqueux, de la biodégradabilité aérobie ultime des composés organiques par détermination de la demande en oxygène dans un respiromètre fermé

La présente Norme internationale spécifie une méthode d'évaluation, en milieu aqueux, de la biodégradabilité ultime de composés organiques et d'eaux résiduaires présents à une concentration donnée sous l'action de microorganismes aérobies, par détermination de la demande en oxygène dans un respiromètre fermé. La méthode est applicable à des composés organiques : a) solubles dans l'eau dans les conditions de l'essai; b) peu solubles dans l'eau dans les conditions de l'essai, auquel cas il peut être nécessaire de prendre des mesures particulières assurant une bonne dispersion du composé (voir, par exemple, l'ISO 10634) ; c) n'atteignant pas l'absorbant de C02 et ne réagissant pas avec lui ; d) volatils, à condition d'utiliser un respiromètre adapté ou des conditions appropriées (par exemple un plus petit rapport entre les volumes de l'espace de tête et du milieu liquide) ; e) n'ayant pas d'effet inhibiteur sur les micro-organismes d'essai à la concentration choisie pour l'essai. La présence d'un effet inhibiteur peut être mis en évidence suivant la méthode spécifiée en 7.3, ou par toute autre méthode de détermination de l'effet inhibiteur d'un composé sur les bactéries (voir, par exemple, l'ISO 8192). NOTE Les conditions décrites dans la présente Norme internationale ne correspondent pas toujours aux conditions optimales d'obtention de la biodégradation maximale. D'autres méthodes de biodégradation sont données dans l'ISO 15462.

General Information

Status
Published
Publication Date
28-Jul-1999
Current Stage
9093 - International Standard confirmed
Start Date
03-Jan-2024
Completion Date
19-Apr-2025
Ref Project

Relations

Standard
ISO 9408:1999 - Water quality -- Evaluation of ultimate aerobic biodegradability of organic compounds in aqueous medium by determination of oxygen demand in a closed respirometer
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Standard
ISO 9408:1999 - Qualité de l'eau -- Évaluation, en milieu aqueux, de la biodégradabilité aérobie ultime des composés organiques par détermination de la demande en oxygene dans un respirometre fermé
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Standards Content (Sample)


INTERNATIONAL ISO
STANDARD 9408
Second edition
1999-08-01
Water quality — Evaluation of ultimate
aerobic biodegradability of organic
compounds in aqueous medium
by determination of oxygen demand
in a closed respirometer
Qualité de l'eau — Évaluation, en milieu aqueux, de la biodégradabilité
aérobie ultime des composés organiques par détermination de la demande
en oxygène dans un respiromètre fermé
A
Reference number
Contents Page
1 Scope .1
2 Terms and definitions .1
3 Principle.3
4 Test environment.3
5 Reagents.4
6 Apparatus .5
7 Procedure .5
8 Calculation and expression of results.8
9 Validity of results.10
10 Test report .11
Annex A (informative) Example of calculation of theoretical oxygen demand.12
Annex B (informative) Correction of oxygen uptake for interference by nitrification.14
(informative)
Annex C Example of a biodegradation curve .16
Annex D (informative) Closed respirometer .17
Bibliography.18
©  ISO 1999
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means, electronic
or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case postale 56 • CH-1211 Genève 20 • Switzerland
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Printed in Switzerland
ii
© ISO
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO
member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical
committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting.
Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
International Standard ISO 9408 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee
SC 5, Biological methods.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 9408:1991), which has been technically revised.
Annexes A to D of this International Standard are for information only.
iii
INTERNATIONAL STANDARD  © ISO ISO 9408:1999(E)
Water quality — Evaluation of ultimate aerobic biodegradability
of organic compounds in aqueous medium by determination
of oxygen demand in a closed respirometer
WARNING — Activated sludge and sewage contain potentially pathogenic organisms. Take appropriate
precautions when handling them. Handle with care toxic test compounds and those whose properties are
unknown.
1 Scope
This International Standard specifies a method, by determination of the oxygen demand in a closed respirometer, for
the evaluation in aqueous medium of the ultimate biodegradability of organic compounds and waste waters at a given
concentration by aerobic microorganisms.
