ISO 10272-1:2017
(Main)Microbiology of the food chain — Horizontal method for detection and enumeration of Campylobacter spp. — Part 1: Detection method
Microbiology of the food chain — Horizontal method for detection and enumeration of Campylobacter spp. — Part 1: Detection method
ISO 10272-1:2017 specifies a horizontal method for the detection by enrichment or direct plating of Campylobacter spp. It is applicable to - products intended for human consumption, - products intended for animal feeding, - environmental samples in the area of food and feed production, handling, and - samples from the primary production stage such as animal faeces, dust, and swabs.
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthode horizontale pour la recherche et le dénombrement de Campylobacter spp. — Partie 1: Méthode de recherche
L'ISO 10272-1:2017 spécifie une méthode horizontale de recherche par enrichissement ou ensemencement direct de Campylobacter spp. Il s'applique: - aux produits destinés à la consommation humaine; - aux produits destinés à l'alimentation des animaux; - aux échantillons environnementaux prélevés dans les secteurs de la production et de la manutention des aliments; et - aux échantillons au stade de la production primaire tels que les matières fécales des animaux, la poussière et les prélèvements de surface.
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 10272-1
Second edition
2017-06
Microbiology of the food chain —
Horizontal method for detection and
enumeration of Campylobacter spp. —
Part 1:
Detection method
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthode horizontale pour
la recherche et le dénombrement de Campylobacter spp. —
Partie 1: Méthode de recherche
Reference number
ISO 10272-1:2017(E)
©
ISO 2017
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 10272-1:2017(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2017, Published in Switzerland
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized otherwise in any form
or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on the internet or an intranet, without prior
written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below or ISO’s member body in the country of
the requester.
ISO copyright office
Ch. de Blandonnet 8 • CP 401
CH-1214 Vernier, Geneva, Switzerland
Tel. +41 22 749 01 11
Fax +41 22 749 09 47
copyright@iso.org
www.iso.org
ii © ISO 2017 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 10272-1:2017(E)
Contents Page
Foreword .v
Introduction .vi
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
4.1 General . 2
4.2 Enrichment in selective liquid medium . 2
4.2.1 Detection procedure A . 2
4.2.2 Detection procedure B . 2
4.2.3 Detection procedure C . 2
4.3 Isolation on selective solid medium . 3
4.3.1 Detection procedure A . 3
4.3.2 Detection procedure B . 3
4.3.3 Detection procedure C . 3
4.3.4 Detection procedure A, B and C . 3
4.4 Confirmation . 3
5 Culture media and reagents . 3
6 Equipment and consumables . 3
7 Sampling . 4
8 Preparation of test sample . 4
9 Procedure. 4
9.1 General . 4
9.2 Test portion and initial suspension . 5
9.2.1 General. 5
9.2.2 Detection procedure A . 5
9.2.3 Detection procedure B . 5
9.2.4 Detection procedure C . 5
9.3 Enrichment . 6
9.3.1 Detection procedure A . 6
9.3.2 Detection procedure B . 6
9.4 Isolation . 6
9.4.1 Detection procedure A . 6
9.4.2 Detection procedure B . 6
9.4.3 Detection procedures A, B and C . 6
9.5 Confirmation of Campylobacter . 6
9.5.1 General. 6
9.5.2 Selection of colonies for confirmation . 7
9.5.3 Examination of morphology and motility . 7
9.5.4 Study of aerobic growth at 25 °C . 7
9.5.5 Detection of oxidase activity . 7
9.5.6 Interpretation . 7
9.6 Identification of Campylobacter species (optional) . 8
9.6.1 General. 8
9.6.2 Detection of catalase activity. 8
9.6.3 Detection of hippurate hydrolysis . 8
9.6.4 Detection of indoxyl acetate hydrolysis . 8
9.6.5 Interpretation . 9
10 Expression of results . 9
11 Performance characteristics of the method . 9
© ISO 2017 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 10272-1:2017(E)
11.1 Interlaboratory study . 9
11.2 Sensitivity . 9
11.3 Specificity . 9
11.4 LOD .
50 9
12 Test report .10
Annex A (normative) Diagram of procedures .11
Annex B (normative) Culture media and reagents .12
Annex C (informative) Method validation studies and performance characteristics .21
Bibliography .24
iv © ISO 2017 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 10272-1:2017(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity assessment,
as well as information about ISO’s adherence to the World Trade Organization (WTO) principles in the
Technical Barriers to Trade (TBT) see the following URL: www . i so .org/ iso/ foreword .html.
