ISO 12966-1:2014
(Main)Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty acid methyl esters — Part 1: Guidelines on modern gas chromatography of fatty acid methyl esters
Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty acid methyl esters — Part 1: Guidelines on modern gas chromatography of fatty acid methyl esters
ISO 12966-1:2014 gives an overview of the gas chromatographic determination of fatty acids, free and bound, in animal and vegetable fats and oils following their conversion to fatty acid methyl esters (FAMEs).
Corps gras d'origines animale et végétale — Chromatographie en phase gazeuse des esters méthyliques d'acides gras — Partie 1: Lignes directrices relatives à la chromatographie en phase gazeuse moderne des esters méthyliques d'acides gras
L'ISO 12966-1:2014 donne un aperçu de la détermination par chromatographie en phase gazeuse des acides gras, libres et liés, dans les corps gras d'origines animale et végétale après leur conversion en esters méthyliques d'acides gras (EMAG).
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МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 12966-1
Первое издание
2014-12-01
Жиры и масла животные и
растительные. Газовая хроматография
метиловых эфиров жирных кислот.
Часть 1.
Руководящие указания по
современной газовой хроматографии
метиловых эфиров жирных кислот
Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty acid
methyl esters —
Part 1: Guidelines on modern gas chromatography of fatty acid methyl
esters
Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO
Ссылочный номер
ISO 12966-1:2014(R)
©
ISO 2014
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ISO 12966-1:2014(R)
ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ
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Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO по адресу ниже или членов ISO в стране регистрации пребывания.
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Опубликовано в Швейцарии
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ISO 12966-1:2014(R)
Содержание Страница
Предисловие . iv
Введение . v
1 Область применения . 1
2 Нормативные ссылки . 1
3 Принцип . 2
4 Получение метиловых эфиров жирных кислот (FAME). 2
5 Колонки . 3
6 Газожидкостная хроматография эфиров FAME . 5
7 Оценка хроматограмм . 5
7.1 Площадь пика и площадь в процентах . 5
7.2 Оценка с помощью внутреннего стандарта или поправочных коэффициентов . 5
8 Протокол испытания . 5
Библиография . 6
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ISO 12966-1:2014(R)
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) всемирная федерация национальных органов
по стандартизации (комитеты-члены ISO). Работа по подготовке международных стандартов обычно
ведется через технические комитеты ISO. Каждый комитет-член ISO, проявляющий интерес к тематике,
по которой учрежден технический комитет, имеет право быть представленным в этом комитете.
Международные организации, государственные и негосударственные, имеющие связи с ISO, также
принимают участие в работе. ISO тесно сотрудничает с Международной электротехнической
комиссией (IEC) по всем вопросам стандартизации в области электротехники.
Процедуры, используемые для разработки данного документа, и процедуры, предусмотренные для его
дальнейшего ведения, описаны в Части 1 Директив ISO/IEC. В частности, следует отметить различные
критерии утверждения, требуемые для различных типов документов ISO. Проект данного документа
был разработан в соответствии с редакционными правилами Части 2 Директив ISO/IEC
(см. www.iso.org/directives).
Необходимо обратить внимание на возможность того, что ряд элементов данного документа могут
быть предметом патентных прав. Международная организация ISO не должна нести ответственность
за идентификацию таких прав, частично или полностью. Сведения о патентных правах,
идентифицированных при разработке документа, будут указаны во Введении и/или в перечне
полученных ISO объявлений о патентном праве (см. www.iso.org/patents).
Любое торговое название, использованное в данном документе, является информацией,
предоставляемой для удобства пользователей, а не свидетельством в пользу того или иного товара
или той или иной компании.
Для пояснения значений конкретных терминов и выражений ISO, относящихся к оценке соответствия, а
также информация о соблюдении Международной организацией ISO принципов ВТО по техническим
барьерам в торговле (TВT), см. следующий унифицированный локатор ресурса (URL): Foreword —
Supplementary information.
Технический комитет, несущий ответственность за данный документ, ISO/TC 34, Пищевые продукты,
Подкомитет SC 11, Животные и растительные жиры и масла.
Настоящее первое издание ISO 12966-1 вместе с ISO 12966-4 отменяет и заменяет ISO 5508:1990 и
ISO 15304:2002, которые подверглись техническому пересмотру.
ISO 12966 состоит из следующих частей под общим названием Жиры и масла животные и
растительные. Газовая хроматография метиловых эфиров жирных кислот:
— Часть 1. Руководящие указания по современной газовой хроматографии метиловых эфиров
жирных кислот
— Часть 2. Получение метиловых эфиров жирных кислот
— Часть 3. Получение метиловых эфиров с применением гидроксида триметилсульфония
(TMSH)
— Часть 4. Метод капиллярной газовой хроматографии
iv © ISO 2014 – Все права сохраняются
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ISO 12966-1:2014(R)
Введение
Настоящая часть ISO 12966 входит в серию из четырех международных стандартов, рассматривающих
получение и определение метиловых эфиров жирных кислот с помощью газовой хроматографии в
животных и растительных жирах и маслах. Все части ISO 12966 применимы к нерафинированным,
рафинированным, частично или полностью гидрогенизированным жирам, маслам и жирным кислотам,
полученным из источников животного и растительного происхождения.
Все части ISO 12966 не применимы к анализу жиров и масел, полученных от жвачных животных
молочной породы, (включая молоко и молочные продукты или жир, полученный из молока и молочных
продуктов), или к анализу продуктов с добавками коньюгированной (сопряженной) линолевой кислоты
(CLA). К тому же данный стандарт не предназначен для применения к полимеризованным и
окисленным жирам и маслам.
Настоящая часть ISO 12966 представляет собой руководящие указания по современной газовой
хроматографии метиловых эфиров жирных кислот, в то время как ISO 12966-2 и ISO 12966-3
рассматривают получение метиловых эфиров жирных кислот различными методами. В ISO 12966-4
приводятся условия анализа метиловых эфиров жирных кислот с помощью капиллярной газовой
хроматографии.
Эта серия международных стандартов заменяет следующие международные стандарты:
― ISO 5508:1990 заменен на ISO 12966-1 и ISO 12966-4
― ISO 15304:2002 заменен на ISO 12966-1 и ISO 12966-4
― ISO 5509:2000 заменен на ISO 12966-2 и ISO 12966-3
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МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ ISO 12966-1:2014(R)
Жиры и масла животные и растительные. Газовая
хроматография метиловых эфиров жирных кислот.
Часть 1.
Руководящие указания по современной газовой
хроматографии метиловых эфиров жирных кислот
1 Область применения
Настоящая часть ISO 12966 дает обзор по газохроматографическому определению свободных и
связанных жирных кислот в растительных и животных жирах и маслах после их превращения в
метиловые эфиры жирных кислот.
