ISO 6887-5:2010
(Main)Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products
ISO 6887-5:2010 specifies rules for the preparation of samples of milk and milk products and their suspension for microbiological examination when the samples require a different preparation from the general methods specified in ISO 6887-1. ISO 6887-1 defines the general rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination. ISO 6887-5:2010 excludes preparation of samples for both enumeration and detection test methods where preparation details are specified in the relevant International Standards. ISO 6887-5:2010 is applicable to: milk and liquid milk products; dried milk products; cheese; casein and caseinates; butter; ice-cream; custard, desserts and sweet cream; fermented milk and sour cream; and milk-based infant foods.
Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 5: Règles spécifiques pour la préparation du lait et des produits laitiers
L'ISO 6887-5:2010 spécifie les règles de préparation des échantillons de lait et de produits laitiers et de leur mise en suspension en vue d'un examen microbiologique lorsque les échantillons nécessitent une préparation différente des méthodes générales spécifiées dans l'ISO 6887-1. L'ISO 6887-1 définit des règles générales pour la préparation de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique. L'ISO 6887-5:2010 exclut la préparation des échantillons pour les méthodes d'essais de dénombrement et de détection où des détails de préparation sont spécifiés dans les Normes internationales appropriées. L'ISO 6887-5:2010 est applicable: au lait et aux produits laitiers liquides; aux produits laitiers en poudre; au fromage; à la caséine et aux caséinates; au beurre; aux crèmes glacées; à la crème anglaise, aux desserts et à la crème douce; au lait fermenté et à la crème acide; et aux aliments à base de lait pour nourrissons.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 6887-5
First edition
2010-08-15
Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Preparation of test samples,
initial suspension and decimal dilutions
for microbiological examination —
Part 5:
Specific rules for the preparation of milk
and milk products
Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la
suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen
microbiologique —
Partie 5: Règles spécifiques pour la préparation du lait et des produits
laitiers
Reference number
ISO 6887-5:2010(E)
©
ISO 2010
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ISO 6887-5:2010(E)
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Published in Switzerland
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ISO 6887-5:2010(E)
Contents Page
Foreword .iv
1 Scope.1
2 Normative references.1
3 Terms and definitions .2
4 Principle.2
5 Diluents.3
6 Apparatus.7
7 Preparation of samples.7
7.1 Frozen products .7
7.2 Hard and dry products.8
7.3 Liquid and non-viscous products.8
7.4 Heterogeneous products.8
8 General procedures.8
8.1 General .8
8.2 Sampling.8
8.3 General case for acidic products.8
8.4 High-fat foods (fat content > 20 % mass fraction) .9
9 Specific procedures .9
9.1 Milk and liquid milk products.9
9.2 Dried milk, dried sweet whey, dried acid whey, dried buttermilk, and lactose.9
9.3 Cheese and processed cheese .9
9.4 Acid casein, lactic casein, rennet casein, and caseinate.10
9.5 Butter .11
9.6 Ice-cream.11
9.7 Custard, desserts and sweet cream (pH > 5).11
9.8 Fermented milk and sour cream (pH < 5).11
9.9 Milk-based infant foods .11
10 Further decimal dilutions.12
Bibliography.13
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ISO 6887-5:2010(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 6887-5 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9,
Microbiology.
This first edition cancels and replaces ISO 8261|IDF 122:2001, which has been technically revised.
ISO 8261ΩIDF 122:2001 was elaborated by ISO/TC 34/SC 5, Milk and milk products, and, with its agreement,
has been renumbered as ISO 6887-5 and technically revised by ISO/TC 34/SC 9 with the following
modifications:
a) the introduction of buffered peptone water as a diluent for general use;
b) the systematic pre-heating of the diluent has been kept only for those cases where it resolves problems of
homogeneity of the suspension;
c) the reactivation step has been removed.