This document was prepared by the European Committee for Standardization (CEN), Technical
Committee CEN/TC 275, Food Analysis — Horizontal methods, in collaboration with ISO Technical
committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9, Microbiology, in accordance with the
agreement on technical cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 10272-1:2006), which has been technically
revised with the following main changes:
— samples from the primary production stage have been added to the scope;
— the detection method was extended to include the option of a second enrichment broth (Preston
broth), primarily to overcome problems with background flora resistant to third generation
ß-lactams (like cefoperazone in Bolton broth);
— the detection method was extended to include the option of direct plating on mCCDA;
— the note on the use of closed containers with reduced headspace as an alternative to incubation in a
microaerobic atmosphere has been deleted;
— the confirmation tests on study of microaerobic growth at 25 °C and aerobic growth at 41,5 °C were
replaced by the study of aerobic growth at 25 °C;
— performance testing for the quality assurance of the culture media has been added to Annex B;
— performance characteristics have been added to Annex C.
A list of all parts in the ISO 10272 series can be found on the ISO website.
© ISO 2017 – All rights reserved v
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 10272-1:2017(E)
Introduction
The main changes, listed in the foreword, introduced in this document compared to ISO 10272-1:2006
are considered as minor (see ISO 17468).
Because of the large variety of food and feed products, this horizontal method may not be appropriate
in every detail for certain products, and for some other products it may be necessary to use different
methods. Nevertheless, it is hoped that in all cases every attempt will be made to apply this horizontal
method as far as possible and that deviations from this will only be made if absolutely necessary for
technical reasons.
When this document is next reviewed, account will be taken of all information then available regarding
the extent to which this horizontal method has been followed, and the reasons for deviations from this
in the case of particular products. The harmonization of test methods cannot be immediate and, for
certain group of products, International Standards and/or national standards may already exist that do
not comply with this horizontal method. It is hoped that when such standards are reviewed, they will
be changed to comply with this document so that eventually the only remaining departures from this
horizontal method will be those necessary for well-established technical reasons.
vi © ISO 2017 – All rights reserved
---------------------- Page: 6 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD ISO 10272-1:2017(E)
Microbiology of the food chain — Horizontal method for
detection and enumeration of Campylobacter spp. —
Part 1:
Detection method
WARNING — In order to safeguard the health of laboratory personnel, it is essential that tests
for detecting Campylobacter are only undertaken in properly equipped laboratories, under the
control of a skilled microbiologist, and that great care is taken in the disposal of all incubated
materials. Persons using this document should be familiar with normal laboratory practice.
This document does not purport to address all of the safety aspects, if any, associated with its
use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health practices.
1 Scope
This document specifies a horizontal method for the detection by enrichment or direct plating of
Campylobacter spp. It is applicable to
— products intended for human consumption,
— products intended for animal feeding,
— environmental samples in the area of food and feed production, handling, and
— samples from the primary production stage such as animal faeces, dust, and swabs.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 6887 (all parts), Microbiology of the food chain — Preparation of test samples, initial suspension and
decimal dilutions for microbiological examination
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General requirements and guidance for
microbiological examinations
ISO 11133, Microbiology of food, animal feed and water — Preparation, production, storage and
performance testing of culture media
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— IEC Electropedia: available at http:// www.e lectropedia. org/
— ISO Online browsing platform: available at http:// www. iso. org/o bp
© ISO 2017 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 10272-1:2017(E)
3.1
Campylobacter
microorganism forming characteristic colonies on solid selective media when incubated in a
microaerobic atmosphere at 41,5 °C, and which possesses the characteristic morphology and motility
and biochemical and growth properties described when the tests are conducted in accordance with
this document
Note 1 to entry: This document targets the thermotolerant Campylobacter species relevant to human health. The
most frequently encountered and relevant to human health thermotolerant species are Campylobacter jejuni and
Campylobacter coli. However, other species have been described (Campylobacter lari, Campylobacter upsaliensis
and others).
3.2
detection of Campylobacter
determination of the presence or absence of Campylobacter (3.1) in a defined quantity of product, when
the test is conducted in accordance with this document
4 Principle
4.1 General
The detection of Campylobacter requires three successive stages as specified in Annex A.