The method applies to organic compounds which
a) are water-soluble under the conditions of the test;
b) are poorly water-soluble under the conditions of the test, in which case special measures may be necessary to
achieve good dispersion of the compound (see for example, ISO 10634);
c) do not reach and react with the CO absorbent;
d) are volatile, provided that a suitable respirometer or suitable conditions (e.g. a smaller ratio of volume head
space to volume liquid medium) are used;
e) are not inhibitory to the test microorganisms at the concentration chosen for the test. The presence of inhibitory
effects can be determined as specified in 7.3, or by using any other method for determining the inhibitory effect of
a compound on bacteria (see, for example, ISO 8192).
NOTE The conditions described in this International Standard do not always correspond to the optimal conditions for
allowing the maximum degree of biodegradation to occur. For alternative biodegradation methods, see ISO 15462.
2 Terms and definitions
For the purposes of this International Standard, the following terms and definitions apply.
2.1
ultimate aerobic biodegradation
breakdown of a chemical compound or organic matter by microorganisms in the presence of oxygen to carbon
dioxide, water and mineral salts of any other elements present (mineralization) and the production of new biomass
2.2
primary biodegradation
structural change (transformation) of a chemical compound by microorganisms, resulting in the loss of a specific
property
© ISO
2.3
activated sludge
biomass produced in the aerobic treatment of wastewater by the growth of bacteria and other microorganisms in the
presence of dissolved oxygen
2.4
concentration of suspended solids of an activated sludge
amount of solids obtained by filtration or centrifugation of a known volume of activated sludge and drying at about
105 °C to constant mass
2.5
biochemical oxygen demand
BOD
mass concentration of dissolved oxygen consumed under specified conditions by the aerobic biological oxidation of
a chemical compound or organic matter in water
NOTE It is expressed in this case as milligrams oxygen uptake per milligram (or gram) test compound.
2.6
chemical oxygen demand
COD
mass concentration of oxygen equivalent to the amount of a specified oxidant consumed by a chemical compound
or organic matter when a water sample is treated with that oxidant under defined conditions
NOTE It is expressed in this case as milligrams oxygen consumed per milligram (or gram) test compound.
2.7
theoretical oxygen demand
ThOD
theoretical maximum amount of oxygen required to oxidize a chemical compound completely, calculated from the
molecular formula
NOTE It is expressed in this case as milligrams oxygen required per milligram (or gram) test compound.
2.8
dissolved organic carbon
DOC
that part of the organic carbon in the water which cannot be removed by specified phase separation
–2
NOTE Examples of specified phase separation are centrifugation at 40 000 m{s for 15 min or by membrane filtration
using membranes with pores of 0,2 mm to 0,45 mm diameter.
2.9
lag phase
time from the start of a test until adaptation and/or selection of the degrading microorganisms are achieved and the
biodegradation degree of a chemical compound or organic matter has increased to about 10 % of the maximum
level of biodegradation
NOTE It is expressed in days.
2.10
maximum level of biodegradation
maximum biodegradation degree of a chemical compound or organic matter in a test, above which no further
biodegradation takes place during the test
NOTE It is expressed in percent.
© ISO
2.11
biodegradation phase
time from the end of the lag phase of a test until about 90 % of the maximum level of biodegradation has been
reached
NOTE It is expressed in days.
2.12
plateau phase
time from the end of the biodegradation phase until the end of the test
NOTE It is expressed in days.
2.13
pre-exposure
pre-incubation of an inoculum in the presence of the test chemical compound or organic matter, with the aim of
enhancing the ability of this inoculum to biodegrade the test material by adaptation and/or selection of the
microorganisms
2.14
preconditioning
pre-incubation of an inoculum under the conditions of the subsequent test in the absence of the test chemical
compound or organic matter, with the aim of improving the performance of the test by acclimatization of the
microorganisms to the test conditions
3 Principle
Determination of the biodegradation of organic compounds by aerobic microorganisms is carried out using a static
aqueous test system. Organic compounds in the context of this International Standard include waste waters. The
test mixture contains an inorganic medium, the organic compound as the sole source of carbon and energy at a
mass concentration of normally 100 mg/l organic carbon [but its theoretical oxygen demand (ThOD) shall be at least
100 mg/l], and a mixed inoculum obtained from a waste-water treatment plant or from another source in the
environment.