Определение качественного и количественного состава жирных кислот газожидкостной
хроматографией (GLC) широко применяется в анализе липидов. Она используется для исследования
жиров и масел или жирных пищевых продуктов после экстракции масла из анализируемого вещества.
Связанные жирные кислоты триацилглицеринов (TAG) и, в зависимости от метода этерификации,
свободные жирные кислоты (FFA) и другие липиды превращают в метиловые эфиры жирных кислот
(FAME), которые определяют капиллярной газовой хроматографией. В зависимости от количества
различных жирных кислот (теоретически может присутствовать более 50 различных жирных кислот)
для разделения можно использовать капиллярные колонки длиной от 10 м до 100 м.
Газожидкостная хроматография метиловых эфиров жирных кислот применяется ко всем натуральным
и синтетическим смесям три-, ди- и моноацилглицеринов, к эфирам жирных кислот, свободным
жирным кислотам, мылам и другим соединениям жирного ряда. В соответствии с этой серией
стандартов можно определить метиловые эфиры жирных кислот от С4 до С26, включая метиловые
эфиры насыщенных жирных кислот, метиловые эфиры цис- и транс-мононенасыщенных жирных
кислот и метиловые эфиры цис- и транс-полиненасыщенных жирных кислот.
Для определения жирных кислот с короткой цепью часто используют изопропиловый и бутиловый эфиры,
чтобы избежать интерференции от пика растворителя и снизить расхождения в откликах детектора.
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные нормативные документы, частично или полностью, являются обязательными
при применении данного документа. Для датированных ссылок применяется только цитированное
издание документа. Для недатированных ссылок необходимо использовать самое последнее издание
нормативного ссылочного документа (включая любые изменения).
ISO 12966-2, Жиры и масла животные и растительные. Газовая хроматография метиловых эфиров
жирных кислот. Часть 2. Получение метиловых эфиров жирных кислот
ISO 12966-3, Жиры и масла животные и растительные. Газовая хроматография метиловых эфиров
жирных кислот. Часть 3. Получение метиловых эфиров с применением гидроксида
триметилсульфония (TMSH)
1)
ISO 12966-4:- , Жиры и масла животные и растительные. Газовая хроматография метиловых
эфиров жирных кислот. Часть 4. Метод капиллярной газовой хроматографии
1)
В стадии подготовки. Будет опубликован.
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ISO 12966-1:2014(R)
3 Принцип
Газожидкостная хроматография (GLC) используется для качественного и количественного анализа
метиловых эфиров жирных кислот (FAME). Эфиры FAME получают в соответствии с требованиями
ISO 12966-2 или ISO 12966-3, а затем растворенные эфиры впрыскивают в инжектор и испаряют.
Разделение эфиров FAME происходит в аналитических колонках различной полярности и длины. Для
обнаружения FAME используют пламенно-ионизационный детектор (FID).
В газовой хроматографии эфиров FAME с применением детектора FID следует использовать водород
в качестве газа-носителя (подвижная фаза). В случае применения масс-селективного детектора (MSD)
должен использоваться гелий. При использовании водорода разделение может быть достигнуто в
более короткий промежуток времени и с более отчетливыми пиками. Неподвижная фаза представляет
собой микроскопический слой тонкой жидкой пленки на инертной твердой поверхности, изготовленной
из стали, стекла или плавленого кварца.
Анализируемые летучие соединения взаимодействуют при прохождении через капилляр с покрытием
неподвижной фазой, нанесенным на внутреннюю поверхность колонки. В результате разного
взаимодействия различных соединений они выходят из колонки или элюируются в разное время,
которое называют временем удерживания соединения при заданном наборе параметров анализа.
Сравнение времен удерживания используют для идентификации различных соединений.
ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ — При использовании масс-селективного детектора для получения
количественных результатов необходимо принимать специальные меры предосторожности из-
за различий в характере фрагментации отдельных эфиров FAME. К тому же в случае масс-
спектрометрии используют другие производные, отличные от FAME, которые обсуждаются в
этой части ISO 12966, например, эфиры пиколиновой кислоты, диметилоксазолидины и другие.
4 Получение метиловых эфиров жирных кислот (FAME)
Получение метиловых эфиров жирных кислот должно выполняться в соответствии с методами,
указанными в ISO 12966-2 и ISO 12966-3. Обзор этих методов приводится в Таблице 1.
Таблица 1 — Обзор различных методов этерификации
Метод Принцип GC-Инжектор Примечание —
Также для триглицеридов
(MCT) со средней цепью и
Применим к жирам и
жирных кислот с короткой
маслам, содержащим
цепью, образование
жирные кислоты до
Экспресс-метод
артефактов незначительно.
Непосредственно в масляной кислоты
переметилирования в условиях
Внутренний стандарт для
колонку (C4:0)
щелочного катализа с KOH
ISO 12966-2,
определения масляной или
Подраздел 4.2
капроновой кислоты
С делителем потока/ Переэтерификация при
FFA не превращаются в FAME
Без делителя потока комнатной
Потери FAME с короткой
Опасность образования мыла
температуре, нет
цепью часто происходят при
необходимости
разделении с помощью
испарять растворитель
солевого раствора/
растворителя.
Общий метод переме-
Потери FAME с короткой
тилирования/метилирования,
Непосредственно в Применим к жирам и
проводимый в условиях цепью часто происходят при
колонку маслам
ISO 12966-2, кипячении с обратным
последовательного щелочного
Подраздел 4.3 холодильником и разделении
и кислотного катализа
С делителем потока/ Не рекомендуется для
с помощью солевого
(NaOCH )
3 Без делителя потока лауриновых масел
раствора/ растворителя.
FFA превращаются в FAME
2 © ISO 2014 – Все права сохраняются
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ISO 12966-1:2014(R)
Таблица 1 (продолжение)
Метод Принцип GC-Инжектор Примечание —
Должен использоваться
Переметилирование /
имеющийся в продаже
метилирование с помощью
14 % метанольный
трифторида бора (BF )
3
раствор BF который
Непосредственно в Применим к жирам рыб.
3,
колонку
Реактив очень токсичен. не готовится
ISO 12966-2,
Не применим к соединениям с
самостоятельно из-за
Подраздел 4.4
С делителем потока/ вторичными кислородными
Используют только в закрытых
токсичности.
Без делителя потока группами.
ампулах и вытяжном шкафу
Раствор имеет
Возможно образование
ограниченный срок
артефактов
годности (старение)
Метанольный раствор серной
или соляной кислоты Реактив должен быть
Непосредственно в
приготовлен; Также для проб с высоким
колонку
ISO 12966-2, Возможно образование
этерификация при содержанием свободных
Подраздел 4.5 артефактов
С делителем потока/
кипении в запаянной жирных кислот
Без делителя пот
...