Depending on the type of sample and the purpose of the test, three different detection procedures can
be used:
— detection procedure A: Detection of Campylobacter by enrichment, in samples with low numbers
of campylobacters and low level of background microflora and/or with stressed campylobacters;
— detection procedure B: Detection of Campylobacter by enrichment, in samples with low numbers
of campylobacters and high level of background microflora;
— detection procedure C: Detection of Campylobacter by direct plating, in samples with high numbers
of campylobacters.
4.2 Enrichment in selective liquid medium
4.2.1 Detection procedure A
The test portion is added to the liquid enrichment medium (Bolton broth).
It is incubated in a microaerobic atmosphere at 37 °C for 4 h to 6 h and then at 41,5 °C for 44 h.
4.2.2 Detection procedure B
The test portion is added to the liquid enrichment medium (Preston broth).
It is incubated in a microaerobic atmosphere at 41,5 °C for 24 h.
4.2.3 Detection procedure C
Enrichment technique is not used.
2 © ISO 2017 – All rights reserved
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 10272-1:2017(E)
4.3 Isolation on selective solid medium
4.3.1 Detection procedure A
From the enrichment culture obtained in 4.2, two selective solid media are inoculated:
— modified Charcoal Cefoperozone Deoxycholate agar (mCCD agar);
— any other solid selective Campylobacter medium using different selective principles from those in
mCCD agar.
4.3.2 Detection procedure B
From the enrichment culture obtained in 4.2, the selective mCCD agar is inoculated.
4.3.3 Detection procedure C
The test portion is plated directly or after suspending in an appropriate amount of liquid onto the
selective mCCD agar.
4.3.4 Detection procedure A, B and C
The selective solid media are incubated at 41,5 °C in a microaerobic atmosphere and examined after
44 h to detect the presence of suspect Campylobacter colonies.
4.4 Confirmation
The suspect Campylobacter colonies are examined for morphology and motility using a microscope
and sub-cultured on a non-selective blood agar, and then confirmed by detection of oxidase activity
and an aerobic growth test at 25 °C. Optionally, the Campylobacter species are identified by specific
biochemical tests and/or molecular methods.
5 Culture media and reagents
For current laboratory practice, see ISO 7218 and ISO 11133.
Composition of culture media and reagents and their preparation are described in Annex B.
For performance testing of culture media, see Annex B.
6 Equipment and consumables
Disposable equipment is an acceptable alternative to reusable glassware if it has suitable specifications.
Usual microbiological laboratory equipment (see ISO 7218) and, in particular, the following.
6.1 Incubators, capable of operating at 25 °C ± 1 °C, 37 °C ± 1 °C and 41,5 °C ± 1 °C.
6.2 Water bath, capable of operating at 37 °C ± 1 °C.
6.3 Sterile loops, of 10 µl volume and of 1 µl volume, and inoculation needle or wire.
A nickel/chromium loop is not suitable for use in the oxidase test (see 9.5.5).
6.4 Microscope, preferably with phase contrast (for observing the characteristic morphology and
motility of Campylobacter).
© ISO 2017 – All rights reserved 3
---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 10272-1:2017(E)
6.5 Apparatus suitable for achieving a microaerobic atmosphere, with oxygen content of
5 % ± 2 %, carbon dioxide 10 % ± 3 %, optional hydrogen ≤10 %, with the balance nitrogen.
The appropriate microaerobic atmosphere can be obtained using gastight jars and gas-generating kits,
following precisely the manufacturer’s instructions. Alternatively, the jar or incubator may be filled
with an appropriate gas mixture prior to incubation.
6.6 Sterile Petri dishes, with a diameter of approximately 90 mm, preferably with vents to facilitate
microaerobic incubation.
6.7 Refrigerators, capable of operating at 3 °C ± 2 °C and at 5 °C ± 3 °C.
7 Sampling
Sampling is not part of the method specified in this document. See the specific International Standard
dealing with the product concerned. If there is no specific International Standard dealing with the
sampling of the product concerned, it is recommended that the parties concerned come to an agreement
on this subject.
A recommended sampling method is given in ISO/TS 17728 for food and animal feed, in ISO 13307 for
sampling at the primary production stage, in ISO 17604 for sampling of carcasses, and in ISO 18593 for
sampling of surfaces.
It is important that the laboratory receives a sample that is representative and the sample should not
have been damaged or changed during transport or storage.
Since Campylobacter is very sensitive to freezing but survives best at low temperatures, samples to be
tested should not be frozen but stored at 3 °C (6.7) and subjected to analysis as rapidly as possible. Also
take care to prevent the samples from drying.