The mixture is agitated in a closed test vessel and the consumption of oxygen is determined either by measuring
the amount of oxygen required to maintain a constant gas volume in the respirometer vessel, or by measuring the
change in volume or pressure (or a combination of the two) in the apparatus. The evolved carbon dioxide is
absorbed in a suitable substance in the test vessel.
The degradation is followed over a period of 28 d, or longer if necessary, by determining the consumption of oxygen
either automatically or manually. The amount of oxygen consumed by the organic compound (after correction by
comparison with blank control) is expressed as a percentage of either the theoretical oxygen demand (ThOD),
calculated from the formula of the compound, or the chemical oxygen demand (COD).
For sufficiently water-soluble compounds, removal of dissolved organic carbon (DOC) may be determined
(optionally) by measuring the concentration of DOC at the beginning and the end of incubation to obtain additional
information on the ultimate biodegradability. If a substance-specific analytical method is available, information on the
primary degradability may be obtained.
4 Test environment
o o
Incubation shall take place in the dark or in diffused light, at a temperature within the range 20 C to 25 C which
o
shall not vary by more than ± 1 C during the test.
© ISO
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade.
5.1 Water
Distilled or deionized water containing less than 1 mg/l DOC.
5.2 Test medium
5.2.1 Composition
5.2.1.1 Solution a)
Dissolve
anhydrous potassium dihydrogenphosphate (KH PO ) 8,5 g
2 4
anhydrous dipotassium hydrogenphosphate (K HPO ) 21,75 g
2 4
.
disodium hydrogenphosphate dihydrate (Na HPO 2H O) 33,4 g
2 4 2
ammonium chloride (NH Cl) 0,5 g
water (5.1), in quantity necessary to make up to 1000 ml
In order to check this buffer solution, it is recommended to measure the pH, which should be at about 7,4. If this is
not the case prepare a new solution.
5.2.1.2 Solution b)
Dissolve 22,5 g magnesium sulfate heptahydrate (MgSO {H O) in water (5.1), quantity necessary to make up to
4 2
1000 ml.
5.2.1.3 Solution c)
Dissolve 36,4 g calcium chloride dihydrate (CaCl {2H O) in water (5.1), quantity necessary to make up to 1000 ml.
2 2
5.2.1.4 Solution d)
Dissolve 0,25 g iron(III) chloride hexahydrate (FeCl {6H O) in water (5.1), quantity necessary to make up to
3 2
1000 ml. Prepare this solution freshly before use, or add a drop of concentrated hydrochloric acid (HCl) to avoid
precipitation
5.2.2 Preparation of the test medium
For 1000 ml of test medium, add to about 800 ml of water (5.1):
 10 ml of solution a);
 1 ml of each of the solutions b) to d).
Make up to 1000 ml with the water (5.1). Prepare the test medium freshly before use. The solutions a) to c) may be
stored up to 6 months in the dark at room temperature.
5.3 Carbon dioxide absorber
Potassium hydroxide solution (about 10 mol/l), soda lime pellets or other suitable absorbent.
© ISO
5.4 Mercury chloride solution
Dissolve 1 g of mercury(II) chloride (HgCl ) in 100 ml of the water (5.1).
5.5 Sodium hydroxide solution
Dissolve sodium hydroxide (NaOH) in the water (5.1) to obtain a solution of concentration 0,1 mol/l to 0,5 mol/l.
5.6 Hydrochloric acid solution
Dilute concentrated hydrochloric acid (HCl) in the water (5.1) to obtain a solution of concentration 0,1 mol/l to
0,5 mol/l.
6 Apparatus
Ensure that all glassware is thoroughly cleaned and free from organic or toxic matter.