ISO 6887 consists of the following parts, under the general title Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination:
⎯ Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions
⎯ Part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products
⎯ Part 3: Specific rules for the preparation of fish and fishery products
⎯ Part 4: Specific rules for the preparation of products other than milk and milk products, meat and meat
products, and fish and fishery products
⎯ Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products
The following part is under preparation:
⎯ Part 6: Specific rules for the preparation of samples taken at the primary production stage
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 6887-5:2010(E)
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation
of test samples, initial suspension and decimal dilutions for
microbiological examination —
Part 5:
Specific rules for the preparation of milk and milk products
WARNING — The use of this International Standard may involve hazardous materials, operations, and
equipment. It is the responsibility of the user to establish appropriate health and safety practices and
to determine the applicability of regulatory limitations prior to use.
1 Scope
This part of ISO 6887 specifies rules for the preparation of samples of milk and milk products and their
suspension for microbiological examination when the samples require a different preparation from the general
methods specified in ISO 6887-1. ISO 6887-1 defines the general rules for the preparation of the initial
suspension and decimal dilutions for microbiological examination.
This part of ISO 6887 excludes preparation of samples for both enumeration and detection test methods
where preparation details are specified in the relevant International Standards.
This part of ISO 6887 is applicable to:
a) milk and liquid milk products;
b) dried milk products;
c) cheese;
d) casein and caseinates;
e) butter;
f) ice-cream;
g) custard, desserts and sweet cream;
h) fermented milk and sour cream;
i) milk-based infant foods.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 707ΩIDF 50, Milk and milk products — Guidance on sampling
© ISO 2010 – All rights reserved 1
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ISO 6887-5:2010(E)
ISO 6887-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of the initial
suspension and decimal dilutions
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General requirements and guidance for
microbiological examinations
ISO/TS 11133-2, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and production
of culture media — Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture media
3 Terms and definitions
For the purposes of this International Standard, the following terms and definitions apply.
3.1
laboratory sample
sample prepared for sending to the laboratory and intended for inspection or testing
[1]
NOTE Adapted from ISO 7002:1986 , A.19.
3.2
test portion
〈microbiology〉 measured volume or measured mass of representative sample taken from the laboratory
sample for use in the preparation of the initial suspension
3.3
initial suspension
primary dilution
suspension, solution or emulsion obtained after a weighed or measured quantity of the product under
examination (or of a test sample prepared from the product) has been mixed, if necessary, using a blender
and observing appropriate precautions, with a nine-fold quantity of dilution fluid (diluent), allowing large
particles, if present, to settle
NOTE 1 For appropriate precautions, see 8.1.
NOTE 2 For details of diluents, see Clause 5.
3.4
further decimal dilutions
suspensions, solutions or emulsions obtained by mixing a specific volume of the primary dilution (3.3) with a
nine-fold volume of diluent, and by repeating this operation with every dilution thus prepared, until a decimal
dilution series, suitable for the inoculation of culture media, is obtained
4 Principle
An initial suspension (3.3) is prepared to obtain as uniform a distribution as possible of the microorganisms
contained in the test sample.
If necessary, further decimal dilutions (3.4) are prepared in order to reduce the number of microorganisms per
volume to allow, after incubation, observation of any growth (in the case of liquid media) or colonies (in the
case of agar plates), as stated in each relevant International Standard.
In order to restrict, if required, the range of enumeration to a given interval, or if high numbers of
microorganisms are foreseen, it is possible to inoculate only the necessary decimal dilutions (at least two
successive dilutions) needed to achieve enumeration according to the calculation specified in ISO 7218.
2 © ISO 2010 – All rights reserved
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ISO 6887-5:2010(E)
5 Diluents
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade, and only
sterile distilled or deionized water.
5.1 Basic materials.
See ISO 6887-1.
5.2 Diluents for general use.
5.2.1 Peptone-salt solution.
5.2.1.1 Composition.
Enzymatic digest of casein 1,0 g
Sodium chloride (NaCl) 8,5 g
Water 1 000 ml
5.2.1.2 Preparation.
Dissolve the components in the water, heating slightly on a hotplate (6.6) if necessary. Adjust the pH, if
necessary, so that after sterilization it is 7,0 ± 0,2 at 25 °C.