8 Preparation of test sample
Prepare the test sample from the laboratory sample in accordance with the specific International
Standard dealing with the product concerned: see ISO 6887 (all parts). If there is no specific
International Standard, it is recommended that the parties concerned come to an agreement on this
subject.
9 Procedure
9.1 General
Depending on the type of sample and the purpose of the test, one or more of three different detection
procedures is/are used:
— detection procedure A: Detection of Campylobacter by enrichment, in samples with low numbers
of campylobacters and low level of background microflora and/or with stressed campylobacters,
e.g. cooked or frozen products;
— detection procedure B: Detection of Campylobacter by enrichment, in samples with low numbers
of campylobacters and high level of background microflora, e.g. raw meats (including poultry) or
raw milk;
— detection procedure C: Detection of Campylobacter by direct plating, in samples with high numbers
of campylobacters, e.g. faeces, poultry caecal contents or raw poultry meat. This can be used in
2
combination with ISO 10272-2 in order to count numbers of Campylobacter per g, per ml, or per cm
in the test material.
4 © ISO 2017 – All rights reserved
---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO 10272-1:2017(E)
If little information is available concerning the best method for the particular type of sample to be
tested, then use detection procedure C, in parallel with detection procedure(s) A and/or B.
In general, detection procedure B is useful for products (including cooked or frozen) that contain
significant numbers of microflora resistant to third generation ß-lactams like cefoperazone.
Cefoperazone is used in Bolton broth (detection procedure A) as well as in mCCD agar. Preston broth
(detection procedure B) uses different selective principles and is therefore more suitable to suppress
this type of resistant microflora.
9.2 Test portion and initial suspension
9.2.1 General
For preparation of the initial suspension, in the general case, use as diluent the enrichment medium
specified in 9.2.2 or 9.2.3. Pre-warm the enrichment medium to room temperature before use.
In general, an amount of test portion (mass or volume) is mixed with a quantity of enrichment medium
(mass or volume) to yield a tenfold dilution. However, for some types of samples (e.g. boot socks, swabs),
it may be necessary to use another ratio.
This document has been validated for test portions of 10 g (or ml), except for the caecal samples. A
smaller size of test portion may be used, without the need for additional validation/verification,
providing that the same ratio between enrichment broth and test portion is maintained. A larger test
portion than that initially validated may be used, if a validation/verification study has shown that there
are no adverse effects on the detection of Campylobacter.
NOTE Validation can be conducted in accordance with the appropriate documents of ISO 16140 (all parts).
Verification for pooling samples can be conducted in accordance with the protocol described in ISO 6887-1:2017,
Annex D (verification protocol for pooling samples for qualitative tests).
9.2.2 Detection procedure A
In general, for preparing the initial suspension, combine a quantity of 10 g or 10 ml of the test portion
with 90 ml of the enrichment medium Bolton broth (B.2), so as to obtain a 1 in 10 dilution, and
homogenize (see ISO 7218).
9.2.3 Detection procedure B
In general, for preparing the initial suspension, combine a quantity of 10 g or 10 ml of the test portion
with 90 ml of the enrichment medium Preston broth (B.3), so as to obtain a 1 in 10 dilution, and
homogenize (see ISO 7218).
9.2.4 Detection procedure C
9.2.4.1 For caecal or faecal samples, use a loop (6.3) or a sterile swab to bring some of the well-mixed
sample material onto the first half of a mCCD agar plate (B.4). Use another loop to streak out on the
second half of the plate.
9.2.4.2 For all other samples, add an appropriate amount of liquid (e.g. peptone salt solution or Preston
broth), for example, 1 in 2 (volume fraction), mix well, and either streak the plate using a loop (6.3), or
dispense a suitable volume and spread it
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 10272-1
Deuxième édition
2017-06
Microbiologie de la chaîne
alimentaire — Méthode horizontale
pour la recherche et le
dénombrement de Campylobacter spp.