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 12966-1
First edition
2014-12-01
Animal and vegetable fats and oils —
Gas chromatography of fatty acid
methyl esters —
Part 1:
Guidelines on modern gas
chromatography of fatty acid methyl
esters
Corps gras d’origines animale et végétale — Chromatographie en
phase gazeuse des esters méthyliques d’acides gras —
Partie 1: Lignes directrices relatives à la chromatographie en phase
gazeuse moderne des esters méthyliques d’acides gras
Reference number
ISO 12966-1:2014(E)
©
ISO 2014
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ISO 12966-1:2014(E)
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Published in Switzerland
ii © ISO 2014 – All rights reserved
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ISO 12966-1:2014(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Principle . 1
4 Preparation of FAME . 2
5 Columns . 3
6 GLC of FAMEs . 4
7 Evaluation of the chromatograms . 4
7.1 Peak area and area per cent . 4
7.2 Evaluation by means of an internal standard or correction factors . 4
8 Test report . 5
Bibliography . 6
© ISO 2014 – All rights reserved iii
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ISO 12966-1:2014(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of any
patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or on
the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity
assessment, as well as information about ISO’s adherence to the WTO principles in the Technical Barriers
to Trade (TBT) see the following URL: Foreword - Supplementary information
The committee responsible for this document is ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11, Animal
and vegetable fats and oils.
This first edition of ISO 12966-1, together with ISO 12966-4, cancels and replaces ISO 5508:1990 and
ISO 15304:2002 which have been technically revised.
ISO 12966 consists of the following parts, under the general title Animal and vegetable fats and oils — Gas
chromatography of fatty acid methyl esters:
— Part 1: Guidelines on modern gas chromatography of fatty acid methyl esters
— Part 2: Preparation of methyl esters of fatty acids
— Part 3: Preparation of methyl esters using trimethylsulfonium hydroxide (TMSH)
— Part 4: Capillary gas chromatographic method
iv © ISO 2014 – All rights reserved
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ISO 12966-1:2014(E)
Introduction
This part of ISO 12966 is one of a suite of four International Standards for the preparation and
determination of fatty acid methyl esters by gas chromatography in animal and vegetable fats and oils.
ISO 12966 (all parts) is applicable to crude, refined, partially hydrogenated or fully hydrogenated fats,
oils and fatty acids derived from animal and vegetable sources.
ISO 12966 (all parts) is not suitable for the analysis of dairy, ruminant fats and oils (including milk and
milk products or fat coming from milk and milk products), or products supplemented with conjugated
linoleic acid (CLA). Furthermore it is not intended to be applied to polymerized and oxidized fats and
oils.
This part of ISO 12966 is a guideline to the modern gas chromatography of fatty acid methyl esters, while
ISO 12966-2 and ISO 12966-3 cover the preparation of fatty acid methyl esters by different methods. In
ISO 12966-4, the conditions for the analysis of fatty acid methyl esters by capillary gas chromatography
are given.
This suite of International Standards replaces the following International Standards:
— ISO 5508:1990 is replaced by ISO 12966-1 and ISO 12966-4
— ISO 15304:2002 is replaced by ISO 12966-1 and ISO 12966-4
— ISO 5509:2000 is replaced by ISO 12966-2 and ISO 12966-3
© ISO 2014 – All rights reserved v
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 12966-1:2014(E)
Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography
of fatty acid methyl esters —
Part 1:
Guidelines on modern gas chromatography of fatty acid
methyl esters
1 Scope
This part of ISO 12966 gives an overview of the gas chromatographic determination of fatty acids, free
and bound, in animal and vegetable fats and oils following their conversion to fatty acid methyl esters
(FAMEs).
The qualitative and quantitative determination of the composition of fatty acids by gas liquid
chromatography (GLC) is a widely used application in lipid analysis. It is used for the characterization of
fats and oils, or fatty foodstuffs after the extraction of the oil from the matrix. The bound fatty acids of
the triacylglycerols (TAGs) and, depending on the esterification method, the free fatty acids (FFA) and
other lipids, are converted to fatty acid methyl esters (FAMEs), which are determined by capillary gas
chromatography. Depending on the number of different fatty acids (theoretically more than 50 different
fatty acids can be present) capillary columns with a length of 10 m to 100 m are used for a separation.
The GLC of FAMEs is applicable to all natural and synthetic mixtures of tri-, di- and monoacylglycerols,
to fatty acid esters, free fatty acids, soaps and other fatty compounds. With this suite of standards,
FAMEs from C4 to C26 can be determined, including saturated fatty acid methyl esters, cis- and trans-
monounsaturated fatty acid methyl esters, and cis- and trans-polyunsaturated fatty acid methyl esters.
For the determination of short chain fatty acids, isopropyl and butyl esters are often used so as to avoid
interferences with the solvent peak and in order to reduce differences in detector responses.
2 Normative references
The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are
indispensable for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated
references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 12966-2, Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty acid methyl esters — Part 2:
Preparation of methyl esters of fatty acids
ISO 12966-3, Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty acid methyl esters —
Part 3: Preparation of methyl esters using trimethylsulfonium hydroxide (TMSH)
1)
ISO 12966-4:— , Animal and vegetable fats and oils — Determination of methyl esters of fatty acids —
Part 4: Capillary gas chromatographic method
3 Principle
Gas liquid chromatography (GLC) is used for the qualitative and quantitative analysis of FAMEs. The
FAMEs are prepared in accordance with ISO 12966-2 or ISO 12966-3 and the dissolved FAMEs are
then injected into and vaporized within the injector. The separation of FAMEs is achieved on analytical
1) Under preparation. To be published.
© ISO 2014 – All rights reserved 1
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ISO 12966-1:2014(E)
columns of different polarity and lengths. For the detection of the FAMEs, a flame ionization detector
(FID) is used.
In the gas chromatography of FAMEs with FID, hydrogen should be used as the carrier gas (mobile
phase). For MSD (mass selective detector) applications helium shall be used. The separation can be done
in a shorter time with sharper peaks by using hydrogen. The stationary phase is a microscopic layer of
a thin liquid film on an inert solid surface, made of steel, glass or fused silica.
The volatilized compounds being analysed interact, during their passage through the capillary tubing,
with the stationary phase coating the inner surface of the column. Due to this different interaction of
different compounds, they exit the column, or elute, at a different time, which is called the retention time
of the compound at a given set of analysis parameters. The comparison of retention times is used for the
identification of the different compounds.