5.2.2 Quarter-strength Ringer's solution.
5.2.2.1 Composition.
Sodium chloride (NaCl) 2,25 g
Potassium chloride (KCl) 0,105 g
a
Calcium chloride (CaCl ), anhydrous 0,06 g
2
Sodium hydrogencarbonate (NaHCO) 0,05 g
3
Water 1 000 ml
a
Alternatively, use 0,12 g of CaCl ·6H O.
2 2
5.2.2.2 Preparation.
Dissolve the salts in the water. Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization it is 6,9 ± 0,2 at 25 °C.
5.2.3 Peptone solution.
5.2.3.1 Composition.
Enzymatic digest of casein 1,0 g
Water 1 000 ml
5.2.3.2 Preparation.
Dissolve the peptone in the water. Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization it is 7,0 ± 0,2 at 25 °C.
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ISO 6887-5:2010(E)
5.2.4 Phosphate buffer solution.
5.2.4.1 Composition.
Potassium dihydrogenphosphate (KH PO) 42,5 g
2 4
Water 1 000 ml
5.2.4.2 Preparation.
Dissolve the salt in 500 ml of water. Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization it is 7,2 ± 0,2 at
25 °C. Dilute to 1 000 ml with the remaining water.
Store the stock solution under refrigerated conditions.
Add 1 ml of this stock solution to 1 000 ml of water for use as diluent.
5.2.5 Buffered peptone water.
5.2.5.1 Composition.
Enzymatic digest of animal tissues 10,0 g
Sodium chloride (NaCl) 5,0 g
a
Disodium hydrogenphosphate dodecahydrate (Na HPO ⋅12HO) 9,0 g
2 4 2
Potassium dihydrogenphosphate (KH PO) 1,5 g
2 4
Water 1 000 ml
a
Alternatively, use 3,56 g of anhydrous disodium hydrogenphosphate (Na HPO ).
2 4
5.2.5.2 Preparation.
Dissolve the components in the water by heating slightly, if necessary, on a hotplate (6.6). Adjust the pH, if
necessary, so that after sterilization it is 7,0 ± 0,2 at 25 °C.
5.2.5.3 Application.
This diluent is recommended in particular for detection of Salmonella spp. or enumeration of Listeria
monocytogenes, but can also be used for the preparation of initial suspensions for other determinations.
5.3 Diluents for special purposes.
These diluents shall only be used for the preparation of initial suspensions.
5.3.1 Sodium citrate solution.
5.3.1.1 Composition.
Trisodium citrate dihydrate (Na C H O ⋅2HO) 20,0 g
3 6 5 7 2
Water 1 000 ml
5.3.1.2 Preparation.
Dissolve the salt in water by heating, if necessary, on a hotplate (6.6) at a temperature between 45 °C and
50 °C. Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization it is 7,5 ± 0,2 at 25 °C.
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ISO 6887-5:2010(E)
5.3.1.3 Application.
This solution is used for cheese and (roller-) dried milk, and some caseinates.
5.3.2 Dipotassium hydrogenphosphate solution.
5.3.2.1 Composition.
Dipotassium hydrogenphosphate (K HPO) 20,0 g
2 4
Water 1 000 ml
5.3.2.2 Preparation.
Dissolve the salt in the water by heating, if necessary, on a hotplate (6.6) at a temperature between 45 °C and
50 °C. For acid whey powder, adjust the pH so that for the primary dilution after sterilization it is 8,4 ± 0,2 at
25 °C. For cheese, roller-dried milk, fermented milk, caseinates, and sour cream, adjust the pH so that after
sterilization it is 7,5 ± 0,2 at 25 °C.
5.3.2.3 Application.
This solution is used for cheese, (roller-) dried milk, fermented milk, some caseinates, dried acid whey, and
sour cream.
5.3.3 Dipotassium hydrogenphosphate solution with antifoam agent.
5.3.3.1 Dipotassium hydrogenphosphate solution.
5.3.3.1.1 Composition.
Dipotassium hydrogenphosphate (K HPO) 20,0 g
2 4
Water 1 000 ml
5.3.3.1.2 Preparation.
Dissolve dipotassium hydrogenphosphate in water by heating, if necessary, on a hotplate (6.6) at a
temperature between 45 °C and 50 °C.