—
Partie 1:
Méthode de recherche
Microbiology of the food chain — Horizontal method for detection
and enumeration of Campylobacter spp. —
Part 1: Detection method
Numéro de référence
ISO 10272-1:2017(F)
©
ISO 2017
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 10272-1:2017(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2017, Publié en Suisse
Droits de reproduction réservés. Sauf indication contraire, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée
sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur
l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à
l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Ch. de Blandonnet 8 • CP 401
CH-1214 Vernier, Geneva, Switzerland
Tel. +41 22 749 01 11
Fax +41 22 749 09 47
copyright@iso.org
www.iso.org
ii © ISO 2017 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 10272-1:2017(F)
Sommaire Page
Avant-propos .v
Introduction .vi
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
4.1 Généralités . 2
4.2 Enrichissement en milieu sélectif liquide . 2
4.2.1 Mode opératoire de recherche A . 2
4.2.2 Mode opératoire de recherche B . 2
4.2.3 Mode opératoire de recherche C . 2
4.3 Isolement sur milieu sélectif solide . 3
4.3.1 Mode opératoire de recherche A . 3
4.3.2 Mode opératoire de recherche B . 3
4.3.3 Mode opératoire de recherche C . 3
4.3.4 Modes opératoires de recherche A, B et C. 3
4.4 Confirmation . 3
5 Milieux de culture et réactifs . 3
6 Matériel et consommables . 3
7 Échantillonnage . 4
8 Préparation de l’échantillon pour essai . 4
9 Mode opératoire. 4
9.1 Généralités . 4
9.2 Prise d’essai et suspension mère. 5
9.2.1 Généralités . 5
9.2.2 Mode opératoire de recherche A . 5
9.2.3 Mode opératoire de recherche B . 5
9.2.4 Mode opératoire de recherche C . 5
9.3 Enrichissement . 6
9.3.1 Mode opératoire de recherche A . 6
9.3.2 Mode opératoire de recherche B . 6
9.4 Isolement . 6
9.4.1 Mode opératoire de recherche A . 6
9.4.2 Mode opératoire de recherche B . 6
9.4.3 Modes opératoires de recherche A, B et C. 6
9.5 Confirmation de Campylobacter . 6
9.5.1 Généralités . 6
9.5.2 Sélection des colonies à confirmer . 7
9.5.3 Examen de la morphologie et de la mobilité . 7
9.5.4 Étude de la croissance aérobie à 25 °C . 7
9.5.5 Recherche de l’activité de l’oxydase . 7
9.5.6 Interprétation . 7
9.6 Identification de l’espèce de Campylobacter (facultative) . 8
9.6.1 Généralités . 8
9.6.2 Recherche de l’activité de la catalase . 8
9.6.3 Recherche de l’hydrolyse de l’hippurate . 8
9.6.4 Recherche de l’hydrolyse de l’acétate d’indoxyle . 8
9.6.5 Interprétation . 9
10 Expression des résultats. 9
11 Caractéristiques de performance de la méthode . 9
© ISO 2017 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 10272-1:2017(F)
11.1 Étude interlaboratoires . 9
11.2 Sensibilité . 9
11.3 Spécificité . 9
11.4 LOD .
50 9
12 Rapport d’essai .10
Annexe A (normative) Représentation schématique des modes opératoires .11
Annexe B (normative) Milieux de culture et réactifs .12
Annexe C (informative) Études de validation des méthodes et caractéristiques de performance .21
Bibliographie .24
iv © ISO 2017 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 10272-1:2017(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’OMC concernant les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien
suivant: w w w . i s o .org/ iso/ fr/ foreword .html.
Le présent document a été élaboré par le comité technique CEN/TC 275, Analyse des produits alimentaires
— Méthodes horizontales du Comité européen de normalisation (CEN), en collaboration avec le comité
technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9, Microbiologie, conformément à l’accord de
coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 10272-1:2006), qui a fait l’objet
d’une révision technique. Les modifications suivantes ont été apportées:
— ajout des échantillons provenant de l’étape de production primaire au domaine d’application;
— extension de la méthode de recherche afin d’inclure l’option consistant à utiliser un deuxième
bouillon d’enrichissement (bouillon de Preston), principalement pour résoudre les problèmes de
résistance de la flore annexe aux ß-lactamines de troisième génération (comme la cefopérazone
dans le bouillon de Bolton);
— extension de la méthode de recherche afin d’inclure l’ensemencement direct sur mCCDA;
— suppression de la note relative à l’utilisation de récipients fermés avec espace libre réduit comme
alternative à l’incubation en atmosphère microaérophile;
— remplacement des essais de confirmation de l’étude de la croissance microaérophile à 25 °C et de la
croissance aérobie à 41,5 °C par l’étude de la croissance aérobie à 25 °C;
— ajout à l’Annexe B d’essais de performance relatifs à l’assurance qualité des milieux de culture;
— ajout des caractéristiques de performance à l’Annexe C.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 10272 est disponible sur le site Internet de l’ISO.