CAUTION — When a mass selective detector is used, special care shall be taken in order to achieve
quantitative results due to differences in fragmentation patterns of individual FAMEs. Also, for
mass spectrometry, derivatives other than the FAMEs discussed in this part of ISO 12966 are
used, as for example, picolinyl esters or dimethyl oxazolidines and others.
4 Preparation of FAME
The preparation of the fatty acid methyl esters shall be carried out in accordance with ISO 12966-2 and
ISO 12966-3. An overview is given in Table 1.
Table 1 — Overview on the different esterification methods
Method Principle GC-Injector Note –
Also for medium chain
Applicable to fats triglycerides (MCTs) and
and oils containing short chain fatty acids,
Rapid transmethylation
fatty acids down to formation of artefacts
method under alkali-cata-
On-column
butanoic (C4:0) insignificant. Internal
lysed conditions with KOH
ISO 12966-2,
standard for butanoic/
Split/
Transesterifi-
Subclause 4.2 FFA are not converted to
hexanoic acid determina-
cation at room
FAME Splitless
tion
temperature, no
Danger of soap formation
solvent evapora- Short chain FAMEs are
tion necessary easily lost during saline/
solvent partitioning.
General transmethylation/
Applicable to fats
Short chain FAMEs are
methylation under sequential On-column
and oils
ISO 12966-2, easily lost during reflux
alkaline and acid condition
Split/
Subclause 4.3 and saline / solvent parti-
(NaOCH ) Not recommended
3
Splitless
tioning
for lauric oils
FFA are converted to FAME
14 % methanolic
Boron trifluoride (BF ) trans-
3
solution of BF ,
3
methylation/methylation
shall be bought Applicable to fish oils.
On-column
Reagent is very toxic.
and not prepared
ISO 12966-2,
Not applicable to com-
Use only in closed vials and
Split/ due to toxicity.
Subclause 4.4
pounds with secondary
fume cupboards
Splitless
The solution has oxy
...
DRAFT INTERNATIONAL STANDARD
ISO/DIS 12966-1
ISO/TC 34/SC 11 Secretariat: BSI
Voting begins on: Voting terminates on:
2013-09-26 2014-02-16
Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography
of fatty acid methyl esters —
Part 1:
Guidelines on modern gas chromatography of fatty acid
methy esters
Corps gras d’origines animale et végétale — Chromatographie en phase gazeuse des esters méthyliques
d’acides gras —
Partie 1: Directive de chromatographie en phase gazeuse moderne des esters méthyliques d’acides gras
[Revision of second edition (ISO 5508:1990) and first edition ISO 15304:2002]
ICS: 67.200.10
ISO/CEN PARALLEL PROCESSING
This draft has been developed within the International Organization for
Standardization (ISO), and processed under the ISO lead mode of collaboration
as defined in the Vienna Agreement.
This draft is hereby submitted to the ISO member bodies and to the CEN member
bodies for a parallel five month enquiry.
Should this draft be accepted, a final draft, established on the basis of comments
received, will be submitted to a parallel two-month approval vote in ISO and
THIS DOCUMENT IS A DRAFT CIRCULATED
formal vote in CEN.
FOR COMMENT AND APPROVAL. IT IS
THEREFORE SUBJECT TO CHANGE AND MAY
NOT BE REFERRED TO AS AN INTERNATIONAL
STANDARD UNTIL PUBLISHED AS SUCH.
To expedite distribution, this document is circulated as received from the
IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS
committee secretariat. ISO Central Secretariat work of editing and text
BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL,
composition will be undertaken at publication stage.
TECHNOLOGICAL, COMMERCIAL AND
USER PURPOSES, DRAFT INTERNATIONAL
STANDARDS MAY ON OCCASION HAVE TO
BE CONSIDERED IN THE LIGHT OF THEIR
POTENTIAL TO BECOME STANDARDS TO
WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN
Reference number
NATIONAL REGULATIONS.
ISO/DIS 12966-1:2013(E)
RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED
TO SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS,
NOTIFICATION OF ANY RELEVANT PATENT
RIGHTS OF WHICH THEY ARE AWARE AND TO
©
PROVIDE SUPPORTING DOCUMENTATION. ISO 2013
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/DIS 12966-1:2013(E)
Copyright notice
This ISO document is a Draft International Standard and is copyright-protected by ISO. Except as
permitted under the applicable laws of the user’s country, neither this ISO draft nor any extract
from it may be reproduced, stored in a retrieval system or transmitted in any form or by any means,
electronic, photocopying, recording or otherwise, without prior written permission being secured.
Requests for permission to reproduce should be addressed to either ISO at the address below or ISO’s
member body in the country of the requester.
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ISO/DIS 12966-1
Contents Page
Foreword . iv
Introduction . vii
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Principle . 1
4 Preparation of FAME . 2
5 Columns . 3
6 GLC of FAMEs . 4
7 Evaluation of the chromatograms . 4
7.1 Peak area and area percent . 4
7.2 Evaluation by means of an internal standard or correction factors . 4
8 Test report . 4
Bibliography . 6
© ISO 2013 – All rights reserved iii
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ISO/DIS 12966-1
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 12966-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11, Animal
and vegetable fats and oils.
This second/third/. edition cancels and replaces the first/second/. edition (), [clause(s) / subclause(s) /
table(s) / figure(s) / annex(es)] of which [has / have] been technically revised.
ISO 12966 consists of the following parts, under the general title Animal and vegetable fats and oils — Gas
chromatography of fatty acid methyl esters:
Part 1: Guidelines on modern gas chromatography of fatty acid methy esters
iv © ISO 2013 – All rights reserved
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ISO/DIS 12966-1
Introduction
This International Standard is part 1 of a suite of four standards for the preparation and determination of fatty
acid methyl esters by gas chromatography in animal and vegetable fats and oils, fat spreads and in fats and
oils isolated from foodstuffs. The standards are not applicable to polymerized and oxidized fats or fatty acids.
Part 1 is a guideline to the modern gas chromatography of fatty acid methyl esters, while parts 2 and 3 cover
the preparation of fatty methyl esters by different methods. In part 4 of this International Standard, the
conditions for the analysis of fatty acid methyl esters by GLC are given.
This suite of standards replaces the following standards:
ISO 5508:1990 is replaced by ISO 12996-1 and ISO 12996-4
ISO 15304:2002 is replaced by ISO 12996-4
ISO 5509:2000 is replaced by ISO 12996-2 and ISO 12996-3
© ISO 2013 – All rights reserved v
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DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/DIS 12966-1
Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of
fatty acid methyl esters — Part 1: Guidelines on modern gas
chromatography of fatty acid methy esters
1 Scope
This International Standard gives an overview of the gas chromatographic determination of fatty acids, free
and bound, in animal and vegetable fats and oils following their conversion to fatty acid methyl esters
(FAMEs).