5.3.3.2 Antifoam stock solution.
5.3.3.2.1 Composition.
Polyethylene glycol 2000 1 g
Water 100 ml
5.3.3.2.2 Preparation.
Dissolve the polyethylene glycol 2000 in the water by mixing.
5.3.3.3 Preparation.
Add 1 ml of the antifoam stock solution (5.3.3.2) to 1 l of the K HPO solution (5.3.3.1). Adjust the pH so that
2 4
for the primary dilution of both acid and lactic casein, after sterilization, it is 8,4 ± 0,2 at 25 °C, and for rennet
casein, after sterilization, it is 7,5 ± 0,2 at 25 °C.
© ISO 2010 – All rights reserved 5
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ISO 6887-5:2010(E)
5.3.3.4 Application.
This solution is used for acid casein, lactic casein and rennet caseins.
5.3.4 Tripolyphosphate solution.
5.3.4.1 Compo
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 6887-5
Première édition
2010-08-15
Microbiologie des aliments — Préparation
des échantillons, de la suspension mère
et des dilutions décimales en vue de
l'examen microbiologique —
Partie 5:
Règles spécifiques pour la préparation
du lait et des produits laitiers
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test
samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological
examination —
Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products
Numéro de référence
ISO 6887-5:2010(F)
©
ISO 2010
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ISO 6887-5:2010(F)
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Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2010 – Tous droits réservés
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ISO 6887-5:2010(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d'application .1
2 Références normatives.2
3 Termes et définitions .2
4 Principe.2
5 Diluants.3
6 Appareillage .7
7 Préparation des échantillons .8
7.1 Produits congelés .8
7.2 Produits durs et secs.8
7.3 Produits liquides et non visqueux.8
7.4 Produits hétérogènes.8
8 Modes opératoires généraux .8
8.1 Généralités .8
8.2 Échantillonnage.8
8.3 Cas général des produits acides .9
8.4 Aliments à forte teneur en matières grasses (teneur en matières grasses > 20 % en
fraction massique).9
9 Modes opératoires spécifiques.9
9.1 Lait et produits laitiers liquides .9
9.2 Lait sec, poudre de lactosérum doux, poudre de lactosérum acide, babeurre en poudre et
lactose .9
9.3 Fromage et fromage fondu.10
9.4 Caséine acide, caséine lactique, caséine présure et caséinates .10
9.5 Beurre .11
9.6 Crème glacée .12
9.7 Crème anglaise, desserts et crème douce (pH > 5) .12
9.8 Lait fermenté et crème acide (pH < 5).12
9.9 Aliments à base de lait pour nourrissons.12
10 Dilutions décimales suivantes .13
Bibliographie.14
© ISO 2010 – Tous droits réservés iii
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ISO 6887-5:2010(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 6887-5 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie.
Cette première édition annule et remplace l'ISO 8261⏐FIL 122:2001, qui a fait l'objet d'une révision technique.
L'ISO 8261⏐FIL 122:2001 a été élaborée par l'ISO/TC 34/SC 5, Lait et produits laitiers et, avec son accord, a
été renumérotée en ISO 6887-5 et techniquement révisée par l'ISO/TC 34/SC 9 avec les modifications
suivantes:
a) l'introduction de l'eau peptonée tamponnée en tant que diluant d'usage général;
b) le préchauffage systématique du diluant n'a été maintenu que dans les cas où il peut résoudre des
problèmes d'homogénéité de la suspension;
c) l'étape de réactivation a été supprimée.