© ISO 2017 – Tous droits réservés v
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 10272-1:2017(F)
Introduction
Les principaux changements énumérés dans l’avant-propos qui ont été apportés au présent document
par rapport à l’ISO 10272-1:2006 sont considérés comme mineurs (voir l’ISO 17468).
En raison de la grande diversité des produits alimentaires, il se peut que la présente méthode horizontale
ne convienne pas exactement, dans tous ses détails, à certains d’entre eux et que, pour certains autres,
il puisse être nécessaire d’employer d’autres méthodes. Néanmoins, il est à espérer que tous les efforts
seront entrepris dans tous les cas afin d’appliquer, dans la mesure du possible, la présente méthode
horizontale et qu’il n’y aura d’écarts par rapport à celle-ci qu’en cas d’absolue nécessité et pour des
raisons techniques.
Lors du prochain réexamen périodique du présent document, il sera tenu compte de toutes les évolutions
intervenues depuis sa publication et, notamment, dans quelle mesure cette méthode horizontale aura
été suivie ainsi que les raisons des dérogations dans le cas de produits particuliers. L’harmonisation
des méthodes d’essai ne peut être instantanée et, pour certains groupes de produits, des Normes
internationales et/ou nationales ne concordant pas avec la présente méthode horizontale existent
peut-être déjà. Lorsque de telles normes viendront en révision, il serait souhaitable de les aligner
avec les spécifications du présent document et de ne conserver que les seules divergences justifiées
indispensables pour des raisons techniques.
vi © ISO 2017 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 6 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 10272-1:2017(F)
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthode
horizontale pour la recherche et le dénombrement de
Campylobacter spp. —
Partie 1:
Méthode de recherche
AVERTISSEMENT — Afin de préserver la santé du personnel de laboratoire, il est essentiel
que les essais de recherche de Campylobacter ne soient effectués que dans des laboratoires
correctement équipés, sous la surveillance d’un microbiologiste expérimenté, et qu’un grand
soin soit apporté à l’élimination de tous les matériaux incubés. Il convient que les personnes qui
utilisent le présent document connaissent les pratiques classiques de laboratoire. Le présent
document n’a pas pour but de traiter tous les aspects de la sécurité (s’il y en a) qui sont liés à son
utilisation. Il incombe à l’utilisateur d’établir des pratiques d’hygiène et de sécurité appropriées.
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode horizontale de recherche par enrichissement ou
ensemencement direct de Campylobacter spp. Il s’applique:
— aux produits destinés à la consommation humaine;
— aux produits destinés à l’alimentation des animaux;
— aux échantillons environnementaux prélevés dans les secteurs de la production et de la manutention
des aliments; et
— aux échantillons au stade de la production primaire tels que les matières fécales des animaux, la
poussière et les prélèvements de surface.
2 Références normatives
Les documents suivants cités dans le texte constituent, pour tout ou partie de leur contenu, des
exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 6887 (toutes les parties), Microbiologie de la chaîne alimentaire — Préparation des échantillons, de la
suspension mère et des dilutions décimales en vue de l’examen microbiologique
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Exigences générales et recommandations
ISO 11133, Microbiologie des aliments, des aliments pour animaux et de l’eau — Préparation, production,
stockage et essais de performance des milieux de culture
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www .electropedia .org/ ;
© ISO 2017 – Tous droits réservés 1
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 10272-1:2017(F)
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse http:// www .iso .org/ obp.
3.1
Campylobacter
microorganismes formant des colonies caractéristiques sur des milieux sélectifs solides lorsqu’ils
sont incubés en atmosphère microaérophile à 41,5 °C et possédant la mobilité et la morphologie
caractéristiques, ainsi que les propriétés biochimiques et de croissance décrites lorsque les essais sont
réalisés conformément au présent document
Note 1 à l’article: Le présent document vise les espèces Campylobacter thermotolérantes pertinentes pour la santé
humaine. Les espèces thermotolérantes le plus souvent rencontrées et les plus pertinentes pour la santé humaine
sont Campylobacter jejuni et Campylobacter coli. D’autres espèces ont toutefois été décrites (Campylobacter lari,
Campylobacter upsaliensis, et autres).