The qualitative and quantitative determination of the composition of fatty acids by gas liquid chromatography
(GLC) is a widely used application in lipid analysis. It is used for the characterisation of fats and oils, or fatty
foodstuffs after the extraction of the oil from the matrix. The bound fatty acids of the triacylglycerols (TAGs)
and, depending on the esterification method, the free fatty acids (FFA) and other lipids, are converted to fatty
acid methyl esters (FAMEs), which are determined by capillary gas chromatography. Depending on the
number of different fatty acids - theoretically more than 50 different fatty acids can be present - capillary
columns with a length of 10 meters to 100 meters are used for a separation.
The GLC of FAMEs is applicable to all natural and synthetic mixtures of tri-, di- and monoacylglycerols, to fatty
acid esters, free fatty acids, soaps and other fatty compounds. With this suite of standards, FAMEs from C4 to
C26 can be determined, including saturated fatty acid methyl esters, cis- and trans-monounsaturated fatty
acid methyl esters, and cis- and trans-polyunsaturated fatty acid methyl esters.
For the determination of short chain fatty acids, isopropyl and butyl esters are often used so as to avoid
interferences with the solvent peak and in order to reduce differences in detector responses.
2 Normative references
The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are
indispensable for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated references,
the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 12966-2, Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty acid methyl esters — Part 2:
Preparation of methyl ester of fatty acids
ISO 12966-3, Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty acid methyl esters — Part 3:
Preparation of methyl esters using trimethylsulfonium hydroxide (TMSH)
ISO 12966-4, Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty acid methyl esters — Part 4:
Determination of cis-, trans-, saturated, mono- and polyunsaturated fatty acids in vegetable or non-ruminant
oils and fats
3 Principle
Gas liquid chromatography (GLC) is used for the qualitative and quantitative analysis of FAMEs. The FAMEs
are prepared according to ISO 12996 Part 2 or 3 and the dissolved FAMEs are then injected into and
vaporized within the injector. The separation of FAMEs is achieved on analytical columns of different polarity
and lengths. For the detection of the FAMEs, a Flame Ionisation Detector (FID) is used.
In the gas chromatography of FAMEs with FID hydrogen shall be used as the carrier gas (mobile phase), for
MSD applications helium shall be used. The separation can be done in a shorter time with sharper peaks by
© ISO 2013 – All rights reserved 1
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ISO/DIS 12966-1
using hydrogen. The stationary phase is a microscopic layer of a thin liquid film on an inert solid surface,
made of steel, glass or fused silica.
The volatilised compounds being analysed interact, during their passage through the capillary tubing, with the
stationary phase coating the inner surface of the column. Due to this different interaction of different
compounds, they exit the column, or elute, at a different time, which is called the retention time of the
compound at a given set of analysis parameters. The comparison of retention times is used for the
identification of the different compounds.
NOTE When a mass selective detector is used, special care must be taken in order to achieve quantitative results
due to differences in fragmentation patterns of individual FAMEs. Also, for mass spectrometry, derivatives other than the
FAMEs discussed here are used, as for example, picolinyl esters or dimethyl oxazolidines and others.
4 Preparation of FAME
The preparation of the fatty acid methyl esters shall be carried out according to part 2 and 3 of ISO 12966. An
overview is given in table 1
Table 1 — Overview on the different esterification methods
Method Principle GC-Injector Note
Also for medium chain
Applicable to fats triglycerides (MCTs) and
and oils containing short chain fatty acids,
Rapid transmethylation
fatty acids down to formation of artefacts
method under alkali-catalyzed
ISO butanoic (C4:0) insignificant. Internal
On-column
conditions with KOH
12966-2 standard for butanoic/
Transesterification
Split/
hexanoic acid
FFA are not converted to
Paragraph at room
Splitless
determination
FAME
4.2 temperature, no
solvent Short chain FAMEs are
Danger of soap formation
evaporation easily lost during
necessary saline/solvent
partitioning.
General
ISO Applicab
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 12966-1
Première édition
2014-12-01
Corps gras d’origines animale et
végétale — Chromatographie en
phase gazeuse des esters méthyliques
d’acides gras —
Partie 1:
Lignes directrices relatives à la
chromatographie en phase gazeuse
moderne des esters méthyliques
d’acides gras
Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty
acid methyl esters —
Part 1: Guidelines on modern gas chromatography of fatty acid
methyl esters
Numéro de référence
ISO 12966-1:2014(F)
©
ISO 2014
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ISO 12966-1:2014(F)
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sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur
l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à
l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Publié en Suisse
ii © ISO 2014 – Tous droits réservés
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ISO 12966-1:2014(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Principe . 2
4 Préparation des EMAG . 2
5 Colonnes . 3
6 Chromatographie en phase gazeuse (CPG) des EMAG . 4
7 Évaluation des chromatogrammes . 5
7.1 Aire du pic et pourcentage de l’aire du pic . 5
7.2 Évaluation au moyen d’un étalon interne ou de facteurs de correction . 5
8 Rapport d’essai . 5
Bibliographie . 6
© ISO 2014 – Tous droits réservés iii
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ISO 12966-1:2014(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne
la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les
références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration
du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par
l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de
la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes de l’OMC concernant
les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos — Informations
supplémentaires.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 11, Corps gras d’origines animale et végétale.
Conjointement avec l’ISO 12966-4, cette première édition de l’ISO 12966-1 annule et remplace
l’ISO 5508:1990 et l’ISO 15304:2002 qui ont fait l’objet d’une révision technique.
L’ISO 12966 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Corps gras d’origines animale
et végétale — Chromatographie en phase gazeuse des esters méthyliques d’acides gras:
— Partie 1: Lignes directrices relatives à la chromatographie en phase gazeuse moderne des esters
méthyliques d’acides gras
— Partie 2: Préparation des esters méthyliques d’acides gras
— Partie 3: Préparation des esters méthyliques à l’aide d’hydroxyde de triméthylsulfonium (TMSH)
— Partie 4: Méthode par chromatographie capillaire en phase gazeuse
iv © ISO 2014 – Tous droits réservés
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ISO 12966-1:2014(F)
Introduction
La présente partie de l’ISO 12966 fait partie d’une série de quatre Normes internationales relatives à la
préparation et à la détermination des esters méthyliques d’acides gras par chromatographie en phase
gazeuse dans les corps gras d’origines animale et végétale. L’ISO 12966 (toutes les parties) s’applique
aux corps gras et aux acides gras bruts, raffinés, partiellement ou totalement hydrogénés, dérivés de
sources animales et végétales.