L'ISO 6887 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Microbiologie des aliments —
Préparation des échantillons, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen
microbiologique:
⎯ Partie 1: Règles générales pour la préparation de la suspension mère et des dilutions décimales
⎯ Partie 2: Règles spécifiques pour la préparation des viandes et produits à base de viande
⎯ Partie 3: Règles spécifiques pour la préparation des produits de la pêche
⎯ Partie 4: Règles spécifiques pour la préparation de produits autres que les produits laitiers, les produits
carnés et les produits de la pêche
⎯ Partie 5: Règles spécifiques pour la préparation du lait et des produits laitiers
La partie suivante est en cours de préparation:
⎯ Partie 6: Règles spécifiques pour la préparation d'échantillons de production primaire
iv © ISO 2010 – Tous droits réservés
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NORME INTERNATIONALE ISO 6887-5:2010(F)
Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons,
de la suspension mère et des dilutions décimales en vue
de l'examen microbiologique —
Partie 5:
Règles spécifiques pour la préparation du lait et des produits
laitiers
AVERTISSEMENT — L'utilisation de la présente Norme internationale peut impliquer l'utilisation de
produits et la mise en œuvre de modes opératoires et d'appareillages à caractère dangereux. Il
incombe à l'utilisateur d'établir, avant de l'utiliser, des pratiques d'hygiène et de sécurité appropriées
et de déterminer l'applicabilité des restrictions réglementaires.
1 Domaine d'application
La présente partie de l'ISO 6887 spécifie les règles de préparation des échantillons de lait et de produits
laitiers et de leur mise en suspension en vue d'un examen microbiologique lorsque les échantillons
nécessitent une préparation différente des méthodes générales spécifiées dans l'ISO 6887-1. L'ISO 6887-1
définit des règles générales pour la préparation de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de
l'examen microbiologique.
La présente partie de l'ISO 6887 exclut la préparation des échantillons pour les méthodes d'essai de
dénombrement et de détection où des détails de préparation sont spécifiés dans les Normes internationales
appropriées.
La présente partie de l'ISO 6887 est applicable:
a) au lait et aux produits laitiers liquides;
b) aux produits laitiers en poudre;
c) au fromage;
d) à la caséine et aux caséinates;
e) au beurre;
f) aux crèmes glacées;
g) à la crème anglaise, aux desserts et à la crème douce;
h) au lait fermenté et à la crème acide;
i) aux aliments à base de lait pour nourrissons.
© ISO 2010 – Tous droits réservés 1
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ISO 6887-5:2010(F)
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 707⏐FIL 50, Lait et produits laitiers — Lignes directrices pour l'échantillonnage
ISO 6887-1, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 1: Règles générales pour la préparation de
la suspension mère et des dilutions décimales
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Exigences générales et recommandations
ISO/TS 11133-2, Microbiologie des aliments — Guide pour la préparation et la production des milieux de
culture — Partie 2: Guide général pour les essais de performance des milieux de culture
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
échantillon pour laboratoire
échantillon préparé pour être envoyé au laboratoire et destiné aux essais ou inspections
[1]
NOTE Adapté de l'ISO 7002:1986 , A.15.
3.2
prise d'essai
〈microbiologie〉 échantillon représentatif mesuré en volume ou en masse, prélevé sur l'échantillon pour
laboratoire pour servir à la préparation de la suspension mère
3.3
suspension mère
première dilution
suspension, solution ou émulsion obtenue après avoir utilisé un mélangeur et pris les précautions appropriées
pour mélanger, si nécessaire, une quantité pesée ou mesurée du produit à analyser (ou de l'échantillon pour
essai préparé à partir de ce produit) avec une quantité de fluide de dilution (diluant) égale à neuf fois cette
quantité de produit, en laissant se déposer les particules grossières, s'il y en a
NOTE 1 Pour les précautions appropriées, voir 8.1.
NOTE 2 Pour des détails sur les diluants, voir l'Article 5.
3.4
dilutions décimales suivantes
suspension, solution ou émulsion obtenue en mélangeant un volume spécifique de la première dilution (3.3)
avec une quantité de diluant égale à neuf fois cette quantité de produit et en répétant cette opération sur
chaque dilution préparée de la sorte, jusqu'à obtention d'une gamme de dilutions décimales, appropriée pour
l'ensemencement des milieux de culture
4 Principe
Préparation de la suspension mère (3.3) de façon à obtenir une répartition aussi uniforme que possible des
micro-organismes contenus dans l'échantillon pour essai.