3.2
recherche des Campylobacter
détection ou non-détection de Campylobacter (3.1) dans une quantité déterminée de produit, lorsque
l’essai est réalisé conformément au présent document
4 Principe
4.1 Généralités
La recherche de Campylobacter exige trois étapes successives telles que spécifiées à l’Annexe A.
En fonction du type d’échantillon et de la finalité de l’essai, trois modes opératoires de recherche
peuvent être utilisés:
— Mode opératoire de recherche A: recherche de Campylobacter par enrichissement, dans des
échantillons contenant de faibles nombres de Campylobacter, peu de flore annexe et/ou des formes
stressées de Campylobacter;
— Mode opératoire de recherche B: recherche de Campylobacter par enrichissement, dans des
échantillons contenant de faibles nombres de Campylobacter et beaucoup de flore annexe;
— Mode opératoire de recherche C: recherche de Campylobacter par ensemencement direct, dans
des échantillons contenant de grands nombres de Campylobacter.
4.2 Enrichissement en milieu sélectif liquide
4.2.1 Mode opératoire de recherche A
Ajout de la prise d’essai au bouillon d’enrichissement de Bolton.
Incubation en atmosphère microaérophile à 37 °C pendant 4 h à 6 h, puis à 41,5 °C pendant 44 h.
4.2.2 Mode opératoire de recherche B
Ajout de la prise d’essai au bouillon d’enrichissement de Preston.
Incubation en atmosphère microaérophile à 41,5 °C pendant 24 h.
4.2.3 Mode opératoire de recherche C
La technique d’enrichissement n’est pas utilisée.
2 © ISO 2017 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 10272-1:2017(F)
4.3 Isolement sur milieu sélectif solide
4.3.1 Mode opératoire de recherche A
À partir de la culture d’enrichissement obtenue en 4.2, deux milieux sélectifs solides sont ensemencés:
— une gélose modifiée à la céfopérazone, au charbon et au désoxycholate (gélose mCCD);
— un autre milieu sélectif solide pour Campylobacter basé sur des principes de sélection différents de
ceux de la gélose mCCD.
4.3.2 Mode opératoire de recherche B
À partir de la culture d’enrichissement obtenue en 4.2, la gélose sélective mCCD est ensemencée.
4.3.3 Mode opératoire de recherche C
Ensemencement direct ou après suspension dans un volume approprié de liquide de la prise d’essai sur
une gélose mCCD sélective.
4.3.4 Modes opératoires de recherche A, B et C
Incubation des milieux sélectifs solides en atmosphère microaérophile à 41,5 °C et examen au bout
de 44 h afin de détecter la présence de colonies présumées de Campylobacter.
4.4 Confirmation
Examen au microscope de la morphologie et de la mobilité des colonies présumées de Campylobacter,
repiquage de ces colonies sur un milieu non sélectif (gélose au sang), puis confirmation par recherche
de l’activité de l’oxydase et test de croissance aérobie à 25 °C. Identification facultative des espèces de
Campylobacter par des tests biochimiques et/ou des méthodes moléculaires spécifiques.
5 Milieux de culture et réactifs
Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir l’ISO 7218 et l’ISO 11133.
La composition des milieux de culture et des réactifs ainsi que leur préparation sont décrites à
l’Annexe B.
Pour les essais de performance des milieux de culture, voir l’Annexe B.
6 Matériel et consommables
Le matériel jetable est une alternative acceptable à la verrerie réutilisable si ses spécifications sont
appropriées.
Matériel courant de laboratoire de microbiologie (voir l’ISO 7218) et en particulier ce qui suit.
6.1 Étuves, réglables à 25 °C ± 1 °C, 37 °C ± 1 °C et 41,5 °C ± 1 °C.
6.2 Bain d’eau, réglable à 37 °C ± 1 °C.
6.3 Anses stériles, de 10 µl et 1 µl de volume, et aiguille ou fil à ensemencer.
L’anse en nickel-chrome ne convient pas au test de l’oxydase (9.5.5).
© ISO 2017 – Tous droits réservés 3
---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 10272-1:2017(F)
6.4 Microscope, de préférence à contraste de phase, pour observer la morphologie et le mouvement
caractéristiques des Campylobacter.
6.5 Appareillage approprié à la culture en atmosphère microaérophile, permettant de maintenir
tout au long de l’incubation une teneur de 5 % ± 2 % en oxygène, de 10 % ± 3 % en dioxyde de carbone,
≤10 % en hydrogène (facultatif) et le complément en azote.