L’ISO 12966 (toutes les parties) ne convient pas pour l’analyse des produits laitiers, des corps gras de
ruminants (y compris le lait et les produits dérivés du lait ou les matières grasses provenant du lait et
des produits laitiers), ou des produits additionnés d’acide linoléique conjugué (CLA). En outre, elle n’est
pas destinée à être appliquée aux corps gras polymérisés et oxydés.
La présente partie de l’ISO 12966 est une ligne directrice relative à la chromatographie en phase gazeuse
moderne des esters méthyliques d’acides gras, alors que l’ISO 12966-2 et l’ISO 12966-3 traitent de la
préparation des esters méthyliques d’acides gras par différentes méthodes. L’ISO 12966-4 donne les
conditions d’analyse des esters méthyliques d’acides gras par chromatographie en phase gazeuse sur
colonne capillaire.
Cette série de Normes internationales remplace les Normes internationales suivantes:
— l’ISO 5508:1990 est remplacée par l’ISO 12996-1 et l’ISO 12996-4
— l’ISO 15304:2002 est remplacée par l’ISO 12996-1 et l’ISO 12996-4
— l’ISO 5509:2000 est remplacée par l’ISO 12996-2 et l’ISO 12996-3
© ISO 2014 – Tous droits réservés v
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NORME INTERNATIONALE ISO 12966-1:2014(F)
Corps gras d’origines animale et végétale —
Chromatographie en phase gazeuse des esters méthyliques
d’acides gras —
Partie 1:
Lignes directrices relatives à la chromatographie en phase
gazeuse moderne des esters méthyliques d’acides gras
1 Domaine d’application
La présente partie de l’ISO 12966 donne un aperçu de la détermination par chromatographie en phase
gazeuse des acides gras, libres et liés, dans les corps gras d’origines animale et végétale après leur
conversion en esters méthyliques d’acides gras (EMAG).
La détermination qualitative et quantitative de la composition des acides gras par chromatographie en
phase gazeuse (CPG) est une application couramment utilisée dans l’analyse des lipides. Elle est utilisée
pour la caractérisation des corps gras ou des produits alimentaires gras après l’extraction de l’huile
de la matrice. Les acides gras liés des triacylglycérols (TAG) et, selon la méthode d’estérification, les
acides gras libres (AGL) et autres lipides, sont convertis en esters méthyliques d’acides gras (EMAG), qui
sont déterminés par chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire. Selon le nombre d’acides
gras différents (théoriquement plus de 50 acides gras différents peuvent être présents) des colonnes
capillaires d’une longueur de 10 m à 100 m sont utilisées pour la séparation.
La CPG des EMAG s’applique à tous les mélanges naturels et synthétiques de tri-, di- et mono-acylglycérols,
aux esters d’acides gras, acides gras libres, savons et autres composés gras. Avec cette série de normes,
les EMAG de C4 à C26 peuvent être déterminés, y compris les esters méthyliques d’acides gras saturés,
les esters méthyliques d’acides gras mono-insaturés cis et trans et les esters méthyliques d’acides gras
poly-insaturés cis et trans.
Pour la détermination des acides gras à chaîne courte, des esters isopropyliques et butyliques sont
souvent utilisés de manière à éviter les interférences avec le pic du solvant et afin de réduire les écarts
de réponse du détecteur.
2 Références normatives
Les documents suivants, en tout ou partie, sont référencés de façon normative dans le présent document
et sont indispensables à son application. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 12966-2, Corps gras d’origines animale et végétale — Chromatographie en phase gazeuse des esters
méthyliques d’acides gras — Partie 2: Préparation des esters méthyliques d’acides gras
ISO 12966-3, Corps gras d’origines animale et végétale — Chromatographie en phase gazeuse des
esters méthyliques d’acides gras — Partie 3: Préparation des esters méthyliques à l’aide d’hydroxyde de
triméthylsulfonium (TMSH)
1)
ISO 12966-4:— , Corps gras d’origines animale et végétale — Détermination des esters méthyliques d’acides
gras — Partie 4: Méthode par chromatographie capillaire en phase gazeuse
1) En préparation. À publier.
© ISO 2014 – Tous droits réservés 1
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ISO 12966-1:2014(F)
3 Principe
La chromatographie en phase gazeuse (CPG) est utilisée pour l’analyse qualitative et quantitative des
EMAG. Les EMAG sont préparés conformément à l’ISO 12996-2 ou l’ISO 12996-3, et les EMAG dissous
sont ensuite injectés et vaporisés dans l’injecteur. La séparation des EMAG est obtenue sur des colonnes
d’analyse de différentes polarités et longueurs. Pour la détection des EMAG, un détecteur à ionisation de
flamme (FID) est utilisé.
Dans la chromatographie en phase gazeuse des EMAG avec FID, il convient que l’hydrogène soit utilisé
comme gaz vecteur (phase mobile). Pour des applications avec détecteur sélectif de masse (MSD),
l’hélium doit être utilisé. La séparation peut être effectuée dans un délai plus court avec des pics plus
fins en utilisant de l’hydrogène. La phase stationnaire est une couche microscopique d’un mince film
liquide sur une surface solide inerte en acier, verre ou silice fondue.
Les composés volatilisés analysés interagissent, pendant leur passage dans le tube capillaire, avec la
phase stationnaire recouvrant la surface interne de la colonne. En raison de l’interaction différente des
différents composés, ceux-ci sortent de la colonne, ou sont élués, au terme d’un délai différent, qui est
appelé temps de rétention du composé pour un ensemble donné de paramètres d’analyse. La comparaison
des temps de rétention est utilisée pour l’identification des différents composés.
AVERTISSEMENT — Lorsqu’un détecteur sélectif de masse est utilisé, des précautions
particulières doivent être prises pour obtenir des résultats quantitatifs en raison des différences
dans les profils de fragmentation des EMAG individuels. De plus, pour la spectrométrie de masse,
des dérivés autres que les EMAG mentionnés dans la présente partie de la norme ISO 12966 sont
utilisés, par exemple des esters picolinyliques ou des diméthyl oxazolidines et autres.
4 Préparation des EMAG
Les esters méthyliques d’acides gras doivent être préparés conformément à l’ISO 12966-2 et l’ISO 12966-3.
Un aperçu est donné dans le Tableau 1.