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ISO 6887-5:2010(F)
Préparation, si nécessaire, de dilutions décimales suivantes (3.4) en vue de réduire le nombre de micro-
organismes par unité de volume pour permettre, après incubation, d'observer leur éventuel développement
(cas des milieux liquides) ou d'observer les colonies (cas des boîtes de gélose), comme indiqué dans chaque
Norme internationale concernée.
Pour restreindre, si nécessaire, le domaine de dénombrement à un intervalle donné, ou si des nombres
élevés de micro-organismes sont attendus, il est possible d'ensemencer uniquement les dilutions décimales
nécessaires (au moins deux dilutions successives) pour pouvoir effectuer le dénombrement selon le mode de
calcul spécifié dans l'ISO 7218.
5 Diluants
Au cours de l'analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue et uniquement de l'eau distillée ou déionisée stérilisée.
5.1 Composants de base.
Voir l'ISO 6887-1.
5.2 Diluants à usage général.
5.2.1 Solution de peptone-sel.
5.2.1.1 Composition.
Digestat enzymatique de caséine 1,0 g
Chlorure de sodium (NaCl) 8,5 g
Eau 1 000 ml
5.2.1.2 Préparation.
Dissoudre les composants dans l'eau en chauffant légèrement, si nécessaire, sur une plaque chauffante (6.6).
Si nécessaire, ajuster le pH de sorte qu'après stérilisation, il soit de 7,0 ± 0,2 à 25 °C.
5.2.2 Solution de Ringer diluée au quart.
5.2.2.1 Composition.
Chlorure de sodium (NaCl) 2,25 g
Chlorure de potassium (KCl) 0,105 g
a
Chlorure de calcium, anhydre (CaCl ) 0,06 g
2
Hydrogénocarbonate de sodium (NaHCO) 0,05 g
3
Eau 1 000 ml
a
En alternative, utiliser 0,12 g de CaCl , 6H O.
2 2
5.2.2.2 Préparation.
Dissoudre les sels dans l'eau. Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu'après stérilisation, il soit de 6,9 ± 0,2 à
25 °C.
5.2.3 Solution de peptone.
5.2.3.1 Composition.
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ISO 6887-5:2010(F)
Digestat enzymatique de caséine 1,0 g
Eau 1 000 ml
5.2.3.2 Préparation.
Dissoudre la peptone dans l'eau. Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu'après stérilisation, il soit de
7,0 ± 0,2 à 25 °C.
5.2.4 Solution tampon phosphate.
5.2.4.1 Composition.
Dihydrogénophosphate de potassium (KH PO) 42,5 g
2 4
Eau 1 000 ml
5.2.4.2 Préparation.
Dissoudre le sel dans 500 ml d'eau. Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu'après stérilisation, il soit de
7,2 ± 0,2 à 25 °C. Diluer à 1 000 ml avec l'eau restante.
Conserver la solution mère au réfrigérateur.
Ajouter 1 ml de cette solution mère à 1 000 ml d'eau pour utilisation en tant que diluant.
5.2.5 Eau peptonée tamponnée.
5.2.5.1 Composition.
Digestat enzymatique de tissus animaux 10,0 g
Chlorure de sodium (NaCl) 5,0 g
a
Hydrogénophosphate disodique dodécahydraté (Na HPO , 12HO) 9,0 g
2 4 2
Dihydrogénophosphate de potassium (KH PO) 1,5 g
2 4
Eau 1 000 ml
a
En alternative, utiliser 3,56 g d'hydrogénophosphate disodique anhydre (Na HPO ).
2 4
5.2.5.2 Préparation.
Dissoudre les composants dans l'eau en chauffant légèrement, si nécessaire, sur une plaque chauffante (6.6).
Si nécessaire, ajuster le pH de sorte qu'après stérilisation, il soit de 7,0 ± 0,2 à 25 °C.
5.2.5.3 Application.
Ce diluant est recommandé en particulier pour la détection de Salmonella spp. ou le dénombrement de
Listeria monocytogenes, mais peut également être utilisé pour la préparation de suspensions mères pour
d'autres analyses.