6.1 Closed respirometer
The principle of a closed respirometer is given in annex D. The respirometer contains test vessels allowing oxygen
supply and stirring, including tubing nonpermeable to oxygen and carbon dioxide. The respirometer vessels are
located in a constant temperature room or in a thermostatically controlled water-bath. When testing volatile
compounds, the apparatus used shall be appropriate or adapted to this particular purpose. Care shall be taken that
there is no loss of compound due to the apparatus.
6.2 Water-bath or constant temperature room (to comply with clause 4)
6.3 Equipment for measurement of dissolved organic ca
...


NORME ISO
INTERNATIONALE 9408
Deuxième édition
1999-08-01
Qualité de l'eau — Évaluation, en milieu
aqueux, de la biodégradabilité aérobie
ultime des composés organiques par
détermination de la demande en oxygène
dans un respiromètre fermé
Water quality — Evaluation of ultimate aerobic biodegradability of organic
compounds in aqueous medium by determination of oxygen demand
in a closed respirometer
.
A
Numéro de référence
Sommaire Page
1 Domaine d’application .1
2 Termes et définitions.1
3 Principe.3
4 Environnement d'essai.3
5 Réactifs.4
6 Appareillage .5
7 Mode opératoire.5
8 Calcul et expression des résultats.8
9 Validité des résultats.10
10 Rapport d'essai .11
Annexe A (informative) Exemple de calcul de la demande théorique en oxygène.12
Annexe B (informative) Correction de la consommation d'oxygène pour éliminer l'interférence
avec la nitrification .14
Annexe C (informative) Exemple de courbe de biodégradation.16
Annexe D (informative) Respiromètre fermé .17
Bibliographie.18
©  ISO 1999
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque
forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit de l'éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case postale 56 • CH-1211 Genève 20 • Suisse
Internet iso@iso.ch
Imprimé en Suisse
ii
© ISO
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI, Partie 3.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour
vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
La Norme internationale ISO 9408 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 147, Qualité de l'eau, sous-
comité SC 5, Méthodes biologiques.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 9408:1991), dont elle constitue une révision
technique.
Les annexes A à D de la présente Norme internationale sont données uniquement à titre d'information.
iii
NORME INTERNATIONALE  © ISO ISO 9408:1999(F)
Qualité de l'eau — Évaluation, en milieu aqueux, de la
biodégradabilité aérobie ultime des composés organiques par
détermination de la demande en oxygène dans un respiromètre
fermé
AVERTISSEMENT — Les boues activées et les eaux usées contiennent des organismes potentiellement
pathogènes. Prendre les précautions appropriées en les manipulant. Manipuler avec précaution les
composés d'essai toxiques et ceux dont on ne connaît pas les propriétés.
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale spécifie une méthode d'évaluation, en milieu aqueux, de la biodégradabilité ultime
de composés organiques et d'eaux résiduaires présents à une concentration donnée sous l'action de micro-
organismes aérobies, par détermination de la demande en oxygène dans un respiromètre fermé.
La méthode est applicable à des composés organiques
a) solubles dans l’eau dans les conditions de l'essai;
b) peu solubles dans l’eau dans les conditions de l'essai, auquel cas il peut être nécessaire de prendre des
mesures particulières assurant une bonne dispersion du composé (voir, par exemple, l'ISO 10634);
c) n'atteignant pas l'absorbant de CO et ne réagissant pas avec lui;
d) volatils, à condition d'utiliser un respiromètre adapté ou des conditions appropriées (par exemple un plus petit
rapport entre les volumes de l'espace de tête et du milieu liquide);
e) n'ayant pas d'effet inhibiteur sur les micro-organismes d'essai à la concentration choisie pour l'essai. La
présence d’un effet inhibiteur peut être mis en évidence suivant la méthode spécifiée en 7.3, ou par toute autre
méthode de détermination de l'effet inhibiteur d'un composé sur les bactéries (voir, par exemple, l'ISO 8192).
NOTE Les conditions décrites dans la présente Norme internationale ne correspondent pas toujours aux conditions
optimales d'obtention de la biodégradation maximale. D'autres méthodes de biodégradation sont données dans l'ISO 15462.
2 Termes et définitions
Pour les besoins de la présente Norme internationale, les termes et définitions suivants s'appliquent.