Une atmosphère microaérophile appropriée peut être obtenue en utilisant des jarres étanches aux gaz et
des sachets générateurs de gaz (suivre rigoureusement les instructions du fabricant). Alternativement,
il est possible d’injecter dans la jarre ou l’étuve, avant l’incubation, un mélange gazeux avec les
proportions des différents gaz appropriés.
6.6 Boîtes de Petri stériles, d’un diamètre de 90 mm environ, de préférence dotées d’aérations pour
faciliter l’incubation microaérophile.
6.7 Réfrigérateurs, réglables à 3 °C ± 2 °C et 5 °C ± 3 °C.
7 Échantillonnage
L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans le présent document. Voir la Norme
internationale spécifique du produit concerné. S’il n’existe pas de Norme internationale spécifique
traitant de l’échantillonnage du produit concerné, il est recommandé que les parties concernées se
mettent d’accord à ce sujet.
Une méthode d’échantillonnage recommandée est donnée dans l’ISO/TS 17728 pour les aliments,
dans l’ISO 13307 pour l’échantillonnage au stade de production primaire, dans l’ISO 17604 pour
l’échantillonnage sur les carcasses et dans l’ISO 18593 pour l’échantillonnage des surfaces.
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon représentatif, et il convient que l’échantillon
n’ait pas été endommagé ou altéré lors du transport ou du stockage.
Étant donné que les Campylobacter sont très sensibles à la congélation, mais qu’ils survivent bien à basse
température, il convient de ne pas congeler les échantillons à analyser, mais de les conserver à 3 °C (6.7)
et de les analyser le plus rapidement possible. Par ailleurs, éviter la déshydratation des échantillons.
8 Préparation de l’échantillon pour essai
Préparer l’échantillon pour essai à partir de l’échantillon de laboratoire, conformément à la Norme
internationale spécifique du produit concerné: voir l’ISO 6887 (toutes les parties). En l’absence de
Norme internationale spécifique, il est recommandé que les parties concernées se mettent d’accord à
ce sujet.
9 Mode opératoire
9.1 Généralités
En fonction du type d’échantillon et de la finalité de l’essai, un ou plusieurs des trois modes opératoires
de recherche est/sont utilisé(s):
— mode opératoire de recherche A: recherche de Campylobacter par enrichissement, dans des
échantillons contenant de faibles nombres de Campylobacter, peu de flore annexe et/ou des formes
stressées de Campylobacter, par exemple dans les produits cuits ou surgelés;
— mode opératoire de recherche B: recherche de Campylobacter par enrichissement, dans des
échantillons contenant de faibles nombres de Campylobacter et beaucoup de flore annexe, par
exemple dans les viandes crues (notamment la volaille) ou le lait cru;
4 © ISO 2017 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO 10272-1:2017(F)
— mode opératoire de recherche C: recherche de Campylobacter par ensemencement direct, dans
des échantillons contenant des nombres élevés de Campylobacter, par exemple dans les matières
fécales, le contenu cæcal de volailles ou la viande de volaille crue. Ce mode opératoire peut être
utilisé en association avec la technique décrite dans l’ISO 10272-2 afin de compter le nombre de
2
Campylobacter par g, par ml ou par cm dans la prise d’essai.
S’il existe peu d’informations quant à la meilleure méthode à utiliser pour le type particulier
d’échantillon à soumettre à essai, utiliser le mode opératoire de recherche C, en parallèle avec les modes
opératoires de recherche A et/ou B.
En général, le mode opératoire B est adapté aux produits (notamment cuits ou surgelés) contenant une
importante microflore résistante aux ß-lactamines de troisième génération, comme la céfopérazone.
La céfopérazone est utilisée dans le bouillon de Bolton (mode opératoire de recherche A) et dans la
gélose mCCD. Le bouillon de Preston (mode opératoire de recherche B) se base sur des principes de
sélection différents et est de ce fait plus adapté pour supprimer ce type de microflore résistante.
9.2 Prise d’essai et suspension mère
9.2.1 Généralités
De façon générale, pour préparer la suspension mère, utiliser comme diluant le milieu d’enrichissement
spécifié en 9.2.2 ou 9.2.3. Préchauffer le milieu d’enrichissement à température ambiante avant
utilisation.
En général, une quantité de la partie d’essai (masse ou volume) est mélangée avec une quantité de
milieu d’enrichissement (masse ou volum
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.