Tableau 1 — Aperçu des différentes méthodes d’estérification
Méthode Principe Injecteur CG Note̶
De plus, pour les triglycérides
Applicable aux corps à chaîne moyenne (TCM)
gras contenant des et les acides gras à chaîne
Transméthylation rapide en
acides gras à partir courte, formation d’artéfacts
conditions de catalyse alca-
de l’acide butanoïque insignifiante. Étalon interne
On-column
lines avec KOH
(C4:0) pour la détermination de
ISO 12966-2, para-
l’acide butanoïque/hexa-
Avec division/
graphe 4.2 Les AGL ne sont pas convertis
Transestérifica-
noïque
Sans division
en EMAG
tion à température
ambiante, évapo- Les EMAG à chaîne courte
Risque de formation de savon
ration du solvant sont facilement perdus pen-
inutile dant la partition entre phase
aqueuse saline/phase solvant
Transméthylation/méthyla-
Les EMAG à chaîne courte
tion générale en conditions Applicable aux corps
On-column
sont facilement perdus pen-
alcalines et acides séquen- gras
ISO 12966-2, para-
dant le reflux et la partition
tielles (NaOCH3) Avec division/
graphe 4.3
Déconseillée pour
entre phase aqueuse saline/
Sans division
Les AGL sont convertis en les huiles lauriques
phase solvant
EMAG
2 © ISO 2014 – Tous droits réservés
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ISO 12966-1:2014(F)
Tableau 1 (suite)
Méthode Principe Injecteur CG Note̶
La solution métha-
Transméthylation/méthyla-
nolique de BF3
tion au trifluorure de bore
à 14 % doit être
Applicable aux huiles de
(BF3)
achetée et n’est pas
On-column poisson
préparée en raison
ISO 12966-2, para- Le réactif est très toxique.
Avec division/ de sa toxicité Non applicable aux composés
graphe 4.4 Utiliser uniquement dans
Sans division ayant des groupes oxygène
des fioles fermées et des
...
PROJET DE NORME INTERNATIONALE
ISO/DIS 12966-1
ISO/TC 34/SC 11 Secrétariat: BSI
Début de vote: Vote clos le:
2013-09-26 2014-02-26
Corps gras d’origines animale et végétale —
Chromatographie en phase gazeuse des esters méthyliques
d’acides gras —
Partie 1:
Directive de chromatographie en phase gazeuse moderne
des esters méthyliques d’acides gras
Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty acid methyl esters —
Part 1: Guidelines on modern gas chromatography of fatty acid methy esters
[Révision de la deuxième édition (ISO 5508:1990) et de la première édition (ISO 15304:2002) ]
ICS: 67.200.10
TRAITEMENT PARRALLÈLE ISO/CEN
Le présent projet a été élaboré dans le cadre de l’Organisation internationale de
normalisation (ISO) et soumis selon le mode de collaboration sous la direction
de l’ISO, tel que défini dans l’Accord de Vienne.
Le projet est par conséquent soumis en parallèle aux comités membres de l’ISO et
aux comités membres du CEN pour enquête de cinq mois.
En cas d’acceptation de ce projet, un projet final, établi sur la base des observations
CE DOCUMENT EST UN PROJET DIFFUSÉ POUR
OBSERVATIONS ET APPROBATION. IL EST DONC reçues, sera soumis en parallèle à un vote d’approbation de deux mois au sein de
SUSCEPTIBLE DE MODIFICATION ET NE PEUT
l’ISO et à un vote formel au sein du CEN.
ÊTRE CITÉ COMME NORME INTERNATIONALE
AVANT SA PUBLICATION EN TANT QUE TELLE.
OUTRE LE FAIT D’ÊTRE EXAMINÉS POUR
Pour accélérer la distribution, le présent document est distribué tel qu’il est
ÉTABLIR S’ILS SONT ACCEPTABLES À DES
FINS INDUSTRIELLES, TECHNOLOGIQUES ET
parvenu du secrétariat du comité. Le travail de rédaction et de composition de
COMMERCIALES, AINSI QUE DU POINT DE VUE
texte sera effectué au Secrétariat central de l’ISO au stade de publication.
DES UTILISATEURS, LES PROJETS DE NORMES
INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ÊTRE
CONSIDÉRÉS DU POINT DE VUE DE LEUR
POSSIBILITÉ DE DEVENIR DES NORMES
POUVANT SERVIR DE RÉFÉRENCE DANS LA
RÉGLEMENTATION NATIONALE.
Numéro de référence
LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET
ISO/DIS 12966-1:2013(F)
SONT INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS
OBSERVATIONS, NOTIFICATION DES DROITS
DE PROPRIÉTÉ DONT ILS AURAIENT
ÉVENTUELLEMENT CONNAISSANCE ET À
©
FOURNIR UNE DOCUMENTATION EXPLICATIVE. ISO 2013
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ISO/DIS 12966-1:2013(F)
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Ce document de l’ISO est un projet de Norme internationale qui est protégé par les droits d’auteur
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ce projet ISO ne peut être reproduite, enregistrée dans un système d’extraction ou transmise sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie,
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comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Les contrevenants pourront être poursuivis.
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Sommaire Page
1 Domaine d'application . 1
2 Références normatives . 1
3 Principe. 2
4 Préparation des EMAG . 2
5 Colonnes . 4
6 Chromatographie en phase gazeuse (CPG) des EMAG . 5
7 Évaluation des chromatogrammes . 5
7.1 Aire du pic et pourcentage de l'aire du pic . 5
7.2 Évaluation au moyen d'un étalon interne ou de facteurs de correction . 5
8 Rapport d'essai . 6
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Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 12966-1 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 11,
Corps gras d'origines animale et végétale.
Cette deuxième/troisième/. édition annule et remplace la première/deuxième/. édition (), dont [l' (les)
article(s) / le(s) paragraphe(s) / le (les) tableau(x) / la (les) figure(s) / l' (les) annexe(s) a/ont] fait l'objet d'une
révision technique.
L'ISO 12966 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Corps gras d'origines animale et
végétale — Chromatographie en phase gazeuse des esters méthyliques d'acides gras:
Partie 1: Directive de chromatographie en phase gazeuse moderne des esters méthyliques d'acides gras
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ISO/DIS 12966-1
Introduction
La présente Norme internationale est la partie 1 d'une série de quatre normes relatives à la préparation et à la
détermination des esters méthyliques d'acides gras par chromatographie en phase gazeuse dans les corps
gras d'origines animale et végétale, les matières grasses à tartiner et les corps gras extraits des produits
alimentaires. Les normes ne s'appliquent pas aux matières grasses ou acides gras polymérisés et oxydés.
La partie 1 est une directive de chromatographie en phase gazeuse moderne des esters méthyliques d'acides
gras, alors que les parties 2 et 3 traitent de la préparation des esters méthyliques d'acides gras par différentes
méthodes. La partie 4 de la présente Norme internationale donne les conditions d'analyse des esters
méthyliques d'acides gras par chromatographie en phase gazeuse (CPG).