5.3 Diluants pour des besoins particuliers.
Ces diluants ne doivent être utilisés que pour la préparation de suspensions mères.
5.3.1 Solution de citrate de sodium.
5.3.1.1 Composition.
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Citrate trisodique dihydraté (Na C H O , 2HO) 20,0 g
3 6 5 7 2
Eau 1 000 ml
5.3.1.2 Préparation.
Dissoudre le sel dans de l'eau en chauffant, si nécessaire, sur une plaque chauffante (6.6) à une température
comprise entre 45 °C et 50 °C. Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu'après stérilisation, il soit de
7,5 ± 0,2 à 25 °C.
5.3.1.3 Application.
Cette solution est utilisée pour le fromage et le lait en poudre Hatmaker, et certains caséinates.
5.3.2 Solution d'hydrogénophosphate dipotassique.
5.3.2.1 Composition.
Hydrogénophosphate dipotassique (K HPO) 20,0 g
2 4
Eau 1 000 ml
5.3.2.2 Préparation.
Dissoudre le sel dans de l'eau en chauffant, si nécessaire, sur une plaque chauffante (6.6) à une température
comprise entre 45 °C et 50 °C. Pour la poudre de lactosérum acide, ajuster le pH de sorte que, pour la
première dilution après stérilisation, il soit de 8,4 ± 0,2 à 25 °C. Pour le fromage, le lait en poudre Hatmaker, le
lait fermenté, les caséinates et la crème acide, ajuster le pH de sorte qu'après stérilisation, il soit de
7,5 ± 0,2 à 25 °C.
5.3.2.3 Application.
Cette solution est utilisée pour le fromage, le lait en poudre Hatmaker, le lait fermenté, certains caséinates, le
lactosérum acide et la crème acide.
5.3.3 Solution d'hydrogénophosphate dipotassique avec agent antimoussant.
5.3.3.1 Solution d'hydrogénophosphate dipotassique.
5.3.3.1.1 Composition.
Hydrogénophosphate dipotassique (K HPO) 20,0 g
2 4
Eau 1 000 ml
5.3.3.1.2 Préparation.
Dissoudre l'hydrogénophosphate dipotassique dans de l'eau en chauffant, si nécessaire, sur une plaque
chauffante (6.6) à une température comprise entre 45 °C et 50 °C.
5.3.3.2 Solution concentrée d'agent antimoussant.
5.3.3.2.1 Composition.
Polyéthylène glycol 2000 1 g
Eau 100 ml
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5.3.3.2.2 Préparation.
Dissoudre le polyéthylène glycol 2000 dans l'eau en mélangeant.
5.3.3.3 Préparation.
Ajouter 1 ml de la solution concentrée d'agent anti-moussant (5.3.3.2) à 1 l de la solution de K HPO (5.3.3.1).
2 4
Ajuster le pH de sorte qu'aussi bien pour la première dilution de la caséine acide que pour celle de la caséine
lactique, il soit de 8,4 ± 0,2 à 25 °C après stérilisation, et pour la caséine présure il soit de 7,5 ± 0,2 à 25 °C
après stérilisation.
5.3.3.4 Application.
Cette solution est utilisée pour la caséine acide, la caséine lactique et les caséines présures.
5.3.4 Solution de tripolyphosphate.
5.3.4.1 Composition.
Tripolyphosphate de sodium (Na O P) 20,0 g
5 10 3
Eau 1 000 ml
5.3.4.2 Préparation.
Dissoudre le sel dans l'eau en chauffant légèrement sur une plaque chauffante (6.6), si nécessaire. Verser la
solution de tripolyphosphate dans des flacons à raison de 90 ml et les stériliser. Le milieu peut être conservé
à une température de 5 °C ± 3 °C pendant 1 mois au plus.
5.3.4.3 Application.
Cette solution est utilisée comme autre diluant pour les caséines présures qui sont difficiles à dissoudre.
5.3.5 Diluant à usage général avec une solution d'α-amylase.
5.3.5.1 Préparation.
Ajouter 12,5 mg
...
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