2.1
biodégradation aérobie ultime
en présence d'oxygène, décomposition par des micro-organismes d'un composé chimique ou d'une matière
organique en dioxyde de carbone, eau et sels minéraux issus de tout autre élément présent (minéralisation) et
production de nouvelle biomasse
© ISO
2.2
biodégradation primaire
modification structurelle (transformation) d'un composé chimique sous l'action de micro-organismes, entraînant la
perte d'une propriété spécifique
2.3
boue activée
biomasse produite, lors du traitement aérobie des eaux résiduaires, par la croissance de bactéries ou d'autres
micro-organismes en présence d'oxygène dissous
2.4
concentration de matières en suspension dans une boue activée
quantité de matière solide obtenue par filtration ou centrifugation d'un volume connu de boues activées et séchage
à 105 °C environ jusqu’à masse constante
2.5
demande biochimique en oxygène
DBO
concentration en masse de l’oxygène dissous consommé dans des conditions définies lors de l’oxydation biologique
aérobie d’un composé chimique ou d’une matière organique dans l’eau
NOTE La DBO s'exprime ici en milligrammes d’oxygène consommé par milligramme (ou gramme) de composé d'essai.
2.6
demande chimique en oxygène
DCO
concentration en masse d'oxygène équivalente à la quantité d'oxydant spécifié consommée par un composé
chimique ou une matière organique lorsqu'un échantillon d'eau est traité avec cet oxydant dans des conditions
définies
NOTE La DCO s'exprime ici en milligrammes d'oxygène consommé par milligramme (ou gramme) de composé d'essai.
2.7
demande théorique en oxygène
DThO
quantité théorique maximale d’oxygène nécessaire pour oxyder complètement un composé chimique, calculée à
partir de la formule moléculaire
NOTE La DThO s'exprime ici en milligrammes d’oxygène nécessaire par milligramme (ou gramme) de composé d'essai.
2.8
carbone organique dissous
COD
partie du carbone organique présent dans l'eau qui ne peut être éliminé par la méthode de séparation de phases
spécifiée
–2
NOTE Une séparation de phases peut être spécifiée, par exemple, par centrifugation à 40 000 m·s pendant 15 min ou
par filtration sur membrane de diamètre de pores de 0,2 μm à 0,45 μm.
2.9
phase de latence
durée entre le début d'un essai et le moment où l'adaptation et/ou la sélection des micro-organismes de
dégradation sont achevées et où le taux de biodégradation d'un composé chimique ou d'une matière organique a
atteint environ 10 % du niveau maximal de biodégradation
NOTE La phase de latence est exprimée en jours.
2.10
niveau maximal de biodégradation
dans un essai, taux maximal de biodégradation d'un composé chimique ou d'une matière organique au-delà duquel
aucune biodégradation ne survient plus pendant l'essai
NOTE Le niveau maximal de biodégradation est exprimé en pourcentage.
© ISO
2.11
phase de biodégradation
durée entre la fin de la phase de latence d'un essai et le moment où environ 90 % du niveau maximal de
biodégradation est atteint
NOTE La phase de biodégradation est exprimée en jours.
2.12
phase de plateau
durée entre la fin de la phase de biodégradation et la fin de l'essai
NOTE La phase de plateau est exprimée en jours.
2.13
préexposition
préincubation d'un inoculum en présence du composé chimique ou d'une matière organique, destinée à accroître
l'aptitude de l'inoculum à dégrader le matériau d'essai par adaptation et/ou sélection des micro-organismes
2.14
préconditionnement
préincubation d'un inoculum dans les conditions d'essai, mais en l'absence du composé chimique ou de la matière
organique, destinée à améliorer l'efficacité de l'essai par acclimatation des micro-organismes aux conditions de
l'essai
3 Principe
Détermination de la biodégradation des composés organiques par des micro-organismes aérobies dans un milieu
d’essai aqueux en condition statique. Dans le contexte de la présente Norme internationale, les composés
organiques comprennent également les eaux résiduaires. Le mélange pour essai contient un milieu inorganique, le
composé organique comme seule source de carbone et d’énergie à une concentration normalement égale à
100 mg/l [mais sa demande théorique en oxygène (DThO) doit être d’au moins 100 mg/l] ainsi qu’un inoculum mixte
provenant d’une usine de traitement des eaux résiduaires ou d'une autre source de l’environnement.