Cette série de normes remplace les normes suivantes :
l'ISO 5508:1990 est remplacée par l'ISO 12996-1 et l'ISO 12996-4 ;
l'ISO 15304:2002 est remplacée par l'ISO 12996-4 ;
l'ISO 5509:2000 est remplacée par l'ISO 12996-2 et l'ISO 12996-3.
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PROJET DE NORME INTERNATIONALE ISO/DIS 12966-1
Corps gras d'origines animale et végétale — Chromatographie
en phase gazeuse des esters méthyliques d'acides gras —
Partie 1: Directive de chromatographie en phase gazeuse
moderne des esters méthyliques d'acides gras
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale donne un aperçu de la détermination par chromatographie en phase
gazeuse des acides gras, libres et liés, dans les corps gras d'origines animale et végétale après leur
conversion en esters méthyliques d'acides gras (EMAG).
La détermination qualitative et quantitative de la composition des acides gras par chromatographie en phase
gazeuse (CPG) est une application couramment utilisée dans l'analyse des lipides. Elle est utilisée pour la
caractérisation des corps gras ou des produits alimentaires gras après l'extraction de l'huile de la matrice. Les
acides gras liés des triacylglycérols (TAG) et, selon la méthode d'estérification, les acides gras libres (AGL) et
autres lipides, sont convertis en esters méthyliques d'acides gras (EMAG), qui sont déterminés par
chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire. Selon le nombre d'acides gras différents -
théoriquement plus de 50 acides gras différents peuvent être présents - des colonnes capillaires d'une
longueur de 10 mètres à 100 mètres sont utilisées pour la séparation.
La CPG des EMAG s'applique à tous les mélanges naturels et synthétiques de tri-, di- et mono-acylglycérols,
aux esters d'acides gras, acides gras libres, savons et autres composés gras. Avec cette série de normes, les
EMAG de C4 à C26 peuvent être déterminés, y compris les esters méthyliques d'acides gras saturés, les
esters méthyliques d'acides gras mono-insaturés cis et trans et les esters méthyliques d'acides gras poly-
insaturés cis et trans.
Pour la détermination des acides gras à chaîne courte, des esters isopropyliques et butyliques sont souvent
utilisés de manière à éviter les interférences avec le pic du solvant et afin de réduire les écarts de réponse du
détecteur.
2 Références normatives
Les documents suivants, en tout ou partie, sont référencés de façon normative dans le présent document et
sont indispensables à son application. Pour les références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 12966-2, Corps gras d'origines animale et végétale — Chromatographie en phase gazeuse des esters
méthyliques d'acides gras — Partie 2 : Préparation des esters méthyliques d'acides gras
ISO 12966-3, Corps gras d'origines animale et végétale — Chromatographie en phase gazeuse des esters
méthyliques d'acides gras — Partie 3 : Préparation des esters méthyliques à l'aide d'hydroxyde de
triméthylsulfonium (TMSH)
ISO 12966-4, Corps gras d'origines animale et végétale — Chromatographie en phase gazeuse des esters
méthyliques d'acides gras — Partie 4 : Détermination des acides gras saturés, mono- et poly-insaturés, cis ou
trans, dans les corps gras d'origines végétale ou animale (non ruminant)
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ISO/DIS 12966-1
3 Principe
La chromatographie en phase gazeuse (CPG) est utilisée pour l'analyse qualitative et quantitative des EMAG.
Les EMAG sont préparés conformément à l'ISO 12996, partie 2 ou 3, et les EMAG dissous sont ensuite
injectés et vaporisés dans l'injecteur. La séparation des EMAG est obtenue sur des colonnes d'analyse de
différentes polarités et longueurs. Pour la détection des EMAG, un détecteur à ionisation de flamme (FID) est
utilisé.
Dans la chromatographie en phase gazeuse des EMAG avec FID, l'hydrogène doit être utilisé comme gaz
vecteur (phase mobile) ; pour des applications avec détecteur sélectif de masse (MSD), l'hélium doit être
utilisé. La séparation peut être effectuée dans un délai plus court avec des pics plus fins en utilisant de
l'hydrogène. La phase stationnaire est une couche microscopique d'un mince film liquide sur une surface
solide inerte en acier, verre ou silice fondue.
Les composés volatilisés analysés interagissent, pendant leur passage dans le tube capillaire, avec la phase
stationnaire recouvrant la surface interne de la colonne. En raison de l'interaction différente des différents
composés, ceux-ci sortent de la colonne, ou sont élués, au terme d'un délai différent, qui est appelé temps de
rétention du composé pour un ensemble donné de paramètres d'analyse. La comparaison des temps de
rétention est utilisée pour l'identification des différents composés.
NOTE Lorsqu'un détecteur sélectif de masse est utilisé, des précautions particulières doivent être prises pour obtenir
des résultats quantitatifs en raison des différences dans les profils de fragmentation des EMAG individuels. De plus, pour
la spectrométrie de masse, des dérivés autres que les EMAG mentionnés ici sont utilisés, par exemple des esters
picolinyliques ou des diméthyl oxazolidines et autres.
4 Préparation des EMAG
Les esters méthyliques d'acides gras doivent être préparés conformément à la partie 2 ou 3 de l'ISO 12966.
Un aperçu est donné dans le Tableau 1.
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ISO/DIS 12966-1
Tableau 1 — Aperçu des différentes méthodes d'estérification
Méthode Principe Injecteur CG Note
De plus, pour les
triglycérides à chaîne
Applicable aux moyenne (TCM) et les
corps gras acides gras à chaîne
Transméthylation rapide en
contenant des courte, formation
conditions de catalyse
acides gras à partir d'artéfacts insignifiante.
alcalines avec KOH
ISO 12966-2 On-column de l'acide Étalon interne pour la
butanoïque (C4:0) détermination de l'acide
Les AGL ne sont pas
Paragraphe Avec division/
butanoïque/hexanoïque.
convertis en EMAG
4.2 Sans division Transestérification
à température Les EMAG à chaîne
Risque de formation de
ambiante, courte sont facilement
savon
évaporation du perdus pendant la
solvant inutile partition entre phase
aqueuse saline/phase
solvant.
Transméthylation/méthylation
Les EMAG à chaîne
générale en conditions Applicable aux
courte sont facilement
ISO 12966-2 On-column
alcalines et acides corps gras
perdus pendant le reflux
Paragraphe Avec division/
séquentielles (NaOCH )
3 et la partition entre phase
Déconseillée pour
4.3 Sans division
aqueuse saline/phase
Les AGL sont convertis en les huiles lauriques
solvant.
EMAG
La solution
méthanoliqu
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.