Le mélange est agité dans un récipient d'essai fermé et la consommation d'oxygène est déterminée soit par
mesurage de la quantité d'oxygène nécessaire au maintien d'un volume de gaz constant dans le respiromètre, soit
par mesurage des variations de volume et/ou de pression dans l'appareil. Le dioxyde de carbone dégagé est
absorbé par une substance appropriée, à l'intérieur du récipient d'essai.
La dégradation est suivie sur une période de 28 jours, ou davantage si nécessaire, en déterminant la
consommation d'oxygène de façon automatique ou manuelle. La quantité d'oxygène consommée par le composé
organique (après correction par comparaison avec un essai à blanc) est exprimée soit en pourcentage de la
demande théorique en oxygène (DThO), calculée à partir de la formule du composé, soit en pourcentage de la
demande chimique en oxygène (DCO).
Lorsque les composés sont suffisamment solubles dans l'eau, il est possible de déterminer (facultativement)
l'élimination du carbone organique dissous (COD) par mesurage de la concentration en COD en début et en fin
d'incubation, de manière à obtenir des informations complémentaires sur la biodégradabilité ultime. Si une méthode
d'analyse spécifique de la substance est disponible, des informations sur la biodégradabilité primaire peuvent être
obtenues.
4 Environnement d'essai
L'incubation doit être menée à l'abri de la lumière ou sous lumière diffuse, à une température maintenue constante
durant l'essai (à ± 1 °C près) comprise entre 20 °C et 25 °C.
© ISO
5 Réactifs
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
5.1  Eau, distillée ou dé-ionisée, dont la teneur en COD est inférieure à 1 mg/l.
5.2  Milieu d'essai
5.2.1  Composition
5.2.1.1  Solution a)
Dihydrogénophosphate de potassium anhydre (KH PO ) 8,5 g
2 4
Monohydrogénophosphate de dipotassium anhydre (K HPO ) 21,75 g
2 4
Monohydrogénophosphate de disodium dihydraté (Na HPO ,2H O) 33,4 g
2 4 2
Chlorure d'ammonium (NH Cl) 0,5 g
Dissoudre dans une quantité suffisante d'eau (5.1) pour complèter à 1 000 ml
NOTE Afin de vérifier cette solution tampon, il est recommandé d'effectuer un mesurage du pH. Si celui-ci n'est pas d'environ
7,4, il convient de préparer une nouvelle solution.
5.2.1.2  Solution b)
Dissoudre 22,5 g de sulfate de magnésium heptahydraté (MgSO ,7H O) dans l'eau (5.1) et compléter à 1 000 ml.
4 2
5.2.1.3  Solution c)
Dissoudre 36,4 g de chlorure de calcium dihydraté (CaCl ,2H O) dans l'eau (5.1) et compléter à 1 000 ml.
2 2
5.2.1.4  Solution d)
Dissoudre 0,25 g de chlorure de fer(III) hexahydraté (FeCl ,6H O) dans l'eau (5.1) et compléter à 1 000 ml. Pour
3 2
éviter les précipités, préparer cette solution juste avant emploi ou ajouter une goutte d'acide chlorhydrique
concentré (HCl).
5.2.2  Préparation du milieu d'essai
Pour 1 000 ml de milieu d'essai, ajouter à environ 800 ml d'eau (5.1):
 10 ml de solution a);
 1 ml de chacune des solutions b) à d).
Compléter à 1 000 ml avec de l'eau (5.1). Préparer cette solution extemporanément. Les solutions a) à c) peuvent
être conservées pendant 6 mois à l'abri de la lumière et à température ambiante.
5.3  Absorbant du dioxyde de carbone
Solution d'hydroxyde de potassium (à environ 10 mol/l), comprimés de chaux sodée ou tout autre absorbant
approprié.
5.4  Solution de chlorure de mercure
Dissoudre 1 g de chlorure de mercure(II) (H
...

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